CN102652791B - 一种具有抗肝纤维化作用的药物组合物及制备方法 - Google Patents
一种具有抗肝纤维化作用的药物组合物及制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种具有抗肝纤维化作用的药物组合物及制备方法。克服目前临床缺乏高效、无明显毒副作用的治疗肝纤维化药物的不足。本发明的药物组合物的活性成分包括10~70重量份的虎眼万年青总黄酮、1~20重量份的虎眼万年青总皂苷、1~10重量份的虎眼万年青总生物碱、30~70重量份的虎眼万年青总多糖。制备方法包括分别提取虎眼万年青总黄酮,虎眼万年青总皂苷,虎眼万年青总生物碱,虎眼万年青总多糖,将所得提取物混合,本发明药物组合物。将前述药物组合物与常用药用辅料组配,制成常规口服或肌注药物制剂,本发明的积极效果是:经相关药效学试验结果表明,本发明药物组合物具有显著的抗肝纤维化作用,对治疗肝炎、肝硬化、肝癌、胆囊炎等的治疗具有显著效果。
Description
技术领域
本发明涉及中药制药技术领域,具体涉及一种从虎眼万年青提取的具有抗肝纤维化作用的药物组合物。
背景技术
虎眼万年青,又名珍珠草、胡连万年青、海葱、葫芦兰,为百合科虎眼万年青属多年生草木植物。主要分布于东半球温带地区,原产于非洲南部,我国北方有栽培。该药味甘、微寒,归肝、脾经。具有清热解毒,消坚散结的功能。民间用其全草或球茎入药,用其鲜汁液涂抹患处以治疗疔疮,内服可治疗无名肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌、胆囊炎等,而且疗效确切,具有极高的药用价值药。
据文献报道,该植物内含虎眼万年青皂苷,生物碱、黄酮、多糖、香豆素、苯甲酸、单糖、多种氨基酸,大量微量元素及低聚糖高级烷烃混合物等各类化学成分。其中虎眼万年青皂苷、生物碱、黄酮既是抗肿瘤的药效成分,又有较强的抗炎作用;多糖组分能增强人体体液免疫和细胞免疫功能,与人参皂苷Rg1相近。
肝纤维化是各种病因所致的慢性肝病共同病理过程,是肝硬化发展的主要环节。而我国又是一个肝病高发国家, 每年仅肝硬化的治疗费用给国家和个人造成了沉重负担。因此, 防治肝纤维化、肝硬化的发生、发展,显得尤为重要和紧迫。
目前临床仍缺乏高效、无明显毒副作用的治疗肝纤维化药品。中医药通过多途径、多环节、多靶点的综合药理学作用在抗肝纤维化方面展现出优势,显示了良好的前景。因此应用具有较强抗肝纤维化作用,而无毒副作用的虎眼万年青提取物为原料的中药制剂,为临床治疗肝炎、肝硬化、肝癌、胆囊炎等提供了一种新的选择。
本发明针对上述情况,采用现代药效学研究方法对虎眼万年青的有效成分进行筛选,确定了具有抗肝纤维化活性的有效部位,进而经过工艺研究确定了以虎眼万年青提取物为主要成分的中药制剂的制备方法。
此前,虎眼万年青的活性成分制备方法多为有机溶剂直接冷浸、回流、超临界萃取等,尚未有对虎眼万年青中抗肝纤维化有效成分有针对性的应用大孔树脂等填料进行提取、制备方法,以及各种口服、外用和注射剂型制剂的制备方法的专利公布。
发明内容
本发明目的在于提供一种具有抗肝纤维化作用的药物组合物。用于治疗肝炎、肝硬化、肝癌、胆囊炎等疾病。克服目前临床缺乏高效、无明显毒副作用的治疗肝纤维化药物的不足。
本发明又一个目的是提供一种上述药物组合物的制备方法。
本发明的药物组合物的活性成分包括10~70重量份的虎眼万年青总黄酮、1~20重量份的虎眼万年青总皂苷、1~10重量份的虎眼万年青总生物碱、30~70重量份的虎眼万年青总多糖。
本发明药物的制备方法是:
1、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用70%乙醇(体积比)冷浸两次,每次15天,合并浸渍液,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加600-800毫升水搅拌,冷却沉淀。置离心机(1200-1600 rad/min)沉降离心15~30分钟,取上清液备用。
取大孔吸附树脂D101,按与生药重量比1:2的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积20~60%乙醇(体积比)进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总黄酮,得率(重量比)为2.7%。
2、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用80%乙醇(体积比)加热回流提取2次,合并提取液,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀。置离心机(1200-1600 rad/min)沉降离心15~30分钟,取上清液备用。
取大孔吸附树脂AB-8,按与生药重量比1:l的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积20~70%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总皂苷,得率(重量比)为1.2%。
3、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用60%乙醇(体积比)浸渍48小时后,渗漉提取,渗漉至流出液色浅,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀。置离心机(1200-1600 rad/min)沉降离心15~30分钟,取上清液备用。
取739型强酸性阳离子树脂,按与生药重量比1:3的比例装柱,将上述各用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积含0.25% 氨水的30~80%乙醇进行梯度洗脱.收集乙醇洗脱液。50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总生物碱,得率为0.7%。
4、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用水(体积比)煎煮提取3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加95%乙醇搅拌均匀,使乙醇浓度达到60-80%,静置过夜。
所得的静置液进行过滤得沉淀物,将沉淀物溶于水,再加入60-80%乙醇进行沉淀,过滤所得沉淀物,除蛋白(Savage 法),在50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总多糖,得率为5.5%。
5、取10~70重量份步骤1得到的虎眼万年青总黄酮、1~20重量份步骤2得到的虎眼万年青总皂苷、1~10重量份步骤3得到的虎眼万年青总生物碱、30~70重量份步骤4得到的虎眼万年青总多糖混合,即得具有抗肝纤维化作用的药物组合物。再将前述药物组合物与常用药用辅料组配,制成片、胶囊、颗粒等各种常规口服或肌注药物制剂,
本发明的积极效果是:经相关药效学试验结果表明,本发明药物组合物具有显著的抗肝纤维化作用,对治疗肝炎、肝硬化、肝癌、胆囊炎等的治疗具有显著效果。
药效验证
用本发明的药物组合物制剂对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响
取清洁级大鼠96 只,随机分为6 组,每组各16 只,即对照组,模型组,秋水仙碱(0.2 mg/kg)组,实施例6中组合物制剂高、中、低剂量(20、10、5 g/kg)组。各组每天ig 给药,体积为20 mL/kg,连续8 周,对照组和模型组给予蒸馏水。再给药的同时采用CCl4制备大鼠肝纤维化模型,除对照组外,其余各组每只大鼠首次于背部sc 纯CCl4 5 mL/kg,以后sc 40%CCl4 花生油3 mL/kg,每周2 次,共8 周。股动脉取血,常规分离血清,大鼠处死前禁食24 h。
检测血清中的肝纤维化4 项指标:PCIII、IV-C、HA、LN。大鼠于平卧状态下剖腹,取肝脏、脾脏,称质量,计算肝脏、脾脏指数;用肉眼观察大鼠肝脏的外形、体积、颜色、质地的改变,一部分肝脏用生理盐水制成10%肝匀浆,用于检测肝组织中的SOD、GSH-Px 的活性与Hyp、MDA 水平。
数据均以x ± s 表示,采用统计软件SPSS13.0进行方差分析。
对肝纤维化大鼠血清中肝纤维化4项指标的影响
与对照组相比,模型组大鼠血清中HA、LN、PCIII、IV-C 水平均显著升高(P<0.01),提示造模成功。与模型组比较,实施例6中组合物制剂各剂量组大鼠血清中HA、LN、PCIII、IV-C 水平明显降低(P<0.01),实施例6中组合物制剂高剂量组效果最好,并且有明显的剂量相关性。结果见表1.
表1 实施例6中组合物制剂给药对CCl4 致肝纤维化大鼠血清中HA、LN、PCIII、IV-C 的影响 ( x ± s )
与对照组比较:**P<0.01;与模型组比较:▲▲P<0.01;与实施例6中组合物制剂高剂量组比较:#P<0.05 ##P<0.01;
对肝纤维化大鼠肝脏、脾脏指数的影响
与对照组比较,模型组大鼠肝脏、脾脏质量明显增加,肝脏、脾脏指数明显升高(P<0.05),提示造模成功。与模型组比较,实施例6中组合物制剂各剂量组大鼠肝脏、脾脏质量明显降低(P<0.01),肝脏、脾脏指数显著降低(P<0.01),实施例6中组合物制剂高剂量组效果最好,且呈明显剂量依赖性。结果见表2.
表2 实施例6中组合物制剂给药对CCl4 致肝纤维化大鼠肝脾及肝脾指数的影响
与对照组比较:**P<0.01;与模型组比较:▲▲P<0.01;与实施例6中组合物制剂高剂量组比较:#P<0.05 ##P<0.01;
对肝纤维化大鼠肝组织中SOD 活性及MDA、GSH-Px 和Hyp 水平的影响
与对照组比较,模型组大鼠肝组织中SOD 活性和GSH-Px 水平显著降低(P<0.01),MDA 和Hyp 水平显著升高(P<0.01),提示造模成功。与模型组比较,实施例6中组合物制剂各剂量组大鼠肝组织中MDA 和Hyp 水平显著降低(P<0.01),而肝组织中的SOD 活性和GSH-Px 水平显著增强(P<0.01),尤其是实施例6中组合物制剂高剂量组效果最好,且有明显的剂量依赖性。结果见表3。
表3 实施例6中组合物制剂给药对CCl4 致肝纤维化大鼠肝组织中SOD 活性及MDA 和GSH-Px 水平的影响 ( x ± s )
与对照组比较:**P<0.01;与模型组比较:▲▲P<0.01;与实施例6中组合物制剂高剂量组比较:#P<0.05 ##P<0.01;
以上研究表明,本发明的药物组合物及其制剂具有显著的抗肝纤维化作用。
具体实施方式
1、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用70%乙醇(体积比)冷浸两次,每次15天,合并浸渍液,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加600-800毫升水搅拌,冷却沉淀。置离心机(1200-1600 rad/min)沉降离心15~30分钟,取上清液备用;
取大孔吸附树脂D101,按与生药重量比1:2的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积20~60%乙醇(体积比)进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总黄酮,得率(重量比)为2.7%。
2、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用80%乙醇(体积比)加热回流提取2次,合并提取液,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀。置离心机(1200-1600 rad/min)沉降离心15~30分钟,取上清液备用。
取大孔吸附树脂AB-8,按与生药重量比1:l的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积20~70%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总皂苷,得率(重量比)为1.2%。
3、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用60%乙醇(体积比)浸渍48小时后,渗漉提取,渗漉至流出液色浅,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀。置离心机(1200-1600 rad/min)沉降离心15~30分钟,取上清液备用。
取739型强酸性阳离子树脂,按与生药重量比1:3的比例装柱,将上述各用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积含0.25% 氨水的30~80%乙醇进行梯度洗脱.收集乙醇洗脱液。50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总生物碱,得率为0.7%。
4、干燥虎眼万年青1.0kg粉碎成粗粉(20目),用水(体积比)煎煮提取3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩呈稠膏(相对密度1.2,70℃),加95%乙醇搅拌均匀,使乙醇浓度达到60-80%,静置过夜。
所得的静置液进行过滤得沉淀物,将沉淀物溶于水,再加入60-80%乙醇进行沉淀,过滤所得沉淀物,除蛋白(Savage 法),在50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总多糖,得率为5.5%。
5、称取步骤1制备得到的虎眼万年青总黄酮0.3 Kg,步骤2制备得到的虎眼万年青总皂苷0.2 Kg,步骤3制备得到的虎眼万年青总生物碱0.1 Kg,步骤4制备得到的虎眼万年青总多糖0.4Kg,混合后得组合物1.0Kg,加入淀粉0.4kg,维晶纤维素0.2Kg,加入0.8Kg10%聚乙烯吡咯烷酮水溶被,混合均匀,过16目筛制成湿颗粒,50℃干燥,14目整粒,加硬脂酸镁0.06Kg,总混,压片,得片剂产品。或称取步骤1制备得到的虎眼万年青总黄酮0.2 Kg,步骤2制备得到的虎眼万年青总皂苷0.1 Kg,步骤3制备得到的虎眼万年青总生物碱0.1 Kg,步骤4制备得到的虎眼万年青总多糖0.6Kg,混合后得组合物1.0Kg,加入淀粉0.2kg,维晶纤维素0.3kg,硬脂酸镁0.06kg,混台均匀,灌装胶囊,得胶囊产品。或称取对羟基苯甲酸乙酯0.05kg、卡波普940 1.0 kg加入50.0 kg蒸馏水中,于80℃水浴加热溶解,冷却后加入由步骤1制备得到的虎眼万年青总黄酮0.8 Kg,步骤2制备得到的虎眼万年青总皂苷0.3 Kg,步骤3制备得到的虎眼万年青总生物碱0.2 Kg,步骤4制备得到的虎眼万年青总多糖0.7Kg混合后得到的组合物2.0Kg和甘油5.0kg,搅拌溶解,最后加入三乙醇胺1.0kg,蒸馏水加至100.0kg,即得透明凝胶剂产品。
Claims (2)
1.一种具有抗肝纤维化作用的药物组合物,其特征是:本药物组合物由10~70重量份的虎眼万年青总黄酮、1~20重量份的虎眼万年青总皂苷、1~10重量份的虎眼万年青总生物碱、30~70重量份的虎眼万年青总多糖组成,并且是通过以下制备步骤获得的:
(1)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,用体积比浓度70%乙醇冷浸两次,每次15天,合并浸渍液,减压浓缩成70℃时相对密度1.2的稠膏,按1kg干燥虎眼万年青加600-800毫升水搅拌,冷却沉淀,置离心机在1200-1600rad/min下沉降离心15~30分钟,取上清液备用,取大孔吸附树脂D101,按与生药重量比1:2的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积的体积比浓度20~60%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总黄酮,重量比得率为2.7%;
(2)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,用体积比浓度80%乙醇加热回流提取2次,合并提取液,减压浓缩成70℃时相对密度1.2的稠膏,按1kg干燥虎眼万年青加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀,置离心机中1200-1600rad/min沉降离心15~30分钟,取上清液备用,取大孔吸附树脂AB-8,按与生药重量比1:1的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积20~70%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总皂苷,重量比得率为1.2%;
(3)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,用体积比浓度60%乙醇浸渍48小时后,渗漉提取,渗漉至流出液色浅,减压浓缩成70℃时相对密度1.2稠膏,按1kg干燥虎眼万年青加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀,置离心机中1200-1600rad/min沉降离心15~30分钟,取上清液备用,取739型强酸性阳离子树脂,按与生药重量比1:3的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积含0.25%氨水的30~80%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总生物碱,得率为0.7%;
(4)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,加药材8-10倍体积的水煎煮提取3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩成70℃时相对密度1.2稠膏,加95%乙醇搅拌均匀,使乙醇浓度达到60-80%,静置过夜,所得的静置液进行过滤得沉淀物,将沉淀物溶于水,再加入60-80%乙醇进行沉淀,过滤所得沉淀物,用Savage法除蛋白,在50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总多糖,得率为5.5%;
(5)取10~70重量份步骤(1)得到的虎眼万年青总黄酮、1~20重量份步骤(2)得到的虎眼万年青总皂苷、1~10重量份步骤(3)得到的虎眼万年青总生物碱、30~70重量份步骤(4)得到的虎眼万年青总多糖混合,即得具有抗肝纤维化作用的药物组合物。
2.一种具有抗肝纤维化作用的药物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,用体积比浓度70%乙醇冷浸两次,每次15天,合并浸渍液,减压浓缩成70℃时相对密度1.2的稠膏,按1kg干燥虎眼万年青加600-800毫升水搅拌,冷却沉淀,置离心机在1200-1600rad/min下沉降离心15~30分钟,取上清液备用,取大孔吸附树脂D101,按与生药重量比1:2的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积的体积比浓度20~60%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总黄酮,重量比得率为2.7%;
(2)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,用体积比浓度80%乙醇加热回流提取2次,合并提取液,减压浓缩成70℃时相对密度1.2的稠膏,按1kg干燥虎眼万年青加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀,置离心机中1200-1600rad/min沉降离心15~30分钟,取上清液备用,取大孔吸附树脂AB-8,按与生药重量比1:1的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积20~70%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总皂苷,重量比得率为1.2%;
(3)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,用体积比浓度60%乙醇浸渍48小时后,渗漉提取,渗漉至流出液色浅,减压浓缩成70℃时相对密度1.2稠膏,按1kg干燥虎眼万年青加600~800毫升水搅拌,冷却沉淀,置离心机中1200-1600rad/min沉降离心15~30分钟,取上清液备用,取739型强酸性阳离子树脂,按与生药重量比1:3的比例装柱,将上述备用的上清液上样,先用2~4倍柱体积去离子水洗脱,再用4~6倍柱体积含0.25%氨水的30~80%乙醇进行梯度洗脱,收集乙醇洗脱液,50~70℃减压浓缩,50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总生物碱,得率为0.7%;
(4)取干燥虎眼万年青粉碎成20目粗粉,加药材8-10倍体积的水煎煮提取3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩成70℃时相对密度1.2稠膏,加95%乙醇搅拌均匀,使乙醇浓度达到60-80%,静置过夜,所得的静置液进行过滤得沉淀物,将沉淀物溶于水,再加入60-80%乙醇进行沉淀,过滤所得沉淀物,用Savage法除蛋白,在50~70℃干燥,粉碎,得虎眼万年青总多糖,得率为5.5%;
(5)取10~70重量份步骤(1)得到的虎眼万年青总黄酮、1~20重量份步骤(2)得到的虎眼万年青总皂苷、1~10重量份步骤(3)得到的虎眼万年青总生物碱、30~70重量份步骤(4)得到的虎眼万年青总多糖混合,即得具有抗肝纤维化作用的药物组合物。
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