CN103006781B - 一种具有保肝作用的傣药复合提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有保肝作用的傣药复合提取物及其制备方法，所述提取物是从傣药猫须草(Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li)、无根藤(Cassytha filiformisLinn.)和古山龙(Arcangelisia loureiri(Pier.)Diels)中提取的，本发明还公开了提取上述提取物的方法。本发明所述的提取物可用于保肝药物或保健品的制备。
Description
技术领域
本发明涉及一种从傣药猫须草(Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y. Wu ex H.W.Li)、无根藤(Cassytha filiformis Linn.)和古山龙(Arcangelisia loureiri(Pier.)Diels)中提取的具有显著保肝作用的复合提取物，以及这种提取物的制备方法，含有该提取物的药物组合，以及该提取物和其药物组合作为药物和保健品的应用，尤其是可用于保肝药物和保健品的制备。
背景技术
肝损伤是多种肝脏疾病共有的一种病理状态，其中，由病毒型肝炎引起的肝损伤、酒精性肝损伤以及由药物、毒物引起的化学性肝损伤最为常见，肝损伤长期存在往往是导致肝纤维化，甚至肝硬化、肝癌发生的重要使动因素，我国是病毒性肝炎高发区，约有1.2亿人口为乙型肝炎病毒携带者，其中约10％发展为慢性肝炎，会逐渐出现肝损伤以及更严重的病理损害。但是，无论中医还是现代医学均没有直接杀灭患者体内肝炎病毒的良策，所以，防治肝损伤，阻断肝炎-肝纤维化-肝硬化-肝癌的发展进程，是治疗病毒型肝炎的有效方法，从而使患者处于终身无症状病毒携带者状态，将会大大延长生命，改善生活质量。另外，在亚洲各国(包括我国)，尽管病毒性肝炎所致的各种肝病占主要地位，但是随着酒类消耗量的增加，人们饮食结构的改变，近年来由酒精所致的肝损害亦呈逐年上升趋势，酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因。因此，如何防治酒精性肝损伤也已经成为医学界研究的热点。
现代医学在肝损伤的治疗方面并无特异性药物，多采用休息、加强营养、补充维生素或对症治疗等，严重者甚至被迫终止用药，而我国民族医药历经几千年的发展，积累了大量的临床治疗实践，尤其通过用药组合，其作用既优于西药，而毒性又会明显小于西药，因此，寻找能够有效治疗肝损伤(保肝)的民族药物组方，并开展现代新药研发，对拓宽肝损伤的防治手段意义重大。
发明内容
本发明的目的在于提供从傣药猫须草(Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y. Wu exH.W.Li)、无根藤(Cassytha filiformis Linn.)和古山龙(Arcangelisia loureiri(Pier.)Diels) 中提取一种复合提取物。
本发明的另一目的在于提供制备这种提取物的方法。
本发明的又一目的在于提出该提取物在制备具有保肝作用的药物制剂和保健食品中的应用。
为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：
(1)以重量份数计，按照猫须草干燥药材1份、无根藤干燥药材1份和古山龙干燥药材1份，称取各药材适量，混合粉碎，过药典2号筛；
(2)取(1)中得到的药材粉末，加入药材质量10-30倍的70％乙醇，加热回流提取，提取次数为1-3次；
(3)取(2)中提取得到的药液，于旋转蒸发仪中进行浓缩，浓缩水浴温度不超过60℃，最终得到相对密度为1.15-1.5的浸膏；
(4)取(3)中得到的浸膏，加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比计算为20-40倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的小于30％乙醇，优选20％乙醇；和10个柱体积的大于30％乙醇，优选50％乙醇进行洗脱，收集大于30％乙醇洗脱液；
(5)取(4)中收集的洗脱液，于旋转蒸发仪中进行浓缩，浓缩水浴温度不超过60℃，最终得到相对密度为1.15-1.5的浸膏；
(6)取(5)中得到的浸膏，于真空干燥箱中进行减压干燥，加热温度不超过60℃，干燥后粉碎。得到本发明提供的复合提取物。
作为对上述技术方案的改进和补充：
(7)在对(1)中得到的药材粉末进行提取时，提取溶剂可以是30％-100％乙醇。
(8)在对(1)中得到的药材粉末进行提取时，提取方式可以是加热回流提取、超声提取或者渗漉提取。
(9)在对(3)中得到的浸膏进行大孔吸附树脂富集时，使用的树脂可以是D-101型或者AB-8型，以及其他非极性、弱极性或者中等极性大孔吸附树脂。
通过上述技术方案制备得到的复合提取物是药食兼用的纯天然的植物提取物，随后的药效实验将证明，本发明复合提取物具有显著的抗肝损伤作用。
本发明还涉及以本发明提取物作为活性成分，添加常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-95％重量的本发明提取物。
本发明的提取物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。除本发明的提取物外，在不防碍本发明效果的范围内，可以根据需要适当混合用于通常的药物制剂和保健食品的其他成分中，例如：交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲淀粉钠、微晶纤维素、乳糖、阿司巴坦、硬脂酸镁等内加辅料、外加辅料和包衣辅料，其剂型可以是任何一种药学上所说的剂型，优选片剂、丸剂、胶囊剂或口服液。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围，为说明方便，以下将本发明提取物简称为TQW。
实施例1提取物(TQW)的制备
本发明通过以下方法制备提取物：
(1)以重量份数计，按照猫须草干燥药材1份、无根藤干燥药材1份和古山龙干燥药材1份，称取各药材适量，混合粉碎，过药典2号筛。
(2)取(1)中得到的药材粉末，加入药材质量10-30倍的70％乙醇，加热回流提取，提取次数为1-3次。
(3)取(2)中提取得到的药液，于旋转蒸发仪中进行浓缩，浓缩水浴温度不超过60℃，最终得到相对密度为1.15-1.5的浸膏。
(4)取(3)中得到的浸膏，加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比计算为20-40倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液。
(5)取(4)中收集的洗脱液，于旋转蒸发仪中进行浓缩，浓缩水浴温度不超过60℃， 最终得到相对密度为1.15-1.5的浸膏。
(6)取(5)中得到的浸膏，于真空干燥箱中进行减压干燥，加热温度不超过60℃，干燥后粉碎。得到本发明提供的复合提取物。
作为对上述技术方案的改进和补充：
(7)在对(1)中得到的药材粉末进行提取时，提取溶剂可以是30％-100％乙醇。
(8)在对(1)中得到的药材粉末进行提取时，提取方式可以是加热回流提取、超声提取或者渗漉提取。
(9)在对(3)中得到的浸膏进行大孔吸附树脂富集时，使用的树脂可以是D-101型或者AB-8型，以及其他非极性、弱极性或者中等极性大孔吸附树脂。
通过上述技术方案制备得到的复合提取物是药食兼用的纯天然的植物提取物，随后的药效实验将证明，本发明复合提取物具有显著的抗肝损伤作用。
本发明还涉及以本发明提取物作为活性成分，添加常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-95％重量的本发明提取物。
实施例2(TQW对CCl4诱导的肝损伤模型大鼠的保护作用)
CCl4肝损伤大鼠模型是目前公认的化学性肝损伤动物模型，本实施例用此模型来验证TQW对化学性肝损伤的保护作用。
1、分组、造模与给药
60只大鼠随机分为空白组、模型组、联苯双酯组(阳性对照组)和TQW低、中、高剂量组，除空白组外各组大鼠皮下注射40％CCl4橄榄油溶液2mL/kg体重，每2天1次，共注射6次，首次皮下注射40％CCl4橄榄油溶液4mL/kg体重，空白组皮下注射等体积的橄榄油；
从造模第1天起，TQW低剂量组每天灌胃TQW(15mg/kg体重)，TQW中剂量组每天灌胃TQW(30mg/kg体重)，TQW高剂量组每天灌胃TQW(45mg/kg体重)，联苯双酯组每天灌胃联苯双酯(50mg/kg体重)，空白组和模型组每天灌胃等体积的蒸馏水，连续15d，末次给药后4h摘眼球取血，检测各指标。
2、TQW对CCl4所致肝损伤大鼠血清ALT、AST的影响结果
与空白组比较，模型组大鼠血清ALT、AST显著升高，说明CCL4诱发大鼠肝损伤模型成功；与模型组比较，TQW各组及联苯双酯组ALT、AST显著降低。TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当，结果见下表：
注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
3、TQW对CCl4所致肝损伤大鼠肝组织SOD、MDA的影响结果
与空白组比较，模型组大鼠肝组织SOD显著降低、MDA显著升高，说明CCL4诱发大鼠肝损伤模型成功；与模型组比较，TQW各组及联苯双酯组SOD显著升高、MDA显著降低。TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当，结果见下表：
注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
4、TQW对CCl4所致肝损伤大鼠肝组织病理学的影响结果
空白组大鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构完整，肝细胞无肿胀、变性、坏死，无淋巴细胞浸润及纤维增生；模型组大鼠肝组织可见纤维组织增生，肝小叶正常结构被破坏，肝细胞索排列紊乱，部分肝细胞变性坏死，有细胞水肿现象，并有大量淋巴细胞浸润，提示造模成功；联苯双酯组趋于空白组，肝小叶结构完整，有个别出现肝细胞点状坏死，少量淋巴细胞浸润，散在的肝细胞脂肪变性；TQW高、中、低剂量组不同程度改善，表现为肝组织结构趋于正常，肝细胞肿胀程度减轻，纤维组织增生减轻，肝细胞脂肪变性减少，淋巴细胞浸润减少；TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当。
5、小结
本研究发现TQW能显著减轻CCl4所致的化学性大鼠肝损伤，具有明显的保肝作用。
实施例3(TQW对ConA诱导的肝损伤模型小鼠的保护作用)
ConA诱导的肝损伤与肝炎病毒所致的肝损伤机理相似，本实施例用此模型来验证TQW对病毒型肝炎引起的肝损伤的保护作用。
1、分组、造模与给药
小鼠购买后适应性喂养3天，将60只小鼠随机分为空白组、模型组、联苯双酯组(阳性对照组)和TQW低、中、高剂量组；
于第4日上、下午，第5日上、下午，第6日上午灌胃给药或等体积的蒸馏水0.2mL/只/次(药物用蒸馏水稀释成等体积)，共计5次。TQW低剂量组每次灌胃TQW(30mg/kg体重)，TQW中剂量组每次灌胃TQW(60mg/kg体重)，TQW高剂量组每天灌胃TQW(90mg/kg体 重)，联苯双酯组每次灌胃联苯双酯(100mg/kg体重)，空白组和模型组每天灌胃等体积的蒸馏水；
末次给药后4h，禁食不禁水，除空白组尾静脉注射0.9％氯化钠注射液外，其余5组尾静脉注射ConA20mg/kg体重。10h后摘眼球取血，检测各指标。
2、TQW对ConA所致肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响结果
与空白组比较，模型组小鼠血清ALT、AST显著升高，说明ConA诱发小鼠肝损伤模型成功；与模型组比较，TQW各组及联苯双酯组ALT、AST显著降低。TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当，结果见下表：
注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
3、TQW对ConA所致肝损伤小鼠血清IFN-γ和TNF-α的影响结果
与空白组比较，模型组小鼠血清IFN-γ、TNF-α显著升高，说明ConA诱发小鼠肝损伤模型成功；与模型组比较，TQW各组及联苯双酯组ALT、AST显著降低。TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当，结果见下表：
注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
4、TQW对ConA所致肝损伤小鼠肝组织病理学的影响结果
空白组小鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构完整，肝索细胞排列整齐，肝细胞无肿胀、变性、坏死，无淋巴细胞浸润；模型组小鼠肝组织可见肝小叶正常结构被破坏，肝细胞索排列紊乱，部分肝细胞变性坏死，有细胞水肿现象，并有大量的淋巴细胞浸润，提示造模成功；联苯双酯组趋于空白组，肝小叶结构完整，有个别出现肝细胞点状坏死，有少量炎细胞浸润；TQW高、中、低剂量组不同程度改善，表现为肝细胞结构趋于正常，肿胀程度减轻，淋巴细胞浸润减少；TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当。
5、小结
本研究发现TQW能显著减轻ConA所致免疫性小鼠肝损伤，具有明显的保肝作用。
实施例4(TQW对酒精诱导的肝损伤模型小鼠的保护作用)
本实施例采用酒精诱导的肝损伤动物模型来验证TQW对酒精性肝损伤的保护作用。
1、分组、造模与给药
60只小鼠随机分为空白组、模型组、联苯双酯组(阳性对照组)和TQW低、中、高剂量组，除空白组外各组小鼠每日灌胃60％医用酒精(0.1ml/10g体重)，连续10天，空白组灌胃给予等体积蒸馏水；
从造模第1天起，TQW低剂量组每天灌胃TQW(30mg/kg体重)，TQW中剂量组每天灌胃TQW(60mg/kg体重)，TQW高剂量组每天灌胃TQW(90mg/kg体重)，联苯双酯组每天灌胃联苯双酯(100mg/kg体重)，空白组和模型组每天灌胃等体积的蒸馏水，连续12d；末次给药后4h摘眼球取血，检测各指标。
2、TQW对酒精所致肝损伤小鼠血清ALT、AST的影响结果
与空白组比较，模型组小鼠血清ALT、AST显著升高，说明酒精诱发小鼠肝损伤模型成功；与模型组比较，TQW各组及联苯双酯组ALT、AST显著降低；TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当，结果见下表：
注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜001
3、TQW对酒精所致肝损伤小鼠肝组织SOD、MDA的影响结果
与空白组比较，模型组小鼠肝组织SOD显著降低、MDA显著升高，说明酒精诱发小鼠肝损伤模型成功；与模型组比较，TQW各组及联苯双酯组SOD显著升高、MDA显著降低；TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当，结果见下表：
注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
4、TQW对酒精所致肝损伤小鼠肝组织病理学的影响结果
空白组小鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，无淋巴细胞浸润及纤维增生，肝细胞以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列，肝小叶轮廓清晰，肝细胞分界清、无肿胀、 变性、坏死，肝细胞核圆而清晰，核位于细胞中央，胞质丰富；模型组小鼠肝组织可见肝小叶正常结构被破坏，肝细胞索排列紊乱，胞质疏松，胞质内可见大小不一的脂滴空泡，部分肝细胞变性坏死，有细胞水肿现象，汇管区有大量淋巴细胞浸润，提示造模成功；联苯双酯组趋于空白组，肝小叶结构完整，有个别出现肝细胞点状坏死，少量淋巴细胞浸润；TQW高、中、低剂量组不同程度改善，表现为肝组织结构趋于正常，肝细胞肿胀程度减轻，淋巴细胞浸润减少。TQW高剂量组与联苯双酯组作用相当。
5、小结
本研究发现TQW能显著减轻酒精所致小鼠肝损伤，具有明显的保肝作用。
实施例5(分散片的制备)
按重量份计，处方为：TQW4～6份，微晶纤维素3～5份，羧甲基淀粉钠1份，低取代羟丙纤维素1份，交联羧甲纤维素钠1份，滑石粉0.1份，硬脂酸镁0.1份。取处方量的TQW、微晶纤维素、低取代羟丙纤维素1份，交联羧甲纤维素钠，过筛，混合均匀，用适量0.05g/ml浓度的聚乙烯吡咯烷酮(K30)的60％乙醇溶液制软材，过18目筛制粒，60℃干燥4小时，18目筛整粒，加入滑石粉、硬脂酸镁混合均匀，压片即得。
实施例6(片剂的制备)
按重量份计，取TQW5～9份，加入滑石粉1～2份，淀粉1～2份，羧甲基淀粉钠1～2份，喷入95％乙醇润湿，湿法制粒，干燥，加入0.5～1％硬脂酸镁，混合均匀，压片；加入15％欧巴代包衣液包衣，增重7％包衣得薄膜衣片。
实施例7(胶囊剂的制备)
按重量份计，取TQW8～9份，加入滑石粉1～2份，喷入95％乙醇润湿，湿法制粒，干燥，加入0.5～1％硬脂酸镁，混合均匀，分装得胶囊剂。
Claims (10)
1.一种具有保肝作用的傣药复合提取物的制备方法，包括如下步骤：
以重量份数计，按照猫须草(Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li)1份、无根藤(Cassytha filiformis Linn.)1份和古山龙(Arcangelisia loureiri(Pier.)Diels)1份，按上述比例称取各干燥药材，混合粉碎，过药典2号筛，取药材粉末，用适当浓度乙醇浸泡后提取，提取液于旋转蒸发仪中进行浓缩，浓缩水浴温度不超过60℃，最终得到相对密度为1.15-1.5的浸膏，浸膏利用大孔吸附树脂柱进行富集，富集的浸膏用乙醇洗脱，收集大于30％乙醇洗脱液，收集的洗脱液，于旋转蒸发仪中进行浓缩，浓缩水浴温度不超过60℃，最终得到相对密度为1.15-1.5的浸膏，将第二次得到相对密度为1.15-1.5的浸膏于真空干燥箱中进行减压干燥，加热温度不超过60℃，干燥后粉碎，得到复合提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于在对药材粉末进行提取时，提取溶剂为30％-100％乙醇，提取次数为1-3次，每次用量为10倍量，浸泡12小时，加热回流提取或者超声提取或者渗漉提取2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于在对浓缩后得到的浸膏进行大孔吸附树脂富集时，将浸膏加5倍量水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比计算为20-40倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的不同浓度的乙醇进行洗脱，收集20％-50％乙醇洗脱液，减压干燥后粉碎，制得棕色粉末。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于对药材粉末进行提取时，提取方式为加热回流提取、超声提取或者渗漉提取。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于对浓缩后得到的浸膏进行大孔吸附树脂富集时，用AB-8型或者其他非极性、弱极性或者中等极性大孔吸附树脂替代D-101型大孔吸附树脂。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于对浓缩后得到的浸膏进行大孔吸附树脂富集时，洗脱溶剂为不同浓度的乙醇，依照乙醇浓度由低到高依次洗脱。
7.通过权利要求1-6任何一项所述的方法得到的具有保肝作用的傣药复合提取物。
8.一种药物组合制剂，其特征在于，包括作为活性成分的权利要求7所述的傣药复合提取物及药学上可接受的载体。
9.根据权利要求8所述的药物组合制剂，其特征在于，该制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂或丸剂。
10.权利要求7所述的复合提取物在制备保肝药物制剂或保健食品中的应用。
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141112 Termination date: 20190106 |
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