CN111000924A - 一种具有降血糖作用的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种具有降血糖作用的中药组合物及其制备方法和用途，所述中药组合物由以下重量份的药物制成：莕菜10～20份、枳壳3～9份以及柳穿鱼2～6份；并采用净制、超微粉碎、乙醇回流提取以及大孔树脂分离等制备步骤获得上述具有降血糖作用的中药组合物，能够显著降低糖尿病患者血糖指数以及餐后血糖，能够达到控制病情、延缓病程发展以及阻止并发症的发生。

Description

一种具有降血糖作用的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有降血糖作用的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病(血糖)一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。糖尿病长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。
糖尿病属于中医“消渴”范畴，早在公元前四世纪《黄帝内经》一书中就有记载。《素文·气厥论》：有“肺消者饮一溲一，死不治”的记载。《黄帝内经》还依据不同的病因病机及临床症状，分别提出“消渴”、“消瘅”、“肺消”、“鬲消”、“消中”等病名。消渴病是由于先天禀赋不足，复因情志失调、饮食不节等原因所导致的以阴虚燥热为基本病机，以多饮、多尿、多食、消瘦、乏力，或尿有甜味为典型临床表现的一种疾病。消渴病的病机主要在于阴津亏损，燥热偏盛，而以阴虚为本，燥热为标，两者互为因果，阴愈虚则燥热愈盛，燥热愈盛则阴愈虚。消渴病日久，其病机转变主要有两种结果：一是阴损及阳，致阴阳俱虚。消渴虽以阴虚为本，燥热为标，但由于阴阳互根、互用，若病程日久，阴损及阳，则致阴阳俱虚。其中以肾阳虚及脾阳虚较为多见。二是病久人络，血脉瘀滞。消渴病是一种病及多个脏腑的疾病，影响气血的正常运行，且阴虚内热，耗伤津液，亦使血行不畅而致血脉瘀滞。血瘀是消渴病的重要病机之一，且淤血形成之后又是造成糖尿病并发症的主要原因。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的药物制成：莕菜10～20份、枳壳3～9 份以及柳穿鱼2～6份；
进一步的，所述具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的药物制成：莕菜12～18份、枳壳5～8份以及柳穿鱼3～5份；
更进一步的，所述具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的药物制成：莕菜16份、枳壳6份以及柳穿鱼4份；
本发明的第二方面，本发明还提供了一种上述任一种具有降血糖作用的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1：按比例称取上述各组分各味药物，充分净制后粉碎成颗粒；
S2：将上述颗粒加浓度为60～90％v/v乙醇水溶液进行回流提取，获得乙醇提取液，减压回收溶剂至干即得浸膏；
S3：将所述浸膏通过大孔树脂分离，经乙醇水溶液梯度洗脱后，收集洗脱液，减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物；
进一步的，S1所述的颗粒粒径为300～500目；优选的，S1所述的颗粒粒径为400目；
进一步的，S2所述的乙醇水溶液浓度为80％v/v；
进一步的，S2所述的提取温度为50～70℃；优选的，S2所述的提取温度为60℃；
进一步的，S2所述的提取时间为30min～2h；优选的，S2所述的提取时间为1h；
进一步的，S2所述回收溶剂的温度为40～60℃；优选的，S2所述回收溶剂的温度为55℃；
进一步的，S3所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂；
更进一步的，S3所述的步骤包括：将所述浸膏吸附于AB-8型大孔树脂，静置30min～2h，先用纯净水洗脱，然后依次用10％、20％、40％、以及60％、75％以及90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集60％、75％以及90％醇水溶液洗脱流分，合并后于40～60℃下减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物。
本发明的第三方面提供了一种治疗糖尿病的药物，包括上述任一种具有降血糖作用的中药组合物以及药学上可接受的载体；
进一步的，所述药学上可接受的载体包括稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、溶剂等；
进一步可选的，所述稀释剂包括但不限于淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖等；所述润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、氯化钠、油酸钠、月桂醇硫酸钠、泊洛沙姆等；所述粘合剂包括但不限于水、乙醇、淀粉浆、糖浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解剂包括但不限于碳酸氢钠、枸橼酸、酒石酸、低取代羟丙基纤维素等；所述稳定剂包括但不限于多糖如金合欢胶、琼脂、藻酸、纤维素醚和羧甲基甲壳酯等；所述溶剂包括但不限于水、平衡的盐溶液等。
进一步的，所述治疗糖尿病的药物为口服制剂或注射剂；优选的，所述口服制剂包括但不限于普通片剂、分散片、肠溶片、颗粒、胶囊、滴丸、散剂、口服液或乳剂中的任意一种；优选的，所述注射剂选自小水针剂、输液剂或冻干粉针剂中的任意一种；
本发明的第四方面请求保护如上所述的任一中药组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。
附图说明
图1是.正离子模式下实施例5中药组合物样品与空白对照的总离子流图
图2是.负离子模式下实施例5中药组合物样品与空白对照的总离子流图
有益效果
本发明具备以下有益效果：
莕菜，别名荇菜，莕、接余、菨余、凫葵、水镜草、荇丝菜、金莲儿、藕蔬菜、靥子菜、金莲子、莕公须，来源为龙胆科植物莕菜 Nymphoidespeltatdμm(Gmel.)O.Kuntze的全草。性味甘，寒。功能主治：具有利尿、消肿、解毒的功效，用来治疗寒热，热淋，痈肿和火丹。
枳壳，来源为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。苦、辛、酸，温。归脾、胃经。功能主治：理气宽中，行滞消胀。用于胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停；胃下垂，脱肛，子官脱垂。
柳穿鱼，来源为玄参科植物柳穿鱼Linaria vulgaris Hill subsp. sinensis(Debeaux)Hong的全草。性味甘，微苦，寒。功能主治：清热解毒，散瘀消肿。主感冒，头痛头晕，黄疸，痔疮便秘，皮肤病，汤火伤。
1.本发明中药组合物中莕菜、枳壳和柳穿鱼三者配伍理气导滞、祛瘀降糖，发挥协同作用，能够显著降低糖尿病患者血糖指数以及餐后血糖，具有控制病情、延缓病程发展以及阻止并发症发生的作用；
2.本发明对各中药组分采用超微粉碎后，采用乙醇提取，并采用大孔树脂进行分离获得活性成分，该方法简便易行，成本较低，且获得的中药提取物中有效成分含量高，与其它提取分离方法相比，能够显著提高治疗效果。另外，本发明的制备过程中未引入对环境不友好的有机溶剂，未造成环境污染。
具体实施方式
下面将对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
实施例1：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜100g、枳壳30g以及柳穿鱼20g；
该中药组合物的制备方法包括以下步骤：S1：按比例称取上述各组分各味药物，充分净制后粉碎成300目颗粒；S2：将上述颗粒加浓度为60％v/v乙醇水溶液、在50℃下进行回流提取2h，获得乙醇提取液，随即将乙醇提取液在40℃下减压回收溶剂至干即得浸膏；S3：将所述浸膏吸附于AB-8型大孔树脂，静置30min，先用纯净水洗脱，然后依次用10％、20％、40％、以及60％、75％以及90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集60％、75％以及90％乙醇水溶液洗脱流分，合并后40℃下减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物。
实施例2：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜200g、枳壳90g以及柳穿鱼60g；
该中药组合物的制备方法包括以下步骤：S1：按比例称取上述各组分各味药物，充分净制后粉碎成500目颗粒；S2：将上述颗粒加浓度为90％v/v乙醇水溶液、在70℃下进行回流提取30min，获得乙醇提取液，随即将乙醇提取液在60℃下减压回收溶剂至干即得浸膏；S3：将所述浸膏吸附于AB-8型大孔树脂，静置2h，先用纯净水洗脱，然后依次用 10％、20％、40％、以及60％、75％以及90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集60％、75％以及90％乙醇水溶液洗脱流分，合并后于60℃下减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物。
实施例3：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜120g、枳壳50g以及柳穿鱼30g；
该中药组合物的制备方法包括以下步骤：S1：按比例称取上述各组分各味药物，充分净制后粉碎成400目颗粒；S2：将上述颗粒加浓度为70％v/v乙醇水溶液、在60℃下进行回流提取1h，获得乙醇提取液，随即将乙醇提取液在50℃下回收溶剂后减压干燥即得浸膏；S3：将所述浸膏吸附于AB-8型大孔树脂，静置1h，先用纯净水洗脱，然后依次用10％、20％、40％、以及60％、75％以及90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集60％、75％以及90％乙醇水溶液洗脱流分，合并后50℃下减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物。
实施例4：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜180g、枳壳80g以及柳穿鱼50g；制备方法同实施例3。
实施例5：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜160g、枳壳60g以及柳穿鱼40g；制备方法同实施例3。
实施例6
将实施例5获得的中药组合物打粉后灌装胶囊，共制备出200粒胶囊，规格0.5g/粒。
对比例1：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜160g、枳壳100g；制备方法同实施例3。
对比例2：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜160g、柳穿鱼100g；制备方法同实施例3。
对比例3：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：枳壳220g以及柳穿鱼40g；制备方法同实施例3。
对比例4：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：枳壳60g以及柳穿鱼200g；制备方法同实施例3。
对比例5：
一种具有降血糖作用的中药组合物，由以下重量份的组分制成：莕菜160g、枳壳220g以及柳穿鱼40g；制备方法包括以下步骤：
该中药组合物的制备方法包括以下步骤：S1：按比例称取上述各组分各味药物，充分净制后粉碎成400目颗粒；S2：将上述颗粒加浓度为70％v/v乙醇水溶液进行回流提取，获得乙醇提取液，随即将乙醇提取液在50℃下减压回收溶剂至即得具有降血糖作用的中药组合物。
实验例1-实施例5获得的中药组合物有效成分的指认和含量测定
1.供试品制备方法
取实施例5获得的中药组合物作为样品0.2g于10ml离心管内，加入 8ml 50％甲醇水溶液，45℃超声提取40min后，静置5min后，取上清液于1ml离心管中，放入高速离心机中13000r/min离心10min，过0.22um 微孔滤膜后装入1.5ml自动进样瓶内，得到样品溶液。同样条件，不加入样品，得到空白对照品溶液。将样品放入4℃冰箱保存，在分析前取出(保存时间不能超过24h)。
2.色谱条件
色谱仪器为：岛津LC-30A。色谱柱为C18柱(1.7μm，2.1*100mm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；进样量为5μl；流动相采用乙腈-0.1％甲酸水溶液的梯度洗脱程序，具体见表1。
表1流动相梯度洗脱程序
时间(min) A(0.1％甲酸水溶液) B(乙腈)
0.01 95 5
15 75 30
30 5 95
32.1 95 5
35 停止分析
3.质谱条件
质谱仪器为AB Sciex Triple TOF 5600+。离子化模式为电喷雾正离子模式，离子源电压分别为5500V，离子源温度为500℃，去簇电压(DP) 分别为100V，碰撞能量(CE)分别为35eV，碰撞能量扩展(CES) 分别为15eV。雾化气体为氮气，辅助气1为50PS I，辅助气2为50PSI，气帘气为40PSI。一级质谱母离子扫描范围为50～1000，IDA设置响应值超过100cps的6个最高峰进行二级质谱扫描，子离子扫描范围为 50～1000，开启动态背景扣除(DBS)。离子化模式为电喷雾负离子模式，离子源电压分别为-4500V，离子源温度为500℃，去簇电压(DP) 分别为100V，碰撞能量(CE)分别为-35eV，碰撞能量扩展(CES) 分别为15eV。雾化气体为氮气，辅助气1为50PS I，辅助气2为50PSI，气帘气为40PSI。一级质谱母离子扫描范围为50～1000，IDA设置响应值超过100cps的6个最高峰进行二级质谱扫描，子离子扫描范围为 50～1000，开启动态背景扣除(DBS)。
4.检测结果
如图1、2所示，图1表示正离子模式下实施例5中药组合物样品与空白对照总离子流图，其中线A表示空白对照总离子流图，线B表示样品总离子流图；图2表示负离子模式下实施例5中药组合物样品与空白对照总离子流图，其中线C表示空白对照总离子流图，线D表示样品总离子流图。
通过前期文献调研结合采用飞行时间高分辨质谱对数据库中的活性成分匹配，检测到如下成分：橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、橙皮素、甜橙素、柠檬苦素、诺米林、水合橙皮内酯、伞形花内酯、柳穿鱼黄素、乌苏酸、蓟黄素、刺槐素、软脂酸。
实验例2-小鼠降糖实验
2.1动物
雄性Wistar大鼠60只，SPF级，体质量(200±20)g，2～3月龄，南京大学南京生物医药研究院提供，南京大学南京生物医药研究院，温度20～25℃，相对湿度40％～70％，自由摄食饮水。
2.2药物
实施例1～5、对比例1～5、罗格列酮片(Dalian Mellon,biological technologyco.,LTD，有效期至2020.3)。
2.3分组、造模及给药
将120只雄性昆明小鼠普通饲料适应性喂养1周，禁食12h，尾静脉采血测空腹血糖。血糖4.77～7.77mmol/L小鼠入选，随机选取8只作为正常组，其余作为造模组。造模组小鼠给予高糖高脂饲料喂养，正常组给予普通饲料喂养。自由饮水，饲养4周后，记录小鼠体质量。禁食不禁水12小时后，给予造模组小鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(缩写为STZ，用0.1mmol/L、pH4.2～4.5的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液配制2％STZ 溶液)50mg/kg，24h后剪尾取血测定血糖，连续三天空腹血糖(FBG) ≥11.0mmol/L的小鼠纳入模型实验组。将成模小鼠随机分为模型组、实施例1～5、对比例1～5组以及罗格列酮组，每组8只，共计96只。成模小鼠均继续给予高糖高脂饲料喂养，正常组给予普通饲料喂养，持续 21天，2次/d。按人与小鼠体表面积折算及前期实验研究予相应剂量药物，实施例1～5、对比例1～5组均给药50mg/kg，罗格列酮50mg/kg，正常组和模型组给予等量生理盐水。各组均为灌胃给药，1次/d，连续给药21天。每周应用血糖仪检测1次空腹血糖水平，记录3周后每组每只小鼠的血糖值。
2.4口服葡萄糖耐量实验(OGTT)
处死小鼠的前一天，将小鼠禁食一晚，之后进行OGTT。按先前分组口服灌胃给药，60min后灌胃葡萄糖(2.0g/kg)。在给予葡萄糖0、 30、60、120min后从各组各组小鼠尾部收集血液，利用血糖仪测定血糖水平。
2.5对糖尿病小鼠血糖水平的影响
如表2所示，每组小鼠8只，分别编为1#～8#，小鼠饲养的3周里，模型组血糖水平明显升高，与正常组比较，差异显著(P＜0.001)；经实施例1～5和对比例1～5组治疗后，小鼠血糖水平显著降低，3周后，罗格列酮、实施例1～5、对比例1～5分别与模型组比较，差异显著(P＜ 0.01)；另外，将治疗效果最好的实施例5与对比例1～5组分别比较，对小鼠血糖水平均差异显著(P＜0.01)。
表2中药组合物对糖尿病小鼠血糖水平的影响
Figure BDA0002353855800000121
2.6对小鼠OGTT的影响
正常组、模型组、罗格列酮组、实施例1～5组以及对比例1～5组在口服葡萄糖60min后血糖水平达到最高值，随机回落延续到120min。 120min后，实施例1～5和对比例1～5组均能显著抑制血糖水平升高(P ＜0.01)，将降血糖效果最好的实施例5与对比例1～5进行比较可知，虽然均能降低血糖水平，但是实施例5分别与对比例1～5均存在显著性差异(P＜0.01)。
表3中药组合物对小鼠OGTT的影响(120min后)
Figure BDA0002353855800000131
实验例3-临床病例
资料与方法：一般资料门诊II型糖尿病患者共43例，其中男25例，女18例，患者年龄48～75岁，空腹血糖(FPG)以及餐后2h血糖(2hPG) 均大幅升高。服用本发明实施例6制备的药物，每天3次，每次2粒，服用三个疗程后，检测上述生化指标。治愈：FPG<6.1mmol/L，2h血糖 (2hPG)<8.0mmol/L；有效：空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)有所改善，但未达到正常水平；无效：空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG) 均无明显改变；治疗效果：治愈12例，有效28例，无效2例，总有效率为93％以上。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。

Claims (10)

1.一种具有降血糖作用的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的药物制成：莕菜10～20份、枳壳3～9份以及柳穿鱼2～6份。
2.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的药物制成：莕菜12～18份、枳壳5～8份以及柳穿鱼3～5份。
3.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的药物制成：莕菜16份、枳壳6份以及柳穿鱼4份。
4.根据权利要求1～3任一项所述的具有降血糖作用的中药组合物，其特征在于，所述莕菜为莕菜根茎或莕菜花。
5.一种权利要求1～4任一项所述具有降血糖作用的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1：按比例称取上述各味药物，充分净制后粉碎成颗粒；
S2：将上述颗粒加浓度为60～90％v/v乙醇水溶液进行回流提取，获得乙醇提取液，减压回收溶剂至干即得浸膏；
S3：将所述浸膏通过大孔树脂分离，经乙醇水溶液梯度洗脱后，收集洗脱液，减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物。
6.根据权利要求5所述的具有降血糖作用的中药组合物的制备方法，其特征在于，S3所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
7.根据权利要求6所述的具有降血糖作用的中药组合物的制备方法，其特征在于，S3所述的步骤包括：将所述浸膏吸附于AB-8型大孔树脂，静置30min～2h，先用纯净水洗脱，然后依次用10％、20％、40％、以及60％、75％以及90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集60％、75％以及90％乙醇水溶液洗脱流分，合并后于40～60℃下减压回收溶剂至干，即得具有降血糖作用的中药组合物。
8.一种治疗糖尿病的药物，其特征在于，包括权利要求1～3任一所述的具有降血糖作用的中药组合物以及药学上可接受的载体。
9.根据权利要求8所述治疗糖尿病的药物，其特征在于，所述药物为口服制剂或注射剂。
10.一种权利要求1～3任一中药组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。
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