CN105481921A - 基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法 - Google Patents

基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，该方法包括以下步骤：⑴制备棘豆提取物浸膏：棘豆经醇提、减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏；⑵萃取：棘豆提取物浸膏溶解后进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位；⑶水部位注入大孔树脂层析柱中进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位；⑷将40%的乙醇部位干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末；⑸将40%乙醇部位干燥粉末溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置进行一二级分离、洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol？3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。本发明工艺简单、重复性高、回收率高。

Description

基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法
技术领域
本发明涉及一种化合物的制备方法，尤其涉及基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法。
背景技术
棘豆属（OxytropisD.C.）植物属于豆科蝶形花亚科。该属植物为多年生草本，半灌木或灌木，全世界约为300多种，而我国有棘豆属植物131种（药用植物为20余种），分别分布于甘肃、青海、内蒙古、四川、西藏等地。棘豆属药用植物曾被收载于1977年版中国药典，其在我国分布广泛，且民间常用于藏药和蒙药的复方之中。
藏药棘豆（OxytropisfalcateBunge）（藏药名为莪达夏）是豆科（Leguminosae）棘豆属（OxytropisD.C.）多年生草本植物。生长在2700~4300m的河滩、沙地、山坡、草甸，产于青藏高原。棘豆主要具有抗炎止疼、清热解毒、止血等功效，用于利便、除毒、清肿、止血，可治疗麻风病、流感及扁桃体炎等多种病症。由于其突出的疗效，具有“草药之王”的美誉。棘豆是藏医常用的三大抗炎药之一，藏医在临床上使用广泛，它是六味棘豆散、九味青鹏散、奇正藏贴、奇正消痛贴膏的多种藏药复方或藏成药的主要药物，是一味非常具有研究和开发价值的天然药物。
甘肃棘豆（OxytropiskansuensisBunge）是棘豆属有毒植物品种之一，同时具有较强的药理活性，尤其在藏药中使用较多，具有解毒医疮，止血利尿，治疗各种内出血症。
多叶棘豆（Oxytropismyriophylla(Pall)DC.）在蒙药中使用较多，主要用于瘟疫、炎症、丹毒、腮腺炎、麻疹、痛风、各种刺疼和出血等症。
目前，各国学者对棘豆属20多种药用植物分离得到了140多个化合物，其中多以黄酮类、三萜类和生物碱类化学成分居多，，没有系统深入地研究棘豆中活性物质的作用机制，仅对其进行了初步的药理活性研究。同时，也无法稳定获得纯度为98%以上的化学对照品，不能满足棘豆新药创制及相关制剂的质量控制要求，从而制约了棘豆药材的药用开发研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、重复性高、回收率高的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法。
为解决上述问题，本发明所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将棘豆用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇进行微波提取，得到提取液；所述提取液经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏；
⑵萃取：
将所述棘豆提取物浸膏用其质量1~10倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位；
⑶所述水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用5~50倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位；
⑷将所述40%的乙醇部位干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末；
⑸将所述40%乙醇部位干燥粉末用其质量的1~30倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为40%~60%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为40%~60%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
所述步骤⑴中棘豆为镰形棘豆、甘肃棘豆、多叶棘豆中一种。
所述步骤⑴中微波提取的条件是指料液比为1g：5mL~30mL，提取温度为60~95℃，提取次数1~4次，每次1~4h，微波功率为1~100KW。
所述步骤⑴中减压浓缩的条件是指压力为0.02~0.07MPa。
所述步骤⑷中干燥的条件是指温度为50~80℃。
所述步骤⑸中一级制备色谱柱的分离条件是指流速为20~60mL/min，检测波长为200~400nm。
所述步骤⑸中一级制备色谱柱中的色谱填料为C18或C8键合相填料，填料粒径为5~20um。
所述步骤⑸中捕集设备吸附填料为聚苯乙烯或甲基丙烯酸-二乙烯基苯聚合物。
所述步骤⑸中二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
所述步骤⑸中二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为40%~60%的甲醇，流速为0.5~5mL/min，检测波长为200~400nm。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明采用具有平行分离模式的制备色谱装置分离制备新化合物，不但工艺简单，实用性高，而且实现了样品的快速分离制备；同时，在保证高效分离的前提下，提高了样品的化学品产量，可以获得克级纯度在98%以上的化学对照品（参见图1、图2）。
2、采用本发明方法获得的新化合物具有较好抗炎活性，为以后的药物研发提供了理论依据。
【抗炎实验】
⑴实验动物：昆明种小鼠，雌性，6~8周龄，体重20~25g，分为5组，每组10只。
⑵受试药物及实验材料：二甲苯、新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
⑶实验方法：
小鼠随机分组，连续给药一周，每鼠于右耳廓均匀涂10~15ul二甲苯，左耳作对照。2小时后脱椎处死，剪下小鼠耳廓，用9mm的穿孔器将耳廓圆片取下，称重。
⑷结果：
表1新化合物对二甲苯所致的小鼠耳肿胀的抑制作用
注：*p<0.05,*p<0.01,*p<0.001vsmodel。
该新化合物能明显抑制二甲苯所致的小鼠急性炎症反应，表现出很好的量效关系。
【新化合物应用实验】
⑴实验动物：SD大鼠，雄雌性兼备，6~8周龄，体重120~150kg，分为5组，每组10只。
⑵实验方法及结果：
选用健康SD大鼠50只，雄雌各半，体重150±30g，随机分为5组，分别为空白对照组、阳性对照组和新化合物的高中低剂量组，按照表2所列计量与途径给药。空白对照组灌胃等容积的生理盐水，每日给药1次，连续给药7d实验前于每只大鼠左后足关节处做标记，用外径千分尺测定大鼠左后足厚度。末次给药30min后于大鼠左后足拓皮下注射10%蛋清0.1ml致炎。在致炎后1、2、3、4小时分别测定大鼠左后足厚度，计算各大鼠致炎前后左右后足厚度变化，以肿胀度（致炎后足厚度值与致炎前足厚度之差值）判断药物的抗炎效果。结果见表2。
表2
3、本发明简单、快速、重复性高，易于推广。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明中新化合物色谱图。其中液相条件为0~30min，40%甲醇~70%甲醇，流速为1ml/min，检测波长为360nm。
图2为本发明中新化合物的光谱图。
图3为本发明中新化合物的C谱图。
图4为本发明中新化合物的H谱图。
图5为本发明中新化合物的BC谱图。
图6为本发明中新化合物的QC谱图。
图7为本发明中新化合物的COSY谱图。
具体实施方式
实施例1基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将镰形棘豆用体积浓度为5%的乙醇进行微波提取，得到提取液；提取液在压力为0.02MPa的条件下经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏。
其中：微波提取的条件是指料液比为1g：5mL，提取温度为60℃，提取次数1次，每次1h，微波功率为1KW。
⑵萃取：
将棘豆提取物浸膏用其质量1倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位。
⑶水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用5倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位。
⑷将40%的乙醇部位在温度为50℃的条件下干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末。
⑸将40%乙醇部位干燥粉末用其质量的1倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置（申请号：201520827784.5，申请日：2015.10.26）中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为40%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为40%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside（参见图3~7）。该化合物的结构式如下：
其中：
一级制备色谱柱的分离条件是指流速为20mL/min，检测波长为200nm。
一级制备色谱柱中的色谱填料为C18键合相填料，填料粒径为5um。
捕集设备吸附填料为聚苯乙烯聚合物。
二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为40%的甲醇，流速为0.5mL/min，检测波长为200nm。
实施例2基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将甘肃棘豆用体积浓度为95%的乙醇进行微波提取，得到提取液；提取液在压力为0.07MPa的条件下经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏。
其中：微波提取的条件是指料液比为1g：30mL，提取温度为95℃，提取次数4次，每次4h，微波功率为100KW。
⑵萃取：
将棘豆提取物浸膏用其质量10倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位。
⑶水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用50倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位。
⑷将40%的乙醇部位在温度为80℃的条件下干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末。
⑸将40%乙醇部位干燥粉末用其质量的10倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置（申请号：201520827784.5，申请日：2015.10.26）中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为60%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为60%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
其中：
一级制备色谱柱的分离条件是指流速为60mL/min，检测波长为400nm。
一级制备色谱柱中的色谱填料为C8键合相填料，填料粒径为20um。
捕集设备吸附填料为甲基丙烯酸-二乙烯基苯聚合物。
二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为60%的甲醇，流速为5mL/min，检测波长为400nm。
实施例3基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将多叶棘豆用体积浓度为5%的甲醇进行微波提取，得到提取液；提取液在压力为0.06MPa的条件下经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏。
其中：微波提取的条件是指料液比为1g：15mL，提取温度为75℃，提取次数3次，每次3h，微波功率为60KW。
⑵萃取：
将棘豆提取物浸膏用其质量6倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位。
⑶水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用10倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位。
⑷将40%的乙醇部位在温度为55℃的条件下干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末。
⑸将40%乙醇部位干燥粉末用其质量的7倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置（申请号：201520827784.5，申请日：2015.10.26）中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为50%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为50%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
其中：
一级制备色谱柱的分离条件是指流速为40mL/min，检测波长为210nm。
一级制备色谱柱中的色谱填料为C8键合相填料，填料粒径为10um。
捕集设备吸附填料为聚苯乙烯聚合物。
二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为50%的甲醇，流速为3mL/min，检测波长为280nm。
实施例4基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将镰形棘豆用体积浓度为100%的甲醇进行微波提取，得到提取液；提取液在压力为0.04MPa的条件下经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏。
其中：微波提取的条件是指料液比为1g：20mL，提取温度为85℃，提取次数2次，每次2.5h，微波功率为90KW。
⑵萃取：
将棘豆提取物浸膏用其质量7倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位。
⑶水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用20倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位。
⑷将40%的乙醇部位在温度为60℃的条件下干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末。
⑸将40%乙醇部位干燥粉末用其质量的30倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置（申请号：201520827784.5，申请日：2015.10.26）中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为45%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为45%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
其中：
一级制备色谱柱的分离条件是指流速为45mL/min，检测波长为270nm。
一级制备色谱柱中的色谱填料为C18键合相填料，填料粒径为10um。
捕集设备吸附填料为甲基丙烯酸-二乙烯基苯聚合物。
二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为45%的甲醇，流速为3mL/min，检测波长为280nm。
实施例5基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将甘肃棘豆用体积浓度为65%的乙醇进行微波提取，得到提取液；提取液在压力为0.07MPa的条件下经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏。
其中：微波提取的条件是指料液比为1g：25mL，提取温度为85℃，提取次数2次，每次3.5h，微波功率为40KW。
⑵萃取：
将棘豆提取物浸膏用其质量10倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位。
⑶水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用25倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位。
⑷将40%的乙醇部位在温度为65℃的条件下干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末。
⑸将40%乙醇部位干燥粉末用其质量的5.5倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置（申请号：201520827784.5，申请日：2015.10.26）中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为52%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为52%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
其中：
一级制备色谱柱的分离条件是指流速为40mL/min，检测波长为280nm。
一级制备色谱柱中的色谱填料为C18键合相填料，填料粒径为10um。
捕集设备吸附填料为甲基丙烯酸-二乙烯基苯聚合物。
二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为52%的甲醇，流速为0.8mL/min，检测波长为320nm。
实施例6基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将多叶棘豆用体积浓度为75%的甲醇进行微波提取，得到提取液；提取液在压力为0.06MPa的条件下经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏。
其中：微波提取的条件是指料液比为1g：25mL，提取温度为85℃，提取次数3次，每次3.5h，微波功率为55KW。
⑵萃取：
将棘豆提取物浸膏用其质量4倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位。
⑶水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用30倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位。
⑷将40%的乙醇部位在温度为70℃的条件下干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末。
⑸将40%乙醇部位干燥粉末用其质量的5倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置（申请号：201520827784.5，申请日：2015.10.26）中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为52%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为52%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
其中：
一级制备色谱柱的分离条件是指流速为35mL/min，检测波长为360nm。
一级制备色谱柱中的色谱填料为C18键合相填料，填料粒径为5um。
捕集设备吸附填料为甲基丙烯酸-二乙烯基苯聚合物。
二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为52%的甲醇，流速为1mL/min，检测波长为300nm。

Claims (10)

1.基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，包括以下步骤：
⑴制备棘豆提取物浸膏：
将棘豆用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇进行微波提取，得到提取液；所述提取液经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏；
⑵萃取：
将所述棘豆提取物浸膏用其质量1~10倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位；
⑶所述水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用5~50倍柱体积且体积浓度为20%、40%、60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位；
⑷将所述40%的乙醇部位干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末；
⑸将所述40%乙醇部位干燥粉末用其质量的1~30倍的去离子水溶解后，注入到具有平行分离模式的制备色谱装置中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为40%~60%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为40%~60%的甲醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D-glucopyranoside。
2.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑴中棘豆为镰形棘豆、甘肃棘豆、多叶棘豆中一种。
3.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑴中微波提取的条件是指料液比为1g：5mL~30mL，提取温度为60~95℃，提取次数1~4次，每次1~4h，微波功率为1~100KW。
4.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑴中减压浓缩的条件是指压力为0.02~0.07MPa。
5.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑷中干燥的条件是指温度为50~80℃。
6.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑸中一级制备色谱柱的分离条件是指流速为20~60mL/min，检测波长为200~400nm。
7.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑸中一级制备色谱柱中的色谱填料为C18或C8键合相填料，填料粒径为5~20um。
8.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑸中捕集设备吸附填料为聚苯乙烯或甲基丙烯酸-二乙烯基苯聚合物。
9.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑸中二级制备色谱柱中的色谱填料为SephadexLH-20。
10.如权利要求1所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法，其特征在于：所述步骤⑸中二级制备色谱柱的分离条件是指流动相为体积浓度为40%~60%的甲醇，流速为0.5~5mL/min，检测波长为200~400nm。
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