CN105287497A - 瑞香毒素类二萜在制备抗艾滋病毒药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属中药制药领域，涉及瑞香毒素类二萜在制备抗艾滋病毒药物中的用途。本发明从狼毒属(Stellera)植物瑞香狼毒(S.chamaejasme)中提取到瑞香毒素类二萜化合物，经实验证实其具有较强的抗HIV活性，所述的化合物经与阳性对照药齐多夫定的药理试验比较，结果表明其具有较强的抗HIV作用，且有效浓度低，细胞毒性较小，本发明所述的化合物瑞香毒素类二萜可作为活性成分用于制备抗艾滋病毒的药物。

Description

瑞香毒素类二萜在制备抗艾滋病毒药物中的用途

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及瑞香狼毒中瑞香毒素类二萜在制备抗艾滋病毒药物中的用途。

背景技术

艾滋病(AIDS)自1981年美国诊断出首例AIDS患者之后，在全球范围内的传播速度惊人，被称为"20世纪的瘟疫"，对人类健康生存和社会经济发展构成了严重的威胁，其传播之快、危害之大，引起了全世界的广泛关注。

药物化学工作者在筛选抗HIV药物的过程中进行了不懈的努力，但到目前为止能治愈HIV感染的特效药还在寻找。尽管著名的鸡尾酒疗法可将艾滋病患者血清中HIV病毒的载量降低至检测限以下，并不意味着HIV病毒得到了彻底的清除。这是因为HIV病毒进入人体内首先处于潜伏期，而处于潜伏期的HIV病毒可以躲过免疫系统和药物的攻击而不受影响，这也是目前艾滋病得不到根治的原因之一。在筛选抗HIV新药的过程中，越来越多的药物化学工作者把注意力转向了植物来源丰富、价廉易得、毒副作用小、分子结构复杂多样的天然化合物。

瑞香狼毒(Stellerachamaejasme)俗称断肠草、馒头花、山萝卜等，为瑞香科(Thymelaeaceae)狼毒属(Stellera)多年生草本植物，其药用部位为根，广泛分布在我国东北、西北、西南，河北及尼泊尔等地，其性味苦辛，有毒，有逐水祛痰、破积杀虫之功效。《中药大辞典》记载其主治水肿腹胀、痰、食、虫积、心腹疼痛、慢性气管炎、咳嗽、气喘、淋巴结、皮肤结核、疥癣、痔痰等。近年有研究发现其具有抗肿瘤和抗病毒作用。

本申请的发明人拟提供具有较强抗HIV活性的瑞香狼毒中的瑞香毒素二萜类在制备抗艾滋病病毒药物中的用途。

发明内容

本发明的目的是提供瑞香毒素类二萜新的药用用途，尤其涉及瑞香狼毒中瑞香毒素类二萜在制备抗艾滋病病毒药物中的用途。

本发明应用现代药理筛选方法，对植物药中抑制HIV的活性物质进行研究，从瑞香科狼毒属(Stellera)植物瑞香狼毒(S.chamaejasme)中提取瑞香毒素二萜类并证明其具有较强的抗HIV活性。

本发明涉及的瑞香毒素二萜类化合物包括：瑞香内酯I(stelleralideI)(1)、wikstroelideB(2)和wikstrotoxinA(3)。其中stelleralideI(1)为新化合物。

本发明所述的瑞香毒素类二萜具有如下Ⅰ的结构通式：

本发明涉及的瑞香狼毒(S.chamaejasme)在我国有丰富的药用资源。本发明从瑞香狼毒中分离得到瑞香毒素类二萜，并经实验证实瑞香毒素类二萜有较好的抗HIV活性。

本发明所述的的化合物通过下述方法制备：

取瑞香狼毒根40kg，95％乙醇加热回流提取，提取物浓缩后用石油醚萃取，共得浸膏400g，取350g干法上样进行硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮梯度洗脱。石油醚-丙酮(5:1～2:1)的流份经MCI柱甲醇/水(4:1)除去色素，用石油醚-乙酸乙酯(20:1～1:1)反复硅胶柱色谱，然后运用SephadexLH-20进行分离，用环己烷/二氯甲烷/甲醇(4:5:1)洗脱，最后用HPLC制备液相进行纯化，以乙腈/水(60:40～85:15)梯度洗脱，分离得到stelleralideI(1)、wikstroelideB(2)和wikstrotoxinA(3)。

其中化合物stelleralideI(1)为新化合物。

StelleralideI(1),C₃₅H₅₀O₉(614),白色无定型粉末， IR(KBr)ν_max:3435,2920,2843,1709,1616,1463,1375,1019cm^-1；UV(MeOH)λ_max(logε):230(3.98)；CD(0.00065M,MeOH)λ_max(Δε)226(–12.1),242(5.82)nm；¹H和¹³CNMR数据见表1和2。

WikstroelideB(2),C₃₇H₅₂O₁₀(656),白色无定型粉末， IR(KBr)ν_max:3415,2938,2832,1710,1630,1420,1008cm^-1；UV(MeOH)λ_max(logε):234(3.76)；CD(0.00060M,MeOH)λ_max(Δε)224(–12.6),240(5.77)nm；¹H和¹³CNMR数据如表1和2所示；

WikstrotoxinA(3),C₃₅H₅₀O₈(598),白色无定型粉末， IR(KBr)ν_max:3440,2965,2842,1712,1625,1428,1011cm^-1；UV(MeOH)λ_max(logε):UV(MeOH)λ_max(logε):238(3.92)；CD(0.00058M,MeOH)λ_max(Δε)224(–11.8),240(5.96)nm；¹H和¹³CNMR数据如表1和2所示。

表1化合物1–3的¹H(400MHz)NMR数据(CDCl₃,δinppm,JinHz)

表2化合物1–3的¹³C(100MHz)NMR数据(CDCl₃,δinppm)

本发明所述的瑞香毒素类二萜进行了经体外抗HIV活性试验，结果显示其具有较强的抗HIV作用，且有效浓度低，细胞毒性较小的特点(如表3所示)；其中，wikstrotoxinA(3)抗HIV活性最强，EC₅₀值分别为0.013μM，治疗指数(TI)分别为1284，明显强于阳性对照药齐多夫定(AZT,EC₅₀＝0.032μM,TI>116.87)，wikstroelideB(2)的EC₅₀值和阳性对照药齐多夫定相当为0.039μM，但其治疗指数为392高于齐多夫定，新化合物瑞香内酯I(stelleralideI)(1)具有较强的抗HIV活性，其EC₅₀值为0.12μM。

本发明所述的瑞香毒素类二萜可作为活性成分用于制备抗艾滋病毒的药物。

附图说明：

图1是瑞香狼毒中瑞香毒素类二萜成分提取分离工艺流程图，

其中，A：石油醚-乙酸乙酯，B：甲醇-水，C：环己烷-二氯甲烷-甲醇，D：乙腈-水。

具体实施方式

实施例1制备瑞香狼毒中的瑞香毒素类二萜

取瑞香狼毒根40kg，95％乙醇加热回流提取，提取物浓缩后用石油醚萃取，共得浸膏400g，取350g干法上样进行硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮梯度洗脱。石油醚-丙酮(5:1～2:1)的流份经MCI柱(甲醇/水(4:1))除去色素，用石油醚-乙酸乙酯(20:1～1:1)进行反复硅胶柱色谱，然后运用SephadexLH-20进行分离，用环己烷/二氯甲烷/甲醇(4:5:1)洗脱，最后用HPLC制备液相进行纯化，以乙腈/水(60:40～85:15)梯度洗脱，分离得到瑞香内酯stelleralideI(1)、wikstroelideB(2)和wikstrotoxinA(3)。

实施例2体外抗HIV实验

应用HIV-1NL4-3病毒株感染MT₄细胞(感染倍数＝0.001)，同时加入不同浓度的药物。感染48小时候加入含适宜浓度药物的新鲜基质以维持细胞的正常生长，4天后采用P24ELISA试剂盒分析病毒的复制情况。实验以齐多夫定(AZT)为阳性对照药物。化合物的EC₅₀指药物抑制HIV-1P24抗原产生降低至50％时的药物浓度。采用线性回归分析法求得EC₅₀(Biosoftsoftware)。

表3瑞香毒素类二萜抗HIV活性

Claims (3)

1.具有如下结构通式Ⅰ的瑞香毒素类二萜在制备抗艾滋病毒药物中的用途，

其中，当R＝OH时，化合物为stelleralideI(1)；当时，化合物为wikstroelideB(2)；当R＝H时，化合物为wikstrotoxinA(3)。

2.式Ⅰ结构的瑞香毒素类二萜，

其中，R＝OH。

3.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的瑞香毒素类二萜通过下述方法制备：

取瑞香狼毒根，95％乙醇加热回流提取，提取物浓缩后用石油醚萃取，得浸膏，干法上样进行硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮梯度洗脱，石油醚-丙酮(5:1～2:1)的流份经MCI柱甲醇/水(4:1)除去色素，用石油醚-乙酸乙酯(20:1～1:1)反复硅胶柱色谱，然后用SephadexLH-20分离，用环己烷/二氯甲烷/甲醇(4:5:1)洗脱，最后用HPLC制备液相纯化，以乙腈/水(60:40～85:15)梯度洗脱，分离得到stelleralideI(1)、wikstroelideB(2)和wikstrotoxinA(3)。