CN101361815A - 利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种运用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法及用途。它是在粉碎的猫爪草药材或猫爪草饮片中，加入6～15倍体积百分比浓度为10％－80％的乙醇，加热回流提取，过滤，合并提取液，减压回收乙醇，提取液通过填充有大孔树脂的层析柱，用水洗涤树脂，水洗脱液弃去；用含体积百分比浓度为20～95％含水乙醇洗脱，流速为2～4BV/h，乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1～1.25，减压或喷雾干燥，得猫爪草总苷。猫爪草总苷含量不低于20％、猫爪草苷D含量不低于1.0％重量的猫爪草总苷提取物，用于治疗结核病。本发明采用的大孔树脂对猫爪草总苷的吸附量大，被解吸完全，所得总苷的含量高，因此，可以显著提高结猫爪草总苷的提取率，降低生产成本。

Description

利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法及用途

技术领域

本发明公开了一种利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法及用途。

背景技术

猫爪草，是五十年代河南信阳地区新发现的一种治疗结核的良药。具有清热解毒、散结消瘀，主治肺结核、淋巴结核、咽喉炎等。其原植物为毛茛科毛茛属植物小毛茛(Ranunculus ternatus Thunb.)。以猫爪草水煎浸膏制成的猫爪草胶囊，临床上用于多种结核病的治疗，疗效肯定。系统的化学成分研究表明猫爪草含甾醇、γ-酮-δ-戊内酯、多种苷类化合物。我们通过药理活性研究表明总苷类化合物是其抗结核菌的有效部位。

大孔吸附树脂是指由苯乙烯、α-甲基苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、丙腈等为原料加入一定量致孔剂二乙烯苯聚合而成的球状颗粒，直径一般在0.3-1.25mm之间。现已广泛应用提取纯化天然植物中的活性成分，如苷、黄酮、内脂、生物碱等。根据大孔树脂化学结构不带或带有不同极性的功能基以及树脂的表面性质，通常将大孔树脂分为弱极性、弱极性和中极性等类型。其中，弱极性大孔树脂为含酯基的吸附树脂，其表面兼有疏水和亲水两部分，既可由极性溶剂中吸附弱极性物质，又可由弱极性溶液中吸附极性物质，因而应用范围更为广泛。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法及用途。

它是在粉碎的猫爪草药材或猫爪草饮片中，加入6～15倍体积百分比浓度为10％-80％的乙醇，加热回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并提取液，减压回收乙醇，提取液浓缩至每mL含0.25～2.0g生药的溶液；过滤或离心分离后通过填充有大孔树脂的层析柱，提取液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为1:5～10，上柱流速1～4BV/h，树脂径高比为1:3～1:9；用水洗涤树脂3～8BV，洗脱流速为2-4BV/h，水洗脱液弃去；用含体积百分比浓度为20～95％含水乙醇洗脱，流速为2～4BV/h，乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1～1.25，减压或喷雾干燥，得猫爪草总苷。

所述的离心分离的离心转速为4000～16000转/分钟。大孔树脂为聚苯乙烯型大孔树脂。大孔树脂优选为弱极性大孔树脂。

猫爪草总苷提取物用于制备治疗结核病的药物。

本发明采用的大孔树脂对猫爪草总苷的吸附量大，被解吸完全，所得总苷的含量高，因此，可以显著提高猫爪草总苷的提取率，降低生产成本。由本发明制备的猫爪草总苷提取物，总苷含量不低于20％，猫爪草苷D含量不低于1.0％。该具有显著的体外抑制结核菌的作用，可以用于制备治疗结核病的药物。

具体实施方式

猫爪草总苷的抗结核菌实验

材料和方法

1.培养基：7H9液体培养基(含10％ADC、0.03％琼脂)。

2.药物及其处理(试管二倍稀释法)：猫爪草总苷由浙江大学现代中药研究所提供，以猫爪草D计总苷含量不低于30％。异烟肼(INH)为Sigma公司产品。猫爪草总苷用二甲基甲酰胺溶解制成初溶液(储备液)，流通蒸气灭菌后，使其在培养基中为所设计的浓度。

3.结核菌及其在培养基中浓度：实验菌为结核分支杆菌标准株H37Rv。将在改良罗氏培养基上生长良好的培养物，用玛瑙乳钵磨成菌悬液，使其在培养基中的浓度为10-2mg/mL。

4.培养与观察置37℃培养，以培养四周的结果为准。

结果

在7H9培养基中所试药物的最小抑菌浓度(MIC)，猫爪草总苷1.25mg/mL，INF为0.025ug/mL，表明猫爪草总苷有较好的抑制结核菌的作用

实施例1

在粉碎的猫爪草药材中，加入6倍体积百分比浓度为10％-的乙醇，加热回流提取2次，每次1h，过滤，合并提取液，减压回收乙醇，提取液浓缩至每mL含0.25g生药的溶液；过滤后通过填充有D101大孔树脂的层析柱，提取液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为1:5，上柱流速1BV/h，树脂径高比为1:3；用水洗涤树脂3BV，洗脱流速为2BV/h，水洗脱液弃去；用含体积百分比浓度为20％含水乙醇洗脱，流速为2BV/h，乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1，减压干燥，得猫爪草总苷。测得猫爪草苷含量为80％(UV法；以猫爪草苷D计，重量百分比)，猫爪草苷D含量为1.9％(HPLC法，重量百分比)。

实施例2

在猫爪草饮片中，加入15倍体积百分比浓度为80％的乙醇，加热回流提取4次，每次3h，过滤，合并提取液，减压回收乙醇，提取液浓缩至每mL含2.0g生药的溶液；离心分离后通过填充有AB-8型大孔树脂的层析柱，提取液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为10，上柱流速4BV/h，树脂径高比为1:9；用水洗涤树脂8BV，洗脱流速为4BV/h，水洗脱液弃去；用含体积百分比浓度为95％含水乙醇洗脱，流速为4BV/h，乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.25，喷雾干燥，得猫爪草总苷。测得猫爪草苷含量为80％(UV法；以猫爪草苷D计，重量百分比)，猫爪草苷D含量为1.9％(HPLC法，重量百分比)。

实施例3

取粉碎后的猫爪草药材5kg，加8倍量70％乙醇，加热回流提取3次，每次1h，过滤，合并提取液，浓缩至1.0g生药/mL；离心(4000转/分钟)后通过AB-8型大孔树脂，药液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为1:5，上柱流速2BV/h，树脂径高比为1:5；用水洗涤树脂3BV，洗脱流速为4BV/h，水洗脱液弃去；用含70％水乙醇洗脱3BV，流速为2BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇液减压浓缩至相对密度为1.1(50℃热测)，减压干燥，得猫爪草总苷。测得猫爪草苷含量为65％(UV法；以猫爪草苷D计，重量百分比)，猫爪草苷D含量为2.5％(HPLC法，重量百分比)。

实施例4

猫爪草药材饮片5kg，加10倍量50％乙醇，加热回流提取2次，每次1.5h，过滤，合并提取液，浓缩至0.5g生药/mL；过滤后通过D201型大孔树脂，药液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为1:9，上柱流速3BV/h，树脂径高比为1:7；用水洗涤树脂5BV，洗脱流速为4BV/h，水洗脱液弃去；用含50％水乙醇洗脱10BV，流速为4BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇液减压浓缩至相对密度为1.25(50℃热测)，喷雾干燥，得猫爪草总苷。测得猫爪草苷含量为38％(UV法，以猫爪草苷D计，重量百分比)，猫爪草苷D含量为1.3％(HPLC法，重量百分比)。

实施例5

猫爪草药材饮片5kg，加15倍量30％乙醇，加热回流提取3次，每次0.5h，过滤，合并提取液，浓缩至0.25g生药/mL；离心(8000转/分钟)后通过HPD450大孔树脂，药液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为1:6，上柱流速4BV/h，树脂径高比为1:9；用水洗涤树脂2BV，洗脱流速为3BV/h，水洗脱液弃去；用含50％水乙醇洗脱5BV，流速为3BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇液减压浓缩至相对密度为1.2(50℃热测)，喷雾干燥，得猫爪草总苷。测得猫爪草苷含量为45％(UV法，以猫爪草苷D计，重量百分比)，猫爪草苷D含量为1.6％(HPLC法，重量百分)。

Claims (5)

1.一种利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法，其特征在于：在粉碎的猫爪草药材或猫爪草饮片中，加入6～15倍体积百分比浓度为10％-80％的乙醇，加热回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并提取液，减压回收乙醇，提取液浓缩至每mL含0.25～2.0g生药的溶液；过滤或离心分离后通过填充有大孔树脂的层析柱，提取液按猫爪草总苷含量计与干树脂的比例为1:5～10，上柱流速1～4BV/h，树脂径高比为1:3～1:9；用水洗涤树脂3～8BV，洗脱流速为2-4BV/h，水洗脱液弃去；用含体积百分比浓度为20～95％含水乙醇洗脱，流速为2～4BV/h，乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1～1.25，减压或喷雾干燥，得猫爪草总苷。

2.根据权利要求1所述的一种利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法，其特征在于：所述的离心分离的离心转速为4000～16000转/分钟。

3.根据权利要求1所述的一种利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法，其特征在于：所述的大孔树脂为聚苯乙烯型大孔树脂。

4.根据权利要求3所述的一种利用大孔树脂制备猫爪草总苷提取物的方法，其特征在于：所述的大孔树脂为弱极性大孔树脂。

5.一种如权利要求1所述方法利用大孔树脂制备的猫爪草总苷提取物的用途，其特征在于：猫爪草总苷提取物用于制备治疗结核病的药物。