CN1687092A - 苍耳子总苷提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药苍耳子总苷提取物,该总苷提取物包括二萜苷类化合物、酚酸类化合物和其他成分的总提取物,含量范围分别是0.5%~99%、0.5%~99%和0.5%以下。采取本领域常规的提取、分离纯化等方法和步骤,即可得到该总苷提取物,其中提取方法一般选用溶剂提取法等,分离纯化方法一般选用溶剂萃取法、大孔吸附树脂法等。该总苷提取物药理作用较强,抗炎、抗病毒、镇痛以及治疗急性和慢性鼻炎、鼻窦炎及其相关病症的效果明显,且制备工艺简单、得率高、化学性质稳定。急、慢性鼻窦炎为临床常见病、多发病,发病率正在不断攀升,该总苷提取物药材原料来源丰富,因此可进一步深入开发为具有临床应用前景的新药。
Description
技术领域
本发明涉及医药、食品、饮料技术领域,具体地说是涉及中药提取物及其制备方法,更具体地说是涉及中药苍耳子总苷提取物及其制备方法。
背景技术
(一)苍耳子的研究概况
1、植物资源和应用概况
苍耳子(Fructus Xanthii),为菊科植物苍耳(Xanthium sibirium Patr.)的干燥成熟带总苞的果实,又名野茄子、羊带归、疔疮草、刺儿课、粘粘葵、苍子棵等,为中国药典品种,中国大部分地区均产,资源极其丰富。中医认为其味辛苦、性温,归肺、肝二经,具有发汗、散风湿、通鼻窍、止痛之功效。传统用于治疗风寒头痛,鼻渊流涕,风疹瘙痒,湿痹拘挛等(中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2000:128);现代临床用其治疗急慢性鼻炎、鼻窦炎、气管炎、腰腿痛以及风疹、疥癞等皮肤病(国家中医药管理局.中华本草[M].第七册.上海:上海科学技术出版社,1999:1013-1016)。
2、化学成分
研究表明,苍耳属植物所含的化学成分主要是倍半萜内酯、挥发油和水溶性苷类,分述如下:
(1)倍半萜内酯化合物 苍耳属植物中主要含有愈创木烷型和裂愈创木烷型内酯化合物,主要有黄质宁(xanthinin,即隐苍耳内酯)、苍耳明(xanthumin,即苍耳内酯,为黄质宁的立体异构体)、苍耳亭(xanthatin,即苍耳素)及它们的衍生物等。此外还有苍耳醇(xanthanol)、xanthinosin,以及X.canadense中的xantholide A、xantholide B,X.catharticum中的ziniolide、lasidiol p-methoxybenzoate和X.pungens中的pungiolide A,pungiolide B等多种化合物(Salinas-A,De-Ruiz-RE,Ruiz-SO.Sterols,flavonoids and sesquiterpenic lactonesfrom Xanthiun spinosum(Asteraceae).Acta Farm Bonaerense,1998,17:297;和Kis-I,Racz-G.Glycoside contents of sitosterol from leaves of Xanthiun spinosum and X.italicum.FarmaciaBucharest,1988,36(1):55;以及Ahmed-AA.New vomifoliol derivative from Xanthiun pungens.Pharmazie,1990,45:698)。
(2)挥发油 Ahijja-MM等用水蒸气蒸馏法提取苍耳X..strumarium叶中的挥发油(Ahijja-MM,Nigam-SS.Chemical examination of the essential oil from the leaves of Xanthiunstrumarium(Linn.).Flavour Ind,1970,1:627),发现含d-柠檬烯(d-limonene,35%),伞花烃(p-cymene,5%),β-丁香烯(beta-caryophyllene,6%),萜品油烯(terpinolene,7.3%),1-α-紫罗兰酮(1-alpha-ionone,10.9%),d-高萜醇(d-carveol,25%)和α-蒎烯(alpha-pinene,0.4%)。Taher-HA等分析了X.cavanillesii中的挥发油成分(Taher-HA,Ubiergo-GO,Talenti-ECJ.Constituents of the essential oil of Xanthiun cavanillesii.J Nat Prod,1985,48:857.),其中含单萜烃55.2%,氧化的类单萜14.2%,倍半萜烃类11.3%。郭亚红等从苍耳子的挥发油中分析出17个化学成分并计算了其相对百分含量(郭亚红,李家实,潘炯光,等.苍耳子中挥发油的研究.中国中药杂志,1994,19(4):235)。
(3)水溶性苷类 宋振玉等早在上世纪60年代已从苍耳子的水浸剂中分离出一种具有苷类性质的物质(暂名为AA2),可能是苍耳子的主要毒性成分(宋振玉,张凌云,谢明智,等.苍耳子的有毒成分及其药理作用.药学学报,1962,9(11):678)。MacLeod-JK等从辛辣苍耳X.pungens的刺果中提取得到了两种水溶性有毒的贝壳杉烯糖苷(kaureneglycoside)类成分(MacLeod-JK,Moeller-PD,Franke-FP.Two toxic glycosides from the burrs ofXanthiun pungens.J Nat Prod,1990,53:451),经二维核磁共振和质谱技术鉴定,确定其结构为羧基苍术苷(carboxyatractyloside)的衍生物。此外,还从苍耳子和蒙古苍耳子中提取出同一种水溶性毒苷,经鉴定为苍术苷(atracyloside)(王素贤,任丽娟,孙泽人,等.蒙古苍耳种仁中的有毒成分.中草药,1983,14(12):1)。
(4)其他 苍耳中还含有苍耳苷(strumaroside,即β-谷甾醇葡萄糖苷)、8-(△3-异戊烯基)-5,7,3′,4′-四羟基黄酮,以及咖啡酸和1,4-二咖啡酰奎宁酸。此外,尚含生物碱、鞣质、查尔酮衍生物、三萜类化合物、葡萄糖、果糖、氨基酸、酒石酸等。
3、药理活性
(1)抗微生物作用 苍耳子煎剂在体外对金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、肺炎球菌、乙型链球菌和白喉杆菌等多种微生物具有较强的抑制作用。苍耳子丙酮或乙醇提取物对红色发癣菌,其水提物对堇色毛癣菌有抗真菌作用。张正等于在1988年研究证实苍耳子煎剂在体外对乙型肝炎病毒DNA多聚糖的直接抑制率为25%~50%,表明其有抗肝炎病毒作用(张正,许向东,杜绍财,等.60种中草药抗乙肝病毒的实验研究.北京医科大学学报,1988,20(3):211)。
(2)对心血管系统的作用 苍耳子煎剂对离体蛙心和豚鼠心脏有抑制作用,使心率减慢,心收缩力减弱,并能扩张兔耳血管,对蛙血管则先扩张后收缩,苍耳子注射液,可使兔和犬血压短暂下降。苷类成分AA2对大鼠有轻度降血压作用,并能增强血管通透性(宋振玉,张凌云,谢明智,等.苍耳子的有毒成分及其药理作用.药学学报,1962,9(11):678)。
(3)对血液系统的作用 苍耳子提取物(相当于生药0.2g/ml)能显著延长牛凝血酶凝聚人纤维蛋白原的时间,有明显抗凝血酶作用。苍耳子甲醇提取物,能迅速恢复因禁食所致兔胆固醇和甘油三酯的降低,也可使磷脂含量有一定程度的回升。
(4)对免疫功能的影响 苍耳子对C57/BL纯种小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均有明显抑制作用。苍耳子使辅助型T细胞(简称:TH)和抑制型T细胞(简称:TS)细胞数减少,并使TH/TS比值降低。苍耳子对下丘脑和血浆中的β-内啡肽均有显著降低作用。此外,苍耳子尚能降低白细胞介素-2(简称:IL-2)活性和IL-2受体含量,能明显降低细胞内组胺的释放,此为苍耳子能用来治疗过敏性疾病的机制之一(王龙妹,傅惠娣,周志兰.枸杞子、白术、细辛、苍耳子对白细胞介素-2受体表达的影响.中国临床药学杂志,2000,9(3):172)。
(5)抗氧化作用 樊景坡于1994年研究了苍耳子的抗氧化作用,表明苍耳子煎剂0.5g生药/只灌胃,每日1次,连续10d,能有效地减少脂质过氧化作用,降低组织过氧化脂质(简称:LPO)含量,对超氧化物歧化酶(简称:SOD)活性有提高趋势,表明苍耳子能增强机体对自由基的清除能力,减少自由基对机体的损害(樊景坡.苍耳子、细辛、枸杞子、白术对小鼠组织自由基代谢的影响.中医药信息,1994,(2):48)。
(6)抗炎与镇痛作用 刘庆增等在1988阐述了苍耳子提取物的药理活性(刘庆增,王金兰.近年来日本对中药药理作用研究的一些进展.中药药理与临床,1988,4(2):50)。苍耳子甲醇提取物250mg/kg腹腔注射,对大鼠角叉菜胶性足肿的抑制率30%~60%;1000mg/kg皮下注射,对小鼠醋酸扭体反应的抑制率为10%~30%,表明本品有一定的抗炎和镇痛作用。加味苍耳子丸具有良好的消炎作用,包括:可显著减少醋酸所致小鼠腹腔伊文斯蓝渗出量,可显著减少二甲苯所致小鼠耳炎症的肿胀度。尚具有良好的镇痛作用,可显著延长醋酸所致小鼠扭体反应出现时间(马萍,李红.苍耳子的研究进展. 中草药,1999,30(8):634)。
(7)其他 还有研究表明苍耳子水提物在体外对子宫颈癌细胞的抑制率达50%~70%;苍耳子提取物对血管紧张素受体、β-羟基-β-甲基戊二酸辅酶A(简称:HMG-Co-A)、钙通道阻滞剂受体和胆囊收缩素等有不同程度的抑制作用。
4、单方及复方的临床应用(李红,周谋.苍耳子及复方制剂的药理作用和临床研究进展.山西医科大学学报,2004,35(3):313-314)
(1)治疗鼻病
治疗鼻炎 慢性鼻炎是一种常见病、多发病。有人在原苍耳子散的基础上进行加减化裁,并随机将96例患者分为治疗组和对照组,1个月为1个疗程,临床观察,两组间无显著性差异,加味苍耳子丸治疗慢性鼻炎和鼻炎丸接近而稍优于鼻炎丸。
治疗鼻窦炎 用黄芩汤合苍耳子散治疗慢性鼻窦炎,临床观察108例,总有效率94.4%,一般用药后一个疗程即可明显见效。用苍耳子合剂与息斯敏合用治疗儿童慢性鼻窦炎效果显著。苍耳子焙成棕色后研粉或粉末制蜜丸,治疗过敏性鼻炎,多数患者症状消失或改善,或发作减少。也有用古方苍耳子散加诃子、地龙等治疗慢性鼻窦炎67例,痊愈42例,好转20例,无效5例,总有效率92.54%。
治疗鼻渊 中医将急性化脓性鼻窦炎归为鼻渊。用苍耳子合剂治疗急性化脓性鼻窦炎200例,治疗组100例服用苍耳子合剂,对照组100例选用青霉素、复方新诺明等对症治疗。临床治疗结果表明,治疗组和对照组总有效率分别为99%和95%(P>0.05),无明显差异。临床上还常用苍、辛煎剂来治疗鼻渊及过敏性鼻炎,也有用玉屏苍耳子散治疗过敏性鼻炎的报道等,都说明了苍耳子在治疗鼻病中的贡献。
(2)治疗癌症 苍耳子以不同的组方形式成为复方制剂,在临床上有效治愈多例鼻咽癌、鼻腔癌;治疗阴茎癌3例,并配合手术临床治愈;以及治疗颅内肿瘤、神经系统恶性肿瘤、脑瘤等都起到一定的疗效。
(3)治疗牙病 文献报道用祖传单方治疗顽固性牙痛98例,疗效满意。还有用苍耳子、玄参各15g,加水煎服,治疗牙疼有疗效的报道。
(4)治疗皮炎 在38例皮炎患者中痊愈25例(占65.8%),显效10例(占26.8%),无效3例(占7.9%),总有效率92.1%。
(5)治疗上呼吸道感染 文献报道30例上呼吸道感染的门诊患者,使用加味苍耳于进行治疗,痊愈26例(占86.7%),好转3例(占10.0%),无效1例;总有效率达96.7%。服药最少的2剂,最多的5剂。
(6)治疗腹泻 苍耳于约50g~70g,加3000ml清水浸泡30min后,用武火煎沸后再用文火煎15min,滤出药液,凉至35℃~38℃,用温液浸浴或浸泡小腿及足每日3次;治愈46例,治愈率为95.77%,有效1例,有效率为2.15%,无效1例(占2.15%)。
(7)治疗中耳炎 有文献报道临床上采用苍耳于散配合抗菌干燥粉治疗单纯型化脓性中耳炎收到了良好的治疗效果。
(8)治疗伤寒 苍耳于6000g,用清水浸过加热煮沸1h,滤出煎液,用同样方法连煎3次,将3次煎液混合,过滤,文火浓缩至2000ml,加尼泊金10g,摇匀,有效治疗伤寒15例,退热时间最快10h,7例血、粪、胆汁伤寒杆菌阳性者,治疗后全部转阴。
(9)治疗痢疾 鲜苍耳于100g,洗净捣烂,加水煎15min,去渣,打入鸡蛋2~3个,于药液内煮熟,在发作前将药液与鸡蛋同服,1次未愈,可接上法再服,治疗痢疾疗效佳。
(10)治疗疮疖 苍耳于、牛蒡子、生大黄等,每日1剂,水煎分2次服;连续4-8剂,治疗疮疖30余例,均获良效。
(11)其他临床应用 临床上还有利用苍耳于以及其复方制剂治疗腰腿痛、腮腺炎、下肢溃疡的报道,都收到了一定疗效。
苍耳子在临床上单用或与其他中药组成复方,用于治疗急慢性鼻炎、鼻窦炎以及过敏性鼻炎等鼻科常见和疑难病症,均取得了较好的疗效,如“苍辛滴鼻剂”、“苍耳子散”、“苍耳当归饮”、“苍辛鱼芷汤”等,均是清郁热、化湿浊、开鼻窍的著名方剂,临床上已应用多年,疗效较好。但是,由于对其化学成分研究不深入,药理筛选不足,导致活性部位和活性成分不明确以及没有可行的质量标准,限制了苍耳子的进一步开发和利用。
(二)鼻窦炎的研究进展
鼻窦炎(sinusitis)是由于细菌侵入鼻窦,破坏鼻窦组织,导致鼻窦发生的急性或慢性炎症。发病部位以上颌窦炎的发病率最高,其次是筛窦炎、额窦炎和蝶窦炎,如所有鼻窦受累则称为全鼻窦炎(pansinusitis)。
急、慢性鼻窦炎是一种常见病和多发病,据文献报道,仅美国就有3700万慢性鼻窦炎患者;一些美国研究人员认为,全球鼻窦炎患者约占世界总人口的14%(约八亿四千万人口),而且鼻窦炎的病例数逐年都在快速增加。在中国,由于地域不同,各地鼻窦炎发病率波动在10.7%~44.5%之间。据临床资料统计,慢性鼻窦炎发病数占耳鼻喉科初诊病人的13.02%。尤其在中国南方地区,由于气候潮湿,鼻窦炎发病率甚高,上海长海医院耳鼻喉科门诊的初诊病人中约有1/3以上是各类鼻窦炎患者,其中患者年龄在30岁以下的占76.0%,40~50岁间有6.4%,50岁以后尚有1%或2%。
由于窦口狭窄,不利排泄以及过敏性体质等因素,本病常反复发作,迁延难愈。而且该病病程长,往往又伴有头痛、头晕、记忆力减退等症状,从而给患者的学习、工作、生活带来极不利影响。
另外,鼻窦炎发生后,炎症可扩展侵犯相邻组织,极易引起骨髓炎、眼窝蜂窝织炎、软脑膜炎、脑脓肿,严重的化脓性鼻窦炎甚至还可导致败血症,直接危及病人的生命。有研究证明慢性鼻窦炎的反复刺激还可导致癌变。
现代研究表明,慢性鼻窦炎是由多种因素共同作用的结果,但是其中许多因素仍未能被人们了解,其发病机制尚未被完全阐明。中国外学者对其发病因素的研究主要集中在以下几个方面:①细菌或病毒感染;②窦口鼻道复合体(简称:OMC)阻塞;③粘膜纤毛功能障碍;④免疫功能紊乱等。
鼻窦炎发病的致病菌多为化脓性球菌,如肺炎双球菌、溶血型链球菌、葡萄球菌等,其次为杆菌,如流感杆菌、变形杆菌等。临床上鼻窦炎的发生多数由于两种病菌混合感染所致。细菌的侵入,使宿主抵抗力受损,鼻粘膜纤毛功能降低,甚至使粘膜的防御机制瘫痪。
近年的研究表明,各种原因造成的窦口鼻道复合体阻塞引起通气和引流障碍是造成鼻窦炎迁延不愈和反复发作的主要病因。同时,上述各环节并非孤立存在,而是相互影响、相互作用,导致了鼻窦粘膜持续性炎症反应和不可逆的病理改变。
鼻窦炎的发病率高、炎症易扩展引起严重的并发症,而且易反复发作,迁延难愈。目前临床上常用的西药主要是抗生素、去充血剂、化痰剂、止痛剂、类固醇及鼻喷剂等,仅适用于轻症和早期的患者以及手术前的病人,且多数只能不同程度的改善症状,而无法将鼻窦炎彻底根治。大约2/3的鼻窦炎患者在外用或服用这些西药后会出现不同程度的副作用,如最常见的是麻黄素滴鼻剂,长期反复使用可导致鼻腔血管舒缩机能失调,嗅神经末稍变性,最后形成药物性鼻炎;抗生素滥用则容易使致病菌产生耐药性,还可能破坏正常菌群的平衡,使之失调,造成不良后果。综上所述,虽然市场上治疗鼻窦炎的药物不少,但疗效不稳定、有不同程度的副作用等缺陷限制了其在临床上的应用。
(三)酚酸类化合物的药理活性研究进展
1、抗血小板聚集和防止血栓形成 给大鼠静注丹参的七个水溶性成分对大鼠血小板聚集的研究结果表明,丹酚酸A和丹酚酸B对胶原诱导的血小板聚集有较强的抑制作用,其IC50分别为0.32mmol/L和0.26mmol/L,对ADP诱导的聚集,则丹酚酸A有效而丹酚酸B无效。迷迭香酸有温和的防止血栓形成的作用,它是丹参抗血栓作用的有效成分之一。迷迭香酸(iv)50mg/kg,100mg/kg对大鼠静脉血栓形成的抑制率为41%和55.8%(P<0.05)。
2、改善微循环障碍 通过观察小鼠肠系膜微动脉血管口径、血流速度及流量在不同条件下的改变情况,表明丹酚酸A和丹酚酸B局部给药对肾上腺素所致小鼠肠系膜微循环障碍有明显改善作用,静注丹酚酸A亦有同样作用。
3、抗脂质过氧化 丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C和迷迭香酸对小鼠肝匀浆丙二醛(简称:MDA)生成的抑制作用均比维生素E强,其抑制强度依次为丹酚酸A>丹酚酸C>丹酚酸B>迷迭香酸,四种成分对羟自由基的清除作用比甘露醇强10~100倍。对口服50%乙醇15ml/kg而造成急性酒精中毒的小鼠,用迷迭香酸(100mg/kg×3,po)治疗后,小鼠肝脏MDA含量显著降低。丹酚酸A、丹酚酸B和迷迭香酸对由维生素C-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(简称:NADPH)或由Fe2+-半胱氨酸诱发的大鼠脑、肝、肾微粒体的脂质过氧化都有很强的抑制作用,其作用强弱依次为丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸,比抗氧化剂维生案E的作用强100~1000倍。丹酚酸A可抑制Fe2+-半胱氨酸引起的大鼠心脏和肝脏的线粒体脂质过氧化和ATP酶活性的丧失,抑制脂质过氧化引起的线粒体肿胀以及肝脏线粒体膜流动性下降。
4、对阿霉素心脏毒性的预防作用 阿霉素的心脏毒性是因其在心脏产生自由基,损伤心肌线粒体所致。丹酚酸A可清除由阿霉素产生的OH·,对阿霉索引起的心脏毒性具有预防作用,而对阿霉素抗肿瘤作用无影响。
5、抗胃溃疡 丹酚酸A有抑制猪胃H+-K+/ATP酶和PNPP酶的作用,IC50分别为5.2×10-7和1.7×10-6mol/L。丹酚酸A(25mg/kg,ip)对幽门结扎的大鼠胃酸分泌有很强的抑制作用,同样剂量丹酚酸A能减弱由于水浸或强制性应激而引起的胃部损伤。这些结果表明丹酚酸A通过抑制胃H+-K+/ATP酶而具有抑制胃酸分泌和抗溃疡活性。
6、减轻尿毒症状 丹酚酸B的镁盐能降低由于服用腺嘌呤而引起尿毒症的小鼠血液中的尿氮、肌酸酐、甲基脒胍、胍基琥珀酸的浓度,从而显著减轻小鼠尿毒症状。
7、抑制腺苷酸环化酶 迷迭香酸和紫草酸及其甲酯对鼠脑的基础腺苷酸环化酶和以5umol/L二萜衍生物活化的腺苷酸环化酶均具有较强的抑制作用。
8、其他 如人参皂苷和一些酚酸化合物是人参抗衰老主要活性成分;茶多酚是多种酚类衍生物的总称,约占25%,它包括儿茶素、花色素、黄酮和黄酮醇、酚酸四类化合物。它们含有多羟基,具有酚的性质,有显著的药理作用,如能降血糖、血脂、防止动脉粥样硬化;能与人体中的大肠杆菌、链球菌等细菌以及伤寒、霍乱等病源菌的蛋白质结合,使之沉淀,抑制细菌的生长,促使多种细菌丧失活性;还能使人体中的尼古丁、脱水吗啡、金鸡纳碱等有毒物质和铅、钴、银、铜等对人体有害的重金属产生沉淀,减弱或消除危害性。
(四)常用中草药有效成分的提取分离方法
1、溶剂提取法
(1)原理:溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质,选用对活性成分溶解度大,对不需要溶出成分溶解度小的溶剂,而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当溶剂加到中草药原料(需适当粉碎)中时,溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内,溶解了可溶性物质,而造成细胞内外的浓度差,于是细胞内的浓溶液不断向外扩散,溶剂又不断进入药材组织细胞中,如此多次往返,直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时,将此饱和溶液滤出,继续多次加入新溶剂,就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。溶剂可分为亲水性有机溶剂及亲脂性有机溶剂,被溶解物质也有亲水性及亲脂性的不同。有机化合物分子结构中亲水性基团多,其极性大而疏于油;有的亲水性基团少,其极性小而疏于水。各类溶剂的性质,同样也与其分子结构有关。这样,发明人就可以通过对中草药成分结构分析,去估计它们的此类性质和选用的溶剂。总的说来,只要中草药成分的亲水性和亲脂性与溶剂的此项性质相当,就会在其中有较大的溶解度,即所谓“相似相溶”的规律。这是选择适当溶剂自中草药中提取所需要成分的依据之一。
(2)溶剂的选择:运用溶剂提取法的关键,是选择适当的溶剂。溶剂选择适当,就可以比较顺利地将需要的成分提取出来。选择溶剂要注意以下三点:①溶剂对有效成分溶解度大,对杂质溶解度小;②溶剂不能与中药的成分起化学变化;③溶剂要经济、易得、使用安全等。常见的提取溶剂可分为以下三类:
①水:水是一种强的极性溶剂。中草药中亲水性的成分,如无机盐、糖类、分子不太大的多糖类、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐及苷类等都能被水溶出。为了增加某些成分的溶解度,也常采用酸水及碱水作为提取溶剂。
②亲水性的有机溶剂:也就是一般所说的与水能混溶的有机溶剂,如乙醇(又称:酒精)、甲醇(又称:木精)、丙酮等,以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比较好,对中草药细胞的穿透能力较强。亲水性的成分除蛋白质、粘液质、果胶、淀粉和部分多糖等外,大多能在乙醇中溶解。难溶于水的亲脂性成分,在乙醇中的溶解度也较大。还可以根据被提取物质的性质,采用不同浓度的乙醇进行提取。用乙醇提取比用水量较少,提取时间短,溶解出的水溶性杂质也少。乙醇为有机溶剂,虽易燃,但毒性小,价格便宜,来源方便,有一定设备即可回收反复使用,而且乙醇的提取液不易发霉变质。由于这些原因,用乙醇提取的方法是历来最常用的方法之一。甲醇的性质和乙醇相似,沸点较低(64℃),但有毒性,使用时应注意。
③亲脂性的有机溶剂:也就是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂,如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。这些溶剂的选择性能强,不能或不容易提出亲水性杂质。但这类溶剂挥发性大,多易燃(氯仿除外),一般有毒,价格较贵,设备要求较高,且它们透入植物组织的能力较弱,往往需要长时间反复提取才能提取完全。如果药材中含有较多的水分,用这类溶剂就很难浸出其有效成分,因此,大量提取中草药原料时,直接应用这类溶剂有一定的局限性。
(3)提取方法:用溶剂提取中草药成分,常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法及连续回流提取法等。同时,原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率,必须加以考虑。
①浸渍提取法(简称:浸渍法):浸渍法系将中草药粉末或碎块装入适当的容器中,加入适宜的溶剂(如乙醇、稀醇或水),浸渍药材以溶出其中成分的方法。本法比较简单易行,但浸出率较差,且如用水为溶剂,其提取液易发霉变质,须注意加入适当的防腐剂。
②渗漉提取法(简称:渗漉法):渗漉法是将中草药粉末装在渗漉器中,不断添加新溶剂,使其渗透过药材,自上而下从渗漉器下部流出浸出液的一种浸出方法。当溶剂渗进药粉、溶出成分比重加大而向下移动时,上层的溶液或稀浸液便置换其位置,造成良好的浓度差,使扩散能较好地进行,故浸出效果优于浸渍法。但应控制流速,在渗渡过程中随时自药面上补充新溶剂,使药材中有效成分充分浸出为止。或当渗滴液颜色极浅或渗涌液的体积相当于原药材重的10倍时,便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀浸出液作为另一批新原料的溶剂之用。
③煎煮提取法(简称:煎煮法):煎煮法是中国最早使用的传统的浸出方法。所用容器一般为陶器、砂罐或铜制、搪瓷器皿,不宜用铁锅,以免药液变色。直火加热时最好时常搅拌,以免局部药材受热太高,容易焦糊。有蒸汽加热设备的药厂,多采用大反应锅、大铜锅、大木桶,或水泥砌的池子中通入蒸汽加热。还可将数个煎煮器通过管道互相连接,进行连续煎浸。
④加热回流提取法:应用有机溶剂加热提取,需采用回流加热装置,以免溶剂挥发损失。小量操作时,可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。瓶内装药材约为容量的20%~60%,溶剂浸过药材表面约1~2cm。在水浴中加热回流,一般保持沸腾3~6小时,放冷过滤,再在药渣中加溶剂,作第二、三次加热回流分别约半小时,或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高,大量生产中多采用连续提取法。
⑤连续回流提取法:应用挥发性有机溶剂提取中草药有效成分,不论小型实验或大型生产,均以连续提取法为好,而且需用溶剂量较少,提取成分也较完全。实验室常用脂肪提取器或称索氏提取器。连续提取法,一般需数小时才能提取完全。提取成分受热时间较长,遇热不稳定易变化的成分不宜采用此法。
2、分离和纯化方法:
上述提取法所得到的中草药提取液或提取物仍然是混合物,需进一步除去杂质,分离并进行精制。
(1)溶剂分离法:一般是将上述总提取物,选用三、四种不同极性的溶剂,由低极性到高极性分步进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常为胶状物,难以均匀分散在低极性溶剂中,故不能提取完全,可拌入适量惰性填充剂,如硅藻土或纤维粉等,然后低温或自然干燥,粉碎后,再以选用溶剂依次提取,使总提取物中各组成成分,依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。利用中草药化学成分,在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化,是最常用的方法。
(2)溶剂萃取法:
①萃取法:溶剂提取萃取法又简称萃取法,是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在溶剂中分配系数相差越大,则分离效率越高;如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质,一般多用亲脂性有机溶剂,如苯、氯仿或乙醚进行萃取,如果有效成分是偏于亲水性的物质,在亲脂性溶剂中难溶解,就需要改用弱亲脂性的溶剂,例如乙酸乙酯、丁醇等。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄酮类成分时,多用乙酸乙脂和水萃取。提取亲水性强的皂苷则多选用正丁醇、异戊醇和水作萃取。不过,一般有机溶剂亲水性越大,与水作萃取的效果就越不好,因为能使较多的亲水性杂质伴随而出,对有效成分进一步精制影响很大。
②逆流连续萃取法:是一种连续的溶剂萃取法。其装置可具有一根、数根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充,以增加溶剂萃取时的接触面。如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙酸乙酯等进行萃取,则需将水提浓缩液装在萃取管内,而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全,可取样品用薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。
③逆流分配法:逆流分配法又称逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法与溶剂逆流萃取法原理一致,但加样量一定,并不断在一定容量的溶剂中,经多次移位萃取分配而达到混合物的分离。
④液滴逆流分配法:液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配法基础上改进的溶剂萃取法。对溶剂系统的选择基本同逆流分配法,但要求能在短时间内分离成,并可生成有效的液滴。由于移动相形成液滴,在细的分配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表面,促进溶质在溶剂中的分配,故其分离效果往往比逆流分配法好。
(3)大孔吸附树脂法:大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类有机高聚物吸附剂,具有良好的吸附性能,近十余年来逐渐被应用于中草药化学成分的提取分离和中药新药的开发研制。
大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料。它的吸附性是由于范德华引力或生成氢键的结果。筛选原理是由于其本身多孔性结构所决定。由于吸附和筛选原理,有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小,在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。这使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。大孔吸附树脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯缩聚而生成,由于改性剂的加入,大孔吸附树脂的极性发生改变,按照树脂的表面性质,吸附树脂一般分为非极性、中极性和极性三类。
非极性吸附树脂是由偶极矩很小的单体聚合物制得的不带任何功能基的吸附树脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯体系的吸附树脂,如D101、XAD-1、DiaionHP-10大孔吸附树脂。
中极性吸附树脂指含酯基的吸附树脂,如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯与双甲基丙烯酸酯等交联的一类共聚物。它是在非极性大孔吸附树脂的基础上,加入丙烯酸甲酯或丙烯腈缩聚而成,如中国国内经常使用的AB-8大孔吸附树脂。
极性吸附树脂是指含酰胺基、腈基、酚羟基等含氮、氧、硫极性功能基的吸附树脂。此外,有时把含氮、氧、硫等配体基团的离子交换树脂称作强极性吸附树脂,强极性吸附树脂与离子交换树脂的界限很难区别。极性大孔吸附树脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亚砜类缩聚而成,如日本三菱化工的Diaion HP 2MG、美国Rohm-hass公司的XAD-10,XAD-9大孔吸附树脂。
与活性炭和其它吸附剂相比,大孔吸附树脂具有很多的优点,如对某种物质的吸附选择性较高;物理化学稳定性和机械强度较好;品种规格较多,可根据需要改变树脂物理或化学结构;吸附树脂一般为球状颗粒,流体阻力较小等等。因而被广泛应用于化工、医药等领域,近年来关于大孔吸附树脂在天然产物提取分离中的应用研究报道越来越多。大孔吸附树脂对中草药化学成分如生物碱、黄酮、皂苷、香豆素及其他一些苷类成分都有一定的吸附作用。对糖的吸附能力很差,对色素的吸附能力较强。
(4)沉淀法:是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀,以获得有效成分或除去杂质的方法。如铅盐沉淀法:铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中,能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀,故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中,通以硫化氢气体,使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。
(5)盐析法:盐析法是在中草药的水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达到饱和状态,可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出,而与水溶性大的杂质分离。常用作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
(6)透析法:透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内,而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中,而加以分离精制。
(7)结晶、重结晶和分步结晶法:鉴定中草药化学成分,研究其化学结构,必须首先将中草药成分制备成单体纯品。在常温下,物质本身性质是液体的化合物,可分别用分馏法或层析法进行分离精制。一般地说,中草药化学成分在常温下多半是固体的物质,都具有结晶体的通性,可以根据溶解度的不同用结晶法来达到分离精制的目的。
3、常用干燥方法
(1)真空干燥:是基于这样一基本原理:水的饱和蒸气压与温度紧密相关,在真空状态下,水的沸点降低,即在真空下操作也就是在低温下操作,可避免在高温下营养成分如维生素等的破坏,同时提高了干燥速度。真空干燥在食品、制药、化工等行业有广泛的应用,中国也开发和引进了各种真空干燥设备,其结构形式多种多样。常用的形式主要有箱式真空干燥器、双锥式真空干燥器、带式真空干燥器等。这些传统的真空干燥装置主要采用热风,蒸汽或电等加热,利用热传导、对流或辐射原理将热量从外部传到物料内部。真空干燥具有干燥温度低,干燥室内相对缺氧,可避免脂肪氧化,色素褐变等一系列优点,适合于热敏感性食品物料的干燥,此外设备成本、干燥费用也相对较低。
(2)喷雾干燥:是流化技术用于液态物料干燥的一种方法。因是瞬间干燥,特别适用于热敏性物料,故所得产品质量好,保持原来的色香味,且易溶解。利用喷雾干燥来制备微囊的研究正在进行,它是将心料混悬在衣料的溶液中,经离心喷雾器将其喷入热气流中,所得的产品是衣料包心料而成的微囊,这种微囊粉末可采用于直接压片,也可制备胶囊剂、糖浆剂或混悬剂。
(3)冷冻干燥:是将干燥液体物料冷冻成固体,在低温减压条件下利用冰的升华性能,使物料低温脱水而达到干燥的一种方法。由于物料在高度真空及低温条件下干燥,故对某些极不耐热物品的干燥很适合。王大林报道了一种喷雾通气冻干新技术,是利用冷的空气或氮气作为介质,迅速流经冻结物使水升华,喷雾冻干制得的产品微粒小、干燥快、时间短、均匀、流动性好,并具良好的速溶性。近年来,对膏状物料和粘稠物料干燥的研究取得了较大进展,流态化技术、喷射技术、惰性载体技术,则是在此研究基础上发展起来的。旋转闪蒸干燥机、热喷射气流干燥机、惰性载体干燥机均适合热敏性物料和膏状物料的干燥。这些新的研究成果用于中药制剂生产,将大大改善中药加工的技术水平,提高生产效率。
(4)远红外加热干燥法:是一项新的干燥技术,其干燥原理是将电能转变为远红外辐射,从而被药材的分子吸收,产生共振,引起分子和原子的振动和转动,导致物体变热,经过热扩散、蒸发和化学变化,最终达到干燥的目的。远红外干燥可节省电能20%~50%,效果较好。
(5)微波干燥法:是一项20世纪60年代迅速发展起来的新技术,微波干燥实际上是通过感应加热和介质加热,使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量,并把它转变为热量从而达到干燥的目的。微波干燥可杀灭微生物和霉菌,并具有消毒作用。目前中国生产的微波加热成套设备有915mhz和2450mhz两个频率。
经文献检索等,到目前为止,尚未发现有对单味苍耳子的活性部位或活性成分进行追踪筛选的报道,也未见关于苍耳子活性部位的制备方法方面的有关报道。
发明内容
本发明所需要解决的技术问题是公开了一种中药苍耳子的总提取物及其制备方法,以克服现有技术存在的上述缺陷。
也就是说,本发明意在于明确中药苍耳子的活性部位和活性成分及其制备方法;即本发明涉及中药苍耳子总苷提取物及其制备方法。
(一)技术构思
自主开发创新药物是中国目前的一项紧迫任务。中国中医药学具有悠久的历史,用中草药预防和治疗疾病方面也积累了丰富的经验,因此从中药中寻找有效的活性成分是一条有效的途径,也是中国创新药物研制的优势之所在。
发明人检索了《新编国家中成药》、《临床常用方剂手册》、《中国常用中成药大全》等书籍,并对五官科病人的医院用药和市售药进行了调查统计分析,发现在治疗鼻炎、鼻窦炎的30种常用中药方剂中,含有苍耳子的有23种,占76.7%,且均作为君药或臣药使用,为鼻科要药。因此推测在苍耳子中极有可能存在抗炎、抗菌、抗病毒活性的物质或物质群。但是,由于对其化学成分研究不深入,药理筛选不足,导致活性部位和活性成分不明确以及没有可行的质量标准,限制了苍耳子的进一步开发和利用。
因此,本发明通过对单味苍耳子药材的总提取物进行系统的化学成分研究,并筛选和证明该总提取物的活性和用途。
经过化学成分研究,证明苍耳子活性部位中的主要成分为二萜苷类化合物和酚酸类化合物。而根据文献检索,发明人发现酚酸类化合物大多具有多种显著的药理活性,如著名的丹酚酸、银杏酚酸等等(见背景技术部分),发明人从而推测苍耳子的抗炎镇痛、抗病毒活性及治疗多种鼻病的临床药效,应主要是通过活性部位苍耳子总苷的药效来发挥的,研究结果也证明和证实了苍耳子总苷提取物具有显著的药理活性。
(二)苍耳子总苷提取物
1、苍耳子总苷提取物的组成
发明人通过对苍耳子药材进行系统的化学成分分离、纯化和结构鉴定等实验研究,发现苍耳子中主要含有大量的挥发油、倍半萜内酯及水溶性苷类化合物。
苍耳子总苷提取物中的成分主要包括二萜苷类化合物和酚酸类化合物等两类化合物;以上所述的两类化合物是苍耳子总苷提取物中的主要有效成分,还包括其他成分。
其中,二萜苷类化合物在该总苷提取物中的含量范围是0.5%~99%(W/W,即重量百分比),优选5.0%~95.0%;
其中,酚酸类化合物在该总苷提取物中的含量范围是0.5%~99%(W/W),优选5.0%~95.0%。
其中,其他成分在该总苷提取物中的含量范围是0.5%以下,其他成分是包括鞣质、单糖或多糖、呫吨酮类(xanthones)或类胡萝卜素等中的一种或多种。
现有的研究表明,其他成分对药效或药物的使用等方面至少没有负面的影响,而且分离这些成分成本较高,因此目前没有进一步纯化的必要。
2、苍耳子中的二萜苷类化合物的化学结构通式如下:
其中,R1为氢、甲基或羧基中的一种;R2、R3为氢、磺酸基、乙酰基、丙酰基或二甲基丙酰基中的一种。
表1列出了部分二萜苷类化合物的结构式中与R1、R2、R3基团的对应关系:
当R1=COOH,R2=R3=H时,表示二萜苷类化合物A;
当R1=COOH,R2=H,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物B;
当R1=COOH,R2=SO3 -,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物C;
当R1=H,R2=H,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物D;
当R1=H,R2=SO3 -,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物E。
表1、苍耳子中几种二萜苷类化合物化学结构式
R1 | R2 | R3 | |
A | COOH | H | H |
B | COOH | H | -COCH2CH(CH3)2 |
C | COOH | SO3- | -COCH2CH(CH3)2 |
D | H | H | -COCH2CH(CH3)2 |
E | H | SO3- | -COCH2CH(CH3)2 |
3、苍耳子中的酚酸类化合物的化学结构通式如下:
其中,R1为氢或碱金属元素中的一种;R2、R3和R4为氢或咖啡酰基中的一种。
咖啡酰基即Caffeoyl,结构如下:
表2列出了部分酚酸类化合物的结构式中与R1、R2、R3基团的对应关系。
当R1=H,R2=R3=R4=Caffeoyl时,表示酚酸类化合物A;
当R1=R3=H,R2=R4=Caffeoyl时,表示酚酸类化合物B;
当R1=R2=H,R3=R4=Caffeoyl时,表示酚酸类化合物C;
当R1=K,R2=R4=H,R3=Caffeoyl时,表示酚酸类化合物D。
表2、苍耳子中几种酚酸类化合物的化学结构式
R1 | R2 | R3 | R4 | |
A | H | Caffeoyl | Caffeoyl | Caffeoyl |
B | H | Caffeoyl | H | Caffeoyl |
C | H | H | Caffeoyl | Caffeoyl |
D | K | H | Caffeoyl | H |
(三)苍耳子总苷提取物的制备方法
本发明所说的苍耳子总苷提取物的制备方法包括如下步骤:
(1)提取:取苍耳子原料若干,提取,得提取液,即苍耳子总提取物;
(2)分离纯化:将提取液分离纯化,即得苍耳子总苷提取物。
所述的提取方法包括溶剂提取法等本领域公知的所有可以使用的方法。
上文所述的溶剂提取法的提取方法是本领域的常规提取方法,也就是说包括常用的超声提取法、浸渍提取法、渗漉提取法、煎煮提取法、加热回流提取法或连续回流提取法等中的一种或多种;提取次数可以是一次或者是多次。同时,原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率,必须加以考虑。各种提取方法包括技术细节在内的所有技术资料,均可以参见有关的教材和相关的技术文献等。
上文所述的溶剂提取法所使用的提取溶剂是本领域的常规提取溶剂,也就是说包括常见的水试剂、亲水性的有机溶剂或亲脂性的有机溶剂等三类提取溶剂的一种或多种;
所述的水试剂是包括水、酸水或碱水等中的一种;
所述的亲水性的有机溶剂是一般所说的与水能混溶的有机溶剂,包括乙醇、乙醇水溶液或甲醇等中的一种或多种,优选乙醇或不同浓度的乙醇水溶液等中的一种或多种,进一步优选不同浓度的乙醇水溶液;
所述的亲脂性的有机溶剂是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂,包括石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一种或多种,优选石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一种或多种,进一步优选氯仿、乙醚、乙酸乙酯或二氯甲烷等中的一种或多种。
上述提取方法所得到的苍耳子总提取物,需进一步分离纯化。
所述的分离纯化方法是本领域公知的所有可以使用的方法,包括溶剂分离法,溶剂萃取法(包括萃取法、逆流连续萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法等中的一种或多种),大孔吸附树脂法,沉淀法,盐析法,柱层析法或结晶与重结晶和分步结晶法等中的一种或多种;这些方法均是本领域的公知技术,在需要进一步确证的时候,很容易从有关的教材和相关的技术文献等查阅到包括技术细节在内的所有技术资料。
为了使产品性质稳定,便于使用和保存,以及提高产品的生物利用度,还可增加一个优化的步骤,即步骤三:
(3)干燥。
所述的干燥方法是本领域公知的可以使用的方法,包括常压干燥法如经烘箱烘干、减压干燥法、真空干燥法、喷雾干燥法、冷冻干燥法、远红外加热干燥法或微波干燥法等中的一种或多种。
在具体实施时,需要根据现有的资金、技术和有关的要求,采用其中合适的方法,并选取合适的条件等必要的措施以达到预期的目标。而这些方法也均是本领域的公知技术,在需要进一步确证的时候,都是很容易从有关的教材和相关的技术文献等查阅到包括技术细节在内的所有技术资料。
(四)技术特长
本发明有针对性地研究苍耳子总苷提取物,该原料使用安全,互为兼顾,一物多用,最大限度地发挥了作用,而且使用范围特别广,因此容易推广应用,能够在较短的时间内产生巨大的社会效益和经济效益。
也就是说,本发明的研究结果可被进一步深入开发为具有临床应用前景的防治鼻炎、鼻窦炎、抗炎镇痛及抗病毒产品尤其是新药。该产品具有疗效确切、有效剂量低、无毒副作用的优点,与同类产品相比具有显著的优势。急、慢性鼻窦炎为临床常见病、多发病,随着全球大气污染的日益严重和环境的恶化,预计鼻窦炎等呼吸系统疾病的发病率将不断攀升。因此,本发明还可为后续的新药研究打下良好的基础,并进一步产生较大的经济效益和社会效益。
经过长期的药理学试验,苍耳子总苷提取物具有抗炎、抗病毒、镇痛以及治疗急性和慢性鼻炎、鼻窦炎及其相关病症的活性,直接使用苍耳子总苷提取物,无须经过胃肠道细菌的代谢,使作用更直接,避免个体之间的胃肠道菌群活性有差异造成代谢产物的差异而产生药效上的差异,从而克服了中药给药剂量难以控制的问题,并提高了生物利用度。
本发明苍耳子总苷提取物药理作用较强,其原料来源丰富,制备工艺简单,得率高。
总之,本发明积极适应了现代医疗和科研领域的工作需要和人性化服务的需要,是用于抗炎、抗病毒、镇痛以及治疗急性和慢性鼻炎、鼻窦炎及其相关病症的安全原料。
具体实施方式
本发明研究了苍耳子总苷提取物及其制备方法,提供了一种能够用于制备抗炎、抗病毒、镇痛产品如药物及治疗急性和慢性鼻炎、鼻窦炎及其相关病症产品特别是药物的原料,便于医疗行业和相关行业如食品、饮料等领域的安全使用,包括疾病治疗、科学研究等。
下面以溶剂提取法为例,详细阐述制备苍耳子总苷提取物的具体操作方法。
(1)提取:取苍耳子药材若干,加入提取溶剂混和,提取,将提取液过滤、浓缩,即得苍耳子药材总提取物。
(2)分离纯化:将苍耳子药材总提取物经分离纯化步骤,得到苍耳子总苷提取物。
这里所说的提取、分离纯化方法包括如上文所述的溶剂提取法、溶剂萃取法或大孔吸附树脂法、柱层析法等本领域公知的提取、分离纯化方法。具体来说:
在步骤一中:
①在所采用的溶剂提取法中,提取溶剂是包括水、醇类或其他有机溶剂等中的一种或多种,醇类包括甲醇、乙醇、乙醇水溶液、丙醇或丁醇等中的一种或多种,其他有机溶剂包括乙酸乙酯、丙酮等,优选水、甲醇、乙醇、乙醇水溶液、丙醇、丁醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂或其混合溶剂中的一种或多种,进一步优选包括乙醇或乙醇水溶液等中的一种,特别优选60%~90%乙醇水溶液。
②所采用的溶剂提取法中,提取方法优选超声提取法、渗漉提取法或加热回流提取法等中的一种或多种,进一步优选加热回流提取法;提取次数可以为一次或多次。
③将提取液减压过滤,浓缩得苍耳子药材总提取物,苍耳子药材总提取物的得率是5.0%~20%,即苍耳子药材总提取物占苍耳子药材总重量的5.0%20%。
在步骤二中:
①所采用的分离纯化方法优选溶剂萃取法,即将苍耳子药材总提取物用水分散,用石油醚脱脂后,再采用适当的有机溶剂萃取以除去脂溶性成分,得到萃取残留物;或直接用适当的有机溶剂进行萃取以除去脂溶性成分,得到萃取残留物;所述的适当的有机溶剂可以选用氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯等中的一种或多种进行萃取;萃取次数可以为一次或多次。
②在所采用的溶剂萃取法中,还需要将萃取脂溶性成分后所得的萃取残留物,继续采用正丁醇萃取,分取正丁醇层,加入无水硫酸钠脱水后,减压浓缩正丁醇部位,即得苍耳子总苷提取物。此时,苍耳子总苷提取物的得率为1%~10%,即苍耳子总苷提取物占苍耳子药材总重量的1%~10%。
③所采用的分离纯化方法也可采用大孔吸附树脂法。所采用的大孔吸附树脂法,可以将苍耳子药材总苷提取物减压回收至无醇味,过滤得滤液,将滤液用蒸馏水调至相对密度1.0~1.1,上大孔吸附树脂柱,用水洗去水溶性杂质,继用洗脱溶剂如不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱,收集5~75%乙醇洗脱部位,即得富含酚酸类和二萜苷类化合物的洗脱液,减压回收至干,即得苍耳子总苷提取物。此时,苍耳子总苷提取物的得率为0.5%~10%,即苍耳子总苷提取物占苍耳子药材总重量的0.5%~10%。优选的洗脱溶剂是浓度为40%的乙醇水溶液。
④苍耳子总苷提取物的大孔吸附树脂制备方法,可以采用多种型号的大孔吸附树脂,包括D101、D520、D4006、H103、AB-8、Dianion HP 20或XAD-7等非极性及弱极性树脂中的一种或多种,也可为其它在性能上可以取代上述树脂的填料,优选AB-8、D101或D520等中的一种或多种,特别优选AB-8。
总而言之,在苍耳子总苷提取物的制备方法中,是以苍耳子新鲜药材或市售药材为原料;原料粉碎后,顺次采用溶剂提取法、溶剂萃取法或大孔吸附树脂法等中的一种或多种,即得苍耳子总苷提取物的粗品;如果结合减压浓缩干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等常用干燥方法中的一种或多种,则可制备得到苍耳子总苷提取物粗品的浸膏或干燥物。
如果进一步采用柱层析法等分离纯化方法,则能够得到苍耳子总苷提取物中的酚酸类化合物和二萜苷类化合物等;此时,得到的酚酸类化合物和二萜苷类化合物占苍耳子总苷提取物的含量在50%~100%,其中,二萜苷类化合物占苍耳子总苷提取物含量的0.5%~99%(W/W),酚酸占总苷提取物含量的0.5%~99%(W/W)。
在本发明中,以上所述的具体实施方式和以下所述的实例均是为了更好地阐述本发明,并不是用来限制发明的范围。
下面通过实施例对本发明作详细描述。
实施例1、苍耳子总苷提取物的制备方法1
苍耳子干燥药材2.5Kg,用90%乙醇溶液50升回流提取2次,每次2小时,合并两次提取液,减压浓缩得到浸膏350g,用2升水分散后,顺次以6升石油醚分三次萃取脱脂,分别以6升氯仿、6升乙酸乙酯各三次萃取除杂质;萃取残留物用6升正丁醇分三次萃取,合并萃取液,冷冻干燥得苍耳子总苷提取物21g。
实施例2、苍耳子总苷提取物的制备方法2
苍耳子干燥药材2.5Kg,用70%乙醇溶液50升超声提取2次,每次2小时,合并两次提取液,减压浓缩得到浸膏208g,用2升水分散后,顺次以6升石油醚分三次萃取脱脂,分别以6升氯仿、6升乙酸乙酯各三次萃取除杂质;萃取残留物用6升正丁醇分三次萃取,合并萃取液,减压回收至干,得苍耳子总苷提取物17g。
实施例3、苍耳子总苷提取物的制备方法3
苍耳子干燥药材2.5Kg,用75%乙醇溶液50升渗漉提取2次,每次24小时,合并两次提取液,减压浓缩得到浸膏285g,用2升水分散后,顺次以6升石油醚分三次萃取脱脂,分别以6升氯仿、6升乙酸乙酯各三次萃取除杂质;萃取残留物用6升正丁醇分三次萃取,合并萃取液,减压回收至干,得苍耳子总苷提取物19g。
实施例4、苍耳子总苷提取物的制备方法4
苍耳子干燥药材2.5Kg,用75%乙醇溶液50升回流提取2次,每次2小时,合并两次提取液,减压回收至无醇味,过滤得滤液,滤液用蒸馏水调至相对密度1.05,上D101大孔吸附树脂柱,用水洗去水溶性杂质,继用不同浓度乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱部位,即得富含酚酸苷类和二萜苷类化合物的洗脱液,减压回收至干,得苍耳子总苷提取物15g。
实施例5、苍耳子总苷提取物的制备方法5
苍耳子干燥药材2.5Kg,用75%乙醇溶液50升回流提取2次,每次2小时,合并两次提取液,减压回收至无醇味,过滤得滤液,滤液用蒸馏水调至相对密度1.05,上AB-8大孔吸附树脂柱,用水洗去水溶性杂质,继用不同浓度乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱部位,即得富含酚酸苷类和二萜苷类化合物的洗脱液,减压回收至干,得苍耳子总苷提取物20g。
Claims (49)
1.苍耳子总苷提取物,其特征在于,该总苷提取物是包括二萜苷类化合物、酚酸类化合物和其他成分的总提取物。
2.根据权利要求1所述的苍耳子总苷提取物,其特征在于,所述的二萜苷类化合物、酚酸类化合物和其他成分在该总苷提取物中的含量范围分别是0.5%~99%(重量百分比)、0.5%~99%和0.5%以下。
3.根据权利要求2所述的苍耳子总苷提取物,其特征在于,所述的二萜苷类化合物和酚酸类化合物在该总苷提取物中的含量范围分别是5%~95%和5%~95%。
4.根据权利要求1~3任一项所述的苍耳子总苷提取物,其特征在于,二萜苷类化合物的化学结构通式如下:
其中,R1为氢、甲基或羧基中的一种;R2、R3为氢、磺酸基、乙酰基、丙酰基或二甲基丙酰基中的一种。
5.根据权利要求4所述的苍耳子总苷提取物,其特征在于,所述的二萜苷类化合物是包括如下化合物中的一种或多种:
当R1=COOH,R2=R3=H时,表示二萜苷类化合物A;
当R1=COOH,R2=H,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物B;
当R1=COOH,R2=SO3 -,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物C;
当R1=H,R2=H,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物D;
当R1=H,R2=SO3 -,R3=COCH2CH(CH3)2时,表示二萜苷类化合物E。
7.根据权利要求6所述的苍耳子总苷提取物,其特征在于,所述的酚酸类化合物是包括如下化合物中的一种或多种:
当R1=H,R2=R3=R4=咖啡酰基时,表示酚酸类化合物A;
当R1=R3=H,R2=R4=咖啡酰基时,表示酚酸类化合物B;
当R1=R2=H,R3=R4=咖啡酰基时,表示酚酸类化合物C;
当R1=K,R2=R4=H,R3=咖啡酰基时,表示酚酸类化合物D。
8.根据权利要求1~3、5、7任一项所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)提取:取苍耳子原料若干,提取,得提取液,即苍耳子总提取物;
(2)分离纯化:将提取液分离纯化,即得苍耳子总苷提取物。
9.根据权利要求8所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取方法是包括溶剂提取法在内的本领域公知的所有可以使用的方法。
10.根据权利要求9所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取方法是溶剂提取法。
11.根据权利要求10所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂提取法是包括常用的超声提取法、浸渍提取法、渗漉提取法、煎煮提取法、加热回流提取法或连续回流提取法中的一种或多种;提取次数是一次或多次。
12.根据权利要求11所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂提取法是包括超声提取法、渗漉提取法或加热回流提取法中的一种;提取次数是多次。
13.根据权利要求12所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂提取法是加热回流提取法;提取次数是多次。
14.根据权利要求13所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的加热回流提取法所使用的提取溶剂是包括常见的水试剂、亲水性的有机溶剂或亲脂性的有机溶剂三类提取溶剂中的一种或多种。
15.根据权利要求14所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的水试剂是包括水、酸水或碱水中的一种;所述的亲水性的有机溶剂是包括乙醇、乙醇水溶液或甲醇中的一种或多种;所述的亲脂性的有机溶剂是包括石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷中的一种或多种。
16.根据权利要求9所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取方法所使用的提取溶剂是包括常见的水试剂、亲水性的有机溶剂或亲脂性的有机溶剂三类提取溶剂中的一种或多种。
17.根据权利要求16所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的水试剂是包括水、酸水或碱水中的一种;所述的亲水性的有机溶剂是包括乙醇、乙醇水溶液或甲醇中的一种或多种;所述的亲脂性的有机溶剂是包括石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷中的一种或多种。
18.根据权利要求10所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂提取法所使用的提取溶剂是包括常见的水试剂、亲水性的有机溶剂或亲脂性的有机溶剂三类提取溶剂中的一种或多种。
19.根据权利要求18所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的水试剂是包括水、酸水或碱水中的一种;所述的亲水性的有机溶剂是包括乙醇、乙醇水溶液或甲醇中的一种或多种;所述的亲脂性的有机溶剂是包括石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷中的一种或多种。
20.根据权利要求11所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂提取法所使用的提取溶剂是包括常见的水试剂、亲水性的有机溶剂或亲脂性的有机溶剂三类提取溶剂中的一种或多种。
21.根据权利要求20所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的水试剂是包括水、酸水或碱水中的一种;所述的亲水性的有机溶剂是包括乙醇、乙醇水溶液或甲醇中的一种或多种;所述的亲脂性的有机溶剂是包括石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷中的一种或多种。
22.根据权利要求8所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取方法是:取苍耳子药材若干,加入提取溶剂混合,提取,将提取液过滤、浓缩,即得苍耳子药材总提取物。
23.根据权利要求22所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取溶剂是包括水、醇类或其他有机溶剂中的一种或多种。
24.根据权利要求23所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的醇类是包括甲醇、乙醇、乙醇水溶液、丙醇或丁醇中的一种或多种,其他有机溶剂是包括乙酸乙酯或丙酮中的一种或多种。
25.根据权利要求23所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取溶剂是包括水、甲醇、乙醇、乙醇水溶液、丙醇、丁醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种或多种。
26.根据权利要求25所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取溶剂是包括乙醇或乙醇水溶液中的一种。
27.根据权利要求26所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的提取溶剂是60%~90%乙醇水溶液。
28.根据权利要求8所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的分离纯化方法是包括溶剂分离法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、沉淀法、盐析法、柱层析法或结晶与重结晶和分步结晶法中的一种或多种。
29.根据权利要求28所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的分离纯化方法是包括溶剂萃取法或大孔吸附树脂法中的一种。
30.根据权利要求29所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂萃取法是包括萃取法、逆流连续萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法中的一种或多种。
31.根据权利要求29所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂萃取法的操作步骤是:
(1)将苍耳子药材总提取物用水分散,用石油醚脱脂后,再采用适当的有机溶剂萃取以除去脂溶性成分,得到萃取残留物;萃取次数可以是一次或多次。
(2)将萃取残留物继续采用正丁醇进行萃取,分取正丁醇层,加入无水硫酸钠脱水后,减压浓缩正丁醇部位,即得苍耳子总苷提取物。
32.根据权利要求30所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂萃取法的操作步骤是:
(1)将苍耳子药材总提取物用水分散,用石油醚脱脂后,再采用适当的有机溶剂萃取以除去脂溶性成分,得到萃取残留物;萃取次数可以是一次或多次。
(2)将萃取残留物继续采用正丁醇进行萃取,分取正丁醇层,加入无水硫酸钠脱水后,减压浓缩正丁醇部位,即得苍耳子总苷提取物。
33.根据权利要求29所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的溶剂萃取法的操作包括如下步骤:直接用适当的有机溶剂对苍耳子药材总提取物进行萃取以除去脂溶性成分,得到萃取残留物;萃取次数可以是一次或多次。
34.根据权利要求33所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的适当的有机溶剂是包括氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯中的一种或多种。
35.根据权利要求29所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的大孔吸附树脂法的操作包括如下步骤:
(1)将苍耳子药材总苷提取物减压回收至无醇味,过滤得滤液;
(2)将滤液用蒸馏水调至相对密度1.0~1.1,上大孔吸附树脂柱,用水洗去水溶性杂质;
(3)用洗脱溶剂进行洗脱,收集5~75%乙醇洗脱部位,即得富含酚酸类和二萜苷类化合物的洗脱液;
(4)减压回收至干,即得苍耳子总苷提取物。
36.根据权利要求35所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的洗脱溶剂是不同浓度的乙醇水溶液。
37.根据权利要求36所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的洗脱溶剂是浓度为40%的乙醇水溶液。
38.根据权利要求35所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的大孔吸附树脂是包括多种型号的大孔吸附树脂。
39.根据权利要求38所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的大孔吸附树脂是包括非极性树脂、弱极性树脂或其它在性能上能够取代上述树脂的填料中的一种。
40.根据权利要求39所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的非极性树脂和弱极性树脂是包括D101、D520、D4006、H103、AB-8、Dianion HP 20或XAD-7中的一种。
41.根据权利要求40所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的非极性树脂和弱极性树脂是AB-8。
42.根据权利要求4所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)提取:取苍耳子原料若干,提取,得提取液,即苍耳子总提取物;
(2)分离纯化:将提取液分离纯化,即得苍耳子总苷提取物。
43.根据权利要求6所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)提取:取苍耳子原料若干,提取,得提取液,即苍耳子总提取物;
(2)分离纯化:将提取液分离纯化,即得苍耳子总苷提取物。
44.根据权利要求1~3、5、7任一项所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,还包括干燥的步骤。
45.根据权利要求44所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的干燥方法是包括常压干燥法、减压干燥法、真空干燥法、喷雾干燥法、冷冻干燥法、远红外加热干燥法或微波干燥法中的一种或多种。
46.根据权利要求4所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,还包括干燥的步骤。
47.根据权利要求46所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的干燥方法是包括常压干燥法、减压干燥法、真空干燥法、喷雾干燥法、冷冻干燥法、远红外加热干燥法或微波干燥法中的一种或多种。
48.根据权利要求6所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,还包括干燥的步骤。
49.根据权利要求48所述的苍耳子总苷提取物的制备方法,其特征在于,所述的干燥方法是包括常压干燥法、减压干燥法、真空干燥法、喷雾干燥法、冷冻干燥法、远红外加热干燥法或微波干燥法中的一种或多种。
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |