CN102219782B - 一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法 - Google Patents
一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102219782B CN102219782B CN2011101282158A CN201110128215A CN102219782B CN 102219782 B CN102219782 B CN 102219782B CN 2011101282158 A CN2011101282158 A CN 2011101282158A CN 201110128215 A CN201110128215 A CN 201110128215A CN 102219782 B CN102219782 B CN 102219782B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- isovitexin
- vitexin
- ethyl acetate
- extract
- extracting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Abstract
本发明公开一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法。该方法以檀香叶为原料，用醇类溶剂对檀香叶进行超声提取、浸提，然后依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯对檀香叶醇提物进行萃取；对乙酸乙酯萃取液柱层析，所得洗脱液重结晶后得到异牡荆素；余液通过制备液相分离，得到牡荆素。本发明首次采用檀香叶，提取出牡荆素和异牡荆素，分离工艺简单，成本低，原料易得，并且檀香叶中的牡荆素和异牡荆素含量高，为檀香叶资源利用提供新的途径，这两个化合物可制成小水针滴注液、冻干粉及片剂、胶囊剂或滴丸剂，牡荆素可用于制备治疗冠心病、心肌梗死、心绞痛、防癌抗肿瘤药物，异牡荆素可用于制备治疗或预防前列腺癌、乳腺癌和子宫内膜癌药物。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物提取领域，具体涉及一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法。
背景技术
檀香(Santalum album L)又名真檀，白旃檀、震檀等，是檀香科檀香属的一种半寄生常绿小乔木。原产于印度南部、印度尼西亚等地，是一种集药用、香料、佛教用品、精细工艺品和优良雕刻材料于一体的重要经济树种。我国利用檀香的历史悠久，明代李时珍的《本草纲目》中记载：“檀香；释名：旃檀、真檀；气味：温、辛、无毒；主治：消风热肿毒、治中恶鬼气、杀虫、止心腹痛、霍乱、肾气痛；磨水：可涂外肾及腰肾痛处、散冷气，引胃气上升、噎膈吐食”。《中华本草》中记载：“干檀香叶具有：祛瘀血、解疮毒、主治痈疮、疥癣等功效”。
目前，国内外学者们对中药檀香的生药学鉴定、栽培技术、质量等方面研究较多，但对檀香的化学、药理、应用等方面研究较少，而有关檀香叶的成分分析报道较少。彭万喜等采用热解-气相色谱/质谱(Py-GC/MS)技术研究檀香叶抽提物的成分，分析结果表明檀香叶苯/醇抽提物主要包含16-三十烷酮(8.69%)、11,14,17-二十碳三烯酸甲酯(8.49%)、十六酸(5.38%)、吡嗪(4.01%)、环辛二十四烷(3.89%)、苯酚(3.19%)等118种化合物，檀香叶丙酮抽提物主要包含3-羽扇酮(39.35%)、蒲公英甾醇(7.60% )、β-谷甾醇(5.38%)、蒲公英萜醇(3.42%)、乙醛(2.37%)、(5α)-雄甾-6-酮(2.36%)等48种化合物。Jigna J.等应用琼脂扩散法测定檀香叶的甲醇提取物对表皮葡萄球菌、枯草杆菌、类产碱假单胞菌、变形杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、产气肠杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌的抑制作用，研究结果表明：檀香叶的甲醇提取物对枯草杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌都具有明显的抑制作用。文海涛等研究了乙烯刺激对檀香叶中多糖含量的影响,发现未经乙烯刺激的檀香叶多糖含量在9.23%~9.37%之间。
牡荆素、异牡荆素都是具有良好生理功能的化合物。目前，牡荆素主要用于治疗心血管疾病，已有成药注射用牡荆素用于临床医疗。从零售市场上销售情况来看，牡荆素等活血化瘀类药物销售形势较好，是增长最为迅速的药品之一，其潜力巨大，空间广阔。牡荆素、异牡荆素还是防癌抗肿瘤的天然药物成分，近年研究发现，山楂叶的抗癌成分中含有牡荆素，因此医生建议消化道癌症的高危人群应经常食用山楂。异牡荆素等对AKR1C3有潜在的抑制作用,可用于治疗或预防前列腺癌、乳腺癌和子宫内膜癌。
现在，许多植物提取厂家都在生产牡荆素类植物提取物，除了牡荆提取物以外，还有山楂提取物等。他们都是以牡荆素为指标在生产，产品也是以牡荆素为指标向客户销售。但是这类提取物所含的牡荆素含量都很低，如山楂提取物中牡荆素的含量只有0.7％左右。从天然植物中提取分离牡荆素、异牡荆素一般采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱和制备HPLC联用的方法，工艺都比较复杂。
经文献查新得知，目前国内外目前没有关于从檀香叶中分离得到牡荆素、异牡荆素的任何报道。
发明内容
本发明的发明目的在于克服现有的天然产物提取物中，牡荆素和异牡荆素含量不高等缺点，提供一种从天然产物中提取分离并同时获得含量大、高纯度的牡荆素和异牡荆素的方法。
本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：
一种从天然产物中提取分离异牡荆素（即式Ⅰ化合物）和牡荆素（即式Ⅱ化合物）的方法，所述天然产物为檀香叶。
所述提取分离方法，可以参照现有的从其它天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法进行。
作为一种优选方案，所述方法优选为以醇类溶剂对檀香叶进行提取得到醇提物，用酯类溶剂对醇提物进行萃取，所得酯类溶剂萃取物经过柱层析和制备液相分离分别得到异牡荆素和牡荆素。
所述醇类溶剂为常用的低分子量醇类溶剂，作为一种优选方案，所述醇类溶剂优选为乙醇。
所述酯类溶剂为常用的低分子量酯类溶剂，作为一种优选方案，所述酯类溶剂优选为乙酸乙酯。
作为一种更优选方案，所述从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，包括如下步骤：
（1）用乙醇对檀香叶进行超声和/或浸提，得到檀香叶乙醇粗提物；
（2）依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯对檀香叶乙醇粗提物进行液液萃取；收集乙酸乙酯萃取液，浓缩，干燥，得到乙酸乙酯萃取物；
（3）将步骤（2）得到的乙酸乙酯萃取物在层析柱中进行分离；所述分离选用乙酸乙酯、甲醇组成的洗脱剂进行梯度洗脱，收集合并洗脱液，对洗脱液进行重结晶，得到异牡荆素；
（4）步骤（3）重结晶后的余液进行制备液相分离纯化，得到牡荆素。
步骤（2）所说的液液萃取，是指先对檀香叶乙醇粗提物用石油醚萃取至石油醚层无色透明，除去石油醚层，用氯仿萃取余下液层至氯仿层无色透明为止，除去氯仿层，再加入乙酸乙酯进行萃取。
作为一种优选方案，步骤（1）中，所述乙醇优选为体积分数为50%~80%的乙醇水溶液。
作为一种最优选方案，步骤（1）中，所述乙醇最优选为体积分数为80%的乙醇水溶液。
作为一种优选方案，步骤（1）中，所述乙醇与檀香叶的质量比优选为10:1。
步骤（1）中，超声或浸提都是有效的萃取方法，超声在一定程度上可以缩短萃取的时间，作为一种优选方案，选用超声萃取与浸提萃取联合进行。
作为一种优选方案，步骤（3）中，所述层析柱优选为硅胶柱。
作为一种优选方案，步骤（3）中，所述洗脱剂中还含有甲酸。加入甲酸，可以防止洗脱时出现的拖尾，使柱层析的分离效果更好。
作为一种更优选方案，步骤（3）中，所述分离依次选用乙酸乙酯、甲醇与甲酸的体积比为100:0:0.05，90:1:0.05，70:1:0.05，50:1:0.05，30:1:0.05，20:1:0.05，10:1:0.05，5:1:0.05，1:1:0.05，0:1:0.05的洗脱剂进行洗脱。
作为一种更优选方案，所述从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，包括如下步骤：
（1）用体积分数为80%乙醇水溶液与檀香叶质量比为10:1的比例超声、浸提粉碎后的檀香叶，得到檀香叶乙醇粗提物；
（2）依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯对檀香叶乙醇粗提物进行萃取，直至乙酸乙酯溶液为无色透明为止，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩，干燥，得到乙酸乙酯萃取物；
（3）将步骤（2）得到的乙酸乙酯萃取物在层析柱中进行分离；所述分离依次选用乙酸乙酯、甲醇与甲酸的体积比为100:0:0.05，90:1:0.05，70:1:0.05，50:1:0.05，30:1:0.05，20:1:0.05，10:1:0.05，5:1:0.05，1:1:0.05，0:1:0.05的洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，重结晶，得到异牡荆素；
（4）步骤（3）重结晶后的余液进行制备液相分离纯化，得到牡荆素。
本申请所述的超声提取，是一种常规的超声提取技术，作为一种优选方案，步骤（1）中，采用频率20KHz的超声波进行萃取，超声萃取次数为2~3次，每次超声10min~15min，浸提的时间优选为48小时。
作为一种优选方案，步骤（3）中，收集按乙酸乙酯、甲醇与甲酸的体积比为30:1:0.05，20:1:0.05，10:1:0.05，5:1:0.05，1:1:0.05，0:1:0.05洗脱的洗脱液进行重结晶。
作为一种优选方案，步骤（3）中，所述重结晶为用甲醇进行重结晶。
作为一种优选方案，步骤（4）中，所述制备液相分离的条件为采用C18反相柱，流动相为甲醇和水的体积比为35:65的甲醇水溶液，流速为10ml/min。制备液相中，收集浓度最大的化合物。
Ⅰ
Ⅱ
经检测及换算，牡荆素在檀香叶中含量：1.84%，异牡荆素在檀香叶中含量：0.99%。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1.本发明的原料为檀香叶，檀香的树叶较多，每年可通过机械的方法采集到大量的檀香叶，但目前檀香叶均被遗弃，不仅造成极大的浪费，对环境也造成不良的影响，本发明提供了檀香叶资源利用的新途径；
2.本发明分离的牡荆素和异牡荆素为首次在檀香叶中分离得到，这两个化合物具有抗癌、抗肿瘤、降血压、止痉挛、抗感染、抗菌、抗辐射、抗氧化以及清除自由基、抗甲状腺和致甲状腺肿的功效，本发明为高附加值产品资源化的综合利用提供了很好的途径。
3.本发明可以从檀香叶中提取得到占檀香叶重量1.84%的牡荆素及0.99%的异牡荆素，比目前生产牡荆素类植物的含量高1%左右。
4.目前，从天然植物中提取分离牡荆素、异牡荆素一般需要采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和制备HPLC联用的方法，工艺比较复杂且成本高；而本发明用硅胶柱层析分离得到异牡荆素，再经制备液相分离得到牡荆素，工艺简单，成本较低。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步解释本发明，但实施例并不对本发明作任何形式的限定。
实施例1
（1） 檀香叶乙醇粗提物的制备：将檀香叶粉碎，加入10倍重量、体积分数为80%的乙醇水溶液，搅匀，采用频率20KHz的超声波进行萃取，超声萃取次数为2~3次，每次超声10min，然后在室温下浸提48 h，过滤，滤渣再重复提取三次，合并滤液，将滤液浓缩，把乙醇挥尽，得乙醇粗提物；
（2） 檀香叶乙醇粗提物液液萃取分离纯化：将乙醇粗提物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，直至乙酸乙酯溶液为无色透明为止，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩，干燥，得到乙酸乙酯萃取物；
（3） 将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱色谱分离，依次用不同浓度的乙酸乙酯、甲醇与甲酸进行梯度洗脱，乙酸乙酯、甲醇与甲酸的体积比依次为：100:0:0.05,90:1:0.05,70:1:0.05,50:1:0.05,30:1:0.05,20:1:0.05,10:1:0.05,5:1:0.05,1:1:0.05,0:1:0.05，收集洗脱液，用甲醇进行重结晶，得到异牡荆素（即式Ⅰ化合物）。异牡荆素纯度为98%以上。
（4）采用C18反相柱，流动相为甲醇和水的体积比为35:65的甲醇水溶液，流速为10ml/min，对步骤（3）重结晶后的余液进行制备液相分离纯化，制备液相分离中，收集其中浓度最大的化合物，得到牡荆素（即式Ⅱ化合物）。牡荆素纯度为98%以上。
对上述所得两种化合物进行分析，数据如下，确认结构为目标化合物。
步骤（3）得到的化合物：
ESI-MS：（433M++H）；
1H-NMR(600MHz,CD3OD)δ:7.81(2H,d,J=8.4Hz,H-2’,6’),6.90(2H,d,J=8.4Hz,H-3’,5’),6.57(1H,s,H-3), 6.48(1H,s,H-6)；
13C-NMR(150MHz,CD3OD)δ:164.8(C-2),103.9(C-3),184.0(C-4),162.0(C-5),109.2(C-6),166.2(C-7),95.3(C-8),158.7(C-9),105.2(C-10),123.1(C-1’),129.4(C-2’,6’),117.0(C-3’,5’),162.1(C-4’),75.3(C-1”),72.6(C-2”) ,80.1(C-3”),71.8(C-4”),82.6(C-5”),62.9(C-6”)。该数据与异牡荆素相一致，证明其为异牡荆素。
步骤（4）得到的化合物：
ESI-MS：433（M++H），455（M++Na）；
1H-NMR(600MHz, DMSD-d6)δ:13.16(1H，s，5-OH，)，10.85,10.36(各1H，s，4’-OH，7-OH)，8.03(2H，d，J=9.0 Hz，2’-H，6’-H)，6.89(2H，d，J=9.0Hz，3’-H，5’-H)，6.78(1H，s，6-H)，6.27(1H，s，3-H)，4.68(1H，d，J=10.OHz，glucosyl 1”-H)，3.80-3.20(m，glucosyl H)；
13C-NMR(150MHz,DMSD-d6)δ：164.10(C-2)，102.71(C-3)，182.36(C-4)．156.27(C-5)，98.33(C-6)，161.61(C-7)．104.89(C-8)，160.59(C-9)， 104.79(C-10)，121.80(C-1’)，128.70(C-2’，6’)，115.99(C-3’，5’)，160.10(C-4’)，78.93(c-1”)，73.65(C-2”)，71.11(C-3”)，70.81(C-4”)，82.18(C-5”)，61.57(C-6”)。该数据与牡荆素相一致，证明其为牡荆素。
Claims (5)
1.一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）用乙醇对粉碎后的檀香叶进行超声和/或浸提，得到檀香叶乙醇粗提物；
（2）依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯对檀香叶乙醇粗提物进行萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩，干燥，得到乙酸乙酯萃取物；
（3）将步骤（2）得到的乙酸乙酯萃取物在层析柱中进行分离；所述分离依次选用乙酸乙酯、甲醇与甲酸的体积比为100:0：0.05，90:1：0.05，70:1：0.05，50:1：0.05，30:1：0.05，20:1：0.05，10:1：0.05，5:1：0.05，1:1：0.05，0:1：0.05的洗脱剂进行梯度洗脱，收集合并洗脱液，对洗脱液进行重结晶，得到异牡荆素；
（4）步骤（3）重结晶后的余液进行制备液相分离纯化，得到牡荆素。
2.如权利要求1所述的从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述乙醇为体积分数为50~80%的乙醇水溶液；所述乙醇与檀香叶的质量比为10:1。
3.如权利要求1所述的从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）用与檀香叶质量比为10:1的体积分数为80%的乙醇水溶液对粉碎后的檀香叶依次进行超声、浸提，得到檀香叶乙醇粗提物；
（2）依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯对檀香叶乙醇粗提物进行萃取，直至乙酸乙酯溶液为无色透明为止，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩，干燥，得到乙酸乙酯萃取物；
（3）将步骤（2）得到的乙酸乙酯萃取物在层析柱中进行分离；所述分离依次选用乙酸乙酯、甲醇与甲酸的体积比为100:0：0.05，90:1：0.05，70:1：0.05，50:1：0.05，30:1：0.05，20:1：0.05，10:1：0.05，5:1：0.05，1:1：0.05，0:1：0.05的洗脱剂进行洗脱，收集合并洗脱液，对洗脱液进行重结晶，得到异牡荆素；
（4）步骤（3）重结晶后的余液进行制备液相分离纯化，得到牡荆素。
4.如权利要求1、2或3中所述的从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述重结晶为用甲醇进行重结晶。
5.如权利要求1、2或3中所述的从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述制备液相分离的条件为采用C18反相柱，流动相为甲醇和水的体积比为35:65的甲醇水溶液，流速为10ml/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011101282158A CN102219782B (zh) | 2011-05-18 | 2011-05-18 | 一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011101282158A CN102219782B (zh) | 2011-05-18 | 2011-05-18 | 一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102219782A CN102219782A (zh) | 2011-10-19 |
| CN102219782B true CN102219782B (zh) | 2013-12-04 |
Family
ID=44776511
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011101282158A Expired - Fee Related CN102219782B (zh) | 2011-05-18 | 2011-05-18 | 一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102219782B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102754835B (zh) * | 2012-07-24 | 2013-11-13 | 华南农业大学 | 一种富含γ-氨基丁酸的檀香叶提取液及其制备方法 |
| CN105982946A (zh) * | 2015-02-15 | 2016-10-05 | 沈阳药科大学 | 紫檀香抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用途 |
| CN104958311B (zh) * | 2015-06-10 | 2018-04-27 | 广西中医药大学 | 牡荆素木糖苷的用途 |
| CN109232548B (zh) * | 2018-11-22 | 2020-10-20 | 华南农业大学 | 一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101172991A (zh) * | 2007-11-01 | 2008-05-07 | 东北林业大学 | 一种从木豆枝叶中提取纯化牡荆苷和异牡荆苷的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100549097B1 (ko) * | 2004-01-29 | 2006-02-06 | 전라남도 | 녹두 유래의 비텍신 및 이소비텍신 추출방법 및 추출물 |
-
2011
- 2011-05-18 CN CN2011101282158A patent/CN102219782B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101172991A (zh) * | 2007-11-01 | 2008-05-07 | 东北林业大学 | 一种从木豆枝叶中提取纯化牡荆苷和异牡荆苷的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Jean-Francois Butaud，等.Comparative Investigation of O- and C-Glycosylflavones in Leaves of Six Santalum insulare (Santalaceae) varieties.《Natural Product Communications》.2006,第1卷(第11期),第969-972页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102219782A (zh) | 2011-10-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104861015A (zh) | 一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法 | |
| CN102153534B (zh) | 具酪氨酸酶抑制活性的化合物及制备方法与用途 | |
| CN103316096A (zh) | 一种黑种草子总黄酮提取物及其制备方法和用途 | |
| CN102219782B (zh) | 一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法 | |
| CN102875615B (zh) | 大麻药苷a和大麻药总皂苷的提取方法及其应用 | |
| CN105949266B (zh) | 睡茄交酯类化合物及提取方法及应用 | |
| CN101724008A (zh) | 通光藤c21甾体苷转化产物及其制备方法和用途 | |
| CN101396373B (zh) | 一种华蟾素提取物及其制备方法 | |
| CN103191143B (zh) | 一种强心苷化合物的用途 | |
| CN105949272B (zh) | 魏察酸浆苦素y及提取方法及用途 | |
| CN104857245A (zh) | 紫萼玉簪花总皂苷的制备方法和应用 | |
| CN1687092A (zh) | 苍耳子总苷提取物及其制备方法 | |
| CN104523792A (zh) | 一种富含强心苷的马利筋乳汁提取物及其制备方法与应用 | |
| CN100341888C (zh) | 霞草苷i化合物在制药中的应用 | |
| CN103751269B (zh) | 冬凌草提取物在α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用 | |
| CN109761977B (zh) | 一种黄精生物碱c及其制备方法与应用 | |
| CN102093380B (zh) | 环淫羊藿素苷元及其制备方法和应用 | |
| CN106008641A (zh) | 睡茄交酯类化合物及提取方法及用途 | |
| CN108619179A (zh) | 老鹳草提取物及其医药用途 | |
| CN107082780A (zh) | 一种具有吡咯骈异喹啉结构的生物碱及其制备方法与应用 | |
| CN110483544B (zh) | 一种倍半萜内酯类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109810153B (zh) | 芳香取代葡萄糖类化合物及其药物组合物的制备方法与镇痛应用 | |
| CN111484411B (zh) | 艾叶抗炎有效成分的提取方法和应用 | |
| CN110684071B (zh) | 一种三萜类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN101967094B (zh) | 一组菊苣中的苯乙酰奎尼酸及其酯类化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20131204 Termination date: 20200518 |