CN101724008A - 通光藤c21甾体苷转化产物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种通光藤C₂₁甾体苷转化产物及其制备方法和用途，转化产物中含有通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于50％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于6％；本发明还公开了通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法及其在制备预防和/或治疗消化道肿瘤的药物中的应用。

Description

通光藤C21甾体苷转化产物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种通光藤C₂₁甾体苷转化产物及其制备方法，还涉及通光藤C₂₁甾体苷转化产物在制备预防和/或治疗消化道肿瘤的药物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是目前严重危害人类健康的疾病之一，它以细胞异常增殖和转移为特点。世界卫生组织统计资料表明，2000年全球新发恶性肿瘤病例约1000万，死亡620万，患病2200万例；预计到2020年恶性肿瘤新发病例将达到1500万，死亡1000万，患病3000万例。

通光藤系萝藦科Asclepiadaceae牛奶菜属植物通光散Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Am.的干燥藤茎，广泛分布于云南、贵州、福建、广东、广西、台湾等省。《中药大辞典》收载大白药“止血接骨。治外伤出血，接骨，疮毒”；百灵草“舒筋活络，补虚平喘”；通光散“清热解毒，止咳平喘。治肺炎，支气管炎，支气管哮喘，咽喉炎，扁桃体炎，膀胱炎，疔疮肿毒”^[2]。其中通光散曾收载于《云南省药品标准》(1974年版)和《中国药典》(1977年版)，其提取物被制成片剂、糖浆剂和注射剂主要用于治疗肺癌、食道癌、贲门癌、胃癌、肝癌、肠癌、宫颈癌和恶性淋巴瘤、白血病等多种恶性肿瘤。C₂₁甾体类化合物是通光藤的主要化学成分，迄今从通光藤中分离鉴定的C₂₁甾体苷类化合物均为3β位单糖链苷，糖链由β-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃黄花夹竹桃糖、β-D-吡喃洋地黄毒糖、β-D-吡喃夹竹桃糖、β-D-吡喃磁麻糖、6-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃阿洛糖等组成，各单糖之间均以1→4糖苷键相连。除糖链的单糖组成不同以外，苷元11α、12β和20位连有乙酰基(Ac)、丙酰基(Pro)、2-甲基丁酰基(Bu)、顺芷酰基(Tig)、苯甲酰基(Bz)、4-羟基苯乙酰基(HPA)、4-羟基苯甲酰基(HPM)、肉桂酰基(Cin)、Z-肉桂酰基(Z-Cin)、烟酰基(Nic)等酰基取代基团。

发明内容

本案发明人采用活性指标指导下的导向分离方法研究通光藤抗肿瘤作用物质基础，确定通光藤C₂₁甾体苷对人肿瘤细胞株增殖有一定的抑制作用。在此基础上，本案发明人制备了通光藤C₂₁甾体苷转化产物，比较了通光藤C₂₁甾体苷和通光藤C₂₁甾体苷转化产物对人肿瘤细胞株增殖的抑制作用，结果表明通光藤C₂₁甾体苷转化产物对人肿瘤细胞株增殖的抑制作用显著增强，因而完成了本发明。

本发明提供一种通光藤C₂₁甾体苷转化产物及其制备方法和用途。

本发明的通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于50％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于6％。

优选的，本发明的通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于70％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于8％。

本发明通光藤C₂₁甾体苷转化产物中还含有12β-O-2-甲基丁酰基-通光藤苷元A，11α-O-2-甲基丁酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B，11α-O-2-甲基丁酰基-12β-O-苯甲酰基-通光藤苷元B。

本发明提供通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法，该方法包括以下步骤：

a)通光藤粗粉用第一溶剂回流提取，滤过，提取液合并，提取液减压浓缩；

b)将步骤a)获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c)用第二溶剂洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d)用第三溶剂洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液；

e)将步骤d)获得的洗脱液，经脱色树脂柱色谱，4～6倍柱体积第三溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；

f)将步骤e)获得的洗脱物加强酸水解，用第四溶剂振摇提取，提取液用碳酸钠试液洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液减压浓缩、干燥得通光藤C₂₁甾体苷转化产物。

在以上步骤中，其中步骤a)的第一溶剂为水或50～90％乙醇，该第一溶剂的用量为通光藤粗粉重量的6～9倍，提取次数为1～4次，提取时间为1～2小时。其中步骤c)的第二溶剂为10～50％乙醇，步骤d)的第三溶剂为60～100％乙醇。其中步骤f)强酸水解的酸为盐酸、硫酸、磷酸或高氯酸，强酸水溶液体积与通光藤粗粉重量比为20∶1，浓度为1～5％，水解温度为40～100℃，水解时间为1～5小时，第四溶剂为与水不互溶的石油醚、正己烷、乙酸乙酯或正丁醇，第四溶剂体积与通光藤粗粉重量比为12∶1。

本发明提供通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法，优选的包括以下步骤：

a)通光藤粗粉加6～9倍量70～90％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇；

b)将步骤a)获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱D101色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c)用10～30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d)用80～100％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液；

e)将步骤d)获得的洗脱液，经脱色树脂柱D941色谱，4～6倍柱体积80～100％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；

f)将步骤e)获得的洗脱物加1～2％硫酸溶液水解，硫酸溶液体积与通光藤粗粉重量比为20∶1，水解温度60～80℃，水解时间3～5小时，用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯体积与通光藤粗粉重量比为12∶1，提取液用碳酸钠试液洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液减压浓缩、干燥得通光藤C₂₁甾体苷转化产物。

本发明提供通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法，优选的包括以下步骤：

a)通光藤粗粉加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇；

b)将步骤a)获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱D101色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c)用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d)用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液；

e)将步骤d)获得的洗脱液，经脱色树脂柱D941色谱，4～6倍柱体积90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；

f)将步骤e)获得的洗脱物加1～2％硫酸溶液水解，硫酸溶液体积与通光藤粗粉重量比为20∶1，水解温度60～80℃，水解时间3～5小时，用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯体积与通光藤粗粉重量比为12∶1，提取液用碳酸钠试液洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液减压浓缩、干燥得通光藤C₂₁甾体苷转化产物。

本发明的通光藤C₂₁甾体苷转化产物在制备预防和/或治疗消化道肿瘤的药物中的应用。

本发明还提供用本发明的通光藤C₂₁甾体苷转化产物以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。

本发明的含有通光藤C₂₁甾体苷转化产物的药物制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙等。

本发明提供的以通光藤C₂₁甾体苷转化产物为原料制得的药物制剂不仅包括单独使用通光藤C₂₁甾体苷转化产物的药物制剂，还包括添加通光藤C₂₁甾体苷转化产物作为活性成分的药物制剂。

本发明通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法工艺简单，操作方便，技术易掌握，能耗小，溶剂可回收循环使用，生产成本低。

本发明通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法优点为通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于50％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于6％。优选的，本发明的通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于70％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于8％。这是以前技术尚未报道的，由于含量高，从而提高了组合物疗效，满足临床用药的需要。

本发明通光藤C₂₁甾体苷转化产物对人胃癌细胞株SGC-7901半数抑制浓度IC₅₀＝97.83±1.94μg·ml^-1明显低于通光藤C₂₁甾体苷IC₅₀＝281.98±7.32μg·ml^-1；对人胃癌细胞株MGC-803半数抑制浓度IC₅₀＝109.13±3.81μg·ml^-1明显低于通光藤C₂₁甾体苷IC₅₀＝234.78±5.82μg·ml^-1；对人结肠癌细胞株SW-111C半数抑制浓度IC₅₀＝88.07±1.79μg·ml^-1明显低于通光藤C₂₁甾体苷IC₅₀＝276.22±5.85μg·ml^-1。

以下通过具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明并不受限于具体实施例。

具体实施方式

基于生物组合化学研究通光藤C₂₁甾体有效部位人肠内菌生物转化产物研究结果表明，通光藤C₂₁甾体苷类化合物在肠道内吸收极低，而易被肠道菌群代谢水解，以通光藤C₂₁甾体苷元形式入血而发挥药理作用。为应用通光藤C₂₁甾体苷转化产物制备预防和/或治疗消化道肿瘤的药物，比较通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物对人肿瘤细胞增殖的影响。

实施例1

比较通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物对人胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803增殖的影响

仪器和材料

奥地利CliniBio 128C全自动酶标仪；日本SANYO CO₂培养箱；日本OLYMPUS倒置显微镜；人胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803，吉林省肿瘤医院；四甲基偶氮唑蓝、胰蛋白酶、二甲基亚砜，美国Sigma公司；RPMI-1640，美国GIBCOBRL公司；胎牛血清，杭州四季青公司。

细胞培养

常规传代培养：人胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803接种于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中，置含有5％CO₂37℃恒温培养箱中培养，取对数生长期细胞用于实验。

细胞毒活性测定

取生长状态良好的人胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803制成细胞悬液，分别以细胞密度1.0×10⁵个/ml 100μl接种在96孔培养板中，培养24小时，加入倍比稀释成5个不同浓度受试药物20μl，另设溶剂对照组(肿瘤细胞和培养液)和空白对照组(培养液)，每组均设4个复孔。各受试药物与细胞置含有5％CO₂37℃饱和湿度恒温培养箱中培养48小时。在各孔中加入浓度为5mg·ml^-1MTT溶液20μl，继续培养4小时，吸取培养液，在各孔中加入二甲基亚砜150μl，经微量混合振荡器振荡10分钟，酶标仪于570nm波长处测定各孔吸光度(OD)，按下式计算抑制率：

抑制率＝(溶剂对照组OD值-受试药物组OD值)/(溶剂对照组OD值-空白对照组OD值)

实验结果

通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物

对人胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803增殖的影响

通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物

对人胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803增殖半数抑制浓度IC₅₀比较

实施例2

比较通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物对人结肠癌细胞株SW-111C增殖的影响

仪器和材料

奥地利CliniBio 128C全自动酶标仪；日本SANYO CO₂培养箱；日本OLYMPUS倒置显微镜；人结肠癌细胞株SW-111C，吉林省肿瘤医院；四甲基偶氮唑蓝、胰蛋白酶、二甲基亚砜，美国Sigma公司；RPMI-1640，美国GIBCOBRL公司；胎牛血清，杭州四季青公司。

细胞培养

常规传代培养：人结肠癌细胞株SW-111C接种于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中，置含有5％CO₂37℃恒温培养箱中培养，取对数生长期细胞用于实验。

细胞毒活性测定

取生长状态良好的人结肠癌细胞株SW-111C制成细胞悬液，分别以细胞密度1.0×10⁵个/ml 100μl接种在96孔培养板中，培养24小时，加入倍比稀释成5个不同浓度受试药物20μl，另设溶剂对照组(肿瘤细胞和培养液)和空白对照组(培养液)，每组均设4个复孔。各受试药物与细胞置含有5％CO₂37℃饱和湿度恒温培养箱中培养48小时。在各孔中加入浓度为5mg·ml^-1MTT溶液20μl，继续培养4小时，吸取培养液，在各孔中加入二甲基亚砜150μl，经微量混合振荡器振荡10分钟，酶标仪于570nm波长处测定各孔吸光度(OD)，按下式计算抑制率：

抑制率＝(溶剂对照组OD值-受试药物组OD值)/(溶剂对照组OD值-空白对照组OD值)

实验结果

通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物

对人结肠癌细胞株SW-111C增殖的影响

通光藤C₂₁甾体苷提取物和通光藤C₂₁甾体苷转化产物

对人结肠癌细胞株SW-111C增殖半数抑制浓度IC₅₀比较

实施例3

通光藤C₂₁甾体苷转化产物的分离

取通光藤C₂₁甾体苷转化产物3.0g，经十八烷基键合硅胶柱色谱，以甲醇-水(45∶55，60∶40，100∶0)梯度洗脱，得10个分离组分Fr.I(202.1mg)，Fr.II(84.8mg)，Fr.III(33.4mg)，Fr.IV(118.6mg)，Fr.V(349.1mg)，Fr.VI(1241.1mg)，Fr.VII(190.8mg)，Fr.VIII(458.5mg)，Fr.IX(256.7mg)，Fr.X(156.9mg)。Fr.V经制备高效液相色谱(色谱柱：SenshuPak C₆H₅-3125-N，流动相：甲醇-水＝45∶55；流速：1.5ml·min^-1；检测器：示差折光检测器RI-102得化合物I(295.4mg)；Fr.VI经制备高效液相色谱(色谱柱：Senshu PakC₆H₅-3125-N，

流动相：甲醇-水＝50∶50；流速：1.5ml·min^-1；检测器：示差折光检测器RI-102得化合物II(323.1mg)和III(388.5mg)；Fr.X经制备高效液相色谱(色谱柱：Senshu PakC₆H₅-3125-N，流动相：甲醇-水＝60∶40；流速：1.5mlmin^-1；检测器：示差折光检测器RI-102得化合物IV(43.3mg)。

化学成分的结构鉴定

化合物I：11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B

¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)δ6.77(1H，q，J＝6.7Hz，H-3’)，5.42(1H，t，J＝10.2Hz，H-11)，5.00(1H，d，J＝10.2Hz，H-12)，3.58(1H，m，H-3)，2.93(1H，d，J＝7.4Hz，H-17)，2.19(3H，s，H-21)，1.86(3H，s，H-2”)，1.77(3H，s，H-5’)，1.76(3H，d，J＝6.8Hz，H-4’)，1.11(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)；¹³C-NMR(CDCl₃，125MHz)δ210.79(C-20)，170.71(C-1”)，167.22(C-1’)，138.00(C-3’)，128.66(C-2’)，75.16(C-12)，71.39(C-14)，70.53(C-3)，68.77(C-11)，66.84(C-8)，59.85(C-17)，51.22(C-9)，45.81(C-13)，44.09(C-5)，38.85(C-10)，38.36(C-4)，37.23(C-1)，31.82(C-7)，31.40(C-2)，30.10(C-21)，26.66(C-6)，26.61(C-15)，25.00(C-16)，20.51(C-2”)，16.64(C-18)，14.45(C-5’)，12.71(C-19)，11.94(C-4’)；ESI-MSm/z511[M+Na]⁺。

化合物II：12β-O-2-甲基丁酰基-通光藤苷元A

¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)δ5.28(1H，d，J＝3.9Hz，H-12)，4.30(1H，dd，J＝3.9，2.0Hz，H-11)，3.63(1H，m，H-3)，1.98(1H，d，J＝6.2Hz，H-17)，1.21(3H，d，J＝5.0Hz，H-5’)，1.20(3H，s，H-21)，1.11(3H，s，H-19)，1.07(3H，s，H-18)，0.91(3H，t，J＝7.4Hz，H-4’)；¹³C-NMR(CDCl₃，125MHz)δ176.31(C-1’)，99.69(C-20)，80.94(C-14)，77.85(C-8)，71.65(C-12)，71.04(C-3)，68.58(C-11)，57.37(C-9)，55.19(C-17)，45.91(C-5)，44.37(C-13)，41.60(C-2’)，38.24(C-1)，37.05(C-4)，35.20(C-10)，34.38(C-15)，34.06(C-7)，30.47(C-2)，27.54(C-6)，26.32(C-3’)，24.22(C-21)，22.95(C-16)，17.70(C-5’)，16.17(C-18)，15.81(C-19)，11.96(C-4’)；ESI-MSm/z471[M+Na]⁺。

化合物III：11α-O-2-甲基丁酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B

¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)δ5.37(1H，t，J＝10.1Hz，H-11)，4.99(1H，d，J＝10.2Hz，H-12)，3.59(1H，m，H-3)，2.93(1H，d，J＝7.5Hz，H-17)，2.20(3H，s，H-21)，1.97(3H，s，H-2”)，1.08(3H，s，H-18)，1.06(3H，d，J＝6.6Hz，H-5’)，1.06(3H，s，H-19)，0.90(3H，t，J＝7.5Hz，H-4’)；¹³C-NMR(CDCl₃，125MHz)δ210.59(C-20)，175.58(C-1’)，170.71(C-1”)，75.19(C-12)，71.33(C-14)，70.42(C-3)，68.52(C-11)，66.83(C-8)，60.19(C-17)，51.09(C-9)，45.83(C-13)，44.06(C-5)，41.34(C-2’)，38.93(C-10)，38.35(C-4)，37.57(C-1)，31.76(C-7)，31.14(C-2)，29.74(C-21)，26.63(C-6)，26.48(C-15)，26.18(C-3’)，24.90(C-16)，20.86(C-2”)，16.79(C-18)，15.33(C-5’)，12.76(C-19)，11.77(C-4’)；ESI-MSm/z513[M+Na]⁺。

化合物IV：11α-O-2-甲基丁酰基-12β-O-苯甲酰基-通光藤苷元B

¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.96(2H，dd，J＝8.5，1.3Hz，H-3”，7”)，7.55(1H，t，J＝7.4Hz，H-5”)，7.42(2H，t，J＝7.7Hz，H-4”，6”)，5.55(1H，t，J＝10.1Hz，H-11)，5.25(1H，d，J＝10.2Hz，H-12)，3.61(1H，m，H-3)，2.99(1H，d，J＝7.5Hz，H-17)，2.27(3H，s，H-21)，1.17(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H-19)，0.86(3H，d，J＝7.0Hz，H-5’)，0.56(3H，t，J＝7.5Hz，H-4’)；¹³C-NMR(CDCl₃，125MHz)δ210.80(C-20)，175.72(C-1’)，166.08(C-1”)，133.29(C-5”)，129.86(C-3”，7”)，129.48(C-2”)，128.49(C-4”，6”)，75.47(C-12)，71.46(C-14)，70.47(C-3)，68.56(C-11)，66.93(C-8)，60.07(C-17)，51.14(C-9)，46.15(C-13)，44.10(C-5)，41.23(C-2’)，38.99(C-10)，38.37(C-4)，37.67(C-1)，31.82(C-7)，31.19(C-2)，29.94(C-21)，26.69(C-6)，26.60(C-15)，25.77(C-3’)，25.00(C-16)，16.80(C-18)，15.07(C-5’)，12.84(C-19)，11.43(C-4’)；ESI-MSm/z575[M+Na]⁺。

实施例4

比色法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元含量的方法

溶液的制备

对照品溶液的制备

精密称取11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B对照品适量，加甲醇制成每1ml含127.0μg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

取通光藤C₂₁甾体苷转化产物0.3g，精密称定，加甲醇溶解，转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

含量测定方法

精密吸取供试品溶液100μl，置具塞试管中，挥干溶剂，精密加入新鲜配制的浓硫酸-甲醇(6∶1)5ml，摇匀，置60℃水浴中加热60分钟，取出，立即置冰水中放置15分钟。以浓硫酸-甲醇(6∶1)为空白，在420nm的波长处测定吸收度，标准曲线法以11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B计算总C₂₁甾体苷元的含量。

实施例5

HPLC法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B含量的方法

色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(45∶55)为流动相；检测波长为220nm。理论塔板数按11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B峰计算，不低于3000。

溶液的制备

对照品溶液的制备

精密称取11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B对照品适量，加甲醇制成127.0μg.ml^-1的溶液。

供试品溶液的制备

取通光藤C₂₁甾体苷转化产物0.3g，精密称定，加甲醇溶解，转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

样品测定方法

精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μl，按色谱条件进样测定，外标一点法计算通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B的含量。

实施例6

取通光藤粗粉50kg，加9倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD100大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，70％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用4倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％磷酸溶液10000ml，置60℃水浴中加热回流5小时，取出，立即冷却，用正丁醇振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收正丁醇得通光藤C₂₁甾体苷组合物1345g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为52％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为6.15％。

实施例7

取通光藤粗粉50kg，加6倍量50％乙醇回流提取4次，每次1小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD200大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，80％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用5倍量80％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加3％磷酸溶液10000ml，置60℃水浴中加热回流3小时，取出，立即冷却，用正丁醇振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收正丁醇得通光藤C₂₁甾体苷组合物1590g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为58％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为6.58％。

实施例8

取通光藤粗粉50kg，加9倍量70％乙醇回流提取1次，提取时间1小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD100大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，90％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量90％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置40℃水浴中加热回流5小时，取出，立即冷却，用石油醚振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收石油醚得通光藤C₂₁甾体苷组合物1233g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为62％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为6.86％。

实施例9

取通光藤粗粉50kg，加6倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于AB8大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用95％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，95％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量95％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加5％硫酸溶液10000ml，置40℃水浴中加热回流1小时，取出，立即冷却，用石油醚振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收石油醚得通光藤C₂₁甾体苷组合物1269g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为65％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为7.03％。

实施例10

取通光藤粗粉50kg，加9倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D201大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用60％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，60％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量60％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加5％高氯酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流4小时，取出，立即冷却，用正己烷振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收正己烷得通光藤C₂₁甾体苷组合物1186g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为69％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为7.53％。

实施例11

取通光藤粗粉50kg，加9倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，70％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流2小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1244g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为80％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.72％。

实施例12

取通光藤粗粉50kg，加9倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，80％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量80％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加2％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流5小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1315g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为82％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.88％。

实施例13

取通光藤粗粉50kg，加9倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，依次用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，90％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用5倍量90％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加4％盐酸溶液10000ml，置60℃水浴中加热回流3小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1321g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为85％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.98％。

实施例14

取通光藤粗粉50kg，加9倍量90％乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D201大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用95％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，95％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用5倍量95％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加2％盐酸溶液10000ml，置60℃水浴中加热回流3小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1580g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为78％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.35％。

实施例15

取通光藤粗粉50kg，加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，80％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量80％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加2％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流4小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1474g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为83％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.85％。

实施例16

取通光藤粗粉50kg，加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，90％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用4倍量90％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加2％硫酸溶液10000ml，置60℃水浴中加热回流4小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1474g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为88％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为9.45％。

实施例17

取通光藤粗粉50kg，加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，90％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用5倍量90％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置60℃水浴中加热回流5小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1520g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为87％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为9.63％。

实施例18

取通光藤粗粉50kg，加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，90％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量90％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流3小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1497g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为96％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为9.12％。

实施例19

取通光藤粗粉50kg，加6倍量水回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用60％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，60％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用4倍量60％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加2％硫酸溶液10000ml，置100℃水浴中加热回流1小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1274g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为81％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为7.03％。

实施例20

取通光藤粗粉50kg，加9倍量水回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，80％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用5倍量80％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流3小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1574g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为88％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.08％。

实施例21

取通光藤粗粉50kg，加6倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，80％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量80％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流3小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1594g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为87％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为9.35％。

实施例22

取通光藤粗粉50kg，加9倍量90％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，90％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用6倍量90％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流4小时，取出，立即冷却，用正丁醇振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收正丁醇得通光藤C₂₁甾体苷组合物1774g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为86％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为8.40％。

实施例23

取通光藤粗粉50kg，加9倍量90％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用95％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，95％乙醇洗脱液加于D941脱色树脂柱上，用4倍量95％乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇得洗脱物。取洗脱物加1％硫酸溶液10000ml，置80℃水浴中加热回流4小时，取出，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸钠试液24000ml洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水24000ml洗涤，弃去水洗液，提取液用无水硫酸钠脱水，回收乙酸乙酯得通光藤C₂₁甾体苷组合物1450g。采用实施例4的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量为88％，采用实施例5的方法测定通光藤C₂₁甾体苷转化产物中11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量为9.43％。

实施例24

通光藤C₂₁甾体苷转化产物用药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙。上述制备工艺均为本领域常规操作，在此不加赘述。

实施例25

通光藤C₂₁甾体苷转化产物为原料制得的药物制剂不仅包括单独使用通光藤C₂₁甾体苷转化产物的药物制剂，还包括添加通光藤C₂₁甾体苷转化产物作为活性成分的药物制剂。

Claims (10)

1.一种通光藤C₂₁甾体苷转化产物，其特征在于，转化产物中含有通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于50％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于6％。

2.根据权利要求1所述的通光藤C₂₁甾体苷转化产物，其特征在于，转化产物中含有通光藤C₂₁甾体苷元重量百分含量大于等于70％，其中含有11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于8％。

3.根据权利要求1～2所述的通光藤C₂₁甾体苷转化产物，其特征在于，转化产物中还含有12β-O-2-甲基丁酰基-通光藤苷元A，11α-O-2-甲基丁酰基-12β-O-乙酰基-通光藤苷元B，11α-O-2-甲基丁酰基-12β-O-苯甲酰基-通光藤苷元B。

4.权利要求1或2所述的通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)通光藤粗粉用第一溶剂回流提取，滤过，提取液合并，提取液减压浓缩；

b)将步骤a)获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c)用第二溶剂洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d)用第三溶剂洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液；

e)将步骤d)获得的洗脱液，经脱色树脂柱色谱，4～6倍柱体积第三溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；

f)将步骤e)获得的洗脱物加强酸水解，用第四溶剂振摇提取，提取液用碳酸钠试液洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液减压浓缩、干燥得通光藤C₂₁甾体苷转化产物。

5.根据权利要求4的制备方法，其中步骤a)的第一溶剂为水或50～90％乙醇，该第一溶剂的用量为通光藤粗粉重量的6～9倍，提取次数为1～4次，提取时间为1～2小时。

6.根据权利要求4的制备方法，其中步骤c)的第二溶剂为10～50％乙醇，步骤d)的第三溶剂为60～100％乙醇。

7.根据权利要求4的制备方法，其中步骤f)强酸水解的酸为盐酸、硫酸、磷酸或高氯酸，强酸水溶液体积与通光藤粗粉重量比为20∶1，浓度为1～5％，水解温度为40～100℃，水解时间为1～5小时，第四溶剂为与水不互溶的石油醚、正己烷、乙酸乙酯或正丁醇，第四溶剂体积与通光藤粗粉重量比为12∶1。

8.根据权利要求4所述的通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)通光藤粗粉加6～9倍量70～90％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇；

b)将步骤a)获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱D101色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c)用10～30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d)用80～100％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液；

e)将步骤d)获得的洗脱液，经脱色树脂柱D941色谱，4～6倍柱体积80～100％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；

f)将步骤e)获得的洗脱物加1～2％硫酸溶液水解，硫酸溶液体积与通光藤粗粉重量比为20∶1，水解温度60～80℃，水解时间3～5小时，用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯体积与通光藤粗粉重量比为12∶1，提取液用碳酸钠试液洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液减压浓缩、干燥得通光藤C₂₁甾体苷转化产物。

9.根据权利要求8所述的通光藤C₂₁甾体苷转化产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)通光藤粗粉加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收乙醇；

b)将步骤a)获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱D101色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c)用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d)用90％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液；

e)将步骤d)获得的洗脱液，经脱色树脂柱D941色谱，4～6倍柱体积90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；

f)将步骤e)获得的洗脱物加1～2％硫酸溶液水解，硫酸溶液体积与通光藤粗粉重量比为20∶1，水解温度60～80℃，水解时间3～5小时，用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯体积与通光藤粗粉重量比为12∶1，提取液用碳酸钠试液洗涤，弃去碳酸钠试液洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液减压浓缩、干燥得通光藤C₂₁甾体苷转化产物。

10.权利要求1或2所述的通光藤C₂₁甾体苷转化产物在制备预防和/或治疗消化道肿瘤的药物中的应用。