CN102302685A

CN102302685A - 一种淡竹叶提取物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102302685A
Application number: CN201110124349A
Authority: CN
Inventors: 李药兰; 叶文才; 王英; 王国才; 张晓琦; 范春林
Original assignee: Jinan University
Current assignee: Jinan University
Priority date: 2011-05-13
Filing date: 2011-05-13
Publication date: 2012-01-04
Anticipated expiration: 2031-05-13
Also published as: CN102302685B

Abstract

本发明公开了一种淡竹叶提取物及其制备方法和用途。该淡竹叶提取物含有异牡荆素、日本当药黄素、当药黄素、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖-6-C-α-L-阿拉伯糖苷、荭草苷和牡荆素。该淡竹叶提取物的制备方法是将淡竹叶的干燥药材用乙醇水溶液提取得到粗提物，再经过大孔吸附树脂柱纯化得到。该提取物可用于制备抗呼吸道合胞病毒、抗副流感3型病毒或抗甲型流感病毒的药物或保健品。

Description

一种淡竹叶提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于中药领域，特别涉及一种淡竹叶提取物及其制备方法和用途。

背景技术

中药淡竹叶为禾本科淡竹叶属植物淡竹叶(Lophatherum gracile Brongn.)的干燥茎叶，别名山鸡米，碎骨子，长竹叶，竹叶麦冬。分布于东亚及东南亚地区，在我国主产于长江以南地区。淡竹叶药用始载于《本草纲目》，1977年以来的历版《中华人民共和国药典》对淡竹叶均有收载。淡竹叶性寒，味甘、淡，具清热、除烦、利尿的功效，民间多用于热病心烦、口渴、口舌生疮、牙龈肿痛、尿路炎症、小便热痛等症的治疗(国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草，1999，366-369)。现代药理学研究表明，淡竹叶具解热、利尿、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抑制丙型肝炎病毒等作用(江苏新医学院.中药大辞典，1997，2253-2254)；已从淡竹叶中分离得到的化学成分包括黄酮及其苷类、三萜类、酚酸类等。但是，但却没有淡竹叶抗呼吸道病毒作用及其有效部位和有效成分的研究报道。

呼吸道病毒感染是严重危害人类健康的传染性疾病之一，其中流感病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒是呼吸道病毒感染的主要病原体。由于病毒是细胞内寄生的微生物，它的复制与宿主细胞的许多生化过程密切相关，因此，寻找能选择性地抑制病毒又不影响宿主细胞功能的抗病毒药物有一定困难；此外，病毒抗原的易变异性和抗病毒药物的耐药性等因素也给抗病毒药物的研究和开发造成困难。目前FDA批准用于临床的抗病毒药比抗菌药少得多，而且还存在毒副作用和耐药性等问题。因此，亟需寻找和开发安全、高效的新型抗病毒药物。

在国家知识产权局相关检索和中国期刊网、Scifinder Scholar的检索中，未发现淡竹叶中黄酮碳苷类成分在抗呼吸道病毒方面用途的专利和文献。

发明内容

为了解决上述现有技术存在的缺点和不足，本发明的首要目的在于提供一种淡竹叶提取物，其主要成分是黄酮碳苷类化合物。

本发明的另一目的在于提供一种上述淡竹叶提取物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述淡竹叶提取物在制备抗呼吸道病毒的药物或保健品中的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种淡竹叶提取物，该提取物含有异牡荆素、日本当药黄素、当药黄素、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖-6-C-α-L-阿拉伯糖苷、荭草苷和牡荆素。

所述木犀草素7-O-β-D-葡萄糖-6-C-α-L-阿拉伯糖苷为新化合物，具有如下式所示的结构：

上述淡竹叶提取物的制备方法，包括以下操作步骤：将淡竹叶的干燥药材粉碎，用乙醇水溶液提取得到粗提物，再经过大孔吸附树脂柱纯化得到淡竹叶提取物；

所述乙醇水溶液提取是指将粉碎的淡竹叶用质量百分比浓度为60～95％的乙醇水溶液渗漉提取或回流提取，过滤提取液，滤液合并后经减压浓缩、干燥后得到粗提物；

所述大孔吸附树脂柱纯化，是将上述所得粗提物过大孔树脂柱，先用质量百分比浓度为20％乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用质量百分比浓度为40～70％乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥得到淡竹叶提取物。

所述渗漉提取的时间为7～10天；所述回流提取的次数为1～3次，每次1～3小时。

所述淡竹叶是禾本科淡竹叶属植物。

以淡竹叶提取物的干品重量计算，淡竹叶提取物中总黄酮质量百分含量＞50％。

上述淡竹叶提取物在制备抗呼吸道病毒的药物或保健品中的用途，所述呼吸道病毒是呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感3型病毒(PIV 3)或甲型流感病毒(FluA，H1N1)。

所述抗呼吸道病毒的药物含有治疗有效量的淡竹叶提取物和药学上可接受的载体。

所述药物制备成片剂、口服液或胶囊剂。

本发明相对现有技术具有如下的优点及有益效果：(1)首次从民间应用广泛的中药淡竹叶中，提取并纯化得到具有抗呼吸道病毒作用的淡竹叶提取物，抗病毒实验表明：该提取物具有很好的抗呼吸道病毒活性，而且细胞毒性小。(2)明确了该淡竹叶提取物主要由黄酮碳苷类化合物组成。(3)本发明不但为地胆草的民间应用提供了一定的科学依据，而且为开发安全、高效的新型抗呼吸道病毒药物提供了新资源。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

将干燥的淡竹叶药材(购自广东东莞市药材市场，由暨南大学中药及天然药物研究所周光雄教授鉴定)粉碎，用质量百分比浓度为95％的乙醇水溶液渗漉提取10天，过滤提取液，滤液用旋转蒸发仪浓缩成浸膏，在真空干燥箱中干燥成褐色粉末，为淡竹叶粗提物；以粗提物干品重量计算含有总黄酮5～15％；

称取大孔吸附树脂(D101)5kg，加蒸馏水10L，搅拌均匀，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h；待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用乙醇湿法装柱；接着用乙醇清洗柱子至流出液与水(1∶5)混合不呈浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道；用5％HCl溶液通过树脂柱，浸泡2-4h后，再用蒸馏水洗至中性；然后用2％NaOH通过树脂柱，浸泡2-4h，再用蒸馏水洗至中性，备用。

称取淡竹叶粗提物干品200g，溶于200mL质量百分比浓度为95％乙醇中，超声波脱气后，将样品加入上述的大孔树脂柱中，先用20L质量百分比浓度为20％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用50L质量百分比浓度为40％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集40％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到淡竹叶提取物；以提取物干品重量计算，淡竹叶总黄酮含量＞50％。

实施例2：

将干燥的淡竹叶药材粉碎，用质量百分比浓度为60％的乙醇水溶液回流提取3次，每次1小时，过滤提取液，合并滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩成浸膏，在真空干燥箱中干燥成褐色粉末，为淡竹叶粗提物；以粗提物干品重量计算含有总黄酮5～15％；

大孔吸附树脂的处理方法与实施例1一致。称取淡竹叶粗提物干品200g，溶于200mL质量百分比浓度为95％乙醇中，超声波脱气后，将样品加入处理好的大孔树脂柱中，先用20L质量百分比浓度为20％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用50L质量百分比浓度为70％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集70％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到淡竹叶提取物；以提取物干品重量计算，淡竹叶总黄酮含量＞50％。

实施例3：淡竹叶提取物胶囊的制备

称取50g实施例1所得的淡竹叶提取物，加药用淀粉10g，混合均匀，用60mL水或质量百分比浓度为95％的乙醇制粒，过12目筛挤压制湿颗粒，在60℃下真空干燥，用20目筛整粒，同时加入5g微粉硅胶，混合均匀，颗粒填装入胶囊，得到淡竹叶提取物胶囊。

实施例4：淡竹叶提取物片剂的制备

称取50g实施例2所得的淡竹叶提取物，加微晶纤维素45g和硬脂酸5g，混合均匀，用压片机压成Φ6mm的片剂，得到淡竹叶提取物片剂。

实施例5：淡竹叶提取物的总黄酮含量测定：

淡竹叶提取物中总黄酮含量采用比色法测定，用异荭草苷(自制，纯度＞95％)做标准样品。

标准曲线的制备：精密称取在干燥器中干燥至恒重的对照品异荭草苷，用甲醇配成0.2mg/mL的对照品溶液，0.15，0.25，0.35，0.45，0.55mL，分别置于10mL容量瓶中，加70％乙醇定容。以70％乙醇为空白对照，在350nm处测定吸光度，以异荭草苷的毫克数为纵坐标，吸光度为横坐标，求回归方程。

含量测定：准确称取实施例1和2所得的淡竹叶提取物干品，溶于45mL70％乙醇中密闭放置10小时、水浴回流2小时，放冷，过滤，滤液置于50mL的容量瓶中，加70％乙醇至刻度，即得供试液。按对照品的测定方法测定吸光度，根据标准曲线，计算淡竹叶提取物中总黄酮的百分含量。

测定结果显示，淡竹叶提取物中，以异荭草苷计，总黄酮含量＞50％。

实施例6：淡竹叶提取物中黄酮碳苷的提取和结构测定

将实施例1所得淡竹叶提取物经硅胶柱层析(氯仿-甲醇梯度洗脱，100∶0→0∶100)，再经硅胶、Sephadex LH-20柱层析分离纯化，得化合物异牡荆素(Dzy-1)、日本当药黄素(Dzy-2)、当药黄素(Dzy-3)、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖基-6-C-α-L-阿拉伯糖苷(Dzy-4)、荭草苷(Dzy-5)和牡荆素(Dzy-6)。它们的化学结构采用光谱分析结合化学反应的方法鉴定，其中木犀草素7-O-β-D-葡萄糖基-6-C-α-L-阿拉伯糖苷(Dzy-4)为新化合物，它们的结构如下所示：

化合物Dzy-1的光谱数据和理化性质如下：

黄色粉末(甲醇)，mp 223～224℃，硫酸-香草醛反应显黄色，HCl-Mg反应呈阳性。ESI-MS m/z：431[M-H]^-。UV(MeOH)λ_max：270，336nm；IR(KBr) v_max：3376，2933，1653(C＝O)，1609，1444(苯环)，1024，837cm^-1；¹H NMR(400MHz，C₅D₅N)δ：6.72(1H，s，H-3)，6.45(1H，s，H-8)，7.90(2H，d，J＝8.7Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J＝8.7Hz，H-3′，5′)，4.60(1H，d，J＝9.7Hz，H-1″)；¹³CNMR(100MHz，C₅D₅N)δ：164.6(C-2)，102.6(C-3)，181.7(C-4)，160.6(C-5)，108.9(C-6)，163.3(C-7)，93.8(C-8)，156.3(C-9)，102.8(C-10)，121.0(C-1′)，128.3(C-2′，6′)，116.3(C-3′，5′)，161.3(C-4′)，78.9(C-1″)，73.2(C-2″)，70.5(C-3″)，70.2(C-4″)，81.4(C-5″)，61.4(C-6″)。

化合物Dzy-2的光谱数据和理化性质如下：

黄色粉末(甲醇)，mp 264～266℃，硫酸-香草醛反应显黄色，HCl-Mg反应呈阳性。ESI-MS m/z：461[M-H]^-，485[M+Na]⁺。UV(MeOH)λ_max：244，271，349nm；IR(KBr)v_max：3415，2919，1652(C＝O)，1609，1492，1445(苯环)，1022，843cm^-1；¹H NMR(400MHz，C₅D₅N，357K)δ：6.74(1H，s，H-3)，6.64(1H，s，H-8)，7.44(1H，d，J＝2.2Hz，H-2′)，6.93(1H，d，J＝8.4Hz，H-5′)，7.43(1H，dd，J＝8.4，2.2Hz，H-6′)，3.89(3H，s，7-OCH₃)，4.67(1H，d，J＝9.8Hz，H-1″)；¹³C NMR(100MHz，C₅D₅N，357K)δ：164.1(C-2)，103.4(C-3)，182.0(C-4)，160.2(C-5)，110.2(C-6)，164.9(C-7)，90.8(C-8)，157.0(C-9)，104.7(C-10)，121.8(C-1′)，113.9(C-2′)，145.9(C-3′)，149.9(C-4′)，116.2(C-5′)，119.1(C-6′)，56.5(7-OCH₃)，79.4(C-1″)，73.0(C-2″)，71.3(C-3″)，70.4(C-4″)，81.4(C-5″)，62.1(C-6″)。

化合物Dzy-3的光谱数据和理化性质如下：

黄色粉末(甲醇)，mp 272～274℃，硫酸-香草醛反应显黄色，HCl-Mg反应呈阳性。ESI-MS m/z：445[M-H]^-。UV(MeOH)λ_max：224，271，342nm；IR(KBr)v_max：3421，1653(C＝O)，1616，1541，1488(苯环)，1076，837cm^-1；¹HNMR(400MHz，C₅D₅N，357K)δ：6.78(1H，s，H-3)，6.73(1H，s，H-8)，7.92(2H， d，J＝8.8Hz，H-2′，6′)，6.95(2H，d，J＝8.8Hz，H-3′，5′)，3.91(3H，s，7-OCH₃)，4.66(1H，d，J＝9.8Hz，H-1″)；¹³C NMR(100MHz，C₅D₅N，357K)δ：163.6(C-2)，102.9(C-3)，181.6(C-4)，160.0(C-5)，109.7(C-6)，164.5(C-7)，90.4(C-8)，156.5(C-9)，104.2(C-10)，120.9(C-1′)，128.0(C-2′，6′)，115.7(C-3′，5′)，160.9(C-4′)，56.0(7-OCH₃)，78.9(C-1″)，72.5(C-2″)，70.8(C-3″)，69.9(C-4″)，80.9(C-5″)，61.6(C-6″)。

化合物Dzy-4的光谱数据和理化性质如下：

黄色结晶(甲醇)，mp＞300℃，硫酸-香草醛反应显黄色，HCl-Mg反应和Molish反应均呈阳性。

ESI-MS m/z：579[M-H]^-。UV(MeOH)λ_max：227，271，350nm；IR(KBr)v_max：3388，1650(C＝O)，1570，1486(苯环)，1075，635cm^-1；¹H NMR(400MHz，C₅D₅N)δ：6.78(1H，s，H-3)，6.93(1H，s，H-8)，7.42(1H，d，J＝2.2Hz，H-2′)，6.90(1H，d，J＝8.3Hz，H-5′)，7.46(1H，d，J＝8.3，2.2Hz，H-2′)，4.53(1H，d，J＝9.4Hz，H-1″)，4.83(1H，d，J＝6.5Hz，H-1″′)；¹³C NMR(100MHz，C₅D₅N)δ：164.4(C-2)，103.2(C-3)，182.1(C-4)，159.4(C-5)，111.1(C-6)，163.0(C-7)，94.6(C-8)，156.4(C-9)，105.1(C-10)，121.3(C-1′)，113.5(C-2′)，145.8(C-3′)，150.0(C-4′)，116.0(C-5′)，119.2(C-6′)，73.3(C-1″)，67.9(C-2″)，74.9(C-3″)，69.0(C-4″)，70.3(C-5″)，102.2(C-1″′)，73.4(C-2″′)，77.3(C-3″′)，69.7(C-4″′)，75.1(C-5″′)，60.7(C-6″′)。

化合物Dzy-5的光谱数据和理化性质如下：

黄色粉末(甲醇)，mp＞300℃，硫酸-香草醛反应显黄色，HCl-Mg反应呈阳性。ESI-MS m/z：447[M-H]^-。UV(MeOH)λ_max：225，270，348nm；IR(KBr)v_max：3384，1656(C＝O)，1571，1508(苯环)，1045，848，580cm^-1；¹H NMR(400MHz，C₅D₅N)δ：6.64(1H，s，H-3)，6.27(1H，s，H-6)，7.39(1H，d，J＝2.2Hz，H-2′)，6.89(1H，d，J＝8.4Hz，H-5′)，7.42(1H，dd，J＝8.4，2.2Hz，H-5′)，4.68 (1H，d，J＝9.8Hz，H-1″)；¹³C NMR(100MHz，C₅D₅N)δ：164.0(C-2)，102.4(C-3)，182.0(C-4)，160.4(C-5)，98.1(C-6)，162.6(C-7)，104.5(C-8)，155.9(C-9)，103.9(C-10)，121.9(C-1′)，114.0(C-2′)，145.8(C-3′)，149.6(C-4′)，115.6(C-5′)，119.4(C-6′)，78.8(C-1″)，73.4(C-2″)，70.8(C-3″)，70.7(C-4″)，81.9(C-5″)，61.6(C-6″)。

化合物Dzy-6的光谱数据和理化性质如下：

黄色粉末(甲醇)，mp 262～264℃，硫酸-香草醛反应显黄色，HCl-Mg反应呈阳性。ESI-MS m/z：431[M-H]^-。UV(MeOH)λ_max：265，335nm；IR(KBr)v_max：3380，3260，1656(C＝O)，1571，1508(苯环)，1042，832cm^-1；¹H NMR(400MHz，C₅D₅N)δ：6.80(1H，s，H-3)，6.28(1H，s，H-6)，8.03(2H，d，J＝8.6Hz，H-2′，6′)，6.90(2H，d，J＝8.6Hz，H-3′，5′)，4.70(1H，d，J＝9.6Hz，H-1″)；¹³CNMR(100MHz，C₅D₅N)δ：163.9(C-2)，102.4(C-3)，182.0(C-4)，160.4(C-5)，98.3(C-6)，163.0(C-7)，103.9(C-8)，156.0(C-9)，104.6(C-10)，121.6(C-1′)，129.0(C-2′，6′)，115.9(C-3′，5′)，161.2(C-4′)，78.7(C-1″)，73.4(C-2″)，70.8(C-3″)，70.6(C-4″)，81.8(C-5″)，61.3(C-6″)。

新化合物木犀草素7-O-β-D-葡萄糖基-6-C-α-L-阿拉伯糖苷(Dzy-4)的结构鉴定如下：

黄色粉末，mp＞300℃，

香草醛-浓硫酸反应显黄色，HCl-Mg反应和Molish反应均呈阳性，原位薄层酸水解检出含有葡萄糖。UV光谱显示在227，271，350nm处有最大吸收；IR谱提示含有羟基(3388cm^-1)、α，β-不饱和羰基(1650cm^-1)和芳环(1601，1486cm^-1)，以上信息提示Dzy-4可能为黄酮苷类化合物。HR-ESI-MS m/z 579.1353[M-H]^-(calcd.for[M-H]^-：579.1355)，推断该化合物的分子式为C₂₆H₂₇O₁₅。

Dzy-4的¹H NMR谱在低场区显示出6个氢信号，其中δ_H 13.54(1H，br s) 处为黄酮类化合物5-OH的特征信号；δ_H 7.46(1H，dd，J＝8.3，2.2Hz，H-6′)，7.42(1H，d，J＝2.2Hz，H-2′)和6.90(1H，d，J＝8.3Hz，H-5′)处为一组ABX偶合系统的芳香氢信号，提示该化合物中含有一个1，3，4-三取代苯环的结构片段；δ_H 6.92(1H，s)和6.78(1H，s)处信号可分别归属为黄酮类化合物母核上H-8和H-3的信号，以上信息提示Dzy-7为5，6，7，3′，4′-五取代黄酮类化合物。

Dzy-4的¹³C NMR谱共显示出26个碳信号，结合DEPT 135谱可知其中包括2个亚甲基碳信号、14个次甲基碳信号及10个季碳信号。其中，15个信号为一组典型的黄酮类化合物母核的碳信号，分别为：9个色原酮片段碳信号[δ_C 182.1(C-4)，164.4(C-2)，163.0(C-7)，159.4(C-5)，156.4(C-9)，111.1(C-6)，105.1(C-10)，103.2(C-3)和94.6(C-8)]和6个B环的碳信号[δ_C 150.0(C-4′)，145.8(C-3′)，121.3(C-1′)，119.2(C-6′)，116.0(C-5′)和113.5(C-2′)]。

Dzy-4以上¹H和¹³C NMR数据与异荭草苷(木犀草素6-C-β-D-葡萄糖苷)母核的数据极其相似，因此推测Dzy-4的母核为5，7，3′，4′-四羟基黄酮，即具有木犀草素母核，且其C-6(δ_C111.1)位连有以碳苷方式取代的糖。此外，¹HNMR谱中在δ_H 4.83(1H，d，J＝6.5Hz，H-1″′)和4.53(1H，d，J＝9.4Hz，H-1″)处出现了两个糖的端基氢信号，结合在¹³C NMR谱中δ_C 102.2～60.8处的两组糖的碳信号，均提示该化合物为木犀草素的双糖苷。

此外，HSQC谱显示，δ_H 4.83(1H，d，J＝6.5Hz，H-1″′)和4.53(1H，d，J＝9.4Hz，H-1″)处的两个糖的端基氢信号分别与δ_C 102.2(C-1″′)和73.3(C-1″)处的两个碳信号相关，故可推测该化合物连有一个氧苷糖和一个碳苷糖。由于该化合物原位薄层酸水解检出葡萄糖，且考虑到自然界中的葡萄糖多以D构型存在，结合氢谱中端基氢偶合常数值，可推测该化合物中的氧苷糖为β-D-葡萄糖。

在TOCSY谱中可观察到，δ_H 4.83(1H，d，J＝6.5Hz，H-1″′)、3.44(m，H-2″′)、3.50(m，H-3″′)、3.22(m，H-4″′)、3.37(m，H-5″′)、3.53(m，H-6″′a)和3.81(m，H-6″′b)处于同一个质子偶合体系，可进一步归属为一组葡萄糖上的氢信号；其余的糖区氢信号δ_H 4.53(d，H-1″)、4.38(t，H-2″)、3.38(H-3″)、3.75(H-4″)、3.72(m，H-5″a)和3.50(m，H-5″b)也处于同一个质子偶合体系中，将归属于该组糖的氢碳信号与文献对比，发现与α-L-阿拉伯糖黄酮碳苷结构中的阿拉伯糖的数据一致，故可确定Dzy-4中C-6位的碳苷糖为α-L-阿拉伯糖。

在HMBC谱中，阿拉伯糖的端基质子信号δ_H 4.53(H-1″)与δ_C 111.1(C-6)、159.4(C-5)和163.0(C-7)有远程相关。同时，在ROESY谱中可以观察到葡萄糖的端基质子δ_H4.83(H-1″′)与黄酮苷元δ_H 6.92(H-8)有NOE相关峰。根据以上信息，可进一步确定α-L-阿拉伯糖连于黄酮苷元的C-6上成碳苷，而β-D-葡萄糖连于黄酮苷元C-7位的酚羟基上成氧苷。

综上所述，鉴定化合物Dzy-4的结构为木犀草素7-O-β-D-葡萄糖基-6-C-α-L-阿拉伯糖苷(luteolin 7-O-β-D-glucopyranosyl-6-C-α-L-arabinopyranoside)，为一新化合物。

实施例7：淡竹叶提取物抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性测定

细胞、病毒和实验材料：选用呼吸道合胞病毒(RSV)，宿主细胞为喉癌细胞(Hep-2)；选用副流感3型病毒(PIV 3)、宿主细胞为Hep-2和甲型流感病毒(FluA，H3N2)，宿主细胞为狗肾传代细胞(MDCK)。

阳性对照药为利巴韦林；细胞生长在质量百分比浓度为10％的小牛血清(FBS)的MEM培养基中；维持液为1％FBS的MEM培养基。

样品溶液的配制：将实施例1和2所得淡竹叶提取物和病毒唑用维持液配制成500μg/mL和100μg/mL的样品溶液。

用四唑盐(MTT)比色法测定化合物的细胞毒性：将Hep-2细胞或MDCK细胞培养在96孔培养板中，等单层细胞长好后，加入用维持液稀释好的样品(浓度为500～12.5μg/mL)，在37℃，5％CO₂培养箱中培养3天。加入10μlMTT溶液(5mg/mL，用缓冲溶液配置)，继续培养4小时。吸出样品溶液，加入二甲亚砜，室温下，将96孔板置于微空孔板振荡器中振荡10分钟。用酶标仪测定各孔的OD值，测量波长为570nm，参比波长为630nm，计算样品对细胞的半数致死毒性浓度(CC₅₀)。每组设4个平衡孔，每组实验重复3次。计算结果，画出曲线，求出半数毒性浓度(CC₅₀)。

通过观察样品对细胞病变效应的抑制程度(cytopathic effect reduction assay)测定抗病毒活性：将Hep-2细胞或MDCK细胞培养在96孔培养板中，等单层细胞长好后，加入用维持液稀释好的100倍半数感染量(100TCID₅₀)的病毒液，再加入用维持液稀释好的系列浓度样品溶液(浓度为100～1.6μg/mL)。在37℃，5％CO₂培养箱中培养3～4天。每天于倒置显微镜下观察细胞病变效应(CPE)的程度，并记录：-表示无CPE；+表示0～25％细胞有CPE；2+表示25～50％细胞有CPE；3+表示50～70％细胞有CPE；4+表示75～100％细胞有CPE。最后估计出半数抑制浓度(IC₅₀)。选择性指数(SI)＝CC₅₀/IC₅₀。实验结果见表1：

表1淡竹叶提取物的抗呼吸道病毒活性

从表中的数据可见：淡竹叶提取物(实施例1和实施例2所得)对本实验所采用的三种呼吸道病毒均有不同程度的体外抑制活性，它们对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制活性最好，对副流感3型病毒(PIV 3)的抑制活性次之，对甲型流感病毒(Flu A)也有一定的抑制作用。值得注意的是，淡竹叶提取物的毒性比阳性对照药病毒唑的低得多，因此，淡竹叶提取物抑制RSV、PIV 3和FluA的选择性指数(SI值，SI＝CC₅₀/IC₅₀)均高于病毒唑，即其抗呼吸道病毒活性具有高效、低毒的特点。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种淡竹叶提取物，其特征在于：该提取物含有异牡荆素、日本当药黄素、当药黄素、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖-6-C-α-L-阿拉伯糖苷、荭草苷和牡荆素。

2.根据权利要求1所述的一种淡竹叶提取物，其特征在于：所述木犀草素7-O-β-D-葡萄糖-6-C-α-L-阿拉伯糖苷具有如下式所示的结构：

3.根据权利要求1所述的一种淡竹叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：将淡竹叶的干燥药材粉碎，用乙醇水溶液提取得到粗提物，再经过大孔吸附树脂柱纯化得到淡竹叶提取物；

4.根据权利要求3所述的一种淡竹叶提取物的制备方法，其特征在于：所述渗漉提取的时间为7～10天小时；所述回流提取的次数为1～3次，每次1～3小时。

5.根据权利要求3所述的一种淡竹叶提取物的制备方法，其特征在于：所述淡竹叶是禾本科淡竹叶属植物。

6.根据权利要求3所述的一种淡竹叶提取物的制备方法，其特征在于：以淡竹叶提取物的干品重量计算，淡竹叶提取物中总黄酮质量百分含量＞50％。

7.根据权利要求1所述的淡竹叶提取物在制备抗呼吸道病毒的药物或保健品中的用途，其特征在于：所述呼吸道病毒是呼吸道合胞病毒、副流感3型病毒或甲型流感病毒。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述抗呼吸道病毒的药物含有治疗有效量的淡竹叶提取物和药学上可接受的载体。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述药物制备成片剂、口服液或胶囊剂。