CN101152202B - 治疗呼吸系统疾病的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种治疗呼吸系统感染的含橙皮苷提取物、黄芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物的药物组合物及其制备方法，该药物组合物具有解热、镇痛、消炎、抗菌和抗病毒的作用，尤其适宜防治上呼吸道感染。

Description

治疗呼吸系统疾病的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于治疗呼吸系统疾病的药物组合物及其制备方法，具体为主要源于植物药的具有治疗和预防呼吸系统感染作用的药物组合物及其可工业上应用的制备方法。

背景技术

呼吸系统病毒感染的临床表现主要为：发热，头痛、身痛，咽喉肿痛、咳喘、肺部感染等上、中、下呼吸道炎症，因而理想的治疗呼吸系统病毒感染的药物应该同时具有解热、抗炎、镇痛、抗菌和抗病毒的作用。已有抗呼吸道病毒作用的专利(申请)中：CN 03100188.2没有抗炎、镇痛作用，其抗病毒谱较窄，只抗流感病毒甲、乙型；CN 00100617.7没有具体的抗病毒药理实验依据，仅有几例临床治疗病例，而且这些病例缺少支持，所治病例没有病毒感染的诊断学依据，没有实验数据支持，所治病例，没有统计学处理；CN 03118301.8中仅提出具有“抗病毒”作用，没有公开具体抗哪些病毒；CN 02128077.0的说明书中仅有组方、制法，没有公开抗病毒药效学数据，“中药不传之秘在于量”，量的规律是组方的基本规律之一，在不同的量变规律指导下，几百味常用中药，可以演变出数千万首汤方，而该专利的申请说明中恰恰没有提到组方的计量问题；CN 03113857.8专利说明书第4页记载其“对流感病毒感染的小鼠肺病变与肺指数没有表现出明显的作用，体外对呼吸系统10株致病菌作用不明显”；CN 94115927.2主要用于风寒感冒，未提到抗病毒的药理作用；CN01129177.X仅具有解热、抗炎作用；CN 96110520.8的说明书第3页仅提及“长于抗流感病毒”，但未见具体的实验数据支持。

橙皮苷(Hesperidin)，异名陈皮甙、桔皮甙。物化性质：白色或浅黄色粉末。几乎不溶于水，微溶于甲醇，易溶于稀碱液和吡啶；60℃时溶于甲酰胺和二甲基甲酰胺；微溶于甲醇、热冰乙酸。橙皮苷可源于陈皮、芸香科植物化州橘Citrus reticulate Blanco及其栽培变种的干燥成熟果实]、青皮[芸香科植物化州橘Citrus reticulate Blanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮]、枳实[芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果]、枳壳[芸香科植物酸橙Citrusaurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥果皮]、化橘红[芸香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果，茜草科植物栗猪殃殃地上部分，芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮、枸橼成熟果实等药材和植物中。橙皮苷是3-羟基-3-甲基戊二酰基CoA(HMG-CoA)还原酶抑制剂，可以降低毛细血管的脆性及通透性，用于高血压病及毛细血管出血性疾患的辅助治疗。射干苷(Tectoridin)源于鸢尾科鸢尾属植物鸢尾Iristectorum Maxim.鸢尾科植物鸢尾的干燥茎根，射干[为鸢尾科植物射干Belamcandachinensis(L.)DC.的干燥根茎]中也含有射干苷。功能是清热解毒、消痰利咽、消积，用于咽喉肿痛、痰咳气喘等症。川射干中总异黄酮较药典其他射干品种高，射干苷是其中的一个主要活性成分。黄芩苷(Baicalin)源于黄芩。黄芩是唇形科植物黄芩Scutellariabaicalansis Georgi的干燥根。药理作用：具有抗病原微生物，增强机体免疫力、解热、镇静、降压、降血脂、保肝利胆及解痉、抗氧化等多种作用。用于湿温、暑湿胸闷呕恶、湿热痞满，泻痢，黄疽，肺热咳嗽，高热烦渴，痈肿疮毒，胎动不安。葛根素(puerarin)源于野葛。野葛为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。葛根[豆科植物葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi根]中也含有葛根素。葛根中含多种黄酮类成份，主要活性成份为大豆素(daidzein)、大豆甙(daidzin)、葛根素(puerarin)、葛根素-7-木糖甙(puerarin-7-xyloside)等。葛根素有心血管作用(扩张血管)、受体阻断效应、抗心律失常、治疗高血压和心绞痛。

发明内容

本发明要解决的技术问题是筛选研究治疗和预防呼吸道病毒感染的药物组合物，具体为同时具有确切的抗病毒、抗菌、解热、抗炎、镇痛作用的主要源于植物药的药物组合物。本发明还要研究该药物组合物适于工业化应用的制备工艺。

为解决上述问题，本发明提供技术方案如下：

一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，该药物组合物的药效原料按重量计为：橙皮苷1-4份、黄芩苷2-8份、葛根素1-4份、射干苷1-6份。优选该药物组合物的药效原料按重量计为：橙皮苷2-3份、黄芩苷3-4份、葛根素2-3份、射干苷2-3份。

一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，该药物组合物的药效原料按重量计为：橙皮苷提取物1-4份、黄芩苷提取物2-8份、葛根素提取物1-4份、射干苷提取物1-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量10-90％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量10-90％，葛根素提取物中葛根素含量5-20％，射干苷提取物中射干苷含量10-90％。优选该药物组合物的药效原料按重量计为：橙皮苷提取物2-3份、黄芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量50-85％，葛根素提取物中葛根素含量10-15％，射干苷提取物中射干苷含量50-70％。

一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，该药物组合物的药效原料按重量计为：含橙皮苷的植物1-4份、黄芩2-8份、含葛根素的植物1-4份、含射干苷的植物1-6份；优选含橙皮苷的植物2-3份、黄芩3-4份、含葛根素的植物2-3份、含射干苷的植物2-3份；含橙皮苷的植物选自陈皮、青皮、枳实、枳壳、化橘红、芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮、枸橼成熟果实、芦柑皮和芦柑皮渣中的一种或几种混合物；含葛根素的植物选自野葛和/或葛根，含射干苷的植物选自鸢尾和/或射干。

一种治疗呼吸系统感染的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

取药效原料芦柑皮或芦柑皮渣、鸢尾、黄芩、野葛；

用水和/或乙醇作溶剂，加热提取上述药效原料，得提取液；将提取液浓缩后，得浓缩物，向该浓缩物中加入水，滤取沉淀物。

所述药物组合物的制备方法，包括：用50-80％乙醇分别提取上述药效原料，得提取液：分别浓缩提取液后，得到相应浓缩物，分别向这些浓缩物中加水，分别滤取沉淀物，干燥沉淀物，得到粗制的橙皮苷提取物、黄芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物；该橙皮苷提取物中橙皮苷含量不低于10％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量不低于10％，葛根素提取物中葛根素含量不低于5％，射干苷提取物中射干苷含量不低于10％。

所述药物组合物的制备方法，优选用60-70％乙醇分别提取上述药效原料；所述粗制的橙皮苷提取物、黄芩苷提取物和射干苷提取物可用常规加碱溶解、加酸沉淀方法精制；橙皮苷提取物中橙皮苷含量20-90％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量20-90％，葛根素提取物中葛根素含量10-20％，射干苷提取物中射干苷含量20-90％；按重量计称取橙皮苷提取物1-4份、黄芩苷提取物2-8份、葛根素提取物1-4份、射干苷提取物1-6份，与药学上可接受辅料或载体混合。

所述药物组合物的制备方法中，橙皮苷提取物的精制方法是：取粗制的橙皮苷提取物加入含2％NaOH的50％乙醇溶解，过滤，将滤液加盐酸调PH至7左右，静置24h后，滤取沉淀，干燥；黄芩苷提取物的精制方法是：取粗制的黄芩苷提取物加相当于药材3倍体积的水分散均匀，用40％NaOH调节PH7左右，用加入等体积的95％乙醇搅拌使溶解，静置12h，滤过，滤液用盐酸调节PH2左右，60℃保温60min，静置24h后，滤取沉淀，先用稀乙醇洗涤沉淀，再用水洗涤沉淀至中性，减压干燥；射干苷提取物的精制方法是：将60-70％乙醇提取液浓缩后，加入水，用盐酸调PH到1～2，静置10小时后，滤取沉淀；于酸水液加入2％NaOH液调到PH至8～9，继续浓缩，浓缩到原体积的1/2，然后加盐酸调PH到1～2，静置10小时后，滤取沉淀；合并两次沉淀物，然后用抽滤漏斗将沉淀抽干，得射干苷的粗提物，向射干苷粗提物中加入无水乙醇(药材重量g∶乙醇体积ml＝7∶10)，搅拌均匀后，滤取沉淀物，干燥。

所述药物组合物的最优选制备方法，其中按重量计称取橙皮苷提取物2-3份、黄芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量50-85％，葛根素提取物中葛根素含量10-15％，射干苷提取物中射干苷含量50-70％，与口服制剂辅料混合，制成胶囊剂、分散片、普通片、颗粒剂、口服液。

一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，该药物组合物的药效原料按重量计为：含橙皮苷的原料1-4份、含黄芩苷的原料2-8份、含葛根素的原料1-4份、含射干苷的原料1-6份；含橙皮苷的原料中橙皮苷含量不低于10％，含黄芩苷的原料中黄芩苷含量不低于10％，含葛根素的原料中葛根素含量不低于5％，含射干苷的原料中射干苷含量不低于10％。优选含橙皮苷的原料中橙皮苷含量10-90％，含黄芩苷的原料中黄芩苷含量10-90％，含葛根素的原料中葛根素含量5-20％，含射干苷的原料中射干苷含量10-90％。更优选该药物组合物的药效原料按重量计为：含橙皮苷的原料2-3份、含黄芩苷的原料3-4份、含葛根素的原料2-3份、含射干苷的原料2-3份；含橙皮苷的原料中橙皮苷含量50-65％，含黄芩苷的原料中黄芩苷含量50-85％，含葛根素的原料中葛根素含量10-15％，含射干苷的原料中射干苷含量50-70％。所述原料选自：①含相应有效成分的植物，或者②有效成分(单体化合物)，或者③含有效成分的提取物(植物的有效部位)。即：含橙皮苷的原料包括含橙皮苷的植物、橙皮苷提取物或橙皮苷；含橙皮苷的植物选自芦柑皮(包括芦柑皮渣)、陈皮、青皮、枳实、枳壳、化橘红、芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮和枸橼成熟果实中的一种或几种混合物；含黄芩苷的原料包括黄芩、黄芩提取物和黄芩苷；含葛根素的原料包括野葛或葛根、葛根素提取物和葛根素；含射干苷的原料包括鸢尾或射干、射干苷提取物和射干苷。

本发明药物组合物包括：①橙皮苷、黄芩、葛根素和射干苷组成的混合物；②橙皮苷提取物、黄芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物组成的混合物(即四个提取物的混合物，简称“CYHG药物”，“提取物”即“有效部位”或简称“部位”)；③含橙皮苷的植物、黄芩、含葛根素的植物和含射干苷的植物组成的混合物以及④本发明所述提取物与原料药粉末和/或有效成分组成的混合物，例如可用橙皮苷提取物与黄芩苷、射干苷及葛根粉末组成的药物组合物。所述含橙皮苷的植物有芦柑皮(包括芦柑皮渣)、陈皮、青皮、枳实、枳壳、化橘红、芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮和枸橼成熟果实；含葛根素的植物是葛根和野葛；含射干苷的植物有鸢尾和射干；含黄芩苷的植物有黄芩。优选芦柑皮、黄芩、野葛和鸢尾组成的混合物。更优选芦柑皮中的橙皮苷提取物、黄芩中的黄芩苷提取物、野葛中葛根素提取物和鸢尾中射干苷提取物组成的药物组合物。

本发明药物组合物的抗病毒谱和药效作用强度优于目前市场具有抗病毒优势的的双黄连口服液。本发明包括研究该药物组合物组方中起到核心和关键作用的“CYHG药物”。CYHG药物是组方药材中相应的活性部位提取物的组合物，相对于目前的抗呼吸道病毒感染的药物有以下特点和优势：用量小、抗病毒谱广、药效作用强(强于阳性对照药双黄连口服液)、低毒等特点。含橙皮苷的中药传统用于理气化痰，现代研究表明对心脑血管疾病有辅助治疗作用，而本发明发现用橙皮苷、含橙皮苷的部位以及含橙皮苷的植物(尤其是芦柑皮或芦柑皮渣)可有效地治疗病毒性感染的呼吸系统疾病。CYHG药物中，优选芦柑皮、芦柑皮渣作为原料提取橙皮苷提取物。芦柑皮属于可循环再生资源(每年收获芦柑果实，必然可以回收到芦柑皮，不破坏资源、不耗费资源、该资源可以循环再生，以芦柑皮为原料开发的产品，有可持续发展性)。芦柑(全果，连皮)榨汁之后产生的芦柑皮渣，原本是农副产品生产过程中的废料。本发明用芦柑皮(可循环再生资源)、芦柑皮榨(废物利用)作为提取橙皮苷有效部位的原料，属于开发可循环再生资源和废物利用。本发明用芦柑皮、芦柑皮渣作原料开发出来的新药产品，显著降低了生产成本，有可持续发展性。本发明提取有效部位的全部工艺中，不用柱层析分离，不用正丁醇萃取，完全用水和/乙醇作溶剂提取，通过调节酸碱性，得到富集有效成分的有效部位。工艺简单，安全，成本较低，利于工业化生产。

具体实施方式

第一部分：

一：组方筛选研究实验

1.组方研究的因素水平的确定

我们选择橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黄芩苷部位(是四个部位的混合物。橙皮苷部位、射干苷部位、黄芩苷部位、葛根素部位各分别按实施例一1、2、3、4制备。见实施例一·制法1)。本发明进行了二轮组方筛选研究正交实验。第一轮初步确定较好组方范围，第二轮确定了最优组方。下面列出最优组方筛选实验的具体步骤与实验结果。

表1：各组方筛选的因素水平表

水平	橙皮苷部位	射干苷部位	葛根素部位	黄芩苷部位
					1	4	2	4	3
2	2	3	3	4
					3	1	4	1	5

2.组方筛选研究的1-9组L9(3⁴)正交工作安排表

表2：组方筛选1-9组L9(3⁴)正交工作安排表

实验组序号	橙皮苷部位	射干苷部位	葛根素部位	黄芩苷部位	光密度(x±s)
						1组	4	2	4	3	0.60±0.103
2组	4	3	2	4	0.545±0.122
						3组	4	4	1	5	0.626±0.099
4组	2	2	2	5	0.495±0.118
						5组	2	3	1	3	0.489±0.132
6组	2	4	4	4	0.499±0.126
						7组	1	2	1	4	0.580±0.101
8组	1	3	4	5	0.598±0.128
						9组	1	4	2	3	0.644±0.121
10组(阳对)					0.501±0.106
						11组(空白)					0.678±0.115
K<sub>1</sub>	0.591	0.559	0.566	0.578	A<sub>2</sub>D<sub>2</sub>B<sub>2</sub>G<sub>2</sub>
						K<sub>2</sub>	※0.494	※0.544	※0.561	※0.541
K<sub>3</sub>	0.607	0.590	0.565	0.578
						R	0.113	0.015	0.050	0.037

3.组方筛选研究的实验方法和结果

(1).1-9组的组方药物的制备

按表2的规定的量，称取由橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黄芩苷部位4个部位组成的1-9组的组方药物；分别配制成浓度为10mg/ml的水溶液。

(2)小鼠腹腔毛细血管通透性抗炎实验

取20～24g健康雄性小鼠110只随机分为11组，分别给予1-9组的组方药物，给药的剂量均为0.20g/kg(每20g小鼠给药0.4ml)；阳性对照组双黄连口服液7.5ml/kg(相当于11.25g生药/kg)；空白对照组给予等容量生理盐水；连续给药6d，ig给药。在末次给药1h后，各鼠均静注0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，随即腹腔注射0.6％醋酸0.20ml/只，20min后颈椎脱位处死小鼠，用6ml生理盐水分三次洗涤腹腔，吸出洗涤液，合并后用入生理盐水定容至10ml。定容液于3000转离心15min，取上清液，于590nm处比色测定光密度，结果填入表1。

(3).实验结果

将各组实验结果的平均值代入表2，进行极差分析。

二轮组方筛选研究表明：优选组方是按重量计橙皮苷部位1-4份、黄芩苷部位2-8份、葛根素部位1-4份、射干苷部位1-6份；最优组方是按重量计橙皮苷部位2份、射干苷部位3份、黄芩苷部位4份、葛根素部位2份。

二.最佳组方与药材组方、纯品组方、单一的橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黄芩苷部位比较实验

1.实验样品药液的制备

最佳组合即为CYHG药物(见实施例一·制法制备CYHG药物，再制备成10mg/ml的水溶液，即为CYHG药物组样品液)；药材组方组[分别取芦柑皮2份、鸢尾3份、黄芩4份、野葛2份，加入药物重量10倍量、8倍量、8倍量的水(w/v)，分别直火煎煮1小时、40分钟、30分钟，分别得到三次煎煮液，合并，减压浓缩至小体积，以水定容为0.5g/ml的水溶液，即为药材组方组样品液]；纯品组方组即为CYHG纯品-混合物(见实施例二制备CYHG纯品-混合物，再制备成10mg/ml的水溶液，即为CYHG纯品-混合物组样品液)；橙皮苷部位(实施例一1制备橙皮苷部位，再制备成10mg/ml的水溶液，即为橙皮苷部位组样品液)；射干苷部位(实施例一2制备射干苷部位，再制备成10mg/ml的水溶液，即为射干苷部位组样品液)；葛根素部位(实施例一3制备葛根素部位，再制备成10mg/ml的水溶液，即为葛根素部位组样品液)；黄芩苷部位(实施例一4制备黄芩苷部位，再制备成10mg/ml的水溶液，即为黄芩苷部位组样品液)。

2小鼠腹腔毛细血管通透性抗炎实验

取20～24g健康雄性小鼠90只随机分为.9组，分别给予1-9组的组方药物，给药的剂量均为0.20g/kg(每20g小鼠给药0.4ml)；阳性对照组双黄连口服液7.5ml/kg(相当于11.25g生药/kg)；空白对照组给予等容量生理盐水；连续给药6d，ig给药。具体方法见组方筛选研究实验的3.2项下。

3.小鼠腹腔毛细血管通透性抗炎实验结果

具体实验结果见表2。

表2.各组药物对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的比较研究(X±SD)

实验样品组	动物数n	给药剂量g/kg.	给药方式	光密度
					1组CYHG药物	10	1.2	Ig	0.415±0.107<sup>**</sup>
2组药材组方组	10	10g生药	Ig	0.515±0.146<sup>*</sup>
					3组纯品组方组	10	0.2	Ig	0.481±0.143<sup>**</sup>
4组橙皮苷部位	10	0.2	Ig	0.570±0.108<sup>*</sup>
					5组射干苷部位	10	0.2	Ig	0.549±0.132<sup>*</sup>
6组黄芩苷部位	10	0.2	Ig	0.536±0.151<sup>*</sup>
					7组葛根素部位	10	0.2	Ig	0.627±0.130
8组阳性对照组	10	11.25g生药	Ig	0.496±0.156<sup>**</sup>
					9组空白对照组	10	-	ig	0.664±0.123

注：各用药组与空白对照组比较^*P＜0.05  ^**P＜0.01

4.结论：CYHG药物、药材组方组、纯品组方组、橙皮苷部位、射干苷部位、黄芩苷部位、阳性对照组与空白对照组比较均具有抗炎的显著作用(^*P＜0.05  ^**P＜0.01)；其中CYHG药物作用最强，明显优于单独的各个部位。

第二部分：

药效学及毒性试验

实验材料

1.试药：

(1).CYHG药物(是四个部位的混合物。橙皮苷部位、射干苷部位、黄芩苷部位、葛根素部位各分别按实施例一1、2、3、4制备。见实施例一·制法1)。

(2).CYHG胶囊(见实施例一·制法2)。

(3).CYHG纯品-混合物(分别称取橙皮苷2g、射干苷3g、黄芩苷4g、葛根素2g，混合均匀后，即为CYHG纯品-混合物。其中葛根素(含量90％-95％，陕西天润植物化工有限公司提供)；射干苷(按本发明提取分离方法，反复精制纯化，用HPLC测定，用中国药品生物制品检定所的标准品对照，用归一划法计算纯度达95％)，黄芩苷(含量90％，惠州东方植物保健科技有限公司提供)；橙皮苷(购于南京青泽医药科技开发有限公司)。见实施例二。

(4).CYHG纯品-胶囊(见实施例三)。

2.阳性对照药：双黄连口服液：来源：河南太龙药业股份有限公司，批号：06051201规格：10ml×10支/盒；功能主治：清热解毒，祛痰止咳。用于上呼吸道感染。用法用量：口服，一次2支，一日3次。

3.实验试剂：(1)冰醋酸：来源：南京市化工试剂厂批号：020821规格：500ml/瓶。(2)酵母：来源：湖北安琪酵母股份有限公司，批号：0607042规格：100g/瓶。

4.实验动物：(1)昆明种小鼠：体重18～26g，雌雄兼用，SPF级，来源于南通大学实验动物中心，合格证号：SCXK(苏)2003-0002。(2)SD雄性大鼠，体重200～240g，SPF级，来源于南通大学实验动物中心，合格证号：_SCXK(苏)2003-0002。

5.仪器：722分光光度计，离心机，大鼠肛温计，秒表，精密电子天平。

(一)抗炎试验：小鼠腹腔毛细血管通透性实验

取20～24g健康雄性小鼠50只随机分为5组，分别是：CYHG药物高剂量组0.25g/kg(相当于生药3.7088g/kg)，(此处0.25g是CYHG药物，是四个部位混合物，按实施例一项下制法1制备)。CYHG药物中剂量组0.20g/kg(相当于生药2.967g/kg)，CYHG药物低剂量组0.15g/kg(相当于生药2.225g/kg)，阳性对照组双黄连口服液7.5ml/kg(相当于11.25g生药/kg)，空白对照组给予等容量生理盐水，连续给药6d，ig给药。在末次给药1h后，各鼠均静注0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，随即腹腔注射0.6％醋酸0.20ml/只，20min后颈椎脱位处死小鼠，用6ml生理盐水分三次洗涤腹腔，吸出洗涤液，合并后用入生理盐水定容至10ml。定容液于3000转离心15min，取上清液，于590nm处比色测定光密度，以平均光密度值做t检验。结果见表4。

表4.对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

组  别	动物数(只)	光密度
			高剂量组	10	0.429±0.107<sup>**</sup>
中剂量组	10	0.426±0.122<sup>**</sup>
			低剂量组	10	0.468±0.143<sup>*</sup>

阳性对照组	10	0.472±0.121<sup>*</sup>
			空白对照组	10	0.591±0.108

注：各用药组与空白对照组比较^*P＜0.05  ^**P＜0.01

实验结果：CYHG药物各剂量组及阳性对照组与空白对照组组间t检验，CYHG药物各剂量组及阳性对照组与空白对照组组间差异有显著意义，检验结果分别为P＜0.05，P＜0.01。

抗炎实验结论：与双黄连口服液对照组比较，CYHG药物组给药剂量小、抗炎用强。

(二)止痛试验：小鼠醋酸扭体法

取20～24g健康雄性小鼠50只随机分为5组，分别是：CYHG药物高剂量组0.25g/kg(相当于生药3.7088g/kg)，(此处0.25g是CYHG药物，是四个部位混合物，按实施例一项下制法1制备)。CYHG药物中剂量组0.20g/kg(相当于生药2.967g/kg)，CYHG药物低剂量组0.15g/kg(相当于生药2.225g/kg)，阳性对照组双黄连口服液7.5ml/kg(相当于11.25g生药/kg，空白对照组给予等容量生理盐水，连续给药6d，ig给药。末次给药0.5h后腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只。观察20min内各鼠出现扭体反应次数，结果见表5。

表5.CYHG药物、双黄连口服液对小鼠醋酸反应次数的影响

组    别	动物数(只)	扭体反应次数(次)
			高剂量组	10	15.6±2.28<sup>**</sup>
中剂量组	10	16.4±4.01<sup>**</sup>
			低剂量组	10	16.1±5.32<sup>*</sup>
阳性对照组	10	16.4±4.74<sup>**</sup>
			空白对照组	10	27.4±8.76

注：各用药组与空白对照组比较^*P＜0.05  ^**P＜0.01

实验结果：CYHG药物各剂量组及阳性对照组与空白对照组组间用t检验，CYHG药物各剂量组及阳性对照组与空白对照组组间差异有显著意义，结果分别为P＜0.05，P＜0.01。

镇痛实验结论：与双黄连口服液对照组比较，CYHG药物组给药剂量小、镇痛作用强。

(三)解热试验：酵母法

取体重150～200g，雌雄各半大鼠，用体温计间隔1h测直肠体温两次，以平均值作为基础体温。选取体温变化不超过0.3℃者50只，将其随机分为5组，每组10只。即CYHG药物高剂量组0.20g/kg(相当于生药2.967g/kg)，CYHG药物中剂量组0.15g/kg(相当于生药2.2252g/kg)，CYHG药物低剂量组0.1g/kg(相当于生药1.4835g/kg)，阳性对照组双黄连口服液12ml/kg，空白对照组给予等容量生理盐水。采用灌胃给药，连续7d。末次给药0.5h后各小鼠于背部皮下注射20％酵母混悬液10ml/kg，于第0.5、1、2、4、6、8、10及12h各测大鼠体温1次。结果见表6。求出Δ℃值，并进行T检验。

表6.CYHG药物、双黄连口服液对酵母致大鼠发热的影响实验

组别	数量	基础体温(℃)	造模后不同时间体温变化
											0.5h	1h	2h	4h	6h	8h	10h	12h
			H组	10	37.91±0.23	37.65±0.28	38.07±0.15*	38.13±0.23*	38.16±0.25**	38.28±0.34**									38.29±0.17**	38.31±0.39**	38.69±0.15*
Δ℃	-0.26±0.28	0.16±0.15*									0.22±0.23*	0.25  ±0.25**	0.37±0.34**	0.38±0.17**	0.40±0.39**	0.78±0.15*
					M组	10	37.82±0.44	37.39±0.31	38.06±0.37*	38.08±0.36*							38.04±0.43**	38.30±0.60**	38.42±0.45**	38.77±0.45*	38.57±0.47*
Δ℃	-0.43±0.31	0.24±0.37*	0.26±0.36*	0.22  ±0.43**							0.48±0.60**	0.6	0.95±0.45*	0.75±0.47*
							L组	10	37.88±0.23	37.60±0.34					38.07±0.51*	38.13±0.37*	38.18±0.32*	38.69±0.37**	38.60±0.37**	38.84±0.36*	38.57±0.30*

组别	数量	基础体温(℃)	造模后不同时间体温变化
											Δ℃	-0.28±0.34	0.19±0.51*	0.25±0.37*	0.3  ±0.32*	0.81±0.37**	0.72	0.96±0.36*	0.69±0.30*
			阳对	10	37.80±0.30	37.63±0.26	38.21±0.33	38.40±0.18	38.21±0.31*	38.54±0.36**										38.57±0.36**	38.97±0.37	38.91±0.39
Δ℃	-0.17±0.26	0.41±0.33									0.6±0.18	0.41  ±0.31*	0.74±0.36**	0.77	1.17±0.37	1.11±0.39
					空白	10	37.93±0.20	37.79±0.24	38.38±0.22	38.49±0.43							38.68±0.25	39.25±0.34	39.32±0.29	39.18±0.29	38.96±0.22
Δ℃	-0.149±0.24	0.45±0.22	0.56±0.43	0.75  ±0.25							1.32±0.34	1.39	1. 25±0.29	1.03±0.22

注：各用药组Δ℃与空白对照组Δ℃比较^*P＜0.05  ^**P＜0.01

实验结果：CYHG药物各剂量组及阳性对照组与空白对照组组间t检验显示，CYHG药物高、中剂量组与空白对照组比较从致热1h开始直到12h结束，有显著的降温作用，P＜0.05，P＜0.01；低剂量组与空白对照组比较从致热1h开始直到8h结束，有显著的降温作用P＜0.05，P＜0.01。阳性对照组从4h到8h都有降温作用，P＜0.01，P＜0.05。

解热实验结论：与双黄连口服液对照组比较，CYHG药物组给药剂量小、起效快、持续药效时间长、解热作用强。

参考文献：《新药审批办法》国家药品监督局2002.12；《药理实验方法》人民卫生出版社，徐淑云2002，《中药药理研究方法学》人民卫生出版社，陈奇1994，《新药西药临床前指导原则》卫生部药监局1993。

(四)体外抑菌实验

1.材料

(1)药物：CYHG药物(是四个部位混合物，按实施例一项下制法1制备)。

(2)菌种：试验所采用的菌株均为临床分离株，由江苏省人民医院检验科和南京市第一医院检验科提供并鉴定。

(3)培养基：MH培养基由北京三药科技开发公司生产，肺炎链球菌采用血培养基，即在MH培养基中加入5％脱纤维羊血制成。

2.方法

(1)药物配制：准确称取一定量的CYHG药物，加入到20ml灭菌生理盐水中，搅拌20min使其溶解，配制成终浓度为10mg/ml的药物溶液。用灭菌生理盐水倍比稀释上述药物溶液，配制成下列浓度梯度，即10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.15625mg/ml。

(2)含药物平板制备：吸取1.5ml稀释好的不同浓度的药物置无菌平皿中，分别于每个平皿中加入恒温于45℃左右的灭菌MH培养基，混匀冷却制成一系列药物浓度梯度的药物平板，即1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/ml和0(空白对照)mg/ml。

(3)菌悬液制备：将冷冻保藏的菌株(甘油管)接种于新鲜琼脂斜面培养基，37℃恒温培养24小时，再分别接种于1ml肉汤中，37℃恒温培养12小时。肺炎链球菌的肉汤培养中含5％脱纤维羊血清。上述细菌培养液浓度约为108～109CFU/ml，分别用灭菌生理盐水稀释至107CFU/ml左右。

采用多点接种仪将上述稀释的菌悬液接种至不同浓度的药物平板，接种量约为104～105 CFU/点。试验菌于37℃恒温倒置培养16～18小时，观察结果，并记录MIC值。

CYHG药物对临床致病菌的MIC值如表6所示。试验结果表明，CYHG药物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠埃希菌(ATCC25922)、绿脓杆菌(ATCC27853)等具有一定的抑制作用。

表7.CYHG胶囊内容物对临床致病菌的MIC值

细菌	株数	MIC(mg/ml)
					MIC<sub>50</sub>	MIC<sub>90</sub>	MIC范围
		金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎链球菌大肠埃希菌绿脓杆菌肺炎克雷伯菌金黄色葡萄球菌(ATCC25923)大肠埃希菌(ATCC25922)绿脓杆菌(ATCC27853)	101010101010111	1.252.51.252.50.6251.252.51.251.25				2.552.551.252.552.52.5	1.25～2.52.5～51.25～2.52.5～50.625～1.251.25～2.51.25～2.51.25～2.51.25～2.5

抗菌实验结论：CYHG药物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠埃希菌(ATCC25922)、绿脓杆菌(ATCC27853)等具有抑制作用。

(五)体外抗病毒实验

药物CYHG药物(是四个部位混合物，按实施例一项下“制法1”制备)。14.835g生药/1g制剂，以蒸馏水配制成1g生药/ml(67.4mg/ml)，隔水煮沸20分钟灭菌，用于体外抗病毒和抑菌试验。

对照药双黄连口服液，1.5g生药/ml(河南太龙药业股份有限公司批号：06051201)，以蒸馏水配制成1g生药/ml，隔水煮沸20分钟灭菌，用于体外抗病毒和抑菌试验。

病毒流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)、腺病毒7型(ADV7)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)，用于体外试验；流感病毒鼠肺适应株FM1，用于体内试验。均购自中国预防医学科学院病毒学研究所，本实验室传代后保存于-60℃冰箱备用。

细胞人喉癌传代细胞Hep-2株，购自国家药品生物制品检定所。

细胞培养液含10％小牛血清、0.29mg谷氨酰胺/ml、100u/ml青、链霉素的Eagle’sMEM(日本日水制药株式会社出品)。

细胞维持液除所含小牛血清为2％外，其他含量均同培养液。

细菌培养基营养琼脂培养基，批号060114，营养肉汤培养基，批号060112，均由中国药品生物制品检定所监制。

仪器CO2培养箱，日本Yamato科学株式会社生产。倒置显微镜，OLYMPUS牌。

1、对Hep-2培养细胞的毒性试验

试验方法按常规试验操作，将瓶中Hep-2细胞消化下来，接种于96孔细胞培养板中，置37℃5％CO2培养箱中培养2天，长成单层细胞后，进行试验：将培养板中的培养液倾去，将试药以维持液连续2倍稀释11个浓度，加入板中200μl/孔，每稀释度加4孔，第12列不加药液作正常细胞对照。将培养板置37℃5％CO2培养箱中培养3天，每日用倒置显微镜观察药液对细胞的影响。若毒性为“1”及其以下“-”，则视为阴性，可认为此浓度药样对细胞无中毒现象，其余的“2”及其以上各级，均视为阳性，即所试药样在此浓度对细胞有中毒作用。利用Reed-Muench法计算50％毒性浓度(TC50)。

按上述方法取得试验结果利用Reed-Muench法计算50％毒性浓度(TC50)如下：

CYHG药物的TC50＝6.80mg生药/ml，TC0＝1.74生药mg/ml，双黄连口服液的TC50＝5.24mg生药/ml，TC0＝1.36mg生药/ml。选择对细胞生长无影响的最大无毒浓度TC0及其以下浓度作抗病毒试验。

2、对病毒致细胞病变作用的影响

实验方法取已长成单层细胞的培养板，倒掉培养液，接种100TCID50的不同病毒液100μl于细胞孔，每一块细胞板接种二种病毒(各加6列)，留第8行不接种病毒作正常细胞对照。置37℃5％CO2培养箱中吸附2小时，倒掉病毒液，用不含小牛血清的Eagle’s维持液洗细胞面1次后，加入从最大无毒浓度TC0起倍比稀释5个浓度的药液(1～5行)200μl/孔，各浓度加3孔。第6行加1/4TC50(0.714/4＝0.197mg/ml)Ribavirin，第7行不加药液作病毒对照，第8行为未感染未加药的正常细胞对照。置37℃5％CO2培养箱中培养3天，每日在倒置显微镜下镜检CPE进展。根据以上细胞病变五级标准判断，利用Reed-Muench法计算50％有效浓度(EC50)，并求出治疗指数(TI＝TC50/EC50)，TI值越高，表明药效作用越强。

表8.CYHG胶囊对常见呼吸系统感染有关病毒的作用

病毒	CYHG胶囊				双黄连口服液
									第1次		第2次		第1次		第2次
	EC<sub>50</sub>	TI	EC<sub>50</sub>	TI	EC<sub>50</sub>	TI	EC<sub>50</sub>	TI
									A<sub>3</sub>HVJRSVADV3	0.800.400.600.80	6.98.66.04.8	0.440.400.480.9	6.97.85.64.2	1.682.902.40	4.44.83.0	1.442.801.28	4.26.23.1

注：表中EC50单位为mg生药/ml；EC50为50％有效浓度；TI为治疗指数TI＝TC50/EC50。第1次、第2次分别指第1次实验结果和第2次实验结果的意思。

实验结果按上述方法通过两次试验结果表明，CYHG药物对流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)均显示具有抑制作用，其中CYHG药物对副流感病毒抑制作用较强。

抗病毒实验结论：CYHG药物与对照药双黄连口服液对流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)均显示具有抑制作用；与对照药双黄连口服液比较，CYHG药物对上述三种病毒的抑制作用强，治疗指数(TI)；对照药双黄连口服液对腺病毒3型(ADV3)没有抑制作用，而CYHG药物对腺病毒3型(ADV3)具有较强的抑制作用。

抗病毒实验结论：CYHG药物比对照药双黄连口服液的抗病毒谱宽、抑制病毒的治疗指数高；尤其是对呼吸道重要的致病病毒腺病毒3型(ADV3)CYHG药物具有独特的药效。

总的药效实验结论：CYHG胶囊具有抗呼吸系统流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)作用，具有抗菌、消炎、解热作用。其药理作用优于对照药双黄连口服液。

(六)CYHG药物的急性毒性实验(最大耐受量实验)

以CYHG药物(按实施例一项下“制法1”制备)30％浓度，一日内一次灌胃给药，每次0.8ml/20g，剂量为12g/kg，没有测出LD₅₀。故进行最大耐受量实验：以30％浓度的CYHG药物，一日内2次，灌胃给药，每次0.8ml/20g，给药后，观察7日，记录结果。最大给药量为24gCYHG药物/kg(相当于356.04g组方生药/kg)，相当于临床人最高剂量(0.05g/kg)的480倍时，实验动物未出现毒性反应。目的：观察CYHG药物一日内2次灌胃给药，所可能产生的毒性反应，为临床安全用药提供参考依据。

实验方法：取体重19-21g昆明种小鼠20只，雌雄各10只。饲养2日，实验前禁食8小时，不禁水，67％CYHG药物，一日内两次灌胃给药，每次0.8ml/20g，给予各鼠灌胃，药后正常给水喂养，观察7日内小鼠死亡数目及各鼠有无行为活动异常，皮毛、二便、饮食状态等不佳表现。

实验结果：以CYHG药物的最大体积(0.8ml/20g)、最高浓度(30％)，一日内2次灌胃给药，给药后观察7日，20只小鼠均状态良好，未出现任何不适现象，皮毛光亮、活动正常、摄食正常、无腹泻发生，测定结果，最大给药量为24gCYHG药物/kg(相当于356.04g组方生药/kg)，相当于临床人最高剂量(0.05g/kg)的480倍(计算公式如下)。实验表明本发明药物组合物即CYHG药物毒性低微。

最大给药量倍数＝(每只小鼠给药量/小鼠平均体重)×(成人平均体重/成人每日用量)

              ＝(0.3×0.8×2/20)×(60000/3)＝480(倍)

第三部分：

实施例一

处方：橙皮苷部位86.58g、射干苷部位129.87g、黄芩苷部位173.16g、葛根素部位86.58g。

制法1：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法见本实施例下述1、2、3、4.)，混合均匀后，即为CYHG药物。

制法2：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法见本实施例下述1、2、3、4.)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。制成CYHG胶囊。用法用量：口服，一次1-2粒，一日3次。规格：0.5g/粒。

1、橙皮苷部位(即橙皮苷提取物，全文同)提取工艺流程及质量标准：

橙皮苷部位提取工艺：取芦柑皮(或芦柑皮渣)[芸香科柑橘属植物芦柑Crtruschinensis(L.)Osbeck的成熟干燥外层果皮]适当粉碎，用10倍量(70％的乙醇为水和乙醇v/v混合，全文同)，先浸泡1h后，于85℃水浴条件下回流连续提取药材4次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并将提取物用适量蒸馏水(药材∶总体积＝1g∶2ml)转移至烧杯中，静置过夜，抽滤，干燥(65℃、0.08Mpa)，得粗提物(母液反复3次沉淀粗提物，每次沉淀时都要将体积浓缩为原体积的1/2)。取粗提物加入含2％NaOH的50％乙醇溶解[粗提物与2％NaOH的50％乙醇比例关系为1∶10(w/v)]，过滤，将滤液加盐酸调PH至7，静置24 h待析出沉淀后抽滤，得纯化物，65℃减压真空干燥48h。研磨成粉，得纯化物。

橙皮苷部位质量标准：参照中国药典2005版相关内容进行实验操作。HPLC色谱条件与系统适用性实验：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)；检测波长283nm，柱温30℃。对照品溶液：精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液。供试品溶液：取纯化物精密称重3mg，置于10ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，得供试液样品测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定。纯化物中橙皮苷含量(w/w)为65％以上。橙皮苷部位的提取率：得到橙皮苷部位5.5g/100g药材。

可用陈皮、青皮、枳实、枳壳、化橘红、芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮或枸橼成熟果实作原料，参照本发明上述方法提取橙皮苷部位，亦可参见其它文献方法，如：“微波法提取陈皮中橙皮苷”，孙秀利等；中药材，2007年06期；“正交试验优选枳实中橙皮苷提取工艺”，杨志学等；怀化医专学报2007年01期。

2、射干苷部位(即射干苷提取物，全文同)提取工艺流程及质量标准：

射干苷部位提取工艺：取鸢尾(鸢尾科鸢尾属植物鸢尾Iris tectorum Maxim.的干燥茎根，)粗颗粒，加入70％醇提取了3次，每次2小时，每次分别加入10、8、8倍量乙醇，85℃水浴回流提取，提取液用8层纱布自然过滤，合并三次提取液，水浴减压浓缩至无醇味体(浓缩过程中可加入少量碱)，并将提取物用适量蒸馏水(药材∶总体积＝1g∶2ml)转移至烧杯中，用盐酸调PH到1～2，静置10小时，待沉淀完全后，分离得沉淀；于酸水液加入2％NaOH液调到PH＝8～9，继续浓缩，浓缩到原体积的1/2，然后加盐酸调PH到1～2，静置10小时，待沉淀完全后，分离得沉淀；于酸水液加入2％NaOH液调至PH＝8～9，继续浓缩至原体积的1/2，然后加盐酸调PH到1～2，静置10小时，待沉淀完全后，分离沉淀物，合并3次沉淀物，然后用抽滤漏斗将沉淀抽干，得射干苷的粗提物。将射干苷粗提物置于容器中，加入无水乙醇(药材重量g∶乙醇体积ml＝7∶10)，搅拌均匀后抽滤，取沉淀物，干燥，即得射干苷部位。

射干苷部位质量标准：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱，150mm×4.6mm，5um；流动相：流动相：水∶甲醇＝80∶20(0nin)-40∶60(10nin)-20∶80(30nin)；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：266nm；按射干苷色谱峰计算，理论塔板数不低于2500。对照品溶液配制：精密称取射干苷标准品1.124mg至10ml容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度，为射干苷对照品溶液(0.1124mg/ml)。对照药材溶液制备(按药典)：取鸢尾粉末过50目筛0.4992g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇25ml，密塞超声处理(50HZ)1小时，过滤后不经过旋干直接定容到100ml容量瓶中，再从中用移液管转移出2ml到10ml容量瓶中(1∶500)，超声，待测。供试品溶液的制备：称取0.75倍量无水乙醇洗得到的沉淀物干燥后，称取27.4mg定容于25ml容量瓶中，超声10分钟，用移液管出2ml定容于10ml容量瓶中，超声，微孔滤膜过滤后进HPLC测定含量。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。射干苷提取物中射干苷的含量(w/w)为70％。射干苷部位的提取率：得到射干苷部位4g/100g药材。

3、黄芩苷部位(即黄芩苷提取物，全文同)提取工艺流程及质量标准

黄芩苷部位提取工艺：取黄芩(唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根)分别加入12倍、10倍、8倍60％乙醇提取3次，每次1.5小时。提取液减压浓缩至药材∶体积＝1g∶5ml后，盐酸调节PH2，80℃保温30min(可提高黄芩苷的含度)，取出，放置24h。抽滤，抽滤后所得沉淀，加相当于药材3倍体积的水分散均匀，用40％NaOH调节PH＝7，用加入等体积的95％乙醇搅拌使溶解，静置12h，滤过，滤液用盐酸调节PH＝2，60℃保温60min(可提高黄芩苷的含度，黄芩苷可以在这个温度条件下析出沉淀，而杂质在此温度条件下保留在溶液中，而达到分离杂质的目的)，静置24h，抽滤，沉淀先用稀乙醇洗，再用水洗至中性，50℃减压干燥，即得。所得黄芩提取物的含量平均百分率为87.81％，转移率为72.77％。

黄芩苷部位质量标准：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱，150mm×4.6mm，5um；流动相：甲醇∶水(0.4％磷酸)＝47∶53；流速：1ml/min；柱温：33℃；检测波长：280nm；按黄芩苷色谱峰计算，理论塔板数不低于2500。样品溶液制备，对照品及标准曲线制备：精密称取黄芩苷标准品3.3mg至50ml容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度，为黄芩苷对照品溶液(66ug/ml)。供试样品溶液制备：水煎煮：精密称取样品9.3mg至25ml容量瓶中，用甲醇溶解后，定容至刻度，再从中精密吸取5ml至25ml容量瓶中，甲醇定容，从中吸取4ml至5ml量瓶中，甲醇定容，摇匀，0.45um微孔滤膜过滤后待测。进样20ul。乙醇提取：精密称取样品9.3mg至25ml量瓶中，甲醇溶解后，定容至刻度，再从中精密吸取5ml至25ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，0.45um微孔滤膜过滤后待测。进样20ul。样品中黄芩苷的含量(w/w)为85％。黄芩苷部位的提取率：得到黄芩苷部位8g/100g药材。

4、葛根素部位(即葛根素提取物，全文同)提取工艺流程及质量标准

葛根素部位提取工艺：将葛根(野葛，豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根)适当粉碎，分别用8倍量70％乙醇回流提取3次，每次1.5小时。将乙醇提取液减压回收乙醇(60～70℃，-0.08Mpa)，将提取浓缩液置减压干燥器中，调节干燥温度为60±5℃，真空度为-0.08MPa，干燥后，取出干燥物观察其性状，并粉碎成细粉，备用。

葛根素部位质量标准：采用HPLC法对葛根提取物中的葛根素进行含量测定。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长250nm；理论板数按葛根素峰计算不得低于4000。供试品溶液的制备称取葛根提取物约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，以30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜，备用。对照品溶液的制备称取葛根素对照品约2mg，精密称定，置25ml量瓶中，以30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密吸取5ml置10ml量瓶中，以30％乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。测定法  分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液各20ul注入液相色谱仪，测定，即得。含量限量本品含葛根素(C₂₁H₂₀O₉)不得少于10％(w/w)。葛根素部位的提取率：得到葛根素部位4g/100g药材。

实施例二CYHG纯品-混合物的制备

处方：橙皮苷2g、射干苷3g、黄芩苷4g、葛根素2g

所用原料均为市购，植物中提取的或化学合成的原料药均可使用，含量不低于90％；如果需要可按常规方法纯化到90％以上，比如95％，

制法：分别称取上述处方量药物，混合均匀后，即为CYHG纯品-混合物。

实施例三CYHG纯品-胶囊的制备

处方：橙皮苷86.58g、射干苷129.87g、黄芩苷173.16g、葛根素86.58g。

制法：分别称取上述处方量药物(组方药物均系市场购买)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。制成CYHG纯品-胶囊。用法用量：口服，一次1-2粒，一日3次。规格：0.5g/粒。

实施例四

处方：橙皮苷部位20g、射干苷部位40g、黄芩苷部位40g、葛根素部位20g。

制法：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法参见实施例一下述1、2、3、4.)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。

实施例五

处方：橙皮苷部位30g、射干苷部位30g、黄芩苷部位40g、葛根素部位30g。

制法：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法参见实施例一下述1、2、3、4.)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。

实施例六

处方：橙皮苷部位20g、射干苷部位30g、黄芩苷部位40g、葛根素部位20g。

橙皮苷提取物中橙皮苷含量70％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量90％，葛根素提取物中葛根素含量20％，射干苷提取物中射干苷含量50％。

制法：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法参见实施例一下述1、2、3、4.)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。

实施例七

处方：橙皮苷部位40g、射干苷部位60g、黄芩苷部位80g、葛根素部位40g。

橙皮苷提取物中橙皮苷含量65％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85％，葛根素提取物中葛根素含量10％，射干苷提取物中射干苷含量70％。

制法：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法参见实施例一下述1、2、3、4.)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。

实施例八

处方：橙皮苷部位10g、射干苷部位10g、黄芩苷部位20g、葛根素部位10g。

橙皮苷提取物中橙皮苷含量50％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量50％，葛根素提取物中葛根素含量10％，射干苷提取物中射干苷含量70％。

制法：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法参见实施例一下述1、2、3、4.)与淀粉适量，混合均匀后，常规湿法制粒，干燥，装制成1000粒0号硬胶囊。

实施例九

处方：橙皮苷部位20g、射干苷部位30g、黄芩苷30g、野葛30g。

橙皮苷提取物中橙皮苷含量50％，黄芩苷含量测定为90％，野葛(粉末)中葛根素含量5％，射干苷提取物中射干苷含量70％。

制法：分别称取上述处方量药物部位(药物部位的制备方法参见实施例一下述1、2、3、4.)混合均匀后，装制成1000粒0号硬胶囊。

Claims (11)

1.一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物按重量计为：橙皮苷1-4份、黄芩苷2-8份、葛根素1-4份、射干苷1-6份。

2.权利要求1的药物组合物，其特征在于该药物组合物按重量计为：橙皮苷2-3份、黄芩苷3-4份、葛根素2-3份、射干苷2-3份。

3.一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物按重量计为：橙皮苷提取物1-4份、黄芩苷提取物2-8份、葛根素提取物1-4份、射干苷提取物1-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量65-90％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85-90％，葛根素提取物中葛根素含量不低于10％，射干苷提取物中射干苷含量70-90％。

4.权利要求3的药物组合物，其特征在于该药物组合物按重量计为：橙皮苷提取物2-3份、黄芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量65％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85％，葛根素提取物中葛根素含量10-15％，射干苷提取物中射干苷含量70％。

5.一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物的药效原料按重量计为：含橙皮苷的植物1-4份、黄芩2-8份、含葛根素的植物1-4份、含射干苷的植物1-6份；含橙皮苷的植物选自陈皮、青皮、枳实、枳壳、化橘红、芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮、枸橼成熟果实、芦柑皮和芦柑皮渣中的一种或几种混合物；含葛根素的植物选自野葛和/或葛根，含射干苷的植物选自鸢尾和/或射干。

6.一种治疗呼吸系统感染的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

取药效原料芦柑皮或芦柑皮渣、鸢尾、黄芩、野葛；

用水和/或乙醇作溶剂，加热提取上述药效原料，得提取液；将提取液浓缩后，得浓缩物，向该浓缩物中加入水，滤取沉淀物。

7.权利要求6药物组合物的制备方法，其特征在于：

用50-80％乙醇分别提取上述药效原料，得提取液；分别浓缩提取液后，得到相应浓缩物，分别向这些浓缩物中加水，分别滤取沉淀物，干燥沉淀物，得到粗制的橙皮苷提取物、黄芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物；所述粗制的橙皮苷提取物、黄芩苷提取物和射干苷提取物可用常规加碱溶解、加酸沉淀方法精制；橙皮苷提取物中橙皮苷含量65-90％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85-90％，葛根素提取物中葛根素含量不低于10％，射干苷提取物中射干苷含量70-90％。

8.权利要求7药物组合物的制备方法，其特征在于用60-70％乙醇分别提取上述药效原料；按重量计称取橙皮苷提取物1-4份、黄芩苷提取物2-8份、葛根素提取物1-4份、射干苷提取物1-6份，与药学上可接受辅料或载体混合；橙皮苷提取物中橙皮苷含量65％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85％，葛根素提取物中葛根素含量10-15％，射干苷提取物中射干苷含量70％。

9.权利要求8药物组合物的制备方法，所述

橙皮苷提取物的精制方法是：取粗制的橙皮苷提取物加入含2％NaOH的50％乙醇溶解，过滤，将滤液加盐酸调PH至7左右，静置24h后，滤取沉淀，干燥；

黄芩苷提取物的精制方法是：取粗制的黄芩苷提取物加相当于药材3倍体积的水分散均匀，用40％NaOH调节PH7左右，用加入等体积的95％乙醇搅拌使溶解，静置12h，滤过，滤液用盐酸调节PH2左右，60℃保温60min，静置24h后，滤取沉淀，先用稀乙醇洗涤沉淀，再用水洗涤沉淀至中性，减压干燥；

射干苷提取物的精制方法是：将60-70％乙醇提取液浓缩后，加入水，用盐酸调PH到1～2，静置10小时后，滤取沉淀；于酸水液加入2％NaOH液调到PH至8～9，继续浓缩，浓缩到原体积的1/2，然后加盐酸调PH到1～2，静置10小时后，滤取沉淀；合并两次沉淀物，然后用抽滤漏斗将沉淀抽干，得射干苷的粗提物，向射干苷粗提物中加入无水乙醇，搅拌均匀后，滤取沉淀物，干燥。

10.权利要求8药物组合物的制备方法，其中按重量计称取橙皮苷提取物2-3份、黄芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量65％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85％，葛根素提取物中葛根素含量10-15％，射干苷提取物中射干苷含量70％，与口服制剂辅料混合，制成胶囊剂、分散片、普通片、颗粒剂、口服液。

11.一种治疗呼吸系统感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物的药效原料按重量计为：含橙皮苷的原料1-4份、含黄芩苷的原料2-8份、含葛根素的原料1-4份、含射干苷的原料1-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量65-90％，黄芩苷提取物中黄芩苷含量85-90％，葛根素提取物中葛根素含量不低于10％，射干苷提取物中射干苷含量70-90％；

所述含橙皮苷的原料包括含橙皮苷的植物、橙皮苷提取物或橙皮苷；含橙皮苷的植物选自陈皮、青皮、枳实、枳壳、化橘红、芸香科植物佛手果实、蕉柑果实、枸橘果实、柠檬果实、藜檬果皮、枸橼成熟果实、芦柑皮和芦柑皮渣中的一种或几种混合物；含黄芩苷的原料包括黄芩、黄芩提取物和黄芩苷；含葛根素的原料包括野葛或葛根、葛根素提取物和葛根素；含射干苷的原料包括鸢尾或射干、射干苷提取物和射干苷。