CN110684071B - 一种三萜类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式I所示的一种新的三萜皂苷类化合物在制备镇痛药物中的新用途。本发明将镰扁豆属植物镰扁豆根晾干粉碎，粉碎后以95％乙醇分次回流提取，合并提取液，过滤，减压浓缩提取液得浸膏，将浸膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇进行萃取。将所获得的乙酸乙酯萃取液减压浓缩成浸膏，浸膏用硅胶柱层析分离，然后采用葡聚糖凝胶色谱(Sephedex LH‑20)进一步分离，即可获得所需化合物。采用小鼠醋酸扭体法对式I化合物进行镇痛活性测试，实验结果显示式I化合物对小鼠扭体反应有较好的抑制作用和较好的镇痛作用，可用其作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物或药物组合物。

Description

一种三萜类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种新的三萜类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

疼痛作为临床最常见的症状之一，已被列为继呼吸、脉搏、血压、体温之后的第五大生命体征。按照病程长短，疼痛被分为急性疼痛和慢性疼痛。目前，慢性疼痛已成为危害我国人民健康的主要疾病之一，我国慢性疼痛患者已超过3亿人，且每年以1000万人至2000万人的速度增加。更为严重的是，近年来疼痛患者人群逐步呈年轻化，主要病源集中为颈椎病、腰椎病、肩周炎、三叉神经痛等。据西南医院调查结果显示，1000多疼痛患者中，98％有过疼痛难忍经历，84％有过无法入睡经历，其中年轻白领占四分之一。由此可见，疼痛不仅是严重的健康难题，也是社会问题，造成了高昂的经济负担和社会成本。

目前在用于治疗疼痛的众多药物中，非甾体抗炎药(NSAIDs)和麻醉性镇痛药是治疗或缓解多种疼痛的首选药物，如阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸等抗炎药以及吗啡、曲马多、杜冷丁等中枢镇痛药。在临床中，该两类药物往往根据患者病情配合使用，针对临床中出现的大多数疼痛如头痛、牙痛、神经痛、关节痛、癌痛以及术后痛等均能取得较好的治疗效果。相较于麻醉性镇痛药，非甾体抗炎药的应用则更为普遍和广泛，自从阿司匹林问世以来，在随后的近一个世纪里，非甾体抗炎药已开发出百余品种，包括乙酰水杨酸类、吡唑酮类、乙酸类、双氯芬酸类、昔康类、乙酰苯胺类等，广泛用于治疗包括骨关节炎、类风湿关节炎等风湿性疾病以及多种以炎症性疼痛为主要症状的疾病，疗效显著，是全球使用频率最高的药物之一。然而，该类药物在发挥抗炎镇痛作用的同时，存在较严重的不良反应，多次或长期应用时对机体产生危害。尽管NSAIDs不断推陈出新，但其不良反应问题仍为困扰临床应用的主要障碍，近年来受到高度的重视。其不良反应主要为胃肠道损伤、上腹疼痛、恶心、消化不良、食管炎以及结肠炎、血液系统损害以及肝、肾损伤。由此可见，作为镇痛抗炎的一线用药，NSAIDs的不良反应以及副作用问题较为突出，因此，这类药物在临床长期使用时，需进行相关不良反应监测以保证其临床使用的安全性。虽然阿片类药物是目前发现的镇痛效果最强的一类药物，可用于各种中、重度疼痛，但该类药易产生较严重的不良反应，如呼吸抑制、咳嗽抑制、剂量依赖、成瘾性、恶心、呕吐、缩瞳、便秘等。此外，因其为麻醉类药品，成瘾性强，连续或不合理应用会产生身体及精神依赖性，所以阿片类药物在应用时受到严格的限制及管制，一般不建议作为临床镇痛的首选药物。因此，从天然药物中探索及寻找疗效好且不良反应小的新型镇痛药是非常有必要的。

发明内容

为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种新的三萜类化合物及其在治疗疼痛中的用途、用于治疗疼痛的药物或药物组合物及其制备方法以及用于治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛的病症。

具体而言，本发明提供：

(1)本发明的目的在于提供一种新的三萜类化合物，本发明的新的三萜类化合物具有式I所示的结构式：

式I化合物命名为：3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯(3-O-β-D-glucopyranosyl-28-methyl-medicagenate)

(2)本发明还提供一种式I化合物的提取方法，包括如下步骤：

(a)将镰扁豆属植物晾干粉碎后用溶剂提取，合并提取液；

(b)减压浓缩(a)中的提取液得浸膏；

(c)将(b)中的浸膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇进行萃取，再用旋转蒸发仪蒸去溶剂，分别得石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取物；

(d)将(c)中的乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析分离，然后依次采用葡聚糖凝胶柱层析和硅胶柱层析进一步分离，即可获得所需化合物。

(3)根据(2)所述式I化合物的制备方法，其特征在于，步骤(a)取镰扁豆属植物6-10倍重量的溶剂提取1～3小时，提取1～3次，合并滤液即得到镰扁豆属药材提取物溶液；

(4)根据(2)所述式I化合物的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述镰扁豆属植物为镰扁豆或丽江镰扁豆或滇南镰扁豆；

(5)根据(2)所述式I化合物的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述溶剂为50～95体积％的乙醇/水、50～95体积％的甲醇/水、或50-90体积％的丙酮/水；

(6)根据(2)所述式I化合物的制备方法，其特征在于，步骤(d)中的葡聚糖凝胶为Sephedex LH-20；

(7)根据(1)所述式I的化合物在制备镇痛药物中的应用：所述式I化合物作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物或药物组合物；

(8)根据(1)-(7)中任一项所述的用途，其特征在于，所述镇痛为治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛。

(9)根据(1)-(8)中任一项所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物选自片剂、胶囊、丸剂、注射剂，所述的药物组合物选自缓释制剂或控释制剂。

(10)根据(1)-(9)中任一项所述的用途，其中所述的药学上可接受的载体或辅料包括口服制剂辅料、胃肠外途径给药或外用给药的辅料，给药途径可以是口服、注射、外用局部给药等；给药剂型可以是液体剂型、固体剂型，液体剂型形式可以是糖浆剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳剂，固体剂型形式可以是片剂、锭剂、胶囊、滴丸、丸剂、粒剂、粉剂、霜剂、溶液剂、栓剂、可分散粉剂如冻干粉针剂、气雾剂等；所用辅料包括：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸钠、淀粉、环糊精、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素钠、硫酸钙、水、乙醇、丙醇、甘油、丙二醇、异丙醇、糖浆、蜂蜜、葡萄糖、明胶浆、羧甲基纤维素钠、磷酸钾、干燥淀粉、琼脂粉、碳酸钙、碳酸氢钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油、季铵盐、滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡。

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

有益效果

1、本发明中的式I化合物对小鼠醋酸扭体反应展现出较好的抑制作用，提示其具有良好的镇痛活性，可以作为镇痛活性成分或先导化合物，有着很好的应用前景。

2.本发明中的式I化合物的制备方法中可采用的镰扁豆属植物，特别是镰扁豆和丽江镰扁豆在国内分布广泛，资源丰富，原料来源简单；而且本发明中的式I化合物在镰扁豆属植物，尤其是镰扁豆和丽江镰扁豆中含量较高，容易得到。

3.本发明中的式I化合物的制备方法中可采用常规柱层析制备方法，化合物制备操作流程简单，所获得的化合物纯度高，随后的工业化生产很容易实现。

附图说明

图1为本发明中所述的式I化合物的活性追踪分离流程图；

图2为本发明中所述的式I化合物的结构式；

图3是本发明中式I化合物高分辨质谱(HRESI-MS)；

图4是本发明中式I化合物的核磁共振氢谱(¹H NMR)；

图5是本发明中式I化合物的核磁共振碳谱(¹³C NMR)；

图6是本发明中式I化合物的DEPT谱；

图7是本发明中式I化合物的COSY相关谱；

图8是本发明中式I化合物的HSQC相关谱；

图9是本发明中式I化合物的HMBC相关谱；

图10是3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯对小鼠扭体反应抑制作用的图。图中所示为至少3个重复样平均值和标准方差；

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述并参照附图对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

本发明中的式I化合物可以是天然存在的化合物，也可以是人工合成的化合物。

本发明所述的一种新的三萜类化合物，是以豆科镰扁豆属植物镰扁豆的根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析分离得到的，该化合物分子式为C₃₇H₅₈O₁₁，命名为3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯(3-O-β-D-glucopyranosyl-28-methyl-medicagenate)，具有下述结构式：

豆科镰扁豆属植物60种，我国有5种，产东南部至西南部，云南尤盛。在镰扁豆属植物中，镰扁豆(Dolichos trilobus L.)、丽江镰扁豆(Dolichos appendiculatus Hand.-Mazz)、滇南镰扁豆(Dolichos junghuhnianus Benth.)等属于多民族使用的单方镇痛用药，其功效有多种民族医药文献记载。该属植物主要用于治疗风湿疼痛、跌打损伤、咽喉痛、胃痛、疮疡肿痛及外伤出血。其中，镰扁豆别名为大麻药、大豆荚、麻里麻、麻三段及豆叶百步还阳，具有祛风通络，止痛止血之功效(贾敏如,李星炜.中国民族药志要(第一册).北京：中国医药科技出版社.2005,11.)，是著名彝药云南红药胶囊、虎杖伤痛酊等的主要成分之一。有关镰扁豆的药理学研究报道主要涉及其抗炎镇痛、抗癌、利尿、抗痛风等生理活性，并认为皂苷成分是其主要抗癌活性成分(Wei H.,Hu C.,Xie J.,et al.Dotirosideattenuates monosodium urate crystals-induced inflammation by targetingNLRP3inflammasome[J].Eur.J.Pharmacol.2014,740:321-328；Chen L.,Mola M.,DengX.,et al.Dolichos falcata Klein attenuated the inflammation induced bymonosodium urate crystals in vivo and in vitro[J].J.Ethnopharmacol.2013,150(2):545.)。尽管文献报道镰扁豆具有镇痛作用，但尚未见有关单体成分的镇痛活性报道，作用机制也尚未明确(黄厚聘,黄能惠,李淑芳.大麻药皂苷的镇痛作用.药学通报.1982,17(2):58.)。本发明试图对镰扁豆属植物中具有镇痛作用的化合物做深入研究，以期发现其中的镇痛活性天然产物，为筛选高效、低毒的镇痛药物提供依据。

本发明人发现镰扁豆属植物(如镰扁豆和丽江镰扁豆)的溶剂(如乙醇溶液)提取物具有较好的镇痛活性，并在生物活性测试指导下对提取物进行化学成分研究，从中获得了一种具有式I结构的活性成分，所述的式I化合物对小鼠扭体反应有较好的抑制作用。所述的式I化合物在制备镇痛药物中的应用，其特征在于，所述镇痛药物或药物组合物为治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛。

本发明人采用目前国内外公认的小鼠醋酸扭体法，对本发明所述的式I化合物进行镇痛活性测试，并计算了式I化合物对小鼠扭体反应抑制的半数有效剂量(IC₅₀)。计算结果表明式I化合物对小鼠醋酸扭体反应抑制的半数有效剂量测定结果为6.09mg/kg。上述结果表明式I化合物显示出较好的镇痛作用，其镇痛作用是阳性对照阿司匹林(IC₅₀为194.17mg/kg)的31.88倍。

本发明还提供上述式I化合物的制备方法，该方法包括从镰扁豆属植物(如如镰扁豆和丽江镰扁豆)中制备所述化合物。优选的是，从镰扁豆属植物镰扁豆的根、茎、叶、果实中制备式I化合物。优选的是，所述方法具有下述步骤：

(1)将镰扁豆晾干粉碎后用溶剂提取，合并提取液；

(2)减压浓缩(1)中的提取液得浸膏；

(3)将(2)中的浸膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇进行萃取，再用旋转蒸发仪蒸去溶剂，分别得石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取物；

(4)将(3)中的乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析分离，用氯仿–甲醇(体积比20:1～0:1)梯度洗脱得到8个组分(Fr.1～8)。

(5)将(4)中的Fr.2经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇)纯化，然后通过硅胶柱色谱，以氯仿–甲醇(体积比20:1～0:1)洗脱，得到组分Fr.2-1～6。Fr.2-4经硅胶柱色谱，以氯仿–甲醇(体积比10:1)洗脱，得到3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-单甲酯。

在步骤(1)中，所述的溶剂可用体积百分比为70％～95％的乙醇/水、或70％～95％的甲醇/水、或50％～90％的丙酮/水，溶剂用量为镰扁豆6-10倍重量，回流提取时间为每次2小时，回流提取重复3次，合并滤液即得到镰扁豆属药材提取物溶液。

优选地，步骤(5)中的葡聚糖凝胶为Sephedex LH-20。

本发明还提供3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-单甲酯在制备镇痛药物或药物组合物中的应用：所述的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-单甲酯作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物或药物组合物。

本发明所述的镇痛药物或药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可以为肠道、或非肠道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔黏膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠、静脉内、肌内、硬膜外、眼内、颅内、阴道给药等；

本发明所述的镇痛药物或药物组合物的给药途径可以为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、穴位注射、鞘内注射和腹膜注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型的溶液性质可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳剂；固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸、丸剂、粒剂、粉剂、霜剂、溶液剂、栓剂、可分散粉剂如冻干粉针剂、气雾剂等。

本发明所述的镇痛药物或药物组合物可以制成普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

本发明所述的药学上可接受的载体或辅料包括口服制剂辅料、胃肠外途径给药或外用给药的辅料。所用辅料包括，赋形剂如乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸钠；稀释剂与吸收剂如淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素钠、硫酸钙等；湿润剂与粘合剂如水、乙醇、丙醇、甘油、丙二醇、异丙醇、糖浆、蜂蜜、葡萄糖、明胶浆、羧甲基纤维素钠、磷酸钾等；崩解剂如干燥淀粉、琼脂粉、碳酸钙、碳酸氢钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素等；崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡等。还可以将片剂进一步制备成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片，以延迟其在胃肠道中的崩解和吸收，并由此提供在较长时间内的持续作用。

为了更好的理解本发明，以下通过具体实施例进一步解释或说明本发明内容，但这些例子不应被理解为对本发明保护范围的限制。

具体实施例

通过以下给出的具体实施例和典型应用实施例，可以进一步清楚地了解本发明。但这并非是对本发明保护范围的限制。

实施例1

镰扁豆属植物提取物对小鼠醋酸扭体反应的抑制活性

材料来源：所属镰扁豆属植物镰扁豆、丽江镰扁豆及滇南镰扁豆；分别采于云南昆明、丽江及蒙自，经云南民族大学民族医药学院杨青松副教授依次鉴定为Dolichostrilobus L.，D.appendiculatus Hand.-Mazz，及D.junghuhnianus Benth.。标本保存于云南民族大学民族医药学院标本馆。

镰扁豆提取物的制备：将干燥的镰扁豆的根粉碎，得镰扁豆的根碎块；然后将镰扁豆的碎块用95体积％乙醇/水回流提取3次，每次2小时得提取液；将镰扁豆提取液分别过滤并用旋转蒸发仪减压浓缩成浸膏备用。

采用小鼠醋酸扭体反应抑制的实验模型(可参见科技文献：Hayashi G.,TakemoriA.E.The type of analgesic-receptor interaction involved in certain analgesicassays.Eur.J.Pharmacol.1971,16:63-66.)测试了镰扁豆提取物抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。取雌性健康小鼠60只，体重18～22g，随机分为6组，每组10只。各组依次为：阴性对照组(0.9％氯化钠溶液)，阳性1对照组(吲哚美辛，10mg/kg)，阳性2对照组(阿司匹林，200mg/kg)，镰扁豆高、中、低剂量组(800mg/kg，400mg/kg，200mg/kg)，给药后30min，各鼠注射0.6％醋酸溶液0.2ml。观察并记录注射醋酸溶液后15min内的扭体次数。比较不同组别受试小鼠的扭体次数的差异，并计算药物对扭体反应的抑制率。

抑制率＝(对照组平均扭体次数－给药组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100％)。

结果表明上述浓度下，镰扁豆提取物有显著抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。结果见表1。

表1.镰扁豆提取物对小鼠醋酸扭体反应的抑制作用。

n＝3

实施例2

用镰扁豆进一步试验

分别用体积百分比为95％的甲醇/水、70％的乙醇/水和70％的丙酮/水作提取溶剂，重复实施例1。实验结果表明用95％的甲醇/水、70％的乙醇/水和70％的丙酮/水作提取溶剂分别所获得的镰扁豆95％甲醇提取物、镰扁豆70％乙醇提取物以及70％丙酮/水的提取物同样对小鼠醋酸扭体反应具有显著的抑制活性，因此用不同浓度的乙醇/水、甲醇/水或丙酮/水作提取溶剂同样可以获得镰扁豆中的对小鼠醋酸扭体反应有抑制作用的成分。结果见表2。

表2.镰扁豆不同溶剂提取物对小鼠醋酸扭体反应的抑制作用。

n＝3

实施例3

从镰扁豆根中分离鉴定镇痛活性化合物

(1)将10Kg镰扁豆根晾干粉碎成粒径0.1cm大小的颗粒，得镰扁豆粉，将镰扁豆粉在70～74℃的温度下每次用60Kg 95％浓度的乙醇回流提取4次，每次2小时，合并甲醇提取液，备用；

(2)将步骤(1)制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50℃的温度下用旋转蒸发仪进行减压浓缩，至比重为1.2时，得浸膏1187g，备用；

(3)将(2)中的1187g浸膏混悬于4500ml水中，依次用4500ml石油醚、4500ml乙酸乙酯以及4500ml正丁醇进行萃取，每种溶剂萃取5次，再用旋转蒸发仪蒸去溶剂，分别得石油醚萃取物(178g)、乙酸乙酯萃取物(236g)以及正丁醇萃取物(449g)；

(4)将(3)中制得的乙酸乙酯萃取物经100-200目硅胶柱色谱，用体积比20:1、15:1、10:1、8:1、5:1、3:1、2:1、0:1的氯仿-甲醇梯度洗脱得到Fr.1-Fr.8共8个组分，Fr.1为19.7g，Fr.2为30.2g，Fr.3为28.8g，Fr.4为24.7g，Fr.5为39.6g，Fr.6为15.2g，Fr.7为8.9g，Fr.8为13.2g。取Fr.2(29.0g)经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇)纯化后，再经200-300目硅胶柱色谱，用体积比20:1、17:1、15:1、10:1、7:1、0:1的氯仿-甲醇梯度洗脱得到Fr.2-1-6共6个组分，Fr.2-1为7.6g，Fr.2-2为5.1g，Fr.2-3为4.9g，Fr.2-4为4.3g，Fr.2-5为0.5g，Fr.2-6为0.8g。Fr.2-4(4.3g)经200-300目硅胶柱色谱，以氯仿–甲醇(体积比10:1)洗脱，得到3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯(1.3g)。所述的式I化合物的活性追踪分离流程图见图1。

实施例4

实施例3所得到的白色无定型粉末的结构鉴定

所述白色无定型粉末(溶剂为甲醇)，IR(KBr)谱在3400,1680,1540,1356,1065,1004cm^-1有吸收，表明分子中存在羧基、羟基和双键。HRESI-MS(附图3)显示其准分子离子峰m/z 701.3502(calcd.for C₃₇H₅₈O₁₁Na⁺:701.3877)，结合NMR谱确定其分子式为C₃₇H₅₈O₁₁，不饱和度为9。¹H NMR(附图4)显示分子中有7个甲基单峰，分别为δ_H 3.68(3H,s),1.41(3H,s),1.26(3H,s),1.15(3H,s),0.93(3H,s),0.90(3H,s)及0.80(3H,s)，有1个三取代双键信号(δ5.25(1H,brs))，有1个葡萄糖信号(4.23(1H,d,J＝8.0Hz,H-1'),3.79(1H,dd,J＝12.0,2.4Hz,H-6′),3.67(1H,dd,J＝12.0,4.8Hz,H-6′),3.34(1H,m,H-3′),3.33(1H,m,H-4′),3.23(1H,m,H-5′),3.15(1H,m,H-2′)),除此之外还有2个连氧碳(4.31(1H,m,H-2),4.03(1H,d,J＝3.6Hz,H-3))；¹³C NMR(附图5)显示分子中有37个碳，其中有9个季碳(含2个羧基碳和1个烯碳)，11个次甲基(含1个烯碳,7个连氧碳)，10个亚甲基(含1个连氧碳)及7个甲基(含1个甲氧基)。结合DEPT和HSQC相关谱(附图6和8)，并对比文献数据可证实，该化合物与已知的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-23,28-二甲酯(medicagenic acid-3-O-β-D-glucoside dimethyl ester)结构相似，区别在于分子中的C-23位少了1个甲氧基。在HMBC谱(附图9)中可看到C₂₈-OCH₃(δ_H 3.68)上的氢质子和C-28(δ_C 179.8)有相关。同时，在NOSY谱中没有出现甲氧基上的氢质子(δ_H 3.68)和H-24(δ_H 1.41)相关，进一步证明式Ⅰ化合物中的甲氧基连接在C-28位上。进一步经HMBC相关(附图9)、COSY相关(附图7)及与文献(AhmadV.U.,Ahmed W.,Usmanghani K.Triterpenoid saponins from leaves ofCastanospermum australe[J].Phytochemistry.1992,31(8):2805-2807.)对比证实，使化合物的结构最终得到确认，化合物具有式Ⅰ(如附图2)结构式。通过SCIFINDER数据库检索和文献查询证实该化合物为新化合物。

化合物1的理化数据：化合物(3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯)为白色无定型粉末(甲醇)，ESI-MS m/z:701[M+Na]⁺，分子式：C₃₇H₅₈O₁₁。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ_H:5.25(1H,brs,H-12),4.23(1H,d,J＝8.0Hz,H-1'),4.31(1H,m,H-2),4.03(1H,d,J＝3.6Hz,H-3),3.79(1H,dd,J＝12.0,2.4Hz,H-6′),3.68(3H,s,28-COOCH₃),3.67(1H,dd,J＝12.0,4.8Hz,H-6′),3.34(1H,m,H-3′),3.33(1H,m,H-4′),3.23(1H,m,H-5′),3.16(1H,m,H-2′),2.84(1H,dd,J＝14.0,4.4Hz,H-18),1.57(1H,m,H-5),1.59(1H,m,H-9),1.68(1H,m,H-19a),1.11(1H,m,H-19b),2.08(1H,dd,J＝14.4,2.8Hz,H-1a),1.24(1H,m,H-1b),1.21(2H,m,H-21),1.51(1H,m,H-7a),1.25(1H,m,H-7b),1.74(1H,m,H-15a),1.15(1H,m,H-15b),1.96(2H,m,H-11),0.97(2H,m,H-6),1.41(3H,s,H-24),1.26(3H,s,H-25),1.15(3H,s,H-27),0.93(3H,s,H-30),0.90(3H,s,H-29),0.80(3H,s,H-26)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ_C:44.4(C-1),70.9(C-2),86.4(C-3),53.7(C-4),53.1(C-5),21.6(C-6),33.6(C-7),40.7(C-8),49.2(C-9),37.3(C-10),24.4(C-11),123.3(C-12),145.0(C-13),42.8(C-14),28.5(C-15),24.4(C-16),47.4(C-17),42.5(C-18),47.0(C-19),31.4(C-20),34.7(C-21),33.6(C-22),179.8(C-23),13.4(C-24),16.9(C-25),17.4(C-26),26.2(C-27),179.8(C-28),33.4(C-29),23.8(C-30),52.6(28-COOCH₃),105.2(C-1'),74.7(C-2'),77.5(C-3)',70.9(C-4'),77.7(c-5'),62.0(C-6').

实施例5

所述式I化合物的镇痛活性检测

采用小鼠醋酸扭体反应抑制的实验模型(可参见科技文献：Hayashi G.,TakemoriA.E.The type of analgesic-receptor interaction involved in certain analgesicassays.Eur.J.Pharmacol.1971,16:63-66.)测试了式I化合物抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。按实验需要数量取雌性健康昆明小鼠，体重18～22g，随机分组，每组10只。各组依次为：阴性对照组(0.9％氯化钠溶液)，样品组(3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯的剂量分别为20.00mg/kg、10.00mg/kg、5.00mg/kg、2.50mg/kg、1.25mg/kg)，阳性对照组(阿司匹林的剂量分别为400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg)，给药后30min，各鼠注射0.6％醋酸溶液0.2ml。观察并记录注射醋酸溶液后15min内的扭体次数。比较不同组别受试小鼠的扭体次数的差异，并计算药物对扭体反应的抑制率。

抑制率＝(对照组平均扭体次数－给药组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100％)。

计算半数有效剂量(IC₅₀)，阿司匹林对小鼠醋酸扭体反应抑制的半数有效剂量测定结果为194.17mg/kg，3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯对小鼠醋酸扭体反应抑制的半数有效剂量测定结果为6.09mg/kg，表明本发明的化合物及其盐具有较好的镇痛活性。

实施例6

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯，加入片剂常用辅料，按常规制备工艺制备成片剂。

实施例7

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯，加入注射剂常用辅料，按常规制备工艺制备成注射剂。

实施例8

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯，加入胶囊剂常用辅料，按常规制备工艺制备成胶囊剂。

实施例9

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-苜蓿酸-28-甲酯，加入巴布剂常用辅料，按常规制备工艺制备成巴布剂。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.式I的化合物在制备镇痛药物中的用途，其特征在于，所述式I的化合物作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物或药物组合物，式(I)的结构如下：

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述镇痛为治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物选自片剂、胶囊、丸剂或注射剂。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物选自缓释制剂或控释制剂。

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