CN1686148A - 脂溶性芪苷类化合物在作为治疗缺血性心脑血管疾病的用途及其制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一类具有治疗缺血性心脑血管疾病的脂溶性芪苷类化合物的用途，即具有改善脑梗塞、心肌梗塞后心脑血管循环，扩张心脑血管，增加心脑血流量，同时可有效改善微循环，减轻脑梗塞、心肌梗塞后的缺血再灌注损伤功效的物质药物、制剂及其生产方法。本发明公开了主要是从蓼科植物中分离提取的脂溶性芪苷类化合物，本发明涉及的脂溶性芪类化合物，最佳为具有上述结构，该化合物(俗称去氧土大黄苷，研究中曾用代号PHS2、QHQ)具有很好的稳定性、生物利用度、及具有很好的改善或治疗缺血性疾病的用途。
Description
技术领域：本发明涉及一类具有治疗缺血性心脑血管疾病的脂溶性芪苷类化合物药物、制剂及其生产方法。本发明公开了具有改善脑梗塞、心肌梗塞后心脑血管循环，扩张心脑血管，增加心脑血流量，同时可有效改善微循环，减轻脑梗塞、心肌梗塞后的缺血再灌注损伤功效的物质，主要是从蓼科植物中分离提取的脂溶性芪苷类化合物。
背景技术：心脑血管疾病是全世界致死人数最多的常见病之一，我国大约有3000万患者，每年死亡人数达200万。心血管疾病均与血液的流变性异常有关，主要表现有血浆蛋白、血脂浓度增高，血液粘度增加，血细胞、血小板聚集性增加，血液凝固性增加等。种种异常将使体内血液运行不畅，易致血栓形成，血管栓塞，近而导致脑梗塞、心肌梗塞、冠心病、心绞痛等病症，现有的治疗方法中，主要采取溶栓疗法，但在血栓溶散，恢复组织器官血流的同时，将会不同程度的发生再灌注损伤，可导致更为严重的后果，而现有治疗心脑血管疾病的药物均不能较好的解决溶栓同时产生的再灌注损伤，因而疗效并不十分理想。
从中药中提取的虎杖苷，白藜芦醇等芪类化合物，具有能改善微循环、扩张毛细血管、清除自由基，活血化瘀等多种功效，这些综合的作用使得该类物质能较好的解决目前在治疗心脑血管疾病药物的不足，具有良好的开发前景。目前，提取或生产白藜芦醇、虎杖苷的工艺技术比较成熟，药理活性报道及申请专利较多，而其它多种类似衍生物如去氧土大黄苷等，由于样品稀少、制备和生产困难，未检索到药理活性和用途的相关报道、专利。
芪类化合物(Stilbenoids)系指具有1，2-二苯乙烯为骨架的化合物及其聚合物的总称。该类化合物的单体，早年已被发现，并观察到它们的抗菌和抗真菌活性。但未形成一类具有重要生理活性的天然产物。此后发现该类化合物有多种生物活性，如降血脂、保肝、扩张毛细血管等方面的作用。由于分离技术的不断完善、合成技术的提高，新的芪类化合物不断被发现，又因新的药理模型、新的药物作用靶点的不断更新，用少量的化合物进行实验即能观察到多方面的生理活性，使得该类化合物的药物化学进展很快。有的已搞清了药理机制和作用途径，有的已成为抗肿瘤、抗病毒的先导物，有的正进入预临床观察阶段。总之，芪类化合物的生物活性愈来愈引起人们浓厚的兴趣，其中专利也很多，与本发明较为密切的专利为：首都医科大学申请“二苯乙烯苷在制备治疗缺血性脑血管疾病的药物的用途”(专利申请号为：01134283.8)、“二苯烯甙在治疗痴呆中的用途”(专利申请号为：01134284.6)等。这些申请都基本针对某一种结构类型，即不带甲基的水溶性化合物。这些化合物作为药用有以下缺点：①分离纯化比较困难，较高纯度产品生产成本高；②化合物带羟基较多、易氧化、产品不稳定；③水溶性大、药物生物利用度较差等。这也是该类化合物这么多年没有形成一个产品的主要原因。
发明内容：本发明的目的在于发明和开发一种脂溶性芪苷类化合物在制备治疗缺血性心脑血管疾病的应用及其制剂，对缺血性心脑血管疾病具有治疗保护的作用。根据本发明之目的，所提供的脂溶性芪苷类成分如去氧土大黄苷等来源于植物，可从蓼科植物中大量提取生产。
本发明者经过大量的基础研究，发现带有甲基的芪苷类成分具(如去氧土大黄苷等)有较好[去氧土大黄苷]
的脂溶性，其具有分离较易、稳定性较高的优点，经过药理研究发现其活性很强，发明一系列以此为基础的制剂产品。
发明者经过长期的植物学研究、植物化学研究、稳定性考察，并经过药理、毒理等研究，在制备大量样品后，进行了药学研究，制备了各种制剂。
本发明脂溶性芪苷类化合物在制备治疗缺血性心脑血管疾病的应用涉及下述结构的脂溶性芪苷类化合物：
R1、R2、R3、R4不同时为OH
该类脂溶性芪苷类化合物作为改善或治疗缺血性心脑血管疾病，改善脑梗塞、心肌梗塞后心脑血管循环、扩张心脑血管，增加心脑血流量，清除自由基，改善微循环，减轻脑梗塞、心肌梗塞后缺血再灌注损伤的的用途。
本发明涉及的脂溶性芪苷类化合物，最佳为具有下述结构：
该化合物(俗称去氧土大黄苷，研究中曾用代号PHS2、QHQ)具有很好的稳定性、生物利用度、及具有很好的改善或治疗缺血性疾病的用途。
所述的脂溶性芪苷类化合物可以使用《药品注册管理办法》上所称的有效部位，其组成含总芪类化合物在45％～98％。在有效部位(总芪类化合物)中某一种主要脂溶性芪苷类化合物(如去氧土大黄苷)含量在54％～99％。
根据需要最终脂溶性芪苷类化合物制剂产品，可制成各种医疗上可接受的制剂，用于治疗缺血性心脑血管疾病的保健食品或药物。
去氧土大黄甙为虎杖甙、白藜芦醇的衍生物。大量研究表明，虎杖甙及白藜芦醇具有改善微循环、扩张毛细血管、抗氧化，活血化瘀等多种功效，发明人新近通过药理实验发现，本公开中的脂溶性芪苷类化合物对心脑缺血具有更显著治疗保护作用，以下实施例将详细说明本发明。
具体实施方式：实施例1：脂溶性芪苷化合物的提取与结构鉴定：
取波叶组大黄植物，加10倍量乙醇回流提取三次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩，加入1倍体积的水于浓缩提物中，以6倍量乙酸乙酯分三次萃取(每次体积分别为3，2，1倍量)。减压浓缩得乙酸乙酯部分，经大孔树酯柱层析(D101)，收集75％乙醇洗脱部分，减压浓缩除去溶剂使浓缩后体积为原体积的1/3，冷藏24小时，过滤或离心(3000r/m，5min)得到白色沉淀即为粗品，粗品经丙酮重结晶即得成品。成品根据要求不同，可得有效部位(总芪类)含量在45％～98％，其中某一主要成分(如去氧土大黄苷)含量在54％～99％。
成品氯仿溶解，上硅胶柱层析(60-100目)，氯仿∶甲醇(V/V，85/15)洗脱部分减压浓缩即得PHS2粗品，丙酮重结晶得PHS2纯品；氯仿：甲醇(V/V，70/30)洗脱部分减压浓缩得PHS1粗品，丙酮/水重结晶即得PHS1纯品。
结构鉴定：化合物PHS1，无色针晶，mp.245-248℃，紫外灯下呈蓝紫色荧光。EI-MS(m/z)：420[M]+，258[M-glc.]+，1H NMR(acetone-d6)δppm：7.41(1H，d，J＝2.0Hz)，7.14(1H，m)，7.05(1H，d，J＝16.0Hz)，6.88(1H，d，J＝16.0 Hz)，6.45(2H，m)，6.20(1H，t，J＝2 Hz)，5.03(1H，d，anomeric H)，3.79(3H，s，OCH3)，3.2-3.9(4H，m，sugar-H)；13C NMR(acetone-d6)δppm：139.5(C-1)，104.6(C-2)，159.2(C-3)，103.7(C-4)，159.2(C-5)，105.2(C-6)，129.9(C-1′)，113.0(C-2′)，146.7(C-3′)，148.9(C-4′)，112.3(C-5′)，121.1(C-6′)，127.4(C-α)，129.1(C-β)，55.6(-OCH3)，101.1(C-1″)，74.7(C-2″)，77.3(C-3″)，70.5(C-4″)，77.1(C-5″)，61.7(C-6″).MS，1H NMR和13C NMR数据与文献(YoshikiKashiwada et al.Chem.Pharm.Bull.1984，32(9)：3501-3517)报道一致，化合物PHS1鉴定为3，3′，5-trihydroxy-4′-methoxystilbene-3′-O-glucopyranoside。
化合物PHS2，白色针晶(甲醇)，mp.225-227℃。紫外灯下呈蓝紫色荧光。negative FAB MS[m/z]：403[M-H]-，227[M+H-C6H11O6]-；1H NMR(acetone-d6)δppm：7.50(d，J＝8.0 Hz)，7.11(s，J＝16.3 Hz)，6.94(s，J＝16.3 Hz)，6.93(d，J＝8.0 Hz)，6.80(s)，6.67(s)，6.48(s)，4.83(1H，d，anomeric H)，3.76(3H，s，OCH3)，3.2-3.9(4H，m，sugar-H)；13C NMR(acetone-d6)δppm：140.7(C-1)，106.6(C-2)，160.2(C-3)，103.9(C-4)，159.5(C-5)，108.2(C-6)，130.9(C-1′)，128.9(C-2′，6′)，114.9(C-3′，5′)，160.5(C-4′)，126.4(C-α)，130.9(C-β)，55.6(-OCH3)，102.1(C-1″)，74.7(C-2″)，77.8(C-3″)，71.5(C-4″)，78.1(C-5″)，62.7(C-6″).MS，1H NMR和13C NMR数据与文献(Yoshiki Kashiwada et al．Chem.Pharm.Bull.1984，32(9)：3501-3517)报道一致，化合物PHS 2鉴定为3，5-dihydroxy-4′-methoxystilbene-3-O-glucopyranoside(desoxyrhaponticin，去氧土大黄苷)。
实施例2：含有脂溶性芪苷类化合物颗粒制剂产品
配方：脂溶性芪苷类(含量45％) 200g
蔗糖 2800g
糊精 350g
乙醇 适量
制备方法：处方量药物和辅料，打粗粉过10～20目，按普通制粒法制粒，分装成1000袋。每次食用一袋，每日1～2次。
实施例3：含有脂溶性芪苷化合物制剂滴丸产品
配方：QHQ 26g
PEG1200 700g
按普通滴丸剂制备方法制备，每粒含QHQ2mg。
实施例4：含有脂溶性芪苷类化合物制剂产品——QHQ冻干粉针
配方：QHQ 10g
大豆磷脂 8g
甘露醇 200g
制备工艺：在1万级的条件下，将合格的药物和辅料一起溶于注射用水中，经脱色等处理后，加入注射用水稀释至所2000ml。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入分装机，按每支2ml分装，盖上带槽的盖子，送入冷冻真空干燥机，快速冷至35℃~40℃，2~3小时，逐步缓慢升温至35℃~45℃(约需10小时)。塞紧盖子，取出制品，扎盖、包装、检验、合格的药用粉针成品(1000支10mg之规格的冻干粉针)。
实施例5：含有脂溶性芪苷化合物制剂口服液产品
配方：脂溶性芪苷(含量98％) 48g
蜂蜜 1000g
蒸馏水 加至10kg
制备方法：取处方量药物和辅料，按普通口服液制备方法制备，可得1000支的口服液。
实施例6、脂溶性芪苷八种氨基酸输液(1000ml)：
配方：脂溶性芪苷(含总芪苷＞88％)： 4g
L-赖氨酸醋酸盐 4.50g
L-异亮氨酸 3.81g
L-亮氨酸 5.03g
L-甲硫氨酸 2.34g
L-苯丙氨酸 5.65g
L-苏氨酸 2.78g
L-色氨酸 1.0g
L-缬氨酸 3.96g
甘露醇 30g
制备工艺：在1万级和氮气保护的条件下，先将微量的L-色氨酸溶于注射用水～20ml，并注意使其完全溶解，待用；将其他氨基酸溶于适量注射用水～400ml，加入上述溶好的色氨酸液，加入甘露醇并用注射用水稀释至所需体积～800ml，加入抗氧剂，加入脂溶性芪苷，搅拌溶解，调节等渗，补加注射用水至最终所需体积1000ml。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入分装机，按每瓶所需50ml分装，盖上丁基橡胶盖子，制剂预热，在于121℃灭菌(15分钟)。或用旋转灭菌器灭菌，冲热水逐渐冷却。阴凉处保存。包装、检验、合格得成品。可制得20瓶50ml规格的脂溶性芪苷氨基酸输液成品。
实施例7、含有脂溶性芪苷化合物制剂软胶囊(1000粒)：
处方：脂溶性芪苷(含总芪＞62％)： 29g
羟苯乙酯 2g
香兰素 1g
松子油 400g
制备工艺：药物及辅料用气流粉碎或球磨粉碎等超细化处理，达到粒径小于40μm，将超细化的药物加入溶剂基质中，充分搅拌、溶解、过滤、脱气，送至填充机上方的罐内，待用；同时准备好软胶囊充填机上方保温明胶罐中的胶皮用的明胶溶液，待用；在1万级、21℃～25℃、RH％：39～41％的条件下，开动旋转模压机压丸，把制成的软胶囊洗净，在28±2[al]℃下干燥19～27小时，分装、包装即得成品1000粒，即得具有香味的每粒含药物29mg的软胶囊成品。
实施例8、单凝聚法制备含有脂溶性芪苷化合物制剂微囊产品
配方：脂溶性芪苷(主要成分含量67.5％)(总芪含量89％) 47g
明胶 2000g
制备工艺：在10万级的条件下，将明胶溶成60000ml的明胶溶液，加入脂溶性芪苷，搅拌均匀，用10％的醋酸调pH3.5~3.8，将反应器置于50℃水浴中保温搅拌45分钟。滴加硫酸钠溶液(稀释液)，在显微镜下观察至聚成囊为止，立即倒入搅拌着的稀释液中，待胶凝沉降后，倾去上清液，用稀释液洗涤2~3次，除去未凝聚的囊材。最后再将微囊混悬于适量稀释液中，加入37％甲醛溶液2000~3000ml，搅拌，滴加氢氧化钠调节pH至8~9，低温放置过夜，过滤，用水洗涤至无甲醛味，低温干燥即得。
实施例9、喷雾干燥法制备含有脂溶性芪苷类化合物制剂产品——QHQ微囊剂
配方：QHQ 30g
乙基纤维素 1200g
羟丙甲纤维素 600g
制备工艺：在10万级的条件下，将药物溶于60000ml的乙基纤维素和羟丙甲纤维素的异丙醇溶液中，选择进口温度在80℃~100℃，出口温度在50℃~75℃。经喷雾干燥即得微囊。该微囊可直接压成片剂。
产品的药学研究及部分药理研究
1、脂溶性芪苷及其制剂的稳定性
实施例9个样品在室温下避光保管，放置1、2、3、6、12、24个月，按时检查，外观基本不变，有效成分经检验也未发生变化。因此，初步认为该脂溶性芪苷及其制剂各种处方制得的产品均可达到2年左右的保质期。
稳定性试验结果：质量标准中含量测定和鉴别等参照现行国标。结果如下：
| 样品 | 样品含量、鉴别 | |||||
| 1月 | 2月 | 3月 | 6月 | 12月 | 24月 | |
| 例1(QHQ)例2例3例4例5例6例7例8例9 | 合格合格合格合格合格合格合格合格合格 | 合格合格合格合格合格合格合格合格合格 | 合格合格合格合格合格合格合格合格合格 | 合格合格合格合格合格合格合格合格合格 | 合格合格合格合格合格合格合格合格合格 | 合格合格合格合格合格合格合格合格合格 |
结果表明该发明制备的样品，经过初步稳定性考察，产品质量稳定可达两年以上。
2、药效评价：选择与人类疾病相近且重复性好的动物模型，是评价药物治疗效果的基础。下面生物实验中采用两种与人类疾病相近的动物模型，测定多种药效学指标，综合评价PHS1、PHS2(QZQ)对心脑缺血的保护作用。
1材料1.1药品与试剂
PHS1，PHS2，白色粉末，按实施例1提取纯品。市售灯盏花素片，20mg/片，批号20040616，由云南省药物研究所制药厂生产。尼莫地平(尼达尔片)，20mg/片，天津市中央药业有限公司生产，批号020801。以上样品均用0.5％CMC-Na配制成所需浓度的混悬液供大鼠灌胃用。
红四氮唑(TTC)，进口，AMRESCO分装，批号0765，上海生工出品。腺苷二磷酸钠(ADP)，批号A2754，Sigma公司生产，进口分装，北京鼎国生物技术发展中心出品。
AST(紫外动力学法，批号0704151)、LDH(紫外动力学法，批号0704102、CK-MB(选择性抑制动力学法，批号100412)、TT(批号0504052)、PT(批号0604161)、APTT(批号0604131)及FIB(批号060405)测定试剂盒，均为四川迈克科技有限公司出品。
1.2动物：清洁级SD大鼠，雄性，体重240～385g，合格证号：SCXK(沪)2003-0002，来源于上海西普尔—必凯实验动物有限公司，由昆明医学院实验动物中心代购。
1.3仪器：TM1024全自动生化分析仪，日本东京株式会社；Centrifuge 5810R型冷冻离心机，德国eppendoff公司；BS110型电子分析天平，赛多利斯公司；Millipore超纯水处理系统，美国Millipore公司；6951D型心电机，上海光电公司；C2000-4血凝仪及LBY-NS血小板聚集仪，北京普利生集团。
1.4统计：结果以
X±SD表示，正态分布数据用t检验，偏态分布数据用秩和检验。
2方法2.1大鼠冠状动脉结扎心肌缺血实验[1]
2.1.1实验分组及造型：雄性SD大鼠，330～385g，按体重随机分为：空白组、模型组、灯盏花素片40mg/kg组、PHS2 50mg/kg组及PHS1 200mg/kg组。各组动物按剂量每日灌胃给药一次，连续5天，空白组和模型组给予等容量0.5％CMC-Na 10ml/kg体重。末次给药后30min，用12％水合氯醛腹腔注射350mg/kg麻醉动物，行开胸手术暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房间找出冠状动脉左前降支，距根部2～3mm处结扎，快速心脏复位关闭胸腔。假手术组仅置线头而不结扎。
2.1.2检测指标：分别记录结扎前及结扎后5分、30分、1h、2h、4h和24h肢体II导联心电图，测量S-T段(J点)变化值。待记录24h心电图后，颈动脉插管取血二份：一份分离血清按试剂盒方法测定AST、LDH及CK-MB的活性；一份用3.8％枸橼酸钠以1∶9抗凝，1000rpm离心5min制备富血小板血浆(PRP)，3500rpm离心10min制备贫血小板血浆(PPP)。按比浊法测定ADP-2Na诱导的血小板聚集率，ADP的终浓度为6mol/L；按试剂盒方法分别测定TT、PT、APTT及FIB。取血后迅速摘出心脏，置于冰生理盐水中泵出心腔内积血，去掉心房及脂肪组织，吸干水分称取心室重，随后沿冠状切成5片，在1％TTC溶液中避光于37℃孵育染色10min。经染色后，正常心肌组织呈红色，而梗死组织呈白色，将梗塞部位剪下称重，计算坏死部分占心室重的百分比为心肌梗塞范围。
2.2大鼠MCAO局灶性脑缺血实验
2.2.1实验分组及造型：雄性SD大鼠，体重240～290g，分组及剂量同前，另设一阳性对照药尼莫地平50mg/kg组。各组动物每日按剂量灌胃给药一次，连续5天。末次灌胃后30min，用12％水合氯醛腹腔注射350mg/kg麻醉动物，左侧卧位，沿右耳眼线中点切开皮肤，分离颞肌，绞断颧骨，在颧骨根前方用牙科钻钻孔，暴露MCA，在大脑下静脉和嗅束间用针挑起，断之，棉球压迫止血后，分层缝合肌肉和皮肤。假手术组除了不挑断MCA外，其余步骤相同。
2.2.2观察指标：动物于造模后6h及24h根据运动等行为表现进行神经功能评分，以此作为脑功能障碍指标。评分采用盲法，即评分者不知道给药的情况，评分标准如下：
| 症状 | 行为障碍评分 |
| 提鼠尾离开地面约一尺，手术对侧前肢出现腕屈曲，肘屈曲，肩内旋或有腕，肘屈曲又有内旋。 | 1～4 |
| 将动物置于平地面上，分别推双肩向内侧，检查阻力。 | 1～3 |
| 将动物置于金属网面上，观察两前肢的张力。 | 1～3 |
| 将动物置于平地面上，观察有无转圈。 | 1～2 |
| 满分 | 12 |
以上标准满分为12分，分数越高，表明动物行为障碍越严重
造模24h，经神经功能评分后，颈动脉插管取血，一份分离血清按试剂盒方法测定AST及LDH的活性；一份用3.8％枸橼酸钠以1∶9抗凝，1000rpm离心5min制备富血小板血浆(PRP)，3500rpm离心10min制备贫血小板血浆(PPP)。按比浊法测定ADP-2Na诱导的血小板聚集率，ADP的终浓度为6mol/L；按试剂盒方法分别测定TT、PT、APTT及FIB。取血后快速断头取脑，放入冰生理盐水中去除嗅球、小脑和低位脑干，吸干水分称取脑重，沿冠状切成5片，置入5ml含有4％TTC及1mol/LK2HPO40.1ml的溶液中，避光于37℃温孵30min，其间每隔7-8min翻动一次，经染色后，正常脑组织呈玫瑰红色，而梗死组织呈白色，将梗塞部位剪下称重，以重量求面积法计算梗死组织重量占双侧大脑半球重的百分比作为脑梗塞范围。
3结果3.1对大鼠冠状动脉结扎心肌缺血的影响
3.1.1对心肌缺血心电图S-T段的影响：模型组大鼠结扎冠状动脉后，心电图上S-T段(J点)明显升高或下降，而假手术组则变化不大，表明实验造模成功。PHS2组能明显减少各时间点S-T段的变化，表明对心肌缺血时的心电图有明显改善作用；PHS1组仅对缺血5min、30min和24h的心电图有改善作用。结果见表1。
表1.PHS1及PHS2对心肌缺血大鼠心电图S-T段的影响
| 组别 | 剂量(/kg) | 动物数(只) | 结扎后ST段变化(X±SD，mv) | |||||
| 5min | 30min | 1h | 2h | 4h | 24h | |||
| 假手术 | 10ml | 10 | 0.06±0.06 | 0.05±0.05 | 0.04±0.05 | 0.06±0.04 | 0.06±0.05 | 0.01±0.02 |
| 模型 | 10ml | 11 | 0.37±0.12ΔΔ | 0.24±0.09ΔΔ | 0.14±0.08ΔΔ | 0.16±0.08ΔΔ | 0.16±0.10ΔΔ | 0.18±0.14ΔΔ |
| 灯盏花素片 | 40mg | 12 | 0.15±0.1** | 0.09±0.08** | 0.07±0.06* | 0.07±0.07** | 0.08±0.06* | 0.02±0.03** |
| PHS2 | 50mg | 12 | 0.14±0.12** | 0.06±0.06** | 0.05±0.04** | 0.05±0.04** | 0.06±0.05* | 0.02±0.03** |
| PHS1 | 200mg | 11 | 0.17±0.11** | 0.12±0.09** | 0.11±0.08 | 0.11±0.07 | 0.11±0.08 | 0.07±0.08* |
与假手术组相比：ΔP＜0.01；与模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01；
3.1.2对心肌缺血大鼠心肌酶学的影响：模型组大鼠血清AST、LDH及CK-MB活性有不同程度的增高，尤以CK-MB及LDH活性增高更明显，表明心肌损伤造模成功。PHS1及PHS2两种样品均能明显降低CK-MB和LDH的释放，并具有降低AST的趋势，表明减轻心肌细胞损伤作用显著；两给药组大鼠的心肌梗塞范围均显著小于模型对照组，与模型组相比分别缩小60.87％和45.65％。结果见表2。
表2.PHS1及PHS2对大鼠心肌梗塞范围和酶学的影响
| 组别 | 剂量(/kg) | 动物数(只) | 心肌酶学(X±SD，ku/L) | 心肌梗塞范围 | |||
| AST | LDH | CK-MB | (X±SD，％) | 缩小率 | |||
| 假手术 | 10ml | 10 | 0.52±0.21 | 0.82±0.21 | 0.65±0.26 | 0.19±0.27 | - |
| 模型 | 10ml | 11 | 0.72±0.35 | 1.08±0.27△ | 2.06±1.30ΔΔ | 6.44±3.62ΔΔ | - |
| 灯盏花素片 | 40mg | 12 | 0.68±0.33 | 0.94±0.42 | 0.92±0.64* | 3.09±1.58* | 52.02 |
| PHS2 | 50mg | 12 | 0.61±0.20 | 0.61±0.24** | 0.80±0.68* | 2.52±2.16* | 60.87 |
| PHS1 | 200mg | 11 | 0.61±0.26 | 066±0.32** | 0.71±0.45** | 3.50±2.68* | 45.65 |
与假手术组相比：ΔP＜0.01；与模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01；
3.1.3对冠状动脉结扎心肌缺血大鼠血小板聚集及凝血的影响：大鼠冠状动脉结扎致心肌缺血造模后，血小板聚集率明显升高，ATPP时间有缩短趋势，纤维蛋白原的含量明显增加。各给药组能明显抑制ADP诱导的血小板聚集，并有延长TT、APTT时间的趋势，PHS2还具有降低纤维蛋白原含量的趋势。结果见表3。
表3.PHS1及PHS2对冠状动脉结扎致心肌缺血大鼠血凝及血小板聚集的影响
| 组别 | 剂量(/kg) | 动物数(只) | 血凝指标 | 血小板聚集率(％) | |||
| TT(s) | PT(s) | APTT(s) | FIB(g/L) | ||||
| 假手术 | 10ml | 10 | 77.14±25.12 | 23.74±6.65 | 85.95±30.16 | 3.57±0.49 | 49.00±6.34 |
| 模型 | 10ml | 11 | 72.37±40.79 | 24.56±4.96 | 56.58±41.58 | 4.75±1.19ΔΔ | 57.50±4.00ΔΔ |
| 灯盏花素片 | 40mg | 12 | 92.49±34.44 | 26.58±3.81 | 69.74±33.82 | 3.90±0.96 | 48.93±7.22** |
| PHS2 | 50mg | 12 | 93.04±35.64 | 25.75±5.26 | 75.96±35.87 | 3.95±0.84 | 48.22±5.55** |
| PHS1 | 200mg | 11 | 92.41±42.37 | 25.90±3.51 | 78.17±28.14 | 4.77±1.11 | 51.20±7.41* |
与假手术组相比：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01；
3.2对MCAO致局灶性脑缺血大鼠的影响
3.2.1对MCAO大鼠神经功能障碍及脑梗塞范围的影响：大鼠MCAO造模后，活动减少，出现不同程度的运动障碍，模型组与假手术组相比差异显著。各给药组均能明显改善MCAO大鼠的神经功能障碍，缩小脑梗塞的范围，PHS2及PHS1组分别缩小64.64％、59.10％。结果见表4。
表4.PHS1及PHS2对MCAO大鼠神经功能障碍及脑梗塞范围的影响
| 组别 | 剂量(/kg) | 动物数(只) | 脑梗塞范围 | 行为学评分(X±SD，分) | ||
| (X±SD，％) | 缩小率 | 6h | 24h | |||
| 假手术模型尼莫地平灯盏花素片PHS2PHS1 | 10ml10ml50mg40mg50mg200mg | 101112111212 | 0.04±0.095.77±2.59ΔΔ2.27±2.56**2.70±1.42**2.04±1.43**2.36±1.81** | 60.6653.2164.6459.10 | 0.6±0.978.73±1.01ΔΔ6.50±1.68**6.27±1.01**5.75±1.42**6.42±1.62** | 0.60±1.087.54±1.29ΔΔ4.83±1.40**5.18±1.33**4.25±1.60**4.92±1.31** |
与假手术组相比：ΔP＜0.01；与模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01；
3.2.2对ADP诱导的MCAO大鼠血小板聚集及凝血的影响：大鼠MCAO造模后，血小板聚集率明显增加，凝血时间有所缩短而纤维蛋白原的含量有增加的趋势。两种样品均能明显抑制由ADP诱导的血小板聚集，并具有降低纤维蛋白原含量的趋势，PHS2有延长APTT时间、PHS1有延长TT时间的趋势。结果见表5。
表5.PHS1及PHS2对MCAO大鼠血凝及血小板聚集的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量(/kg) | 动物数(只) | 血凝指标 | 血小板聚集率(％) | |||
| TT(s) | PT(s) | APTT(s) | FIB(g/L) | ||||
| 假手术 | 10ml | 10 | 87.96±29.56 | 28.02±5.49 | 81.63±39.80 | 3.70±0.58 | 46.30±10.97 |
| 模型 | 10ml | 11 | 71.58±35.64 | 25.82±7.79 | 57.86±32.72 | 4.50±1.40 | 60.38±9.28ΔΔ |
| 尼莫地平 | 50mg | 12 | 88.55±32.24 | 23.38±8.23 | 61.02±44.79 | 3.52±1.14 | 54.15±7.76 |
| 灯盏花素片 | 40mg | 11 | 98.07±36.83 | 26.78±3.51 | 74.79±26.26 | 3.24±0.90* | 49.5±6.80** |
| PHS2 | 50mg | 12 | 62.04±40.80 | 23.43±8.66 | 75.15±27.41 | 3.59±0.76 | 52.38±5.24* |
| PHS1 | 200mg | 12 | 95.55±24.80 | 25.56±5.30 | 62.48±29.08 | 3.38±1.07 | 50.52±4.07** |
与假手术组相比：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01；
3.2.3对MCAO大鼠血清AST、LDH及体重的影响：模型组大鼠血清AST及LDH活性明显增高而手术后24h体重显著下降，两给药组均能明显降低LDH的释放，PHS2还能明显降低AST活性，PHS1能明显对抗造模人鼠的体重减轻，表明两样品减轻脑组织损伤作用显著。结果见表6。
表6.PHS1及PHS2对MCAO大鼠血清AST、LDH及体重的影响
| 组别 | 剂量(/kg) | 动物数(只) | 体重(X±SD，g) | 血清酶(X±SD，u/L)) | ||||
| 给药前 | 手术前 | 术后6h | 术后24h | AST | LDH | |||
| 假手术 | 10ml | 10 | 258.0±15.5 | 269.5±16.6 | 258.0±15.8 | 255.5±16.6 | 156.0±51.0 | 566.1±191.2 |
| 模型 | 10ml | 11 | 257.3±10.1 | 267.7±9.6 | 252.3±7.5 | 240.0±8.7Δ | 246.6±121.5Δ | 907.1±256.7ΔΔ |
| 尼莫地平 | 50mg | 12 | 259.6±14.5 | 265.8±12.9 | 257.1±11.4 | 249.6±10.5* | 198.6±118.2 | 536.7±262.8** |
| 灯盏花素片 | 40mg | 11 | 259.1±13.0 | 267.7±19.4 | 256.8±15.7 | 247.3±15.4 | 244.3±183.6 | 719.5±133.4* |
| PHS2 | 50mg | 12 | 256.3±13.3 | 265.8±12.4 | 253.8±12.1 | 244.2±12.2 | 152.9±33.0* | 472.0±231.9** |
| PHS1 | 200mg | 12 | 257.9±11.6 | 268.8±12.4 | 258.3±11.9 | 250.0±15.1* | 171.2±71.6 | 571.1±287.5** |
与假手术组相比：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01；
4.讨论 选择与人类疾病相近且重复性好的动物模型，是评价药物治疗效果的基础。本研究采用两种与人类疾病相近的动物模型，测定多种药效学指标，综合评价两种样品对急性心脑缺血的影响。结果表明，PHS1及PHS2能明显改善冠状动脉结扎致心肌缺血大鼠的心电图变化，降低血清CK-MB及LDH的活性，缩小心肌梗死范围，抑制血小板聚集，并具有延长凝血时间和降低纤维蛋白原的趋势，提示其对心肌缺血有明显保护作用。PHS1及PHS2不仅可以减少MCAO大鼠脑梗塞范围，使行为障碍程度得到明显改善，血清中LDH及AST的活性明显降低；同时还能明显抑制ADP诱导的血小板聚集，并有一定的抗凝趋势，从而抑制血栓形成。研究结果表明，PHS1及PHS2对心脑缺血具有显著保护作用。
5结论在所采用的两种缺血性心脑血管疾病模型上，脂溶性芪苷类化合物以PHS1及PHS2为代表，在实验条件下，对心肌缺血有明显保护作用，PHS2小剂量组显示出了比40mg/kg灯盏花素片和50mg/kg的尼莫地平片还好的作用，该样品是尚未开发成分，其发展成为药物的前景较为乐观。蓼科大黄属、蓼属等多种植物中该类成分的含量普遍较高，而多种植物可大面积的引种栽培，其开发和利用符合可持续发展的战略。
以上实施例仅为了对本发明做进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。
Claims (6)
1、一种下述结构的脂溶性芪苷类化合物
R1、R2、R3、R4不同时为OH
该类脂溶性芪类化合物作为改善或治疗缺血性心脑血管疾病的用途，则作为改善脑梗塞、心肌梗塞后心脑血管循环、扩张心脑血管，增加心脑血流量，清除自由基，改善微循环，减轻脑梗塞、心肌梗塞后缺血再灌注损伤的用途。
2、根据权利要求1或2所述的脂溶性芪苷类化合物，其特征在于最佳为具有下述结构的化合物，
具有较好的稳定性、生物利用度、及具有很好的改善或治疗缺血性心脑血管疾病的用途。
3、根据权利要求1或2所述的脂溶性芪苷类化合物制剂或产品，其生物活性成分为有效部位，组成应为总芪类化合物含量在45％～98％。
4、根据权利要求1或2所述的脂溶性芪苷类化合物制剂或产品，其有效部分总芪类化合物中某一种主要芪苷类化合物含量在54％～99％。
5、根据权利要求1或2所述的脂溶性芪苷类化合物制剂或产品，其特征在于用于制备治疗缺血性心脑血管疾病的保健食品或药物。
6、根据权利要求1或2所述的脂溶性芪苷类化合物制剂或药物，其特征在于可制成各种医药上可接受的制剂。
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