CN107550923A - 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其应用和由其制备形成的注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药组合物领域，具体涉及一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其应用和由其制备形成的注射剂。该药物组合物包括槲皮素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷、水仙苷、山萘酚‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖苷、松醇、红杉醇以及银杏内酯A、B、C，各组分相互配合，在临床上应用于心脑血管疾病治疗；尤其加入特定配比的松醇和红杉醇，使得该药物组合物药效明显优于现有舒血宁注射剂；而且成分清楚，质量可控，保证疗效和用药安全。本发明还提供药物组合物的制备方法，采用90～95％乙醇回流提取，并先后采用阳、阴离子树脂吸附处理，能够将上述组分有效分离出来，且工艺简单，适于工业化生产。

Description

一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其应用和由其制备形 成的注射剂

技术领域

本发明属于医药组合物领域，具体涉及一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其应用和由其制备形成的注射剂。

背景技术

心脑血管疾病一般是指高血压、高血脂症、血液粘稠、动脉粥样硬化等因素所导致的心脏、大脑及全身组织的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病具有“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高，并发症多”的特点，即“四高一多”。目前，我国心脑血管疾病患者已经超过2.7亿人，我国每年死于心脑血管疾病近300万人，占我国每年总死亡病因的51％。

在肌醇的众多甲基衍生物中，松醇(D-Pinitol)、红杉醇 (5-O-methyl-myoinositol，又名Sequoyitol)是最常见的两种甲基衍生物。 Ohmoto等于1980年从银杏花粉颗粒中分离到了松醇和红杉醇。松醇、红杉醇的分子结构分别如式(I)(II)所示：

近年来，松醇和红杉醇已成为人们研究的热点，其越来越多的功能活性不断被发现。如中国专利文献CN103202824A公开了松醇类物质(如松醇、D-松醇等)在制备预防和/治疗肥胖症、高血脂、血脂异常动脉硬化、高血压或心血管疾病的药或保健品中的应用。又如中国专利文献 CN1706369A公开了用于糖尿病预防和治疗的红杉醇和红杉醇植物提取物，但是还没报道过红杉醇在治疗心脑血管疾病方面的应用，且市面上也没有以其为原料药的治疗心脑血管疾病的药物。

银杏(Ginkgo biloba L.)，又名白果(种子)、白果树、公孙树、飞蛾叶、鸭脚子，为银杏科(Ginkgoaceae)下银杏属(Ginkgo)落叶乔木，属于古老的孑遗稀有植物，有“活化石”、“植物界的熊猫”的美称。银杏叶为银杏的干燥叶，秋季叶尚未绿时采收，性味甘、苦、涩，性平，归心、肺经，具有活血化瘀、通络止痛、敛肺平喘、化浊降脂的功效。银杏叶中主要成分为总黄酮醇苷和银杏内酯，总黄酮醇苷为不同种类黄酮醇苷单体的总称，其结构为以槲皮素(querctin)、山柰酚(kaempferol)、异鼠李素 (isorhamnetin)等为母核，并结合葡萄糖、鼠李糖、多糖等单糖构成；银杏内酯主要有银杏内酯A、B、C等。研究发现，银杏叶所含的总黄酮醇苷和银杏内酯因具有突出的药理活性，通常作为银杏叶提取物及其制剂的质量控制指标性成分；而银杏叶中还含有银杏酚类物质(如银杏酸)有致敏性，为有害成分，应控制其含量以保证用药安全。

随着国际市场对银杏叶提取物及其复方制剂的质量要求愈来愈高，国家食品药品监督管理局颁布的《中药、天然药物注射剂基本技术要求》要求“注射剂中所含成分应该基本清楚”，而实际上，银杏品种、产地、生长环境及年限不同，其化学成分存在差异，再加上缺乏有效的提取分离方法及质量控制方法，使得现有银杏叶提取物及其制剂产品中活性成分复杂且不明确，导致疗效不确切，质量不稳定。再者，也没有公开过总黄酮醇苷类物质、银杏内酯与松醇、红杉醇形成组合物用于治疗心脑血管疾病的应用，且市面上也没有出现以其组合物形式为原料药用于治疗心脑血管疾病的药物。因此，结合现有银杏产业的发展现状，急需突破现有技术，进一步开发和研究银杏叶提取物中的有效部位以及功效成分以用于治疗心脑血管疾病，将具有重要意义。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是克服现有技术制备的银杏叶提取物及其制剂难以达到质量要求而不能保证用药安全，以及活性成分不明确导致疗效不确切这一缺陷，进而提供一种新的治疗心脑血管疾病的药物组合物及其应用和由其制备形成的注射剂。

为此，本申请采取的技术方案为：

本发明提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，包括以下重量份的组分：

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.1～1份；

山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.1～1份；

水仙苷0.1～1份；

松醇8～24份；

红杉醇2～4份；

银杏内酯A 0.7～2份；

银杏内酯B 0.3～1份；

银杏内酯C 0.4～1份。

可选的，所述水仙苷、松醇、红杉醇、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C中的一种或多种由银杏叶提取制得。

本发明提供包含上述药物组合物的制剂，所述药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆剂、膏剂、冲剂、酒剂、注射剂、饮料、饼干、糖果、糕点食品或方便食品。

本发明提供上述药物组合物或包含上述药物组合物的制剂在制备治疗心脑血管疾病药品中的应用。

本发明还提供一种制备包含上述药物组合物的注射剂的方法，其特征在于，包括，将所述槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、松醇、红杉醇、银杏内酯 A、银杏内酯B、银杏内酯C与水、辅料混合制成无菌溶液；其中，所述红杉醇在所述无菌溶液中的含量为2～4mg/ml。

本发明还提供上述药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)取银杏叶粉碎后，加入90～95％乙醇回流提取2～4次，每次回流提取时间为0.4～0.6小时，每次加入所述90～95％乙醇的质量为所述银杏叶质量的9～11倍；过滤，将所得滤液减压浓缩至所述银杏叶质量的 0.15～0.25倍，冷藏45～51小时；

(2)刮去浮油，取下层液；

(3)向所述下层液中加入注射用水至所述银杏叶质量的0.4～0.6倍，冷藏45～51小时；过滤，将所得滤液减压浓缩至所述银杏叶质量的0.15～ 0.25倍，放至室温，加入90～95％乙醇，使含醇量至78～82％，将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩，重复进行2～3次；

(4)向浓缩后的滤液加入注射用水至所述银杏叶质量的0.15～0.25倍，先采用阳离子树脂进行吸附3～5次，然后再用阴离子附树脂进行吸附3～5 次；其中，所述阳离子树脂用量为所述银杏叶质量的1.5～2.5倍，所述阴离子树脂用量为所述银杏叶质量的0.34～1.0倍；

(5)向吸附处理的药液中加入辅料及水，制成无菌溶液，所述无菌溶液中红杉醇的含量为2～4mg/mL。

可选的，所述阳离子树脂粒度为30～60目；所述阴离子树脂粒度为30～ 60目。

可选的，所述无菌溶液的pH值为4.0～7.0。

可选的，所述无菌溶液中，银杏酸≤20ng/ml，铅含量≤0.6μg/ml，镉含量≤0.15μg/ml，砷含量≤0.3μg/ml，汞含量≤0.1μg/ml，铜含量≤7.5μg/ml。

本发明还提供由上述方法制备形成的注射剂。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，包括槲皮素 -3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.1～1份；山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基 (1-2)-α-L-鼠李糖苷0.1～1份；水仙苷0.1～1份；松醇8～24份；红杉醇2～ 4份；银杏内酯A 0.7～2份；银杏内酯B0.3～1份；银杏内酯C 0.4～1份。该药物组合物中含有松醇、红杉醇、银杏内酯以及总黄酮醇苷中的上述三种单体，各组分相互配合，在临床上应用于心脑血管疾病治疗；尤其加入特定配比的松醇和红杉醇，使得该药物组合物药效明显优于现有舒血宁注射剂；而且该药物组合物中所含组分清楚，质量可控，既能保证疗效突出，又能保证用药安全。另外，我国银杏资源丰富，使得总黄酮醇苷的获取更为方便，而且银杏内酯、松醇、红杉醇不但可以从银杏叶中提取，也可以采用市售，价格低廉，应用前景较广。

2.本发明提供上述药物组合物的制备方法，银杏叶依次经过醇提、水沉、醇沉、吸附等工艺得到银杏叶提取物，采用90～95％乙醇回流提取以及先后采用阳离子树脂、阴离子树脂进行吸附配合使用，能够将银杏叶中的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基 (1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、松醇、红杉醇以及银杏内酯A、B、C进行有效提取分离出来，成分清楚，并以此制备治疗心脑血管疾病的药物组合物，符合行业质量标准，保证疗效，用药安全。另外，本发明采用的提取工艺成本低，操作简单，适于工业化生产。

3.本发明还提供采用由药物组合物制备得到的注射剂，经动物试验，能够减轻细胞膜脂质的过氧化损伤，增强对氧自由基的清楚能力，稳定细胞膜，减少细胞内CK外漏，减轻自由基所致的细胞损伤，保护缺血心肌细胞；而且该药物组合物含有松醇和红杉醇，能够显著降低大鼠血糖含量，非常有利于糖尿病患者临床使用，扩大了药物的使用范围。

具体实施方式

为了便于理解本发明的目的、技术方案和要点，下面将对本发明的实施方式作进一步详细描述。本发明可以多种不同的形式实施，而不应该被理解为仅限于在此阐述的实施例。相反，提供此实施例，使得本发明将是彻底的和完整的，并且将把本发明的构思充分传达给本领域技术人员，本发明将仅由权利要求来限定。

实施例1

本发明提供一种含有治疗心脑血管疾病的药物组合物的注射剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取银杏叶粉碎后，加入95％乙醇回流提取3次，每次回流提取时间为0.5小时，每次加入95％乙醇的质量为银杏叶质量的10倍；过滤，将所得滤液减压浓缩至所述银杏叶质量的0.2倍，冷藏48小时；

(2)刮去浮油，取下层液；

(3)向下层液中加入注射用水至银杏叶质量的0.5倍，冷藏48小时；过滤，将滤液减压浓缩至银杏叶质量的0.2倍，放至室温，加入95％乙醇，使含醇量至80％，将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩，重复进行2 次；

(4)向浓缩后的滤液加入注射用水至银杏叶质量的0.2倍，先采用45 目阳离子树脂进行吸附4次，然后再用45目阴离子附树脂进行吸附处理，其中，阳离子树脂用量为银杏叶质量的2倍，阴离子树脂用量为银杏叶质量的0.67倍；

(3)向吸附处理的药液加入辅料及水，制成上述无菌溶液，pH＝6。

采用高效液相色谱进行检测，上述无菌溶液中，其槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.69mg/ml；山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L- 鼠李糖苷0.55mg/ml；水仙苷0.41mg/ml；松醇13.89.mg/ml；红杉醇 2.88mg/ml；银杏内酯A 1.31mg/ml；银杏内酯B 0.74mg/ml；银杏内酯C 0.81mg/ml。

实施例2

本发明提供一种含有治疗心脑血管疾病的药物组合物的注射剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取银杏叶粉碎后，加入90％乙醇回流提取4次，每次回流提取时间为0.6小时，每次加入90％乙醇的质量为银杏叶质量的11倍；过滤，将所得滤液减压浓缩至所述银杏叶质量的0.15倍，冷藏45小时；

(2)刮去浮油，取下层液；

(3)向下层液中加入注射用水至银杏叶质量的0.6倍，冷藏51小时；过滤，将滤液减压浓缩至银杏叶质量的0.15倍，放至室温，加入90％乙醇，使含醇量至78％，将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩，重复进行3 次；

(4)向浓缩后的滤液加入注射用水至银杏叶质量的0.15倍，先采用 30目阳离子树脂进行吸附3次，然后采用60目阴离子附树脂进行吸附3次，其中，阳离子树脂用量为银杏叶质量的2.5倍，阴离子树脂用量为银杏叶质量的1.0倍；

(3)向吸附处理的药液加入辅料及水，制成上述无菌溶液，pH＝4。

采用高效液相色谱进行检测，上述无菌溶液中，其槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.10mg/ml；山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L- 鼠李糖苷0.10mg/ml；水仙苷0.10mg/ml；松醇8.00mg/ml；红杉醇2.00mg/ml；银杏内酯A 0.70mg/ml；银杏内酯B0.30mg/ml；银杏内酯C 0.40mg/ml。

实施例3

本发明提供一种含有治疗心脑血管疾病的药物组合物的注射剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取银杏叶粉碎后，加入93％乙醇回流提取2次，每次回流提取时间为0.4小时，每次加入93％乙醇的质量为银杏叶质量的9倍；过滤，将所得滤液减压浓缩至银杏叶质量的0.25倍，冷藏51小时；

(2)刮去浮油，取下层液；

(3)向下层液中加入注射用水至银杏叶质量的0.4倍，冷藏45小时；过滤，将滤液减压浓缩至银杏叶质量的0.25倍，放至室温，加入93％乙醇，使含醇量至82％，将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩，重复进行2 次；

(4)向浓缩后的滤液加入注射用水至银杏叶质量的0.25倍，先采用 60目阳离子树脂进行吸附5次，然后再用30目阴离子附树脂进行吸附5次，其中，阳离子树脂用量为银杏叶质量的1.5倍，阴离子树脂用量为银杏叶质量的0.34倍；

(3)向吸附处理的药液加入辅料及水，制成上述无菌溶液，pH＝7。

采用高效液相色谱进行检测，上述无菌溶液中，其槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷1.00mg/ml；山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L- 鼠李糖苷1.00mg/ml；水仙苷0.10mg/ml；松醇24.00mg/ml；红杉醇4.00mg/ml；银杏内酯A 2.00mg/ml；银杏内酯B1.00mg/ml；银杏内酯C 1.00mg/ml。

试验例1

将实施例1-3提供的无菌溶液制备的注射剂分别进行总黄酮醇苷、银杏酸、重金属检测，其结果如下：

表1无菌溶液的检测结果

由表1可知，采用实施例1-3提供的工艺得到的银杏叶提取物，质量可控，质量稳定，有害成分符合行业标准，能够保证用药安全。

试验例2

为了进一步证明本发明提供的注射剂的性能，本发明采用实施例1-3 提供的无菌溶液制备的注射剂做了如下实验：

1.对缺血心肌的保护作用

1.1试验仪器和试剂

心电图仪ECG_106Ken2(日本)；

自动生化分析仪Olympus Au560(日本)；

XW-80旋涡混匀器(上海第一医学院仪器厂)；

NOS、MDA、SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所)；

CK试剂盒(北京化工二厂)；

舒血宁注射剂(SXN)由神威药业生产，批号：160815，每支10ml；

实施例1-3提供的无菌溶液制备的注射剂：ZHW-1、ZHW-2、ZHW-3。

1.2舒血宁注射剂松醇、红杉醇试验研究

1.2.1试验仪器与材料

仪器：Agilent1260-3高效液相色谱仪，METTLER XS205电子天平；

色谱柱：COSMOSIL5NH2-MS 250*4.6IDmm；

对照品：D-松醇(美仑生物，批号A0622AS，纯度95％)，红杉醇(美仑生物，批号A0610A，纯度98％)；

供试品：舒血宁注射液(神威药业)；

试剂：乙腈(色谱纯，北京迪克马科技有限公司)，水(娃哈哈纯净水)。

1.2.2测试方法

色谱条件：乙腈-水(90.5∶9.5)为流动相；柱温为30℃；流速为1.5ml/min；蒸发光检测器；漂移管温度：105℃；增益：1；载气压力：3.0b。

对照品溶液的制备：分取松醇对照品、红杉醇对照品各适量，加水制成每1ml含1mg的溶液，摇匀，滤过，即得。

供试品溶液的制备：取舒血宁注射液作为供试品溶液。

检测方法：分别精密吸取对照品溶液3μl、供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定。以外标两点对数方程计算含量。

1.2.3测试结果

舒血宁注射液未检出松醇、红杉醇。

1.3实验动物及分组

健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重25±5g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。适应性喂养3天后其心电图阴性者作为实验对象，将小鼠随机分为生理盐水(NS)组、缺血模型(MI)组、舒血宁注射剂预处理组(MI+SXN)组、实施例1提供的注射剂预处理组(MI+ZHW-1)、实施例2提供的注射剂预处理组(MI+ZHW-2)、实施例3提供的注射剂预处理组(MI+ZHW-3)，每组6只。

1.4MI组模型复制及各组处理方法

双蒸水配制40％的SXN、ZHW-1、ZHW-2、ZHW-3。NS组和MI组以生理盐水灌胃，灌胃剂量按照0.25ml/10g，2次/天，时间为1周。1周后给对照组小鼠腹腔注射NS 0.1ml/10g，给舒血宁注射剂预处理组(MI+ SXN)组、实施例1提供的注射剂预处理组(MI+ZHW-1)、实施例2提供的注射剂预处理组(MI+ZHW-2)、实施例3提供的注射剂预处理组 (MI+ZHW-3)腹腔注射垂体后叶素(Pituitrin，Pit)30U/kg_2J，标准 II导联连接肢体描记心电图，QRS波群的终点与ST段交接处称为J点，正常小鼠J点大多在等电位线上，心肌缺血时可出现J点上升或下降，J点上升或下降0.1mV或以上即可视为心肌缺血标志，示造模成功。

1.5样本采集及生化指标测定

1.5.1 CK的检测

给药后3h，取小鼠股静脉血1ml立即转入加有20ul EDTA-Na₂和10ul 抑肽酶的预冷离心管内充分混匀，4℃下3000r/min，离心5min，吸取管内上清液测定血清CK活性。

1.5.2 NOS、SOD、MDA检测

小鼠取血后断颈处死小鼠，开胸取出心脏，吸取血迹，称取心室肌，用NS制成10％的心肌组织匀浆，离心取上清液，按照试剂盒的说明分别测定NOS、SOD活性及MDA的含量。

1.6统计学处理

实验数据用均数±标准差(±S)表示，进行方差齐性检验，然后分别对各组均数的差异用单因素方差分析进行显著性检验，比较各组间差异的显著性(用SPSS11.0统计软件分析)。

1.7实验结果

1.7.1 ZHW-1、ZHW-2、ZHW-3对缺血心肌心电图J点位移的影响

实验中，缺血组小鼠在腹腔注射Pit后5min，J点抬高持续到25min，最高幅度达到0.214mv；SXN预处理组、ZHW-1预处理组、ZHW-2预处理组、ZHW-3预处理组小鼠的心电图J点在腹腔注射Pit后的每一个时间段，抬高幅度均较MI组小，其最高幅度为0.129mV。且ZHW-1预处理组、 ZHW-2预处理组、ZHW-3预处理组优于SXN预处理组小鼠。

1.7.2 ZHW-1，ZHW-2，ZHW-3对心肌组织MDA含量及血清CK活性变化的影响

MI组的MDA含量及CK活性均明显高于NS组，呈显著性差异(P＜ 0.01)，说明模型建立，而SXN预处理组、ZHW-1预处理组、ZHW-2预处理组、ZHW-3预处理组的MDA含量及CK活性显著低于MI组(P＜0.05)，且ZHW-1预处理组、ZHW-2预处理组、ZHW-3预处理组优于SXN预处理组。见表2。

表2 ZHW-1、ZHW-2、ZHW-3对MI小鼠CK活性、心肌细织MDA含量的影响

本实验结果显示，NS组血清CK浓度很低，而ZHW-1预处理组、ZHW-2 预处理组、ZHW-3预处理组组血清CK活性及心肌MDA浓度低于MI组。同时，ZHW-1预处理组、ZHW-2预处理组、ZHW-3预处理组能提高缺血心肌细胞内SOD的活性，提示ZHW-1预处理组、ZHW-2预处理组、ZHW-3 预处理组能减轻细胞膜脂质的过氧化损伤，增强对氧自由基的清除能力，稳定细胞膜，减少胞内CK外漏，减轻自由基所致的细胞损伤，保护缺血心肌细胞，且优于对照的SXN预处理组。

1.7.3对心肌组织匀浆NOS、SOD活力的影响

MI组心肌组织中NOS的活性显著低于SXN预处理组(P＜0.05)和ZHW-1预处理组、ZHW-2预处理组、ZHW-3预处理组(P＜0.01)；MI组的SOD也明显低于其他各组，呈显著性差异(P＜0.01)，见表3。

表3 ZHW-1、ZHW-2、ZHW-3对心肌组织匀浆NOS、SOD活力的影响

本实验显示MI组NOS活性下降，而分别给予SXN、ZHW-1、ZHW-2、 ZHW-3的小鼠缺血后NOS活性明显加强，且ZHW-1、ZHW-2、ZHW-3预处理组均优于SXN预处理组。与上述CK、SOD和MDA等指标变化一致，表明心肌组织NOS活性的高低与心肌是否损伤有关，即NOS活性增强(或减弱)引起机体内NO水平的升高(或下降)，从而减轻(加重)心肌缺血损伤。

2.本发明中组合物对血糖的影响

2.1受试样品：实施例1-3提供的无菌溶液制备的注射剂ZHW-1、 ZHW-2、ZHW-3。

2.2实验动物：普通级Wistar大白鼠50只，雄性，体重(200±10)g。由河北省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(冀)2008-1-003。

2.3主要试剂与仪器

四氧嘧啶(sigma公司)，盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司)，葡萄糖测定试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司)，高速台式离心机(北京时代北利离心机有限公司)，0.9％生理盐水(石药银湖制药有限公司)，电子天平(哈尔滨众汇衡器有限公司)。

2.4实验方法

2.4.1糖尿病大鼠模型的建立

取健康大鼠100只，适应性喂养1-2天待平稳后，随机取10只为第一正常对照组，其余90只大鼠禁食18h后，以四氧嘧啶生理盐水溶液180mg/kg (现配现用)腹腔注射造成糖尿病模型。注射4h后灌胃50％葡萄糖溶液4ml/ 只。6天后禁食4h尾静脉采血，离心分离血清，测定葡萄糖含量，血糖值为15-35mmol/L定为糖尿病模型成功动物。

2.4.2组合物对四氧嘧啶致糖尿病大鼠空腹血糖试验

随机抽取50只大鼠分成五组，每组10只。第二组为模型对照组，第三组为盐酸二甲双胍片组，第四组为注射剂ZHW-1组、第五组为注射剂 ZHW-2组、第六组为注射剂ZHW-3组。第一组和第二组灌胃双蒸水，第三组灌胃盐酸二甲双胍片，第四灌胃实施例1提供的注射剂ZHW-1，第五组灌胃实施例2提供的注射剂ZHW-2，第六组灌胃实施例3提供的注射剂 ZHW-3，每组灌胃等剂量的受试品。给药后禁食0h、2h和4h后尾静脉采血，离心分离血清，测定葡萄糖含量。

2.5实验结果

表4组合物对血糖的影响(±s)

注：算数平均数，s标准偏差，**P＜0.01与y第一组比较，**P＜0.01 给药后与第二组比较。

由表4可知，第二组、第三组、第四组、第五组、第六组的大鼠空腹血糖含量与第一组比较极显著升高(P＜0.01)。与第二组比较，给药2h 时，第三组、第四组、第五组、第六组血糖含量有一定的下降；给药4h时，第三组、第四组、第五组、第六组血糖含量显著降低(P＜0.01)。明显地，第四组、第五组、第六组降血糖的效果均比第三组好。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.1～1份；

山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷0.1～1份；

水仙苷0.1～1份；

松醇8～24份；

红杉醇2～4份；

银杏内酯A 0.7～2份；

银杏内酯B 0.3～1份；

银杏内酯C 0.4～1份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述水仙苷、松醇、红杉醇、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C中的一种或多种由银杏叶提取制得。

3.一种包含由权利要求1或2所述的药物组合物的制剂，其特征在于，所述药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆剂、膏剂、冲剂、酒剂、注射剂、饮料、饼干、糖果、糕点食品或方便食品。

4.权利要求1或2所述的药物组合物或权利要求3所述的药物组合物的制剂在制备治疗心脑血管疾病药品中的应用。

5.一种制备包含权利要求1或2所述的药物组合物的注射剂的方法，其特征在于，包括，将所述槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷、水仙苷、松醇、红杉醇、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C与水、辅料混合制成无菌溶液；其中，所述红杉醇在所述无菌溶液中的含量为2～4mg/ml。

6.一种制备包含权利要求1或2所述的药物组合物的注射剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取银杏叶粉碎后，加入90～95％乙醇回流提取2～4次，每次回流提取时间为0.4～0.6小时，每次加入所述90～95％乙醇的质量为所述银杏叶质量的9～11倍；过滤，将所得滤液减压浓缩至所述银杏叶质量的0.15～0.25倍，冷藏45～51小时；

(2)刮去浮油，取下层液；

(3)向所述下层液中加入注射用水至所述银杏叶质量的0.4～0.6倍，冷藏45～51小时；过滤，将所得滤液减压浓缩至所述银杏叶质量的0.15～0.25倍，放至室温，加入90～95％乙醇，使含醇量至78～82％，将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩，重复进行2～3次；

(4)向浓缩后的滤液加入注射用水至所述银杏叶质量的0.15～0.25倍，先采用阳离子树脂进行吸附3～5次，然后再用阴离子附树脂进行吸附3～5次；其中，所述阳离子树脂用量为所述银杏叶质量的1.5～2.5倍，所述阴离子树脂用量为所述银杏叶质量的0.34～1.0倍；

(5)向吸附处理的药液加入辅料及水，制成无菌溶液，所述无菌溶液中红杉醇的含量为2～4mg/mL。

7.根据权利要求6所述的注射剂的制备方法，其特征在于，所述阳离子树脂粒度为30～60目；所述阴离子树脂粒度为30～60目。

8.根据权利要求6或7所述的注射剂的制备方法，其特征在于，所述无菌溶液的pH值为4.0～7.0。

9.根据权利要求6-8任一所述的注射剂的制备方法，其特征在于，所述无菌溶液中，银杏酸≤20ng/ml，铅含量≤0.6μg/ml，镉含量≤0.15μg/ml，砷含量≤0.3μg/ml，汞含量≤0.1μg/ml，铜含量≤7.5μg/ml。

10.一种由权利要求6-9所述的方法制备形成的注射剂。