CN1899323A - 一种银杏叶提取物、含有该提取物的注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的银杏叶提取物、含有该提取物的注射剂及其制备方法。该银杏叶提取物主要含有以下重量百分比的成分：黄酮醇苷18～40％，银杏内酯2.5～25％，重金属含量低于9.4ppm；其中，银杏内酯由下述重量比例的银杏内酯A、B和C组成：7～27∶3～20∶4～40。本发明银杏叶提取物不仅有效成分含量高，而且所含的银杏酚类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质低于20ppm，由此制备得到的药物制剂，尤其是注射剂，对心脑血管疾病疗效显著，临床使用安全，不会产生注射疼痛，热源反应等副作用。

Description

一种银杏叶提取物、含有该提取物的注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种提取物、含有该提取物的注射剂及其制备方法，尤其涉及一种主要含银杏内酯和银杏总黄酮醇苷的银杏叶提取物、含有该提取物的中药注射剂及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

银杏叶提取物具有改善心脑血管循环，治疗心脑血管疾病，提供记忆力，清除氧自由基，延缓衰老的作用，具有治疗和保健的双重效果。由银杏叶经提取制备的银杏叶注射液在临床中使用多年，取得了很好的效果。其主要活性成分为银杏总黄酮醇苷和银杏内酯，银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、M和J等，其中以银杏内酯B活性为最高，银杏内酯A与其具有协同作用，因此在由银杏叶提取物制备的各种制剂中，需要提高银杏内酯A与B的含量。

但是，银杏内酯类物质在银杏叶中含量很低，尤其是银杏内酯B的含量更少(CN1124275C)，而且随着季节的变化而改变。而银杏叶提取物中除银杏内酯外，各种银杏黄酮类物质，包括黄酮苷元和黄酮醇苷类物质也是重要的活性物质。因此，银杏叶提取物制剂中需要同时提高银杏内酯类物质与总黄酮类物质的含量。

此外，在由银杏叶提取物制备的注射液中，不仅需要提高活性成分的含量，而且需要尽量除尽会引起注射疼痛、热源反应等银杏酚类物质、蛋白质、鞣质等物质，即使这些成分含量降至最低。

现有技术中由很多关于银杏叶提取物注射液的报道，例如CN1193753C公开了一种采用新鲜银杏叶提取物制备的银杏叶注射液，可以大大提高总黄酮和银杏内酯的含量，但是，由于黄酮类物质与黄酮醇苷类物质相比，水溶性差，在体内难以吸收，因此更需要提高注射液中黄酮醇苷类物质的含量，而非仅仅是黄酮类物质的含量。CN1517088A公开了一种银杏叶提取物注射剂，该注射剂是在市售银杏叶提取物中加入特殊赋形剂泊洛沙姆188使注射剂的pH呈碱性，但是该文献并未解决注射剂中银杏内酯类物质、黄酮醇苷类物质含量低的问题，且银杏酚类物质、蛋白质、鞣质等物质含量相对较高，不利于临床使用。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是克服现有技术的不足，提供一种新的银杏叶提取物，该银杏叶提取物不仅总黄酮醇苷类物质含量高，而且银杏内酯类物质，尤其是银杏内酯A、B和C的含量也高，同时，有效地除尽了提取物中的银杏酚类物质，蛋白质、鞣质、热源物质等影响疗效或引起副作用的杂质。

本发明所要解决的第一个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种银杏叶提取物，其特征在于主要含有以下重量百分比的成分：黄酮醇苷18～40％，优选为20～36％，更优选22～30％，最优选为23-25％，最最优选为24％；银杏内酯2.5～25％，优选为2.8～15％，更优选为3.0～12％，最优选为3.8～4.2％，最最优选为4％；重金属含量低于9.4ppm；其中，银杏内酯A、B和C的重量比为7～27∶3～20∶4～40，优选为7～25∶4～18∶5～36，更优选为8～18∶5～16∶8～32，最优选为7∶3∶4。

本发明银杏叶提取物不仅总黄酮醇苷和银杏内酯(银杏内酯由银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)，银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)和银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)组成)含量高，且含银杏酚、蛋白质、鞣质等杂质低于20ppm，重金属含量低于9.4ppm，非常有利于制备成药物制剂使用，尤其适合用于制备要求极高的注射剂，由于有效成分含量高，含杂质低(所含的银杏酚类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质低于20ppm)，由此制备得到的注射剂疗效确切，不会引起注射疼痛，也不会引起热源反应。

银杏内酯A、B和C的比例直接影响到临床治疗效果(见表1)，本发明银杏叶提取物的银杏内酯A、B和C的比例为7～27∶3～20∶4～40，在此比例范围内，各有效成分的协同作用能发挥到最佳，从而使得本发明银杏叶提取物所制备的注射液与阳性对照药物相比具有更好的临床疗效。

表1银杏叶注射液含银杏内酯A、B和C不同比例的临床疗效试验对比

银杏内酯A、B和C不同比例的银杏叶注射液	治疗心血管疾病疗效	治疗脑血管疾病疗效	治疗呼吸系统疾病疗效
				本发明所制备的银杏叶注射液[银杏内酯A、B和C(7∶3∶4)]	总有效率91.80％	总有效率85.64％	总有效率83.36％
本发明所制备的银杏叶注射液[银杏内酯A、B和C(9∶10∶19)]	总有效率92.62％	总有效率86.80％	总有效率85.42％
				本发明所制备的银杏叶注射液[银杏内酯A、B和C(8∶10∶25)]	总有效率93.88％	总有效率88.56％	总有效率86.72％
本发明所制备的银杏叶注射液[银杏内酯A、B和C(26∶20∶40)]	总有效率95.86％	总有效率89.78％	总有效率88.84％
				金纳多注射液[银杏内酯A、B和C(4∶3∶4)批号1591102]	总有效率83.60％	总有效率82.98％	总有效率80.32％

^*阳性对照药物：金纳多注射液：批号1591102，生产厂家：德国威玛舒培大药厂。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种制备上述银杏叶提取物的方法。

本发明所要解决的第二个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种制备上述银杏叶提取物的方法，包括以下步骤：

1)、a.银杏叶粉碎后，加60～95％乙醇回流提取1-5次，每次回流提取时间1-3小时，每次加入的乙醇量为银杏叶重量的5-10倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.3～0.8倍，冷藏3～24小时；

b.刮去浮油，将刮出的浮油，每次加银杏叶重量的0.03～0.1倍的注射用水，搅拌洗涤1～5次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的1～3倍，冷藏16～84小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.2～0.5倍，放至室温，加85％～95％乙醇，使含醇至80％；

c.将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩并重复进行1～5次；

2)、浓缩后的滤液用阳离子树脂吸附2～8次，控制pH值至1～3，再用阴离子树脂吸附1～5次，控制pH值至2～5，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.2～0.5倍，放至室温，加85％～95％乙醇使含醇量至80％～84％，冷藏16～84小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.1～0.5倍，冷藏16-48小时，过滤备用；

3)、分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后即得银杏叶提取物。

上述制备方法中，步骤1)中将银杏叶粉碎后，加入银杏叶5～10重量倍的60～95％乙醇回流1～5次；过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.4～0.5倍，冷藏；将刮出的浮油，每次加银杏叶0.03～0.06倍重量的注射用水。

通过本发明方法制备得到银杏叶提取物不仅总黄酮醇苷和银杏内酯含量高，而且银杏内酯A、B和C的重量比为7～27∶3～20∶4～40；不含银杏酚类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质，重金属含量不超过9.4ppm(按照中国药典2000版标准进行检查)。由此制备得到的药物制剂特别有利于临床使用，尤其是由此制备的注射液在临床使用中不会引起注射疼痛，热源反应等。

根据需要在上述提取物中添加药用载体通过常规方法将其制备成相应的药物组合物或药物制剂，优选为注射剂。

本发明的银杏叶提取物药物组合物(特别是注射液)中根据需要还可以含有各种赋形剂，例如对于注射液可以加入等渗调节剂，如氯化钠或葡萄糖等；增溶剂，例如羟丙基-β-环糊精；鳌合剂，例如乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钠钙等。

本发明还提供一种含有上述银杏叶提取物和药用载体的药物组合物。

本发明还提供一种上述银杏叶提取物在制备治疗心血管疾病药物中的用途。

根据本发明，含有上述银杏叶提取物的药物组合物优选为注射剂，该注射剂可以由上述银杏叶提取物添加常用药用载体，按照常规制剂方法制备得到。

每1ml该注射剂含有总黄酮醇苷0.63～1.4mg，优选0.76～1.2mg，更优选0.78～0.9mg，最优选0.82～0.86mg，最最优选为0.84mg；含有银杏内酯0.0875～0.875mg，优选0.11～0.525mg，更优选0.12～0.42mg，最优选0.13～0.15mg，最最优选为0.14mg；且银杏内酯A、B和C的重量比为7～27∶3～20∶4～40，优选为7～25∶4～18∶5～36，更优选8～18∶5～16∶8～32，最优选7∶3∶4。且该注射液含银杏酚类、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质低于20ppm，重金属含量低于10ppm。该注射剂的pH值为4.0～6.5，优选为4.5～6.0，更优选为4.5～5.8。

另外，本发明的银杏叶注射剂可以制备成冻干粉针剂形式，该冻干粉针在注射用水，葡萄糖注射液及氯化钠注射液等溶剂中可以速溶，不需要使用特殊的溶剂或助溶剂，且溶液澄清，不发生沉淀。且稳定性好，有效期长，储存运输方便。

本发明银杏叶提取物或注射剂中所含成分的测定方法：

一、银杏内酯A、B和C的测定方法

本发明中是指银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)，银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)和银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)，其含量测定方法如下：

方法：高效液相色谱法(中国药典2000版)。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-四氢呋喃-水(20∶10∶75)为流动相；用蒸发光检测器检测。理论塔板数按银杏A峰计算不低于5000。

对照品溶液的制备：精密称取银杏内酯A，B，C对照品适量，加丙酮制成每1ml分别含1mg，0.5mg，0.5mg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取52.5mg本发明银杏叶提取物加蒸馏水溶解制成15ml溶液，或精密量取本发明注射液15ml，加稀盐酸调pH至2，用醋酸乙酯提取4次(20ml，10ml，10ml，10m1)，合并醋酸乙酯液，用20ml的5％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸乙酯液，醋酸钠溶液再用10ml醋酸乙酯洗涤，合并醋酸乙酯液及洗涤液，用水洗涤2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣用适量丙酮溶解，并转移至2ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得。

测定：分别精密吸取对照品溶液和10μl与15μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标两点对数关系计算含量，即得。每1ml含银杏内酯以银杏内酯A计不少于0.07mg，以银杏内酯B计不少于0.03mg，以银杏内酯C计不少于0.04mg，三者之和不少于0.14mg。

二、总黄酮醇苷的测定方法

本发明中的总黄酮醇苷主要是指槲皮素苷，山奈酚苷和异鼠李素苷，其测定方法如下：

方法：高效液相色谱法(中国药典2000年版)

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.4％磷酸溶液(55∶45)为流动相；检测波长为368nm。理论塔板鼠按槲皮素峰计算不低于2500；分离度按槲皮素与异鼠李素计算，大于1.5。

对制品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷干燥的槲皮素、山奈素与异鼠李素对照品，加甲醇制成每1ml各含0.03mg，0.03mg，0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液(或分别制成每1ml中含槲皮素0.1mg，山奈素0.1mg，异鼠李素0.05mg的储备液。临用前精密量取各1ml，混匀)。

供试品溶液的制备：精密称取35mg提取物加水制成10ml溶液，或者精密量取10ml注射液，加甲醇16ml，18％盐酸6ml，置水浴中加热回流1.5小时，迅速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，分别计算三种黄酮苷元的含量，以下式换算成总黄酮醇苷的含量：

总黄酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)×2.51

本发明提取物含总黄酮醇苷为标示量的90.0％-110％。

三、杂质的检测方法

1、银杏酚类：以药材为对照品，通过薄层色谱法(中国药典2000版)试验，在硅胶GF254薄层板上，以苯-正己烷-乙醇(5∶3∶1)为展开剂，以5％香草醛硫酸溶液显色，在与对照药材相应的位置上，本发明提取物不显示任何斑点。

2、蛋白质：取本发明提取物的1ml水溶液(制法见上述银杏内酯测定)，用1％氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，加1％鞣酸1-3滴，不出现混浊或沉淀。

3、鞣质：取本发明提取物的1ml水溶液，加新鲜配制的含1％鸡蛋清的生理盐水5ml，放置10分钟，不出现混浊或沉淀。

4、热源：取本发明产品，按照中国药典2000版要求，检查，剂量按家兔体重每1kg注射5ml，完全符合要求。

5、炽灼残渣：精密量取本发明注射液2ml，按照中国药典2000版要求检查，每1ml不超过0.5mg。

6、重金属：将炽灼残渣项下遗留的残渣，按照中国药典2000版要求检查，含重金属不超过百万分之十。

通过上述测定方法对本发明实施例所制备的银杏叶注射剂与市售银杏叶注射液的产品质量进行了对比分析，结果如表2所示。

表2本发明注射液各成分含量的检测结果

成分或检查项目	本发明实施例5所制备的注射液	本发明实施例6所制备的注射液	本发明实施例7所制备的注射液	本发明实施例8所制备的冻干注射剂	金纳多注射液
						总黄酮醇苷(mg/ml)	0.86	1.12	1.32	1.10	0.84
银杏内酯A(mg/ml)	0.078	0.153	0.265	0.146	0.045
						银杏内酯B(mg/ml)	0.042	0.171	0.205	0.169	0.031
银杏内酯C(mg/ml)	0.042	0.285	0.395	0.283	0.038
						蛋白质检查	不混浊	不混浊	不混浊	不混浊	不混浊
鞣质检查	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀
						银杏酚检查	相应位置无斑点	相应位置无斑点	相应位置无斑点	相应位置无斑点	相应位置有斑点
重金属(ppm)	8.8	9.0	9.2	8.3	9.8

^*金纳多注射液：批号1591102，生产厂家：德国威玛舒培大药厂。

将本发明产品进行稳定性考察，结果经过一年后，本发明产品有效成分未降低，各种检查均符合要求。

将本发明注射液与市售银杏叶注射液(金纳多注射液：批号1591102，生产厂家：德国威玛舒培大药厂)的治疗心血管疾病的疗效进行了对比分析，其结果见表3。试验结果说明，本发明银杏叶注射液的总体疗效要明显高于市售银杏叶注射液的总体疗效，且未发现明显不良反应，其安全性也明显优于市售银杏叶注射液。

表3本发明银杏叶注射液与金纳多注射液的临床疗效试验结果对比

	本发明生产的银杏叶注射液 批号020905	金纳多注射液 批号1591102
			临床使用评价	总有效率93.88％	总有效率83.6％
临床不良反应评价	未发现明显不良反应	明显不良反应发生率0.63％

本发明产品经动物试验，证明对血管无刺激性，也未出现过敏反应。经动物急性毒性试验证明毒性小，非常有利于临床使用。

以下通过实施例来进一步描述本发明的有益效果，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的范围。

具体实施方式

实施例1银杏叶提取物的制备

取干燥银杏叶1kg，用粉碎机粉碎后，加60％乙醇回流提取两次，每次回流提取时间1小时，每次加入的乙醇量为银杏叶重量的5倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.3倍，冷藏3小时，刮去浮油，将刮出的浮油，每次加银杏叶重量的0.03倍的注射用水，搅拌洗涤一次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的1倍，冷藏16小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.2倍，放至室温，加85％乙醇，使含醇至80％，冷藏16小时，过滤，浓缩，上述冷藏、过滤、浓缩过程进行两次。滤液用阳离子树脂吸附2次，控制pH1.2，再用阴离子树脂吸附2次，控制pH2，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.5倍，放至室温，加85％乙醇使含醇量至80％，冷藏16小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.3倍，冷藏16小时，过滤备用。分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后得到银杏叶提取物。

经检测，本实施例所制备的银杏叶提取物中各成分的重量百分含量如下：黄酮醇苷24％，银杏内酯4.0％(银杏内酯A、B和C的重量比例为7∶3∶4)，重金属含量8.8ppm。

实施例2银杏叶提取物的制备

取干燥银杏叶1kg，用粉碎机粉碎后，加70％乙醇回流提取一次，回流提取时间2小时，加入的乙醇量为银杏叶重量的10倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.8倍，冷藏24小时，刮去浮油，将刮出的浮油，加银杏叶重量的0.1倍的注射用水，搅拌洗涤一次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的3倍，冷藏84小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.5倍，放至室温，加90％乙醇，使含醇至80％，冷藏84小时，过滤，浓缩，上述冷藏、过滤、浓缩过程重复进行三次。滤液用阳离子树脂吸附8次，控制pH3，再用阴离子树脂吸附5次，控制pH5，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.2倍，放至室温，加85％乙醇使含醇量至82％，冷藏36小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.5倍，冷藏36小时，过滤备用。分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后得到银杏叶提取物。

经检测，本实施例所制备的银杏叶提取物中各成分含量如下：

黄酮醇苷18％，银杏内酯2.5％(银杏内酯A、B和C的重量比例为9∶10∶25)，重金属含量9.1ppm。

实施例3银杏叶提取物的制备

取新鲜银杏叶1kg，用打浆机粉碎成糊，加80％乙醇回流提取三次，每次回流提取时间2小时，每次加入的乙醇量为银杏叶重量的8倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.4倍，冷藏20小时，刮去浮油，将刮出的浮油，加银杏叶重量的0.04倍的注射用水，搅拌洗涤一次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的3倍，冷藏72小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.5倍，放至室温，加95％乙醇，使含醇至80％，冷藏48小时，过滤，浓缩，上述冷藏、过滤、浓缩过程进行四次。滤液用阳离子树脂吸附3次，控制pH1.7，再用阴离子树脂吸附2次，控制pH3.5，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.5倍，放至室温，加85％乙醇使含醇量至82％，冷藏36小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.2倍，冷藏48小时，过滤备用。分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后得到银杏叶提取物。

经检测，本实施例所制备的银杏叶提取物中各成分含量如下：

黄酮醇苷32％，银杏内酯18％(银杏内酯A、B和C的重量比例为9∶9∶19)，重金属含量9.1ppm。

实施例4银杏叶提取物的制备

取新鲜银杏叶1kg，用打浆机粉碎成糊，加70％乙醇回流提取四次，每次回流提取时间3小时，每次加入的乙醇量为银杏叶重量的8倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.5倍，冷藏24小时，刮去浮油，将刮出的浮油，加银杏叶重量的0.03倍的注射用水，搅拌洗涤一次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的1.5倍，冷藏48小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.2倍，放至室温，加95％乙醇，使含醇至80％，冷藏48小时，过滤，浓缩，上述冷藏、过滤、浓缩过程进行五次。滤液用阳离子树脂吸附3次，控制pH1.5，再用阴离子树脂吸附1次，控制pH3.0，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.2倍，放至室温，加95％乙醇使含醇量至82％，冷藏48小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.1倍，冷藏48小时，过滤备用。分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后得到银杏叶提取物。

经检测，本实施例所制备的银杏叶提取物中各成分含量如下：

黄酮醇苷38％，银杏内酯25％(银杏内酯A、B和C的重量比例为26∶20∶40)，重金属含量9.1ppm。

实施例5银杏叶提取物注射液的制备

取1.75g实施例1所制备的银杏叶提取物，用500ml注射用水，加入0.5g羟丙基-β-环糊精和0.4g乙二胺四乙酸钠搅拌至溶解，加入1g针用活性炭处理，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液补加注射用水至1000ml，灭菌，分装为2ml/支。

本实施例所制备的注射液的各成分含量的检测结果见表1。

实施例6银杏叶提取物注射液的制备

取3.5g实施例3所制备的银杏叶提取物，用500ml注射用水，加入0.5g羟丙基-β-环糊精和0.4g乙二胺四乙酸钠搅拌至溶解，加入1g针用活性炭处理，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液补加注射用水至1000ml，灭菌，分装为2ml/支。

本实施例所制备的注射液的各成分含量的检测结果见表1。

实施例7银杏叶提取物注射液的制备

取3.5g实施例4所制备的银杏叶提取物，用500ml注射用水，加入0.5g羟丙基-β-环糊精和0.4g乙二胺四乙酸钠搅拌至溶解，加入1g针用活性炭处理，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液补加注射用水至1000ml，灭菌，分装为2ml/支。

本实施例所制备的注射液的各成分含量的检测结果见表1。

实施例8银杏叶提取物冻干注射剂的制备

将实施例3所制备的银杏叶提取物3.5g加注射用水550ml，另取甘露醇20g溶于适量注射用水中，将其加入银杏叶提取物溶液中混合，补加注射用水至1000ml。过滤，在0～4℃冷藏过夜，冷藏液用0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装成5ml/支，检查装量后冻干，压盖，包装，得银杏叶提取物冻干注射剂成品。

本实施例所制备的冻干注射剂的各成分含量的检测结果见表1。

Claims (17)

1.一种银杏叶提取物，以重量计，该银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量为18～40％，银杏内酯含量为2.5～25％，重金属含量低于9.4ppm；其中，银杏内酯A、B和C的重量比为7～27∶3～20∶4～40。

2.根据权利要求1的银杏叶提取物，其特征在于以重量计总黄酮醇苷的含量为20～36％，银杏内酯含量为2.8～15％；银杏内酯A、B和C的重量比为7～25∶4～18∶5～36。

3.根据权利要求2的银杏叶提取物，其特征在于以重量计总黄酮醇苷的含量为22～30％，银杏内酯含量为3.0～12％；银杏内酯A、B和C的重量比为8～18∶5～16∶8～32。

4.根据权利要求3的银杏叶提取物，其特征在于以重量计总黄酮醇苷的含量为23～25％，银杏内酯含量为3.8～4.2％；银杏内酯A、B和C的重量比为7∶3∶4。

5.根据权利要求4的银杏叶提取物，其特征在于以重量计总黄酮醇苷的含量为24％，银杏内酯含量为4.0％。

6.一种含有银杏叶提取物的药物组合物，其特征在于该药物组合物含有权利要求1至4中任意一项的银杏叶提取物和药用载体。

7.一种银杏叶提取物注射剂，其特征在于由权利要求1的银杏叶提取物按照常规制剂方法制备得到。

8.按照权利要求7的银杏叶提取物注射剂，其特征在于每1ml该注射液含有总黄酮醇苷0.63～1.4mg，含有银杏内酯0.0875～0.875mg，重金属含量低于9.4ppm，pH值为4.0～6.0；银杏内酯A、B和C的重量比为7～27∶3～20∶4～40。

9.根据权利要求8的注射剂，其特征在于每1ml该注射剂含有总黄酮醇苷0.76～1.2mg，含有银杏内酯0.11～0.525mg；银杏内酯A、B和C的重量比为7～25∶4～18∶5～36。

10.根据权利要求9的注射剂，其特征在于每1ml该注射剂含有总黄酮醇苷0.78～0.9mg，含有银杏内酯0.12～0.42mg；银杏内酯A、B和C的重量比为8～18∶5～16∶8～32。

11.根据权利要求10的注射剂，其特征在于每1ml该注射剂含有总黄酮醇苷0.82～0.86mg，含有银杏内酯0.13～0.15mg；银杏内酯A、B和C的重量比为7∶3∶4。

12.根据权利要求11的注射剂，其特征在于每1ml该注射剂含有总黄酮醇苷0.84mg，含有银杏内酯0.14mg。

13.根据权利要求8的注射剂，其特征在于该注射剂的pH值为4.5～5.8。

14.根据权利要求7至13中任意一项的银杏叶提取物注射剂，其特征在于所述的注射剂为冻干粉针剂形式。

15.一种制备权利要求1～5中任意一项银杏叶提取物的方法，包括以下步骤：

1)a.银杏叶粉碎后，加60～95％乙醇回流提取1-5次，每次回流提取时间1～3小时，每次加入的乙醇量为银杏叶重量的5～10倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.3～0.8倍，冷藏3～24小时；

b.刮去浮油，将刮出的浮油，每次加银杏叶重量的0.03～0.1倍的注射用水，搅拌洗涤1～5次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的1～3倍，冷藏16～84小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.2～0.5倍，放至室温，加85％～95％乙醇，使含醇至80％；

c.将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩并重复进行1～5次；

2)浓缩后的滤液用阳离子树脂吸附2～8次，控制pH值至1～3，再用阴离子树脂吸附1～5次，控制pH值至2～5，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.2～0.5倍，放至室温，加85％～95％乙醇使含醇量至80％～84％，冷藏16～84小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.1～0.5倍，冷藏16～48小时，过滤备用；

3)分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后即得银杏叶提取物。

16.按照权利要求15的方法，其特征在于步骤1)中将银杏叶粉碎后，加入银杏叶5～10倍重量的60～95％乙醇回流1～5次；过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.4～0.5倍，冷藏；将刮出的浮油，每次加银杏叶0.03～0.06倍重量的注射用水。

17.权利要求1～5所述的任一项银杏叶提取物在制备治疗心血管疾病药物中的用途。