CN103054907B - 一种蜂胶总黄酮提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蜂胶总黄酮提取物及其制备方法，属于中药现代化领域。本发明采用以下技术方案：将蜂胶在-40℃~-80℃冷冻，粉碎；将粉碎后的蜂胶加入乙醇，用超高压提取设备进行提取，将提取液浓缩，干燥，即得。本发明的优点是：蜂胶黄酮的得率高，提取液澄清，容易过滤，提供工艺操作简单，适宜于工业化大生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种蜂胶总黄酮提取物及其制备方法，属于中药现代化领域。
背景技术
蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂（树胶），混入其上腭腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶作为保健食品主要有免疫调节的功效。还有辅助抗氧化、调节血脂、血压、血糖、辅助保护胃粘膜等保健功能。蜂胶中含黄酮类、萜烯类、酚酸类化合物等多种生物活性物质。其中黄酮类化合物是蜂胶中的主要生理活性物质。黄酮化合物包括黄酮类、黄酮醇类和双氢黄酮类等。黄酮类化合物具有多方面的生理和药理作用，能帮助人体防治多种疾病，使机体各种功能正常化、增强化。蜂胶中的黄酮类化合物，其品种之多、含量之高超过了一般的植物药。
目前对蜂胶总黄酮的提取方法主要有乙醇浸提法、超临界CO2萃取法、微波提取法等。乙醇提取法操作简单，但提取效率不高，生产周期长。超临界CO2萃取法无溶剂残留，杂质少，但是由于黄酮类化合物在超临界流体CO2中的溶解度很低，因此需要加入夹带剂以增加溶解度，这使得萃取得到的提取物混有夹带剂。并且，超临界萃取机器昂贵，成本高，生产量少，距离工业化还有很长的距离。微波提取法提取时间短，提取率有所提升，但是会产生大量蜂蜡，增加了分离纯化的难度。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种蜂胶总黄酮提取物。
本发明要解决的另一个技术问题是提供一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法。能够缩短提取时间，提高黄酮含量，减少蜂蜡产生，以克服现有技术存在的上述问题。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种蜂胶总黄酮提取物，采用如下制备方法得到：
（1）将蜂胶在-40℃~-80℃冷冻1~5h，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入30~80倍量的体积百分比浓度为60~80%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为300~600Mpa，提取的时间为5~15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物，采用如下制备方法得到：
（1）将蜂胶在-40℃~-60℃冷冻3~5h，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入50~80倍量的体积百分比浓度为70~80%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为400~600Mpa，提取的时间为10~15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物，采用如下制备方法得到：
（1）将蜂胶在-40℃~-50℃冷冻4~5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入60~80倍量的体积百分比浓度为70~75%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为500~600Mpa，提取的时间为10~15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物，采用如下制备方法得到：
（1）将蜂胶在-40℃冷冻5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入80倍量的体积百分比浓度为70%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取的时间为15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物在制备降血糖药物中的用途。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物在制备降血脂药物中的用途。
采用本发明方法得到的蜂胶总黄酮提取物的黄酮含量高，与现有技术中的蜂胶醇提取物相比，具有优异的降血糖和降血脂效果。
.一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，步骤如下：
（1）将蜂胶在-40℃~-80℃冷冻1~5h，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入30~80倍量的体积百分比浓度为60~80%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为300~600Mpa，提取的时间为5~15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，步骤如下：
（1）将蜂胶在-40℃~-60℃冷冻3~5h，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入50~80倍量的体积百分比浓度为70~80%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为400~600Mpa，提取的时间为10~15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，步骤如下：
（1）将蜂胶在-40℃~-50℃冷冻4~5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入60~80倍量的体积百分比浓度为70~75%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为500~600Mpa，提取的时间为10~15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
所述的一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，步骤如下：
（1）将蜂胶在-40℃冷冻5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入80倍量的体积百分比浓度为70%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取的时间为15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案，蜂胶总黄酮的得率高，提取液澄清，容易过滤，提供工艺操作简单，适宜于工业化大生产。
本发明为疾病的预防和保健提供了一种新的蜂胶总黄酮提取物来源，从而对现有的蜂胶制备方法进行了完善。
本发明的优点是：采用本发明技术方案，制备出了质量稳定可控、疗效与现有市售产品相比显著提高、服用剂量减少、生物利用度提高的蜂胶提取物，且能够缩短提取时间，提高黄酮含量，减少蜂蜡产生，容易操作，适宜工业化生产。具有显著的经济和社会效益。
以下通过实施例详细说明本发明技术方案，并不以此限定本发明的实施范围。
具体实施方式
实验材料：
蜂胶：（市售）批号为 201103245
超高压提取设备：HPP.M1型超高压处理设备（天津市华泰森淼超高压设备有限公司）
冷冻设备：立式多功能冷冻干燥机LGJ-18(德国CHRIST冻干机)
粉碎机：XFB粉碎机（上海超亿制药机械设备有限公司）
实施例1：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-40℃冷冻1h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入30倍量60%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为300Mpa，提取时间为5分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物65克。
实施例2：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-50℃冷冻2h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入50倍量70%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为400Mpa，提取时间为8分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物57克。
实施例3：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-60℃冷冻2h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入50倍量70%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为500Mpa，提取时间为10分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物49克。
实施例4：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-70℃冷冻3h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入80倍量60%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取时间为12分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物62克。
实施例5：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-70℃冷冻3h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入80倍量60%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取时间为12分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物62克。
实施例6：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-80℃冷冻1h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入60倍量80%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取时间为15分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物65克。
实施例7：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-40℃冷冻5h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入80倍量70%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取时间为15分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物58克。
实施例8：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-50℃冷冻3h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入70倍量65%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为300Mpa，提取时间为5分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物47克。
实施例9：制备蜂胶总黄酮提取物
取蜂胶100g，将蜂胶在-70℃冷冻4h，粉碎成细粉，将粉碎后的蜂胶加入40倍量75%乙醇（体积百分比），用超高压提取设备进行提取，提取压力为500Mpa，提取时间为5分钟，将提取液浓缩，减压干燥，得到干燥物，即为本发明蜂胶总黄酮提取物51克。
预实验结果表明，乙醇浓度、提取压力和提取时间对于蜂胶物中总黄酮的含量有较大影响。使用L9（34）正交试验的方法，以不同提取工艺制备的样品中总黄酮的含量为评价指标，对乙醇浓度、提取压力、提取时间进行考察，以确定最优工艺。因素水平见表1
表1 因素水平表
按照实验设计，分别进行提取样品制备，测定其总黄酮含量。根据测定结果进行直观分析和方差分析，结果见表2、表3
表2 试验数据及分析
表3 方差分析结果
通过对以上正交结果进行方差分析可知，乙醇浓度和提取压力对于蜂胶提取物中总黄酮含量有显著影响。通过直观分析，选取工艺A2B3C3作为最佳提取条件，即70%乙醇，600Mpa压力提取15分钟。
实施例10：提取物中总黄酮含量测定
一．实验药物
1.供试品：实施例1-9中制备的蜂胶总黄酮提取物，依次命名为蜂胶提取物1-9
2.试剂试药：
聚酰胺，分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司
甲醇，分析纯，天津康科德科技有限公司
乙醇，分析纯，天津康科德科技有限公司
芦丁对照品（批号 100080-200707），购自中国药品生物制品检定所
3.仪器：
Lambda 25型紫外-可见光分光光度计，美国PERKIN ELMER仪器有限公司生产
二．试验方法：
1.对照品溶液制备：同时称取芦丁5.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，得到50ug/ml的芦丁标准品溶液。
2.供试品溶液制备：称取蜂胶提取物1-9，加乙醇定容至25ml，摇匀，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0ml，于蒸发皿中，加1g聚酰胺吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20ml苯洗涤，苯液弃去，然后加甲醇洗脱黄酮，定容至25ml，作为供试品溶液。
3.测定法：
精密吸取取芦丁标准溶液0、1.0、2.3、3.0、4.0、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm处比色，测定标准曲线，求回归方程。将供试品溶液分别于波长360nm处测定吸收值。带入回归方程计算样品中总黄酮含量。
三．结果：
表4：蜂胶提取物1-9总黄酮测定结果
实施例11：动物实验：本发明提取物对四氧嘧啶诱发的糖尿病模型小鼠的影响
一．实验材料：
1.实验动物：CR小鼠，体重18~22g，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2007-0001。
2.药品及试剂：
蜂胶总黄酮提取物（取自本发明实施例7）
蜂胶醇提取物（按照中国专利申请CN 201110117989.0中实施例2方法制备）
四氧嘧啶，Sigma公司
盐酸二甲双胍片，天津太平洋制药有限公司
葡萄糖天津市北方天医化学试剂厂
葡萄糖试剂盒中生北控生物科技有限公司
总胆固醇试剂盒中生北控生物科技有限公司
3.仪器：
AA-800型全自动生化仪，北京埃尔玛医用电子仪器有限公司离心机，北京医用离心机厂
二．实验方法：
1.对四氧嘧啶诱发的糖尿病模型小鼠的影响
1.1模型的建立
取健康无伤小鼠，禁食24小时，正常饮水，分别尾静脉一次注入四氧嘧啶（40mg/kg）造模，给药体积均为0.1ml/10g。（注射后4小时至32小时给小鼠饮用5%糖水）造模后7天，禁食16小时，正常饮水，小鼠眼底静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖。血糖值高于200mg/dl视为造模成功。
1.2药物治疗
选用上述造模成功者中血糖值相对集中的60只小鼠，随机分为6组：模型对照组、阳性对照二甲双胍组、蜂胶醇提物组、蜂胶总黄酮提取物低、高剂量组，每组10只，分别给予纯净水和和受试药，给药体积均为0.2ml/10g。连续给药14天，于第7、14天，同上方法测定血糖。采用SPSS11.0统计，结果见表5。
表5.对四氧嘧啶诱发的糖尿病模型小鼠的影响
与模型对照组比较 *P〈0.05**P〈0.01；与蜂胶醇提取组比较 #P〈0.05
结果表明：蜂胶醇提物与蜂胶总黄酮给药7天和14天均具有降低四氧嘧啶诱发的糖尿病模型小鼠的血糖的作用（P<0.05，P<0.01），相同剂量下（320mg/kg），蜂胶总黄酮的作用略优于蜂胶醇提物（P<0.05），且低、高剂量之间呈一定的量效关系。
实施例12：动物实验：本发明提取物对高胆固醇血症小鼠血清总胆固醇的影响
一．实验材料
1.实验动物：CR小鼠，体重18~22g，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2007-0001。
2.药品及试剂：
蜂胶总黄酮提取物（取自本发明实施例7）
蜂胶醇提取物（按照中国专利申请CN 201110117989.0中实施例2方法制备）
四氧嘧啶，Sigma公司
盐酸二甲双胍片，天津太平洋制药有限公司
葡萄糖天津市北方天医化学试剂厂
葡萄糖试剂盒中生北控生物科技有限公司
总胆固醇试剂盒中生北控生物科技有限公司
3.仪器：
AA-800型全自动生化仪，北京埃尔玛医用电子仪器有限公司离心机，北京医用离心机厂
二．实验方法：
1、对高胆固醇血症小鼠血清总胆固醇的影响
预防给药
取健康无伤小鼠70只，随机分为7组：空白对照组、模型对照组、阳性对照二甲双胍组、蜂胶醇提物组、蜂胶总黄酮低、高剂量组，每组10只，分别给予纯净水和和受试药，给药体积均为0.2ml/10g。连续给药7天，于第6天禁食，16小时后除空白对照组外，其余各组均腹腔注射75%新鲜蛋黄乳0.5ml/20g，16小时后各组小鼠眼眶静脉取血，分离血清做总胆固醇Tch测定。采用SPSS11.0统计，结果见表6。
表6.对高胆固醇血症小鼠血清总胆固醇的影响
与模型对照组比较 *P〈0.05**P〈0.01；与蜂胶醇提取组比较 #P〈0.05
结果表明：蜂胶醇提物与蜂胶总黄酮预防给药7天有高胆固醇血症小鼠血清胆固醇的作用（P<0.05，P<0.01），相同剂量下（320mg/kg），蜂胶总黄酮的作用略优于蜂胶醇提物（P<0.05），且低、高剂量之间呈一定的量效关系。
Claims (8)
1.一种蜂胶总黄酮提取物，其特征在于：采用如下制备方法得到：
（1）将蜂胶在-40℃～-60℃冷冻3～5h，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入50～80倍量的体积百分比浓度为70～80%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为400～600Mpa，提取的时间为10～15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的一种蜂胶总黄酮提取物，其特征在于，采用如下制备方法得到：所述
（1）将蜂胶在-40℃～-50℃冷冻4～5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入60～80倍量的体积百分比浓度为70～75%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为500～600Mpa，提取的时间为10～15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
3.根据权利要求2所述的一种蜂胶总黄酮提取物，其特征在于：采用如下制备方法得到：所述
（1）将蜂胶在-40℃冷冻5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入80倍量的体积百分比浓度为70%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取的时间为15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
4.一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：步骤如下：
（1）将蜂胶在-40℃～-60℃冷冻3～5h，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入50～80倍量的体积百分比浓度为70～80%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为400～600Mpa，提取的时间为10～15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
5.根据权利要求4所述的一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述
（1）将蜂胶在-40℃～-50℃冷冻4～5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入60～80倍量的体积百分比浓度为70～75%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为500～600Mpa，提取的时间为10～15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
6.根据权利要求5所述的一种蜂胶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述
（1）将蜂胶在-40℃冷冻5小时，粉碎成细粉；
（2）将粉碎后的蜂胶加入80倍量的体积百分比浓度为70%的乙醇溶液，用超高压提取设备进行提取，提取压力为600Mpa，提取的时间为15分钟；
（3）将提取液浓缩，干燥，即得。
7.权利要求1所述的一种蜂胶总黄酮提取物在制备降血糖药物中的用途。
8.权利要求1所述的一种蜂胶总黄酮提取物在制备降血脂药物中的用途。
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| .2008,第44卷(第4期),30-33. * |
| 吉林大学博士学位论文> * |
| 四川食品与发酵> * |
| 席军.高压加工技术在蜂胶黄酮类化合物提取中的应用研究.< * |
| 席军.高压加工技术在蜂胶黄酮类化合物提取中的应用研究.<<吉林大学博士学位论文>>.2005,正文第10-11、30-37页. |
| 张利等.蜂胶总黄酮的提取最佳工艺研究.< * |
| 张利等.蜂胶总黄酮的提取最佳工艺研究.<<四川食品与发酵>>.2008,第44卷(第4期),30-33. |
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| Publication number | Publication date |
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| CN103054907A (zh) | 2013-04-24 |
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