CN105037464A - 一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105037464A CN105037464A CN201510287839.2A CN201510287839A CN105037464A CN 105037464 A CN105037464 A CN 105037464A CN 201510287839 A CN201510287839 A CN 201510287839A CN 105037464 A CN105037464 A CN 105037464A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- vegetable flavonoid
- vegetable
- glucoside
- extraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 title abstract description 14
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 title abstract description 14
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 title abstract description 11
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 11
- -1 flavone compounds Chemical class 0.000 title abstract 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 28
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- KMOUJOKENFFTPU-UHFFFAOYSA-N Apigenin-7-glucosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=CC(O)=CC=3)OC2=C1 KMOUJOKENFFTPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- KMOUJOKENFFTPU-QNDFHXLGSA-N apigenin 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=CC(O)=CC=3)OC2=C1 KMOUJOKENFFTPU-QNDFHXLGSA-N 0.000 claims description 28
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 27
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 27
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 27
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 23
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 14
- 241000132536 Cirsium Species 0.000 claims description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 9
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 abstract description 5
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 abstract description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 abstract 1
- 239000002445 liver protective agent Substances 0.000 abstract 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 11
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 8
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 7
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 244000019459 Cynara cardunculus Species 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 231100000012 chronic liver injury Toxicity 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 1
- 206010007247 Carbuncle Diseases 0.000 description 1
- 235000019106 Cynara scolymus Nutrition 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010017553 Furuncle Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 208000034507 Haematemesis Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010019837 Hepatocellular injury Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010027514 Metrorrhagia Diseases 0.000 description 1
- SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N NSC 227190 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2C(OC3=CC=C(C=C3O2)C2C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010081750 Reticulin Proteins 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 231100000439 acute liver injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229950005499 carbon tetrachloride Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229930182486 flavonoid glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000007955 flavonoid glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 208000003512 furunculosis Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006750 hematuria Diseases 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000027700 hepatic dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000437 hepatocellular injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000697 sensory organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N silibinin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2[C@H](OC3=CC=C(C=C3O2)[C@@H]2[C@H](C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N 0.000 description 1
- 229960004245 silymarin Drugs 0.000 description 1
- 235000017700 silymarin Nutrition 0.000 description 1
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000000814 tuberculostatic agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于中药领域,具体涉及一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用。所述的植物黄酮类化合物,具有式Ⅰ所示的结构。本发明通过回流提取、萃取、柱层析等步骤从大蓟的根上部分分离提取到该植物黄酮类化合物,并经实验证实该植物黄酮类化合物在体外能显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖,而且能保护人肝细胞L02不受四氯化碳的损伤。所述的植物黄酮类化合物使用剂量低,毒副作用也低于临床常用的药物,可作为新型的护肝药物,用药途径简单,易操作。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
大蓟为菊科(Composite)管状花亚科菜蓟族(Cvnareae)蓟属(CirsiumMill.)植物C.japonicumDC.的干燥地上部分或根。菊科蓟属植物是广泛分布于北温带的一个大属,全世界约有300种蓟属植物,我国约有50种,全国各地都产,其中常用作药用植物的有10余种。大蓟是凉性植物,其味甘、苦,归经于心、肝,常用作凉血止血药,并有祛疲痛,治吐血、尿血、衄血、血淋、血崩、肠风、带下、肠痈、疔疮、痈疡肿毒、高血压等功效。
肝脏是人体最大的实质性器官,担负消化、解毒、分泌和生物合成功能,其功能障碍直接影响人体健康,甚至危及生命。我国是肝病发生率较高的国家之一,各种肝病严重危害着人们的身体健康,寻找和开发治疗肝病的有效药物是目前国内外肝病领域研究中的热点。引起肝病发生的因素很多,主要有病毒、酒精和化学物质三大因素,而肝细胞损伤是各型肝病共同的病理基础。其中,在我国以肝炎病毒和化学物质导致的肝病居多。化学性肝损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质和药物包括四氯化碳(CC14)、乙醇、半乳糖胺、扑热息痛及抗结核药物等。它们能通过生成氧自由基和前致炎因子,从诱导氧化应激和炎症反应,造成细胞膜和酶类破坏,进而引起肝细胞功能障碍,导致肝细胞凋亡或坏死,进一步引起整个肝脏功能的障碍。化学性肝损伤的起始靶部位都是质膜,质膜一经破坏就引起连锁反应,形成恶性循环降。在各种化学性肝病中,CC14所致的肝损伤是最常见的。
近年来研究发现,天然药物在肝病治疗方面有良好的效果和巨大潜力。天然药物治疗肝损伤作用主要为改善肝功能,降低转氨酶活性、降低血清总胆红素;促进肝糖元合成,保护肝细胞,防止急慢性肝损伤造成的糖元合成障碍;改善肝组织病理,对急性肝损伤能减轻细胞肿胀,防止细胞坏死、减少炎性细胞浸润,对慢性肝损伤能减轻细胞肿胀,防止脂肪变性;抑制肝胶原纤维、网状纤维增生,防止肝纤维化发生。天然药物抗肝损伤的作用机制主要为两方面:①抗氧化和②减少炎症因子生成。多种天然药物被认为能清除自由基,阻止肝细胞脂质过氧化,同时减少前炎症因子生成,抑制炎症反应,从而维持细胞膜的正常结构,避免细胞的损害。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点,本发明的首要目的在于提供一种植物黄酮类化合物。
本发明的另一目的在于提供上述植物黄酮类化合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述植物黄酮类化合物的应用。
本发明的目的通过下述方案实现:
一种植物黄酮类化合物,具有式Ⅰ所示的结构,命名为Apigenin-7-O-β-glucoside:
所述的植物黄酮类化合物的制备方法,包含如下步骤:
(1)将大蓟根上部分粉碎过筛,然后用乙醇溶液加热回流提取,提取液过滤,然后减压浓缩蒸干至膏状,得到大蓟乙醇粗提物;
(2)将步骤(1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分级萃取,制备得到不同极性部位;
(3)取步骤(2)制备得到的正丁醇部位,用硅胶拌样,晾干后,经聚酰胺柱层析,以氯仿-甲醇为洗脱剂,按照氯仿:甲醇(V:V)=100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、50:50、40:60、0:100进行梯度洗脱,经TLC分析合并相似流份,得到组分1~9,其中组分7由氯仿:甲醇(V:V)=50:50洗脱得到;
(4)将步骤(3)制备得到的组分7过凝胶柱分离纯化,甲醇洗脱,制得Apigenin-7-O-β-glucoside,即为植物黄酮类化合物;
步骤(1)中所述的过筛的目数优选为10~100目;
步骤(1)中所述的乙醇的体积分数优选为70%;
步骤(1)中所述的加热回流提取的温度优选为90~100℃;所述的加热回流提取次数优选为2~4次;所述的加热回流提取每次提取的时间优选为2~4h;
步骤(1)中所述的加热回流提取的温度进一步优选为100℃微沸状态下;所述的加热回流提取次数进一步优选为3次;所述的加热回流提取每次提取的时间进一步优选为3h;
步骤(1)中所述的减压浓缩的温度优选为40℃~45℃;
步骤(2)中所述的分级萃取的条件为:在室温下,等体积萃取2~4h;所述的室温的范围为20~40℃;所述的萃取时间优选为3h;
步骤(3)中所述的硅胶的目数优选为100~200目;
步骤(3)中所述的正丁醇部位与硅胶的质量比优选为1:1.5;
步骤(3)中所述的聚酰胺柱的规格为Φ8×120cm;
步骤(4)中所述的凝胶柱为葡聚糖凝胶柱;优选为SephadexLH-20;
步骤(4)中所述的洗脱的流速优选为2BV/h;
所述的植物黄酮类化合物具有抗肿瘤作用,可以应用于制备抗肿瘤药物;
所述的植物黄酮类化合物具有护肝作用,可以应用于制备护肝药物;
一种抗肿瘤药物,含有上述植物黄酮类化合物;
一种护肝药物,含有上述植物黄酮类化合物;
本发明的原理:植物来源的黄酮可以保护四氯化碳损伤的肝细胞,减少化学毒物对肝细胞的生长。本发明发现和确证植物黄酮Apigenin-7-O-β-glucoside具有显著的护肝活性,且植物黄酮Apigenin-7-O-β-glucoside的使用剂量低,在同样剂量下的毒副作用也较低。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
(1)本发明首次发现植物黄酮Apigenin-7-O-β-glucoside在体外能够保护L02细胞不受四氯化碳损伤。
(2)植物黄酮Apigenin-7-O-β-glucoside在体外能明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖,同阳性对照效果相当。
(3)植物黄酮Apigenin-7-O-β-glucoside的用药剂量比较低,而且在有效用药剂量范围内毒性较低。
(4)Apigenin-7-O-β-glucoside-1为黄酮类的单一化合物。
(5)本发明所述的植物黄酮Apigenin-7-O-β-glucoside-1的结构特征描述为:Apigenin-7-O-β-glucoside是一种黄酮苷,分子量为432。
附图说明
图1是Apigenin-7-O-β-glucoside的1H-NMR谱图。
图2是Apigenin-7-O-β-glucoside的13C-NMR谱图。
图3是Apigenin-7-O-β-glucoside对HepG2细胞增殖的抑制效果分析图,其中,Ap:Apigenin-7-O-β-glucoside;5-F:五-氟尿嘧啶。
图4是Apigenin-7-O-β-glucoside对四氯化碳诱导的L02细胞的保护作用分析图,其中,Ap:Apigenin-7-O-β-glucoside。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例中,人正常肝细胞L02、人肝癌细胞HepG2购自中科院上海生命科学研究院细胞资源中心;大蓟根上部分采自河南。
Apigenin-7-O-β-glucoside从大蓟根上部分中制备得到;
实施例1从大蓟根上部分中制备得到Apigenin-7-O-β-glucoside
(1)将购买的大蓟根上部分粉碎后过20目筛,称取1000g,用体积分数为70%的乙醇在100℃微沸状态下加热回流提取3次,每次3h,合并提取液,用2层40目纱布过滤,然后用旋转蒸发仪在40℃下减压浓缩蒸干至膏状,得到大蓟乙醇粗提物;
(2)在室温25℃下,将步骤(1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积分级萃取3h,制备得到不同极性部位;
(3)取步骤(2)制备得到的正丁醇部位,用100~200目硅胶按照正丁醇部位与硅胶的质量比1:1.5拌样,晾干后,经聚酰胺柱层析(Φ8×120cm),以氯仿-甲醇为洗脱剂,按照氯仿:甲醇(V:V)=100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、50:50、40:60、0:100进行梯度洗脱,得到组分1~9,其中组分7由氯仿:甲醇(V:V)=50:50洗脱得到,组分7经聚酰胺薄层色谱检测,主要为黄酮类物质;
(4)将步骤(3)制备得到的组分7过SephadexLH-20柱分离纯化,甲醇洗脱,洗脱的流速为2BV/h,即制得Apigenin-7-O-β-glucoside(8.5mg)。
实施例2从大蓟根上部分中制备得到Apigenin-7-O-β-glucoside
(1)将购买的大蓟根上部分粉碎后过40目筛,称取1000g,用体积分数为70%的乙醇在100℃微沸状态下加热回流提取2次,每次2h,合并提取液,用2层40目纱布过滤,然后用旋转蒸发仪在42℃下减压浓缩蒸干至膏状,得到大蓟乙醇粗提物;
(2)在室温30℃下,将步骤(1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积分级萃取2h,制备得到不同极性部位;
(3)取步骤(2)制备得到的正丁醇部位,用100~200目硅胶按照正丁醇部位与硅胶的质量比1:1.5拌样,晾干后,经聚酰胺柱层析(Φ8×120cm),以氯仿-甲醇为洗脱剂,按照氯仿:甲醇(V:V)=100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、50:50、40:60、0:100进行梯度洗脱,得到组分1~9,其中组分7由氯仿:甲醇(V:V)=50:50洗脱得到,组分7经聚酰胺薄层色谱检测,主要为黄酮类物质;
(4)将步骤(3)制备得到的组分7过SephadexLH-20柱分离纯化,甲醇洗脱,洗脱的流速为2BV/h,即制得Apigenin-7-O-β-glucoside(8.2mg)。
实施例3从大蓟根上部分中制备得到Apigenin-7-O-β-glucoside
(1)将购买的大蓟根上部分粉碎后过100目筛,称取1000g,用体积分数为70%的乙醇在100℃微沸状态下加热回流提取2次,每次2.5h,合并提取液,用2层40目纱布过滤,用旋转蒸发仪在45℃下减压浓缩蒸干至膏状,得到大蓟乙醇粗提物;
(2)在室温40℃下,将步骤(1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积分级萃取4h,制备得到不同极性部位;
(3)取步骤(2)制备得到的正丁醇部位,用100~200目硅胶按照正丁醇部位与硅胶的质量比1:1.5拌样,晾干后,经聚酰胺柱层析(Φ8×120cm),以氯仿-甲醇为洗脱剂,按照氯仿:甲醇(V:V)=100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、50:50、40:60、0:100进行梯度洗脱,得到组分1~9,其中组分7由氯仿:甲醇(V:V)=50:50洗脱得到;组分7经聚酰胺薄层色谱检测,主要为黄酮类物质;
(4)将步骤(3)制备得到的组分7过SephadexLH-20柱分离纯化,甲醇洗脱,洗脱的流速为2BV/h,即制得Apigenin-7-O-β-glucoside(8.4mg)。
实施例4Apigenin-7-O-β-glucoside的1H–NMR和13C-NMR谱图
取实施例1中制备得到的Apigenin-7-O-β-glucoside10mg,用氘代DMSO溶解后利用核磁共振仪,以TMS为内标物,测定其氢谱(1H-NMR)。
1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:12.97(1H,s,5-OH),10.41(1H,s,4'-OH),7.96(2H,d,J=8.4Hz,H-2',6'),6.94(2H,d,J=8.4Hz,H-3',5'),6.88(1H,s,H-3),6.83(1H,d,J=1.8Hz,H-8),6.45(1H,d,J=1.8Hz,H-6),5.09(1H,d,J=6.1Hz,Glc-H-1”),3.97~3.50(6H,m,糖基质子)(图1)。
取实施例1中制备得到的Apigenin-7-O-β-glucoside10mg,用氘代DMSO溶解后利用核磁共振仪,以TMS为内标物,测定碳谱(13C-NMR)。
13C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:182.0(C-4),164.2(C-2),162.9(C-7),161.3(C-5),161.1(C-4'),156.9(C-9),128.6(C-2',6'),121.0(C-1'),116.0(C-3',5'),105.3(C-10),103.1(C-3),99.9(C-6),99.7(C-1”),94.8(C-8),77.1(C-3”),76.4(C-5”),73.1(C-2”),69.5(C-4”),60.6(C-6”)(图2)。
从1H-NMR,13C-NMR来看,Apigenin-7-O-β-glucoside由一个葡萄糖和一个黄酮组成。
实施例5MTT法检测Apigenin-7-O-β-glucoside对肝癌细胞HepG2增殖的影响
将HepG2细胞以1×105个/mL浓度接种于96孔细胞培养板(100μL/孔),置37℃,5%CO2恒温培养箱中培养。待孔板中的细胞完全贴壁后,加入含有不同终浓度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)Apigenin-7-O-β-glucoside样品(实施例1制备)的细胞培养液100μL。同时设细胞对照组,即加入与样品液等量体积的完全培养液;阳性对照组,加与Apigenin-7-O-β-glucoside样品同浓度梯度同体积的五-氟尿嘧啶作为阳性对照。每个浓度设6个平行。在37℃,5%CO2培养箱中继续培养,24h后取出,倒置显微镜观察细胞形态的变化。用1mL注射器小心地吸弃96孔板中的培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗板2次,然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL(需关灯操作,MTT见光易分解)和DMEM完全培养液180μL,在37℃,5%CO2培养箱中继续培养4h。小心吸弃孔内的细胞培养液,每孔加入150μLDMSO,振荡10min。用酶联免疫检测仪在波长为490nm下测定其吸光度值。
结果见图3,Apigenin-7-O-β-glucoside能够抑制HepG2细胞增殖,并呈现梯度依赖性。
实施例4Apigenin-7-O-β-glucoside对四氯化碳损伤的L02细胞的保护作用
取对数生长期的L02细胞,以1×105个/mL浓度接种于96孔细胞培养板(100μL/孔),置37℃,5%CO2恒温培养箱中培养。待孔板中的细胞完全贴壁后,吸弃上清,按如下分组要求给药,每组6个复孔。样品组:加入含有不同终浓度(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)Apigenin-7-O-β-glucoside样品(实施例1制备)的细胞培养液,细胞对照组和模型组:加入等量的培养液,阳性对照组:加入与样品组相同浓度的水飞蓟素。6h后除细胞对照组加入不含CCl4的100μL培养液,其余各孔中都加100μL含CCl4(10mmol/L)的培养液。37℃,饱和湿度,5%的CO2恒温培养箱中培养24h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化。并小心地吸弃96孔板中的培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗板2次,然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL(需关灯操作,MTT见光易分解)和DMEM完全培养液180μL,在37℃,5%CO2培养箱中继续培养4h。小心吸弃孔内的细胞培养液,每孔加入150μLDMSO,振荡10min。用酶联免疫检测仪在波长为490nm下测定其吸光度值。
结果见图4,与模型组对比,细胞存活率显著增大,并呈现浓度依赖性,且细胞存活率与阳性对照相当。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种植物黄酮类化合物,其特征在于具有式Ⅰ所示的结构:
2.权利要求1所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于包含如下步骤:
(1)将大蓟根上部分粉碎过筛,然后用乙醇溶液加热回流提取,提取液过滤,然后减压浓缩蒸干至膏状,得到大蓟乙醇粗提物;
(2)将步骤(1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分级萃取,制备得到不同极性部位;
(3)取步骤(2)制备得到的正丁醇部位,用硅胶拌样,晾干后,经聚酰胺柱层析,以氯仿-甲醇为洗脱剂,按照氯仿:甲醇V:V=100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、50:50、40:60、0:100进行梯度洗脱,经TLC分析合并相似流份,得到组分1~9,其中组分7由氯仿:甲醇V:V=50:50洗脱得到;
(4)将步骤(3)制备得到的组分7过凝胶柱分离纯化,甲醇洗脱,制得Apigenin-7-O-β-glucoside,即为植物黄酮类化合物。
3.根据权利要求2所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的乙醇的体积分数为70%。
4.根据权利要求2所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的加热回流提取的温度为90~100℃;所述的加热回流提取次数为2~4次;所述的加热回流提取每次提取的时间为2~4h。
5.根据权利要求2所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的减压浓缩的温度为40℃~45℃;
步骤(2)中所述的分级萃取的条件为:在室温下,等体积萃取2~4h。
6.根据权利要求2所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于:
步骤(3)中所述的硅胶的目数为100~200目;
步骤(3)中所述的正丁醇部位与硅胶的质量比为1:1.5。
7.根据权利要求2所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于:步骤(4)中所述的凝胶柱为葡聚糖凝胶柱。
8.根据权利要求2所述的植物黄酮类化合物的制备方法,其特征在于:步骤(4)中所述的洗脱的流速为2BV/h。
9.权利要求1所述的植物黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.权利要求1所述的植物黄酮类化合物在制备护肝药物中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510287839.2A CN105037464B (zh) | 2015-05-29 | 2015-05-29 | 一种大蓟黄酮类化合物及其制备方法与在制备抗肿瘤或护肝药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510287839.2A CN105037464B (zh) | 2015-05-29 | 2015-05-29 | 一种大蓟黄酮类化合物及其制备方法与在制备抗肿瘤或护肝药物中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105037464A true CN105037464A (zh) | 2015-11-11 |
CN105037464B CN105037464B (zh) | 2018-01-16 |
Family
ID=54444482
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510287839.2A Expired - Fee Related CN105037464B (zh) | 2015-05-29 | 2015-05-29 | 一种大蓟黄酮类化合物及其制备方法与在制备抗肿瘤或护肝药物中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105037464B (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108929352A (zh) * | 2018-08-13 | 2018-12-04 | 江西普正制药有限公司 | 一种竹叶柴胡黄酮类化合物及其制备方法 |
CN109432152A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-03-08 | 四川师范大学 | 一种大蓟提取物及其制备方法和用途 |
CN110483488A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-11-22 | 河南中医药大学 | 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用 |
CN115181024A (zh) * | 2021-04-07 | 2022-10-14 | 中国医学科学院药物研究所 | 间苯三酚类化合物及其抗肝损伤用途 |
-
2015
- 2015-05-29 CN CN201510287839.2A patent/CN105037464B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
HOSSAM M. ABDALLAH ET AL.: "Protective effect of Echinops galalensis against CCl4-induced injury on the human hepatoma cell line (Huh7)", 《PHYTOCHEMISTRY LETTERS》 * |
LIWU CHEN ET AL.: "Prediction of anti-tumor chemical probes of a traditional Chinese medicine formula by HPLC fingerprinting combined with molecular docking", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
冯旭 等: "酸藤子化学成分研究", 《中药材》 * |
宋泽规 等: "大蓟的研究进展", 《广州化工》 * |
逯梦亚 等: "葵花大蓟的化学成分研究", 《西北药学杂志》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108929352A (zh) * | 2018-08-13 | 2018-12-04 | 江西普正制药有限公司 | 一种竹叶柴胡黄酮类化合物及其制备方法 |
CN109432152A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-03-08 | 四川师范大学 | 一种大蓟提取物及其制备方法和用途 |
CN110483488A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-11-22 | 河南中医药大学 | 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用 |
CN110483488B (zh) * | 2019-09-03 | 2021-09-21 | 河南中医药大学 | 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用 |
CN115181024A (zh) * | 2021-04-07 | 2022-10-14 | 中国医学科学院药物研究所 | 间苯三酚类化合物及其抗肝损伤用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105037464B (zh) | 2018-01-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105820147B (zh) | 一枝蒿活性成分的制备方法及其用途 | |
CN103316096A (zh) | 一种黑种草子总黄酮提取物及其制备方法和用途 | |
CN105037464A (zh) | 一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用 | |
CN102133255B (zh) | 一种抗肿瘤的鬼臼类中药提取物及其制备方法与应用 | |
CN104873560B (zh) | 一种大蓟总黄酮及其制备方法与在制备抗肿瘤或护肝药物中的应用 | |
CN101669979A (zh) | 滨蒿提取物及其生产方法和应用 | |
CN104945452B (zh) | 一种连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物的制备方法及其应用 | |
CN109232491A (zh) | 一种华泽兰中苯并呋喃类化合物的制备方法及用途 | |
CN101028322B (zh) | 毛裂蜂斗菜提取物用于制备防治肿瘤疾病药物的用途 | |
CN102775375B (zh) | 一种色酮类化合物及制备方法、应用以及所制备的抗艾滋病药物组合物和制剂 | |
CN102030800B (zh) | 杉松三萜类化合物及其提取分离与应用 | |
CN101161668B (zh) | 黄酮碳苷类化合物在制备治疗和预防肝炎药物中的应用 | |
CN104523733B (zh) | 一种抗衰老作用的药物组合物 | |
CN103784427B (zh) | 含桉烷型倍半萜的药物组合物及其在制药中的应用 | |
CN1698606A (zh) | 喹诺里西啶类生物碱在制备抗乙肝病毒药物中的用途 | |
CN102138957B (zh) | 药西瓜提取物及其生产方法和应用 | |
CN100590119C (zh) | 一种抗肿瘤化合物红波罗花碱a及其制备方法和应用 | |
CN101982171B (zh) | 苦豆双黄酮苷在制备抗病毒或/和抗肿瘤药物中的应用 | |
CN103880913B (zh) | 一种具有保肝作用的化合物及其应用 | |
CN103113196B (zh) | 一种连钱草酚及其制备方法和应用 | |
CN102697800B (zh) | 繁缕多糖组合物及其在制备抗病毒药物中的应用 | |
CN101721434A (zh) | 一种阿里红有效组分及其制备方法和用途 | |
CN105640933A (zh) | 黄酮类化合物在制备抗乙肝病毒药物中的用途 | |
CN105017376B (zh) | 一种楮头红甾体皂苷及其应用 | |
CN103285052A (zh) | 长柱金丝桃提取物在制备抗肿瘤及抑制肿瘤生长药物中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180116 |