CN112043755A - 鸡矢藤提取物、其制备方法和用途 - Google Patents

鸡矢藤提取物、其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种鸡矢藤提取物，其中所述鸡矢藤提取物包含大于60wt％的环烯醚萜类化合物，并且所述环烯醚萜类化合物主要由车叶草苷酸、车叶草苷、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯组成，其中鸡矢藤苷酸占所述环烯醚萜类化合物的30.0wt％‑50.0wt％，优选约40wt％。本发明还提供所述鸡矢藤提取物的制备方法及其在制备用于降尿酸的药物中的用途。

Description

鸡矢藤提取物、其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及鸡矢藤提取物、其制备方法和用途。
背景技术
鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr为茜草科植物鸡矢藤的地上部分或全草，又名鸡屎藤和臭藤。鸡矢藤味甘酸、性平，入肝、胃、大肠经，有消食化积、祛风活血、止痛消肿的功效，主要分布于我国东南沿海以及长江流域等地区，是传统中药材。现代药理学研究证明，鸡矢藤具有显著的抗炎、镇痛、镇静和治疗消化系统疾病等多种作用。鸡矢藤化学成分主要有环烯醚萜苷类、黄酮、三萜、甾体和苯丙素类以及挥发油等多种天然产物。
中国专利公布说明书CN105287790A公开了一种鸡矢藤提取物及其应用。其中所提及的鸡矢藤提取物含有60％-99％的环烯醚萜苷类，但并没有公开所述鸡矢藤提取物所含的环烯醚萜苷类的具体化合物及其含量。中国专利公布说明书CN101049360公开了一种治疗痛风疾病的中药制剂及鸡矢藤提取物的用途，其中所提及的鸡矢藤提取物含有鸡矢藤苷、鸡矢藤次苷、车叶草苷、鸡矢藤苷酸、脱乙酰车叶草苷、熊果酸、谷甾醇、脂肪酸、脂肪醇及挥发油成分，但并没有公开所含化合物含量。
申请人之前的中国专利公布说明书CN104398619A、CN104435226A和CN104474068A公开了鸡矢藤提取物并公开了其在降尿酸、抗炎和抗痛风关节炎等方面的用途。本申请在上述公开的鸡矢藤提取物前提下，通过进一步精制获得了一种新的鸡矢藤提取物。其中所含环烯醚萜类化合物含有车叶草苷酸、车叶草苷、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯，并在总提取物中含量占比大于60％，同时具有很好的降尿酸作用。
发明内容
本发明在上述公开的鸡矢藤提取物前提下，通过进一步精制获得了一种新的鸡矢藤提取物。其中所含环烯醚萜类化合物含有车叶草苷酸、车叶草苷、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯，并在鸡矢藤总提取物中含量占比大于60％。本申请证明了本申请获得的新的鸡矢藤提取物相对于现有技术的鸡矢藤提取物而言具有更好的体外降尿酸活性。
因此，一方面，本发明提供鸡矢藤提取物，其中所述鸡矢藤提取物包含大于60wt％的环烯醚萜类化合物，并且所述环烯醚萜类化合物主要由车叶草苷酸、车叶草苷、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯组成，其中鸡矢藤苷酸占所述环烯醚萜类化合物的30.0wt％-50.0wt％，优选约40wt％；
其由以下方法制备：
a)将鸡矢藤药材经乙醇提取获得提取液；
b)将所述提取液浓缩至无醇味，首次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和80％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，再次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和25％-35％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，获得鸡矢藤粗提物；
c)将所述鸡矢藤粗提物上样聚酰胺色谱柱，用水洗脱，分段收集洗脱液，减压，干燥，获得鸡矢藤提取物。
根据本发明的一个优选的实施方案，所述鸡矢藤药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂。
根据本发明的一个优选的实施方案，b)步骤中首次上样大孔吸附树脂后依次用水和85％乙醇洗脱。
根据本发明的一个优选的实施方案，b)步骤中再次上样大孔吸附树脂后依次用水和30％乙醇洗脱。
根据本发明的一个优选的实施方案，b)步骤中所述大孔吸附树脂的型号为D101。
根据本发明的一个优选的实施方案，b)步骤中所述大孔吸附树脂的柱径高比为1:8-1:12。
根据本发明的一个优选的实施方案，b)步骤中首次上样和再次上样的流速均为1.0-2.0BV/h，洗脱流速为4-6BV/h。
根据本发明的一个优选的实施方案，c)步骤中聚酰胺色谱柱的柱径高比为1:8-1:12，粒径30-50目。
本发明的第二方面提供一种制备鸡矢藤提取物的方法，包括如下步骤：
a)将鸡矢藤药材经乙醇提取获得提取液；
b)将所述提取液浓缩至无醇味，首次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和80％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，再次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和25％-35％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，获得鸡矢藤粗提物；
c)将所述鸡矢藤粗提物上样聚酰胺色谱柱，用水洗脱，分段收集洗脱液，减压，干燥，获得鸡矢藤提取物。
本发明的第三方面提供上述鸡矢藤提取物在制备用于降尿酸的药物中的用途。
本发明的第四方面提供上述鸡矢藤提取物在制备治疗痛风关节炎的药物中的用途。
本发明的第五方面提供上述鸡矢藤提取物在制备治疗高尿酸血症的药物中的用途。
本发明的鸡矢藤提取物的制备方法工艺简单、设计合理，环境污染小。该方法对环境无污染，乙醇用量少，成本较低，收率较高，适宜工业化生产。
由于本发明的鸡矢藤提取物所含环烯醚萜类化合物的独特组分及其含量，因此其相对于现有技术的鸡矢藤提取物而言对急性高尿酸血症大鼠亦有更显著的降尿酸作用。
附图说明
图1为本发明实施例1所得的鸡矢藤提取物-1的高效液相色谱图。
图2为本发明实施例2所得的鸡矢藤提取物-2的高效液相色谱图。
其中本发明实施例1所得的鸡矢藤提取物-1和本发明实施例2所得的鸡矢藤提取物-2中三个化合物的含量分别如下表所示：
Figure BDA0002085818840000041
具体实施方式
实施例1：
取云南鸡矢藤药材(批号150830)10kg，加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，提取3次，过滤合并提取液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至使溶解，离心，取上清液上大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂)，树脂柱径高比为1:8，上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为5.0BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱2BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用85％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集85％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至使溶解，离心，取上清液上大孔吸附树脂(树脂柱径高比为1:8)上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为5.0BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱2BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用30％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集30％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤粗提取物。称取50g鸡矢藤粗提物，加100ml去离子水使溶解，上聚酰胺色谱柱(粒径30-50目，层析柱径高比为1:10)，去离子水洗脱，每1000ml收集一份，分别回收，取第3份，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤提取物-1，其中交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯含量分别为：3.27％、40.04％、6.70％、11.03％。
实施例2：
取云南鸡矢藤药材(批号150830)10kg，加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，提取3次,过滤合并提取液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至使溶解，离心，取上清液上大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂)，树脂柱径高比为1:9，上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为4.0BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱3BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用85％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集85％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至使溶解，离心，取上清液上大孔吸附树脂(树脂柱径高比为1:9)上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为4.0BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱3BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用30％乙醇洗脱树脂柱5BV，收集30％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤粗提取物。称取50g鸡矢藤粗提物，加100ml去离子水使溶解，上聚酰胺色谱柱(粒径30-50目，层析柱径高比为1:10)，去离子水洗脱，每1000ml收集一份，分别回收，取第4份，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤提取物-2，其中车叶草苷酸、车叶草苷、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯含量分别为：3.68％、41.43％、5.83％、11.07％。
对比例(CN104435226A的实施例1)：
取云南药材(批号：131110)1.0kg，加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，提取3次，过滤合并提取液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至4L使溶解，离心，取上清液上D101大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101树脂)，树脂柱径高比为1:8，上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为5BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱2BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用85％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集85％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤提取物16.43g，得率为1.64％，以鸡矢藤苷酸为标准品外标法计算鸡矢藤苷的含量为4.56％。
实施例3：本发明鸡矢藤提取物治疗氧嗪酸钾致大鼠急性高尿酸血症模型的降尿酸实验
一、仪器和材料
1.1受试药物
1.1.1样品
名称/缩写号：实施例1获得的鸡矢藤提取物-1、实施例2获得的鸡矢藤提取物2
来源：上海医药工业研究院
批号和规格：180921-3(鸡矢藤提取物-1)；180921-4(鸡矢藤提取物-2)
性状和保存条件：淡棕色粉末，低温避光密封保存；
药物配制方法：生理盐水稀释；
设计剂量：100mg/kg；
给药途径及体积：灌胃，按体重折算计量给药。
1.1.2阳性对照
名称/缩写号：别嘌醇片；
来源：上海信宜万象药业有限公司；
批号和规格：(110802)，100毫克；
性状和保存条件：片剂，室温干燥保存；
设计剂量：50mg/kg；
给药途径及体积：灌胃，按体重折算计量给药。
1.2仪器和试剂
1.2.1实验仪器
(1)电子分析天平，型号：Sartorius ALC-210.3，生产厂家：赛多利斯公司；
(2)高速离心机，型号：5810R，生产厂家：Eppendorf(德国)；
(3)全自动血清生化分析仪，型号：7080，生产厂家：日历(日本)；
(4)鼠称，生产厂家：南京以马内利医药仪器有限公司；
1.2.2实验试剂
造模剂：氧嗪酸钾(Adamas Reagent Co.,Ltd；LOT：P 1275208)；
溶媒：生理盐水。
1.3动物
1.3.1动物来源
品系和种属：SD大鼠
动物质量合格证号：2015000550327
提供单位：上海斯莱克实验动物责任有限公司
生产许可证：SCXK(沪)2015-0005
使用单位：上海医药工业研究院
使用许可证：SYXK(沪)2014-40018
1.3.2动物规格
SPF级SD大鼠，6-8周周龄，180-220g。
1.3.3性别及数量
雄性，36只。
1.3.4动物饲养
SPF级环境动物室，实验动物使用许可证号：SYXK(沪)2014-0018。动物均喂以标准SPF级全价鼠饲料，饲料购于中科院上海斯莱科实验动物中心。动物饮用水采用饮水瓶供应，动物自由饮水。每笼饲养动物10-15只，动物设定室温20℃-22℃，湿度40％-70％，光照12小时明暗交替。垫料每周至少更换2次，同时更换饲养盒，遇有异常情况时随时更换饲养盒。每天更换消毒饮水瓶和瓶塞，每两周消毒1次笼架。所有换洗的笼具清洗过后均采用高压灭菌。
二、实验方法
2.1药物配制
(1)受试药配置：将受试样品溶于0.9％生理盐水中，按100mg/kg剂量配成混悬液，储存于4℃冰箱备用。
(2)氧嗪酸钾混悬液：氧嗪酸钾粉末按300mg/kg剂量以0.9％生理盐水配成混悬液，实验当天现配。
(3)别嘌醇混悬液：按50mg/kg剂量配成混悬液，配置方法同(1)。
2.2造模及分组
2.2.1动物分组
动物经适应性饲养1周后，随机分为6组，每组6只。组别为正常对照组、模型组、阳性药组，100mg/kg剂量组。
2.2.2造模和给药
分组结束后除正常组外，其余各组大鼠腹腔给予氧嗪酸钾混悬液(1ml/只)，间隔1h后灌胃给药，正常和模型组大鼠给予等体积生理盐水。
2.2.3指标检测
给药结束后1h大鼠眼底静脉丛取血，所得全血按12000rpm离心5min分离血清，送日立血清生化检测仪考察，检测血清内尿酸(UA)含量的变化情况。
三、实验结果
表1：鸡矢藤提取物对氧嗪酸钾所致的急性高尿酸血症SUA的影响
Figure BDA0002085818840000081
Figure BDA0002085818840000082
与正常组比较：#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01
结果如表1所示，模型组大鼠血尿酸浓度与正常对照组相比有极显著差异(P<0.001)，造模成功；阳性药别嘌醇对内源性尿酸升高导致的SUA升高有极显著抑制作用(P<0.001)，本发明实施例2获得的鸡矢藤总环烯醚萜提取物-2对急性高尿酸血症大鼠亦有极显著的降尿酸作用(P<0.001)。
表2：鸡矢藤提取物对氧嗪酸钾所致的急性高尿酸血症SUA的影响
Figure BDA0002085818840000091
Figure BDA0002085818840000092
与正常组比较：#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01
结果如表2所示，模型组大鼠血尿酸浓度与正常对照组相比有极显著差异(P<0.001)，造模成功；阳性药别嘌醇对内源性尿酸升高导致的SUA升高有极显著抑制作用(P<0.001)，本发明实施例1获得的鸡矢藤提取物-1对急性高尿酸血症大鼠亦有极显著的降尿酸作用(P<0.001)。

Claims (11)

1.鸡矢藤提取物，其中所述鸡矢藤提取物包含大于60wt％的环烯醚萜类化合物，并且所述环烯醚萜类化合物主要由车叶草苷酸、车叶草苷、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯组成，其中鸡矢藤苷酸占所述环烯醚萜类化合物的30.0wt％-50.0wt％，优选约40wt％；
其由以下方法制备：
a)将鸡矢藤药材经乙醇提取获得提取液；
b)将所述提取液浓缩至无醇味，首次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和80％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，再次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和25％-35％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，获得鸡矢藤粗提物；
c)将所述鸡矢藤粗提物上样聚酰胺色谱柱，用水洗脱，分段收集洗脱液，减压，干燥，获得鸡矢藤提取物。
2.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物，其特征在于，b)步骤中首次上样大孔吸附树脂后依次用水和85％乙醇洗脱，并收集85％乙醇的洗脱液。
3.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物，其特征在于，b)步骤中再次上样大孔吸附树脂后依次用水和30％乙醇洗脱，并收集30％乙醇的洗脱液。
4.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物，其特征在于，b)步骤中所述大孔吸附树脂的型号为D101。
5.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物，其特征在于，b)步骤中所述大孔吸附树脂的柱径高比为1:8-1:12。
6.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物，其特征在于，b)步骤中首次上样和再次上样的流速均为1.0-2.0BV/h，洗脱流速为4-6BV/h。
7.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物，其特征在于，c)步骤中聚酰胺色谱柱的柱径高比为1:8-1:12，粒径30-50目。
8.一种制备鸡矢藤提取物的方法，包括如下步骤：
a)将鸡矢藤药材经乙醇提取获得提取液；
b)将所述提取液浓缩至无醇味，首次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和80％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，再次上样大孔吸附树脂层析，依次用水和25％-35％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，获得鸡矢藤粗提物；
c)将所述鸡矢藤粗提物上样聚酰胺色谱柱，用水洗脱，分段收集洗脱液，减压，干燥，获得鸡矢藤提取物。
9.如权利要求1-7所述的鸡矢藤提取物或如权利要求8的方法所获得的鸡矢藤提取物在制备用于降尿酸的药物中的用途。
10.权利要求1-7任一项所述的鸡矢藤提取物或如权利要求8的方法所获得的鸡矢藤提取物在制备治疗痛风关节炎的药物中的用途。
11.权利要求1-7任一项所述的鸡矢藤提取物或如权利要求8的方法所获得的鸡矢藤提取物在制备治疗高尿酸血症的药物中的用途。
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