CN101480423A - 制备富含丹酚酸a的丹参提取物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从中药丹参中提取富含丹酚酸A的丹参提取物的方法。本发明将丹参粗提液用乙醇沉淀去除一部分杂质，再进行保温转化，可以提高中间产物中丹酚酸A的含量，然后进行有机溶剂萃取，进一步去除水溶性杂质，最后经过色谱分离，使丹酚酸A含量达到50％以上，甚至达到90％以上，工艺简单合理，提高了产率。

Description

制备富含丹酚酸A的丹参提取物的方法

技术领域

本发明涉及一种从中药丹参中提取富含丹酚酸A的丹参提取物的方法。

背景技术

丹参是最常用的中药之一，临床上主要用于高血压、心绞痛、冠心病及中风等心脑血管疾病。自80年代起对丹参水溶性成分进行了系统的研究，从中分离得到了13个丹酚酸类化合物，其中活性最高的两个化合物为丹酚酸A和丹酚酸B。

中国专利申请CN1397276于2002年公开了用水或醇提取，经树脂或聚酰胺层析，再用硅胶柱层析制备丹酚酸A的方法。中国专利申请CN1513848于2003年公开了采用水温浸，离心，超滤，调酸，有机溶剂萃取，再经反相柱层析制备丹酚酸A的方法。中国专利申请CN1887849A于2007年公开了采用水或醇提取，柱层析，调酸，有机溶剂萃取制备丹酚酸A的方法。中国专利申请CN1830947A于2006年公开了采用水或醇提取，高温高压反应，柱层析，调酸，有机溶剂萃取制备丹酚酸A的方法。中国专利申请CN100999470A于2007年公开了采用水或醇提取，调酸，加热，过大孔树脂柱，再过硅胶或葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺柱，调酸，有机溶剂萃取制备丹酚酸A的方法。以上的这些方法都是将提取液直接进行色谱分离，容易污染色谱柱，分离效果不好，纯度达不到要求，并且有些方法工艺复杂，不适合工业化生产。

发明内容

本发明目的在于提供一种制备富含丹酚酸A的丹参提取物的工艺，解决现有技术存在的不足，使丹酚酸A提取工艺更加简单，提取率高，纯度好，工艺稳定，更加适合工业化生产。

本发明人经过大量的试验发现，首先将提取液用乙醇沉淀去除一部分杂质，再进行保温，可以提高中间产物中丹酚酸A的含量，然后进行有机溶剂萃取，进一步去除水溶性杂质，最后经过色谱分离，使丹酚酸A含量达到50％以上，甚至达到90％以上，工艺简单合理，提高了产率。

更具体的说，本发明所述的提取分离富含丹酚酸A的丹参提取物方法包括以下步骤：

步骤(1)、向丹参饮片或初粉中加入适量的溶剂进行提取或渗漉，所述溶剂优选为水、碱水溶液(例如：碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水的水溶液，优选浓度约0.1-2％，更优选0.2-1.5％)、甲醇、乙醇、丙酮或者它们的混合溶液，优选提取溶剂用量为丹参重量的4～15倍(优选6-12倍，更优选8-10倍)，优选采用回流或渗漉提取；过滤，得提取液，将提取液浓缩，优选使得浓缩液的比重为1～1.3(优选1.1-1.25)；加乙醇，边加边搅拌，至达醇浓度为40～90％(优选50-80％，更优选60-70％)，放置，使沉淀静置，取上清液，浓缩，得浓缩液；或在一定温度下，加入澄清剂，优选澄清剂为酸(优选醋酸、盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸橼酸、乳酸等等，更优选醋酸、盐酸)、甲壳素类，明胶，101果汁澄清剂，ZTC1+1(天津正天成澄清技术有限公司)，优选澄清剂的浓度为0.1％～20％(优选3-10％)，搅拌，过滤，将滤液浓缩，得浓缩液。

步骤(2)、将浓缩液在40℃～100℃(优选50-90℃，更优选60-80℃)的温度下保温6～72小时(优选10-60小时，更优选20-50小时)。

步骤(3)、将上述保温后的溶液用酸(优选醋酸、盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸橼酸、乳酸等等，更优选醋酸、盐酸)调节PH值为1～6(优选2-5，更优选2.5-4)；用有机溶剂萃取，得萃取液，所述有机溶剂优选为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯；回收有机溶剂，得萃取物。

步骤(4)、将上述萃取物用溶剂溶解，所述溶剂优选为水、碱水溶液(例如：碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水的水溶液，优选浓度约0.1-2％，更优选0.2-1.5％)、甲醇、乙醇、丙酮或者它们的混合溶液；经色谱柱吸附，优选色谱柱中的填料为大孔树脂、凝胶或聚酰胺；用水、醇-水溶液或醇或丙酮-水进行洗脱，优选洗脱剂为水，乙醇、甲醇或丙酮及其水溶液；收集并合并含有丹酚酸A的级份，干燥(优选减压或真空或冷冻干燥)，得富含丹酚酸A的丹参提取物。

根据本发明的制备丹参提取物的方法，用水或有机溶剂提取，主要是充分提取出丹酚酸类成分，提取液浓缩后用乙醇进行沉淀，去除一些醇不溶性杂质；保温的作用是在温和的反应条件下，将一些其它酚酸类成分转化成丹酚酸A，使丹酚酸A的收率明显提高；调节PH值后，用有机溶剂萃取，进一步去除非酚酸类的水溶性杂质，使下一步的色谱分离样品更加纯化，减少对色谱柱的污染，延长色谱柱的寿命，并且保证得到富含丹酚酸A的丹参提取物样品。经过上述提取分离，丹酚酸A的含量大于50％，工艺简单，适合大规模生产。

本发明还涉及一种富含丹酚酸A的制剂，其中含有按照本发明的方法制备的富含丹酚酸A的丹参提取物，所述制剂为片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、口服液、滴丸或眼用制剂等药物制剂形式。

本发明中检测丹酚酸A的含量的方法采用高效液相色谱法，以丹酚酸A对照品为标准进行计算。

在本发明中，测定丹酚酸A的高效液相方法如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录V)测定。

色谱条件与系统适应性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相:甲醇-0.4％醋酸水溶液(50:50)；流速1.0ml/min；检测波长286nm；理论板数按丹酚酸A计不低于3000。

丹酚酸A对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸A对照品，加甲醇制成每1ml含丹酚酸A0.2mg的溶液。

供试品溶液的制备：精密称取样品10mg置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得。

测定：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算，得到样品中丹酚酸A的含量。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

取丹参饮片或粗粉，加10倍量水回流提取3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至比重为1.2，加入95％乙醇，边加边搅拌，至醇浓度达到60％，静置24小时，吸取上清液，减压回收乙醇至无醇味，70℃保温24小时，取出，放置至室温，用1M盐酸调节PH值至3，用等量的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压回收乙酸乙酯至干，得干浸膏，干浸膏用10％乙醇溶解，上大孔树脂HP-20(日本三菱株式会社)，分别用10％、30％、50％、70％乙醇洗脱，用高效夜相色谱仪进行监测，收集含有丹酚酸A的组份，减压干燥，既得，经测定，丹酚酸A含量为62.36％。

实施例2.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例1的方法基本相同，所不同的是大孔树脂改为SephadexLH20。经测定，丹酚酸A含量为90.41％。

实施例3.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例1的方法基本相同，所不同的是大孔树脂改为聚酰胺，经测定，丹酚酸A含量为82.55％。

实施例4.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例1的方法基本相同，所不同的是保温温度改为80℃，保温时间改为20小时，经测定，丹酚酸A含量为71.72％。

实施例5.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例1的方法基本相同，所不同的是萃取所用的溶剂改为乙酸丙酯，经测定，丹酚酸A含量为75.18％。

实施例6.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例2基本相同，所不同的是萃取所用的溶剂改为乙酸丙酯，经测定，丹酚酸A含量为71.47％。

实施例7.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例1的方法基本相同，所不同的是提取改用50％的乙醇水溶液进行渗漉，经测定，丹酚酸A含量为61.20％。

实施例8.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例1的方法基本相同，所不同的是醇沉改用0.2％ZTC1+1澄清剂，经测定，丹酚酸A含量为91.26％。

实施例9.富含丹酚酸A的丹参提取物的制备

与实施例2基本相同，所不同的是干燥方法改为冷冻干燥，经测定，丹酚酸A含量为91.82％。

实施例10 富含丹酚酸A的丹参提取物片剂处方

丹酚酸A(实施例2)        10g

淀粉                    40g

微晶纤维素              49.3g

亚硫酸氢钠              0.2g

硬脂酸镁                0.5g

制成                    1000片

将上述组分混匀后，过筛，压片，既得。

实施例11 富含丹酚酸A的丹参提取物片剂处方

丹酚酸A(实施例2)               10g

淀粉                           40g

微晶纤维素                     50g

焦亚硫酸氢钠                   0.5g

硬脂酸镁                       0.5g

无水乙醇                       适量

制成                           1000片

取丹酚酸A与淀粉、微晶纤维素、焦亚硫酸氢钠混合均匀，加无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，压片。

实施例12 富含丹酚酸A的丹参提取物片剂处方

丹酚酸A(实施例1)       20g

乳糖                   40g

微晶纤维素             39g

焦亚硫酸氢钠           0.5g

硬脂酸镁               0.5g

无水乙醇               适量

制成                   1000片

取丹酚酸A与乳糖、微晶纤维素、焦亚硫酸氢钠混合均匀，加无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，压片。

实施例13 富含丹酚酸A的丹参提取物注射剂处方

丹酚酸A(实施例1)          20g

亚硫酸氢钠                0.2g

甘露醇                    80g

注射用水                  1000ml

上述组分混合，采用常用粉针剂常规制备方法，冷冻干燥，既得。

实施例114 富含丹酚酸A的丹参提取物滴眼剂处方

丹酚酸A(实施例2)             20g

亚硫酸氢钠                   2g

玻璃酸钠                     1g

磷酸二氢钠                   7.2g

磷酸氢二钠                   0.947g

注射用水                     1000ml

上述组分混合，过滤，既得。

实施例15 富含丹酚酸A的丹参提取物滴眼剂处方

丹酚酸A(实施例1)      20g

亚硫酸钠              0.6g

聚乙二醇8000          279.4g

制成                  1000粒

上述组分混合，融溶，滴入液体石蜡，选丸，除去液体石蜡，既得。

以上实施例仅是为了对本发明作进一步具体的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

Claims (10)

1.一种制备富含丹酚酸A的丹参提取物的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤(1).向丹参饮片或初粉中加入适量的提取溶剂进行回流提取或渗漉；过滤，得提取液，将提取液浓缩；加乙醇，边加边搅拌，至达醇浓度为40～90％(优选50-80％，更优选60-70％)，放置，使沉淀静置，取上清液，浓缩，得浓缩液；或在一定温度下，加入澄清剂，搅拌，过滤，将滤液浓缩，得浓缩液。

步骤(2).将浓缩液在40℃～100℃(优选50-90℃，更优选60-80℃)的温度下保温6～72小时(优选10-60小时，更优选20-50小时)。

步骤(3).将上述保温后的溶液用酸调节PH值为1～6(优选2-5，更优选2.5-4)；用有机溶剂萃取，得萃取液，所述有机溶剂优选为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯；回收有机溶剂，得萃取物。

步骤(4).将上述萃取物用溶剂溶解；经色谱柱吸附，优选色谱柱中的填料为大孔树脂、凝胶或聚酰胺；洗脱；收集并合并含有丹酚酸A的组份，干燥，得富含丹酚酸A的丹参提取物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述提取溶剂优选为水、碱水溶液、甲醇、乙醇、丙酮或者它们的混合溶液，提取溶剂用量为丹参重量的4～15倍(优选6-12倍，更优选8-10倍)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的将提取液浓缩使得浓缩液的比重为1～1.3(优选1.1-1.25)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中所述的澄清剂为酸(优选醋酸、盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸橼酸、乳酸等等，更优选醋酸、盐酸)、甲壳素类，明胶，101果汁澄清剂，ZTC1+1。

5.根据权利要求5中所述的方法，其特征在于澄清剂的浓度为0.1％～20％，优选3-10％。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(3)中调节PH值时采用的酸优选为醋酸、盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸橼酸、乳酸等等，更优选醋酸、盐酸。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(4)中溶解萃取物时采用的溶剂为水、碱水溶液、甲醇、乙醇、丙酮或者它们的混合溶液；所述洗脱剂为水，乙醇、甲醇或丙酮或其水溶液；所述的干燥为减压干燥、真空干燥或冷冻干燥。

8.根据权利要求2或7所述的方法，其特征在于所述碱水溶液为碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾或氨水的水溶液，浓度为约0.1-2％，优选0.2-1.5％。

9.按照权利要求1-8任一项所述的方法获得的富含丹酚酸A的丹参提取物。

10.一种富含丹酚酸A的制剂，其中含有根据权利要求1-8任一项制备的富含丹酚酸A的丹参提取物，所述制剂为片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、口服液、滴丸或眼用制剂等药物制剂形式。