CN105380996B - 一种具有活血止血作用的中药组合物及其制剂 - Google Patents
一种具有活血止血作用的中药组合物及其制剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于药物研究开发领域,涉及一种药物物质,特别涉及一种具有活血止血作用的药物物质及其制备方法,以及所关联的中药或天然药物复方(比如银荷方)。本药物物质含有氨基酸类、酚类、内酯类、生物碱类、三萜类等基本药物组分,可从银荷方经过溶剂(比如稀醇)提取,或经大孔吸附树脂分离富集获得;经过血栓模型与抗凝模型试验验证,本发明中药物制备物及其组合物具有显著的活血止血作用。本发明中药物制备物(提取物、富集物)、组合物及其关联复方可用于药品与健康品。
Description
技术领域
本发明属于药物研究开发领域,涉及一种药物物质,特别涉及一种具有活血止血作用的药物物质及其组方与制备方法和应用。
背景技术
血栓形成和血栓栓塞两种病理过程所引起的疾病,临床上称为血栓性疾病,血栓性疾病严重威胁人类生命健康,其发病率高且有渐增之势,是当代医药研究的重点。目前上市的大多数药物对血栓性疾病有一定的副作用,可导致出血、血小板减少等。中药凭借其多成分、多靶点的优势,更具有发展前景。
银荷方各单味药中主要化学成分有:酚类、萜类、生物碱类、氨基酸类、内酯类。本发明将银荷方中药物物质采用溶剂(比如稀醇)提取,或经大孔吸附树脂进行分离富集,获得有关药物物质制备物,并进行制备物配比组合,得到最佳活血止血药物组合物,从而推进药物与健康品的研发创新。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有活血止血活性的药物物质,本发明的另一个目的在于提供其制备方法,本发明的第三个目的在于提供其质量检测及控制方法,本发明的第四个目的在于提供该药物物质组合的中药方原组合,由银杏叶、荷叶、人参、三七等组成,本发明的第五个目的在于为药品或健康品等应用。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
本发明中药物质组合主要由酚类、生物碱类、萜类、氨基酸类、内酯类组成,可由化学合成、制备,天然药物提取制备组合制成;本发明中药药物物质组合可由如下4组药用植物及其代用品种,包括其药用部位及非药用部位,药材及其饮片组合制成。
组1人参同属植物及其炮制品:人参、人参叶、红参、西洋参等。
组2三七同属植物及其炮制品:三七、假人参、田七、狭叶假人参、秀丽假人参、大叶三七、羽叶三七、花叶三七、疙瘩七等。
组3银杏同属植物及其炮制品:银杏叶等。
组4莲同属植物及其炮制品:荷叶、荷叶碳等。
本发明中药药物组合优选为以下原料药制成:
本发明药物物质制备方法包括如下步骤:
步骤1:选取上述原料药;
步骤2:溶剂(如稀醇)提取;
步骤3:大孔吸附树脂纯化
上述步骤2中,将原料药用溶剂(如稀醇)提取1-4次,每次提取0.1-5 小时;优选50%乙醇加热回流提取3次,每次2小时。
上述步骤3中,将步骤2所得提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为 0.02-0.20g/mL,水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为 0.5-10BV/h,树脂柱径高比为1∶(2-15),上样液浓度为0.02-0.20g/mL,收集上样流出液,然后水洗脱1-8BV,洗脱流速为0.5-10BV/h,收集洗脱液,合并上样流出液与水洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得氨基酸类有效组分;5-50%乙醇洗脱1-10BV,洗脱流速为0.5-10BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得酚类有效组分;50%-80%乙醇洗脱1-10BV,洗脱流速为0.5-10BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得萜类、酚类、生物碱类、内酯类有效组分。
以上所述的氨基酸类有效组分制备物中总氨基酸含量达1-20%;所述的酚类有效组分制备物中总酚含量达5-40%;所述的萜类、酚类、生物碱类、内酯类有效组分制备物中总萜达10-80%、总酚达5-50%、总生物碱达1%-30%、总内酯达 5-40%、所述的组合物中人参皂苷Rb1含量达5-30%、人参皂苷Rg1含量达5-30%、人参皂苷Re含量达1-20%、三七皂苷R1含量达1-20%、槲皮素含量达0.1-10.0%、山奈酚含量达0.1-10.0%、异鼠李素含量达0.1-10.0%。
将以上所得药物物质按比例混合后,加入常规辅料,按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型,包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液等。
以下对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
实验例1本发明活血止血作用
(一)实验材料
1.实验动物
SD大鼠,雄雌各半,体重190-220g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2.药品与试剂
受试药:银荷方水提取物、银荷方稀醇提取物、银荷方组合物。试剂:角叉菜胶(批号:C1013-25g),sigma公司;华法林钠片(批号:4070161KR),齐鲁制药有限公司;金纳多(批号:6701014),德国威玛舒培博士药厂;三七片 (批号:14121208),同仁堂;凝血酶原PT试剂盒(批号:20150918),BG;凝血酶TT试剂盒(批号:20150918),BG;TXB2试剂盒(批号:20150918), BG;6-keto--PGF1a试剂盒(批号:20150918),BG;生理盐水(批号:C13040602),山东华鲁制药有限公司;水合氯醛(批号:20120720),国药集团化学试剂有限公司。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药方式
大鼠饲养一周后,随即分成五组,每组12只,雌雄各半,即空白组、模型组、阳性药组、水提物组、醇提物组、组合物组。血栓模型造模药:角叉菜胶制成浓度10mg/mL,每只大鼠按照20mg/kg腹腔注射给药;血栓模型阳性药:金纳多制成浓度0.833mg/mL,每只大鼠按照16.66mg/kg灌胃给药;抗凝模型造模药:华法林钠片制成浓度0.2mg/mL,每只大鼠按照4mg/kg灌胃给药;抗凝模型阳性药:三七片制成浓度33.3mg/mL,每只大鼠按照0.666g/kg灌胃给药;银荷方组合物按成人(60kg)1.8g/每日计算,折算成大鼠0.18g/kg每日,其他形式制备物灌胃给予相同生药量,根据膏重折算大鼠相应给药量,水提物0.18g/kg每日。醇提物0.195g/kg每日。
2.血栓模型试验
空白组和模型组灌胃蒸馏水,给药组分别灌胃各组药物,共7天,在第6 天给药后,模型组和给药组分别腹腔注射角叉菜胶造血栓模型,第7天给药1h 后,测定大鼠黑尾长度,之后腹主动脉取血,置于枸橼酸钠抗凝管,4℃, 3000r/min,离心15min,分离血浆,用酶联法测定血浆中TXB2和6-keto-PGF1a 含量。
3.抗凝模型试验
空白组灌胃蒸馏水,其余组分别灌胃华法林钠溶液造抗凝模型。以华法林钠片造模第4天各给药组开始给予相应药物,每日1次,空白组和模型组正常饮食进水。连续给试药7天,腹主动脉取血,置于枸橼酸钠抗凝管,4℃,3000r/min,离心15min,分离血浆,用酶联法测定血浆中凝血酶原PTHR、凝血酶THR含量。
4.统计方法
使用SPSS17.0统计软件进行分析,实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较,采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较,组间差异采用LSD(方差齐)或者 Games-Howell法(方差不齐)。
5.实验结果
表1 银荷方血栓模型药效结果
**表示与模型组相比P<0.01,有极显著差异;*表示与模型组相比P<0.05,有显著性差异。
*表示与空白组相比P>0.05,没有统计学差异。
表2 银荷方抗凝模型药效结果
**表示与模型组相比P<0.01,有极显著差异;*表示与模型组相比P<0.05,有显著性差异。
*表示与空白组相比P>0.05,没有统计学差异。
基于表1、表2,以空白组各指标的平均水平为基准,设其值为1,分别计算其他组别对应指标的相对值,见表3、表4。
表3 血栓模型中以空白组指标为基准的相对值结果
表4 抗凝模型中以空白组指标为基准的相对值结果
(三)结论
由表1可知,模型组与空白组具有极显著差异,说明血栓模型造模成功;由黑尾长度指标可知:阳性药组、醇提物组、组合物组均与模型组具有极显著差异,说明药物有效,且可得出:组合物组>阳性药组>醇提物组>水提物组;由表3可知,各给药组TXB2平均值与空白组接近程度为:组合物组>阳性药组>醇提物组>水提物组;各给药组TXB2/6-keto-PGFla平均值与空白组接近程度为:组合物组>阳性药组>醇提物组>水提物组。综上,血栓模型中各银荷方制备物中药效最好的组别为组合物组。
由表2可知,模型组与空白组具有极显著差异,说明抗凝模型造模成功;由表4可知,各给药组PT平均值与空白组接近程度为:组合物组>阳性药组>水提物组>醇提物组;各给药组TT平均值与空白组接近程度为:组合物组>阳性药组>水提物组>醇提物组。综上,抗凝模型中各银荷方制备物中药效最好的组别为组合物组。
下述实施例均能实现上述实验例的效果
实施例1:活血止血药物物质组合制备工艺
原料饮片:人参 100g 三七 200g 银杏叶 600g 荷叶 600g
按上述比例取原料药饮片2kg,15倍量50%乙醇回流提取2次,每次提取3 小时,减压回收溶剂,得提取物,加水分散溶解,使水溶液浓度为0.1g/mL,水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为4BV/h,树脂柱径高比为 1∶8,收集上样流出液,然后水洗脱3.5BV,洗脱流速为4.5BV/h,收集洗脱液,合并上样流出液与水洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得氨基酸类有效组分;15%乙醇洗脱10BV,洗脱流速为5BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得酚类有效组分;70%乙醇洗脱8BV,洗脱流速为5BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得萜类、酚类、生物碱类、内酯类有效组分。按制备比例混合各有效组分,即得。
总酚的含量测定方法:
对照品溶液的制备
取槲皮素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含12.6μg的溶液,即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.2mL、0.5mL、0.8mL、1.1mL、1.4mL、1.7mL、2.0mL、 2.3mL、2.6mL,分别置于25ml棕色量瓶中,加50%甲醇至5ml,加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2.6ml,摇匀,加入新配置的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾(1: 1)混合液2.0ml,在暗处放置7min,用0.1%的盐酸定容至25ml,摇匀后于暗处静置40min,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA),在780nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,对照品量为横坐标,绘制标准曲线。
测定法
取样品适量,精密称定,加50%甲醇溶解,转移至100ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀既得供试品溶液,精密量取供试品溶液1ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“加50%甲醇至5ml”起依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中槲皮素重量,计算,即得。
总生物碱含量测定方法:
对照品溶液的制备
取荷叶碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含398μg的溶液,即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品品溶液10μ1、60μl、110μl、160μl、290μl,分别置于磨口圆底烧瓶中,60℃下减压蒸干,依次加入PH2.2邻苯二甲酸氢钾缓冲液1ml,溴甲酚绿溶液1ml,再精密加入5ml二氯甲烷,密塞,剧烈震摇2min,转移至分液漏斗中,静置萃取2h,以相应的试剂为空白,接收二氯甲烷层,照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在412nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,对照品量为横坐标,绘制标准曲线。
测定法
取样品适量,精密称定,加50%甲醇溶解,转移至100ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液。精密量取5ml,置于磨口圆底烧瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“60℃下减压蒸干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中荷叶碱重量,计算,即得。
总萜含量测定方法:
对照品溶液的制备
取人参皂苷Rb1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含136.8μg的溶液,即得。
标准曲线的制备
精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液0.2ml、0.6ml、1.0ml、1.4ml、1.8ml、 2.2ml、2.6ml,分别置于西林瓶中,沸水浴蒸干,冷却至室温,先加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.3ml,然后再加入高氯酸0.8ml,密塞,置于60℃水浴加热15min,取出,置于冰水中冷却3min,加入冰醋酸5ml,摇匀,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在552nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,对照品量为横坐标,绘制标准曲线。
测定法
取样品适量,加甲醇溶解,转移至25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取1ml,置于西林瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“沸水浴蒸干”起依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rb1重量,计算,即得。
总内酯含量测定方法:
对照品溶液的制备
取白果内酯对照品适量,精密称定,加70%乙醇制成每1ml含827μg的溶液,即得。
标准曲线的制备
精密量取白果内酯对照品溶液1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml,置于25ml量瓶中,加70%乙醇至5ml,加入碱性羟胺溶液1ml,静置6min,加入 3mol/l盐酸溶液1ml,6%三氯化铁0.2ml,摇匀,静置6min,用70%乙醇定容至 25ml,摇匀,静置15min,以等量的水代替碱性羟胺溶液作为空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典附录VA)在466nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,对照品量为横坐标,绘制标准曲线。
测定法
取样品适量,加70%乙醇醇溶解,转移至50ml量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀,既得供试品溶液,精密量取供试品溶液5ml,置于25ml量瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“加入碱性羟胺溶液1ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中白果内酯重量,计算,即得。
总氨基酸含量测定方法:
对照品溶液的制备
取三七素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含159.6μg的溶液,即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品0.9mL、1.2mL、1.5mL、1.8mL、2.1mL、2.4mL、2.7mL、3.0mL,分别置于25ml棕色量瓶中,加水至6ml,再加入pH值为7的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液1ml,2%茚三酮乙醇溶液2ml,摇匀,置于沸水浴中20min,迅速冷却至室温,用水定容至25ml,摇匀,以相应的溶剂为空白,照紫外-可见分光光度法 (中国药典附录VA)在568nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,对照品量为横坐标,绘制标准曲线。
测定法
取样品适量,精密称定,加水溶解,转移至50ml棕色量瓶中,加水至刻度,摇匀,既得供试品溶液。精密量取供试品溶液5ml,置于25ml棕色量瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“加水至6ml”起依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中三七素重量,计算,即得。
三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1含量测定方法:
色谱条件
waters sunfire C18色谱柱(5μm,4.6*250mm),流动相为乙腈(A)-0.05%磷酸水(B)梯度洗脱(梯度条件见下表),流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长203nm。
对照品溶液的制备
取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品适量,加甲醇制成每1ml含三七皂苷R124μg、人参皂苷Rg1129μg、人参皂苷Re17μg、人参皂苷Rb1109μg的混合溶液。
供试品溶液的制备
取本品100mg,精密称定,70%甲醇溶解,转移至10ml茶色量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液9μl和供试品溶液50μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
槲皮素、山奈酚、异鼠李素含量测定方法:
色谱条件
waters xbridge C18色谱柱(5μm,4.6*250mm),流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)梯度洗脱(梯度条件见下表),流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长270nm。
对照品溶液的制备
取槲皮素、山奈酚、异鼠李素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每毫升各含槲皮素132μg、山奈酚31μg、异鼠李素26μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备
取样品适量,精密称定,置于圆底烧瓶,加甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)混合溶液25ml,加热回流40min,放冷,转移至50ml量瓶中,并加甲醇至刻度,摇匀即得。
测定法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL,注入液相色谱仪,分别计算槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量。
实施例2:胶囊剂的制备
取本发明中药药物物质组合200g,粉碎,过80目筛,与微晶纤维素100g混合均匀,以95%乙醇制粒,干燥,以20目筛整粒,灌装胶囊。
实施例3:片剂的制备
取本发明中药药物物质组合50g,粉碎,过80目筛,与微晶纤维素70g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀,以5%PVP制粒,干燥,以20目筛整粒,加入硬脂酸镁2g,压片。
实施例4:滴丸剂的制备
取本发明中药药物物质组合60g,粉碎,过80目筛,混合均匀,投入180g加热熔融的聚乙二醇6000中,搅拌至溶解,转移至贮液瓶中,密闭并保温在80~90℃,调节滴丸机液滴定量阀门,由上往下滴入10~15℃的液体石蜡中,将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡,干燥。
实施例5:口服液的制备
取本发明中药药物物质组合70g,粉碎,过80目筛,混合均匀,与蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸钠10g及蒸馏水2000ml混合,加热至85~90℃,搅拌使溶解,保温30min,滤过,滤液加水稀释至4000ml,搅拌均匀,灌封,灭菌。
实施例6:注射液的制备
取本发明中药药物物质组合100g,加注射用水适量使溶解,加配置量的0.02%的活性炭搅拌5~10min,滤过,滤液稀释至10L左右,加氯化钠调节渗透压至等渗,调节pH7.5~8.0,超滤,灌封,100℃灭菌30min。
实施例7:粉针剂的制备
取本发明中药药物物质组合100g,加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解,加配置量的0.02%的活性炭搅拌5~10min,滤过,滤液稀释至1L,调节pH6.5~7.8,超滤,喷雾干燥,干粉无菌分装。每支100mg,临用前加注射用水适量使溶解,用氯化钠输液250~500ml稀释后缓慢静脉滴注。
Claims (3)
1.一种具有活血止血作用的中药组合物,其特征在于,按原料药计,由人参100g、三七200g、银杏叶600g、荷叶600g组成;按上述比例取原料药饮片2kg,15倍量50%乙醇回流提取2次,每次提取3小时,减压回收溶剂,得提取物,加水分散溶解,使水溶液浓度为0.1g/mL,水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为4BV/h,树脂柱径高比为1∶8,收集上样流出液,然后水洗脱3.5BV,洗脱流速为4.5BV/h,收集洗脱液,合并上样流出液与水洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得氨基酸类有效组分;15%乙醇洗脱10BV,洗脱流速为5BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得酚类有效组分;70%乙醇洗脱8BV,洗脱流速为5BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得萜类、酚类、生物碱类、内酯类有效组分;按制备比例混合各有效组分,即得。
2.如权利要求1所述的具有活血止血作用的中药组合物制成的制剂,其特征在于,所述制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、糖浆、滴丸剂、注射液、冻干粉剂或微丸。
3.如权利要求1所述的具有活血止血作用的中药组合物制成的制剂,其特征在于,所述制剂加入了常规辅料。
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