CN103977179B - 一种具有抗痴呆作用的药物物质及其制备方法与应用 - Google Patents
一种具有抗痴呆作用的药物物质及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于药物研究开发领域,涉及一种药物物质,特别涉及一种具有抗痴呆作用的药物物质及其制备方法。由开心散经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到,富集了开心散中的酚酸类成分、萜类成分,同时经过小鼠记忆障碍试验证明,本发明药物物质可增强小鼠被动逃避电刺激的能力,减少错误次数,降低小鼠大脑皮层中乙酰胆碱酯酶活性,从而达到改善记忆力,抗痴呆的目的。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物物质,特别涉及一种具有抗痴呆作用的中药药物组合物及其制备方法。
背景技术
痴呆是一种持续性的智能障碍,病因十分复杂,既有遗传因素,又有后天的环境影响和诱发,可引起痴呆的疾病高达百余种。目前上市的药物对老年痴呆都只能起到改善症状的作用。因此到目前为止,仍缺乏控制疾病进程的有效治疗手段。中药凭借其多成分、多靶点的优势,更具发展前景。
开心散始见于《备急千金要方》,由人参、远志各四分,茯苓二两,石菖蒲一两组成,“主好忘”。为益气养心、安神定志之代表方剂,主治为中医情志性疾病:心气不足,神志不宁,健忘失眠,心怯怔忡等证。该方中人参益心气,安心神,可治疗心悸怔忡,失眠健忘;远志行气散郁、益智慧;茯苓归心、脾、肾等诸经,主治忧患、惊邪恐悸;石菖蒲开心孔、明耳目,发散药性、引药入经。目前临床上,开心散及其加减方多用于治疗老年痴呆症和抑郁症。
本发明以开心散为载体,发现了一种具有抗痴呆作用的中药药物物质组合,并以药效关联的类型成分及指标性成分为综合考量,建立了稳定可靠、适合实际生产的同时制备工艺和科学全面的质量控制方法,有利于进一步创新药物的研发。目前,未见从开心散中纯化制备抗痴呆药物物质组合的相关报道,也未见有关该组合物在治疗痴呆疾病方面的相关研究报道。
发明内容
本发明的目的在于公开一种具有抗痴呆作用的药物物质,本发明的另一个目的在于公开其制备方法,本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法,本发明的第四个目的在于提供其抗痴呆作用。本发明的第五个目的在于提供该药物物质组合物的制品及其在药品、食品领域的应用。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
选取本发明中药药物物质组合,可由如下4组药用植物及其代用品种,包括其药用部位及非药用部位,药材及其饮片组合制成。
组1远志、台湾远志、荷包山桂花、小花远志、坝王远志、尾叶远志、华南远志、香港远志等;生远志、制远志、蜜远志等远志同属植物及其炮制品。
组2菖蒲、石菖蒲、长苞菖蒲、金钱蒲等石菖蒲同属植物及其炮制品。
组3人参、假人参等;园参,生晒参,山参,生晒山参,糖参,红参等人参同属植物及其炮制品。
组4生茯苓、炒茯苓、煮茯苓、蒸茯苓、煨茯苓、酒茯苓、泔茯苓、人乳制茯苓、土制茯苓、朱砂制茯苓、砂仁制茯苓、猪苓制茯苓、白矾制茯苓等茯苓同属植物及其炮制品
本发明中药药物物质,可经上述原料药组合后以乙醇、或其他醇类、稀醇、或其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法,如聚酰胺色谱法等,或溶剂萃取法等纯化得到。
本发明中药药物物质可由上述原料药的提取物经进一步富集纯化后或上述原料药的大孔树脂制备物混合而成。
本发明药物物质可经化学合成或结构修饰,生物合成或生物转等途径获得。。
本发明中药药物物质优选为下原料药制成:
茯苓 200-600重量份 人参 100-300重量份
远志 100-300重量份 石菖蒲 100-300重量份。
本发明中药药物物质的制备方法包括如下步骤:
步骤1:选取上述原料药;
步骤2:乙醇提取;
步骤3:大孔吸附树脂纯化;
该药物物质中总萜含量为5-80%,总酚含量为5-80%;优选总酚类含量为40~80%,其中3,6’-二芥子酰基蔗糖含量1~5%;优选总萜类含量20~80%,其中细叶远志皂苷含量3~20%。
上述步骤2中,将原料药用40-80%乙醇回流提取2-4次,每次提取1-2小时;优选用50%乙醇回流提取3次,每次1.5小时;
上述步骤3中,将步骤2所得提取物加水分散溶解,使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL,水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂,吸附流速为1.0-3.0mL/min,树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7,上样液浓度为0.02-0.1g/mL,水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3.0-9.0BV/h,20-60%乙醇洗脱3-7倍树脂体积,洗脱流速为3.0-9.0BV/h,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得酚类有效组分;60-90%乙醇洗脱3-7倍树 脂体积,洗脱流速为3.0-9.0BV/h,收集乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即得萜类有效组分;
将以上所得药物物质混合后,加入常规辅料,按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型,包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。
本发明药物物质由开心散经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到,富集了开心散中的萜类有效组分和酚类有效组分,同时经过小鼠记忆障碍模型试验证明,本发明中药有效组分组合成的药物物质可改善模型小鼠的学习记忆能力,使模型小鼠错误次数减少,潜伏期延长。
以下对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
实验例1:本发明抗痴呆药物物质致小鼠记忆障碍模型的改善作用
(一)实验材料
1.实验动物
ICR小鼠,雄性,体重26-29g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2.药品与试剂
受试药:开心散抗痴呆药物物质,按实施例5方法制备,给药前用水溶解配成溶液。
东莨菪碱,购于中国药品生物制品检定所,生产批号:100049-200308,小鼠剂量为3mg/kg。
吡拉西坦片,小鼠剂量为0.15mg/kg。
3.器材
小鼠跳台仪,箱内隔成5室,可同时测定5只小鼠。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药
小鼠按体重随机分成4组,即模型对照组、正常对照组、开心散抗痴呆药物物质组,阳性药组,每组12只,开心散抗痴呆药物物质组、阳性药组连续给药5天,模型组与正常组给予等容积的生理盐水。
2.实验方法
第五天给药后30分钟(准确计时)腹腔注射东莨菪碱造模,30分钟后进行训练(记忆获得实验),24小时后测试(记忆巩固实验)。模型组注射东莨菪碱造模,30分钟进行训练,24小时后测试。正常组直接进行训练,24小时后测试。
跳台行为学实验过程
将同组5只小鼠同时放入跳台仪中,适应环境3分钟,训练5分钟,记录仪记录第一次跳上跳台的时间(潜伏期),安全期时间,5分钟内的跳下次数(错误次数)。24小时后,进行记忆巩固测试,先将小鼠放到跳台上,记录第一次跳下时间(触电潜伏期),安全期时间,5分钟内的跳下次数(错误次数)。
3.统计方法
使用SAS8.0统计软件进行分析,实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较,采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较,组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐),分别将记忆巩固测试阶段各组给药大鼠与模型组大鼠和正常组大鼠进行比较,求得组间差异。
4.实验结果
表1开心散抗痴呆药物物质药效验证实验结果
注:&&P<0.01,与正常组对照组比较;**P<0.01,与模型组比较;*P<0.05,与模型组比较
(三)结论
与模型组相比,开心散抗痴药物物质中剂量组可改善模型小鼠的学习记忆能力,且药效好于阳性药组,可增强小鼠被动逃避电刺激的能力,减少错误次数,降低小鼠大脑皮层中乙酰胆碱酯酶活性,从而达到改善记忆力,抗痴呆的目的。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1:胶囊剂
茯苓 400g 人参 200g
远志 200g 石菖蒲 200g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,加入常规辅料,按照常规工艺制成胶囊剂;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996 Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996 Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例2:片剂
茯苓 350g 人参 280g
远志 260g 石菖蒲 180g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,加入常规辅料,按照常规工艺制成片剂;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇 溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例3:丸剂
茯苓 560g 人参 160g
远志 180g 石菖蒲 270g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收 集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,规辅料,按照常规工艺制成丸剂;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996 Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996 Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例4:口服液体制剂
茯苓 400g 人参 200g
远志 200g 石菖蒲 200g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,加入常规辅料,按照常规工艺制成口服液体制剂。
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996 Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例5:注射剂
茯苓 450g 人参 160g
远志 150g 石菖蒲 250g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,加入常规辅料,按照常规工艺制成注射剂;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例6:
茯苓 400g 人参 200g
远志 200g 石菖蒲 200g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,即为本发明中药药物物质;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至.5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6× 250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996 Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例7:
茯苓 350g 人参 280g
远志 260g 石菖蒲 180g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,即为本发明中药药物物质。
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例8:
茯苓 560g 人参 160g
远志 180g 石菖蒲 270g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树 脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,即得中药药物物质。
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:.
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例9:
茯苓 400g 人参 200g
远志 200g 石菖蒲 200g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,即为本发明中药提取物;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%;
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31∶69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例10:
茯苓 450g 人参 160g
远志 150g 石菖蒲 250g
按上述比例取原料药饮片1kg,50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL(以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml)的上样液,通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;合并酚类与萜类有效组分,即为本发明中药药物物质;
总萜的含量测定方法:
对照品:远志皂苷元;
试剂:0.5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸,冰醋酸;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于西林瓶中,蒸干后放冷,空白随行,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后,于60℃恒温水浴中保温15min,取出放冷,加5ml冰醋酸后,摇匀,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总萜含量为21.81%。
总酚含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
试剂:0.6%三氯化铁溶液,0.9%铁氰化钾溶液,0.3%十二烷基硫酸钠溶液,70%甲醇溶液,0.1mol/L盐酸溶液;
显色方法:精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中,加70%甲醇至5ml,再加入0.3%十二烷基硫酸钠溶液2ml,以及1∶1的0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾混合溶液1ml,暗处放置5min,用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线,摇匀,暗处放置30min,以备测定;
测定方法:将上述显色后样品于768±2nm波长范围内测定,记录其最大吸光度值,经测定总酚含量为79.19%。
指标性成分细叶远志皂苷含量测定方法:
对照品:细叶远志皂苷;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(31:69);检测波长为210nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定萜类有效物质中细叶远志皂苷含量为11.58%。
指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖含量测定方法:
对照品:3,6’-二芥子酰基蔗糖;
仪器:Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996Photodiode Array Detector检测器,Empower Pro软件系统,自动进样;色谱柱:Waters XBridgeTMC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);
测定方法:流动相为乙腈-0.05%磷酸水(18∶82);检测波长为320nm;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL,经测定酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量为2.16%。
实施例11:胶囊剂的制备
取本发明中药药物物质组合200g,粉碎,过80目筛,与微晶纤维素100g混合均匀,以95%乙醇制粒,干燥,以20目筛整粒,灌装胶囊。
实施例12:片剂的制备
取本发明中药药物物质组合50g,粉碎,过80目筛,与微晶纤维素70g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀,以5%PVP制粒,干燥,以20目筛整粒,加入硬脂酸镁2g,压片。
实施例13:滴丸剂的制备
取本发明中药药物物质组合60g,粉碎,过80目筛,混合均匀,投入180g加热熔融的聚乙二醇6000中,搅拌至溶解,转移至贮液瓶中,密闭并保温在80~90℃,调节滴丸机液滴定量阀门,由上往下滴入10~15℃的液体石蜡中,将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡,干燥。
实施例14:口服液的制备
取本发明中药药物物质组合70g,粉碎,过80目筛,混合均匀,与蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸钠10g及蒸馏水2000ml混合,加热至85~90℃,搅拌使溶解,保温30min,滤过,滤液加水稀释至4000ml,搅拌均匀,灌封,灭菌。
实施例15:注射液的制备
取本发明中药药物物质组合100g,加注射用水适量使溶解,加配置量的0.02%的活性炭搅拌5~10min,滤过,滤液稀释至10L左右,加氯化钠调节渗透压至等渗,调节pH7.5~8.0,超滤,灌封,100℃灭菌30min。
实施例16:粉针剂的制备
取本发明中药药物物质组合100g,加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解,加配置量的0.02%的活性炭搅拌5~10min,滤过,滤液稀释至1L,调节pH6.5~7.8,超滤,喷雾干燥,干粉无菌分装。每支100mg,临用前加注射用水适量使溶解,用氯化钠输液250~500ml稀释后缓慢静脉滴注。
Claims (2)
1.一种具有抗痴呆作用的中药药物物质,其特征在于,该中药药物物质由如下方法制成:
选取如下原料药:450g的茯苓、160g的人参、150g的远志、250g的石菖蒲;按上述比例取原料药饮片1kg,用50%乙醇10L回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,得提取物;加水分散溶解,得浓度为0.05g/mL的上样液,以折生药材量计,其中萜类浓度为1.755mg/ml,酚类浓度为1.190mg/ml;通过4LDM130型大孔吸附树脂,吸附流速3BV/h,树脂柱径高比为1∶8.7,水洗脱2倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,30%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为3BV/h,收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得酚类有效组分,90%乙醇洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,得萜类有效组分;组合酚类与萜类有效组分,得药物物质,该药物物质中总萜含量以细叶远志皂苷计为21.81%,总酚含量以3,6’-二芥子酰基蔗糖计为79.19%;其中3,6’-二芥子酰基蔗糖含量2.16%,细叶远志皂苷含量11.58%。
2.如权利要求1所述的中药药物物质,其特征在于,加入本领域公知的各种药用辅料,按常规的制剂工艺制成药剂学能接受的任意常规剂型。
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