CN101099756B

CN101099756B - 一种治疗肝癌的中药组合物及其制备方法和药物制剂

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Publication number: CN101099756B
Application number: CN2006100906929A
Authority: CN
Inventors: 周亚伟
Original assignee: 周亚伟
Current assignee: Beida Shijia Technology Development Co. Ltd.
Priority date: 2006-07-07
Filing date: 2006-07-07
Publication date: 2010-09-08
Anticipated expiration: 2026-07-07
Also published as: CN101099756A

Abstract

本发明以中药苦木为原料，经溶剂提取和树脂分离纯化方法得到苦木提取物，该提取物中总生物碱含量在50％以上，工艺路线简单，有效成分的含量及提取率较高，适合于工业化生产。本发明还进一步提供了以所述苦木提取物为活性成分，制备抗肿瘤的纯中药药物制剂。该中药组合物及其药物制剂具有很好的抗肿瘤活性。

Description

一种治疗肝癌的中药组合物及其制备方法和药物制剂

技术领域

本发明属于中药新药研发技术领域。具体涉及一种从中药材苦木中提取分离得到的苦木总生物碱提取物及其制备方法和药物制剂。该中药组合物具有很好的抗肿瘤活性。

背景技术

据世界卫生组织1997年度报道，1996年全球58亿人口中因癌症死亡约有630万人，约占总死亡人数的12％，其中近60％死于肺癌、胃癌、肝癌、食道癌等，是仅次于心血管疾病的第二大死因。从1996年以来全球每年新确诊的肿瘤患者均在1030万人以上，世界卫生组织2001年报道，世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了22％，今后20年还将上升大约50％。

目前抗肿瘤药物占世界药品市场总销售额的4.2％左右，植物生物碱和其他天然药物是抗肿瘤药中的领先类别，从临床用药情况看，呈现出逐年上升的趋势，已在抗肿瘤药物中占据了半壁江山。2000年全球抗癌药物市场总值达234.13亿美元，比上年增长了3.9％。2003年最畅销的400种处方药中的20种抗癌药品，销售额达94亿美元，其中天然植物碱提取药物占了37％。

苦木为苦木科植物苦木Picrasma quassioides(D.Don)Benn干燥茎及叶。性味苦寒，有小毒。归肺、大肠经。具有清热，祛湿，解毒的功效。多用于风热感冒，咽喉肿痛，腹泻下痢、湿疹，疮疖，毒蛇咬伤等。苦木科植物中所含主要化学成分为苦木苦味素和生物碱类。其次为三萜、甾醇、皂苷类等。据文献报道，苦木苦味素类化合物是苦木科植物的特征成分，多为内酯类化合物，具有抗肿瘤活性，但这类化合物大多都具有很大的毒性(王琦，周玲仙等，苦木科植物化学成分及生物活性研究进展，国外医学中医中药分册，2004，26(5)，277～279)。而生物碱类化合物是苦木科植物中的另一特征成分，文献报道具有抗菌消炎、降压、降低心肌耗氧量，改善心肌营养性血流量等作用(宋振玉、周同惠等，中草药现代研究，1996，468～469。马树德，苦木总生物碱对心血管系统的作用，药学学报，1982，5(5)，327～320)。经本发明人的深入研究及药理试验表明，苦木生物碱类成分也具有抗肿瘤的活性。且郭晓庄等，在《有毒中草药大辞典》中记载苦木总生物碱对大鼠生长发育、肝、肾功能、血象及实质性器官、心、肝、肺、肾未见明显影响。可见苦木生物碱类成分毒性小，将苦木中生物碱类化合物开发成抗肿瘤的天然药物是很有前景的。在我国已有苦木单方制剂的上市品种，苦木注射液。临床上用于治疗感冒及上呼吸道感染。但该注射液仅仅是将药材简单的提取加工而制成。公开号为CN1686333A的中国专利公开了一种苦木注射制剂及其制备方法，该专利采用碱性乙醇提取，梯度酸水沉淀去除杂质，得到苦木提取物，但是并没有明确说明苦木提取物中总生物碱的含量，且说明书中公开的总生物碱的提取率(1.46％)较低。工艺方法还有待于改进，还应该进一步提高有效组分的提取率及其含量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗肿瘤的中药组合物，其中的活性成分是来自中药苦木提取物中的总生物碱类化合物，亦称苦木总生物碱。并进一步提供该中药组合物的制备方法，使总生物碱的含量达到50％以上，总生物碱的得率在40％以上。

本发明要解决的另一技术问题是提供以所述苦木提取物为活性成分，用于抗肿瘤的纯中药药物制剂和相应的药物剂型。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案。

本发明所述的中药组合物是以中药苦木为原料，经树脂分离纯化方法所得到的苦木提取物，其中含有的生物碱类化合物包括苦木碱己、β-咔巴啉生物碱、铁屎米酮生物碱等。苦木碱己的化学结构式如下：

本发明所述的中药组合物，即苦木提取物是通过下述方法制备得到的：

(1)提取：取苦木药材粉碎，用6～12倍药材重量的水、稀盐酸水溶液、C1-C5的低级醇或含水的C1-C5低级醇提取，得提取液；

(2)拌样：将提取液直接与树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；

(3)上样：将样品A直接加载于已经装好的树脂柱上；

(4)除杂：干法上样后，用水或含水的C1-C5低级醇洗脱杂质；

(5)洗脱：再用含水的C1-C5低级醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；

(6)干燥：洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量在50％以上。

所述的制备方法中提取方法为回流提取方法或者渗漉提取方法。优选为回流提取方法。

所述的制备方法中提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等，浓度为X，0＜X≤95％。优选为乙醇，浓度为40％≤X≤80％。

所述的制备方法中树脂为苯乙烯型骨架材料的树脂。例如ZTC-1、D101、AB-8或DM301型树脂等。

所述的制备方法中除杂用的含水低级醇的碳数为C1-C5，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等，浓度为X，0＜X≤40％。优选为乙醇。试验表明：在该洗脱浓度下，去除杂质的效果较好，使得生物碱类化合物能够被富集。

所述的制备方法中洗脱用的含水低级醇的碳数为C1-C5，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等，浓度为X，40％≤X≤95％。优选为乙醇，浓度为60％≤X≤80％。试验表明：在该洗脱浓度下，得到的苦木总生物碱的含量高。

苦木提取物的干燥方法可以采用真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥等，优选为真空干燥。

本发明所述的苦木提取物制备方法中的突出特点为：将苦木药材提取后，提取液直接与树脂混合拌样，搅拌的同时蒸去溶剂，得到的干燥样品直接加载于树脂柱上，再进行除杂洗脱。本发明采用的干法上样的方法能够提高提取物中总生物碱的含量(大于50％)，并且能够提高总生物碱的得率(大于40％)。

本发明不仅有效地提高了提取物中总生物碱的纯度和有效成分的含量，并且建立了的严格的质量控制方法，可以将苦木提取物制成符合药用标准的抗肿瘤的现代药物制剂。

1.苦木碱己的含量测定

1.1色谱条件

色谱柱：RP-C₁₈柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-1％乙酸铵-十二烷基硫酸钠(60∶40∶0.6g)，以冰醋酸调pH值为4.00；流速：1.0ml/min；检测波长：250nm；灵敏度：1.000AUFS。

1.2对照品溶液的制备

称取苦木碱己对照品约4mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加适量甲醇超声使溶解，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

1.3供试品溶液的制备

取苦木提取物(过20目)约5mg，精密称定，置于50ml锥形瓶中，加甲醇超声使溶解，并定容至刻度，摇匀，0.22μm滤膜滤过，即得供试品溶液。

1.4测定法

分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，依上述色谱条件进行测定，记录苦木碱己峰面积，计算含量。

2苦木总生物碱含量测定的方法

2.1对照品溶液的制备

称取苦木碱己对照品约1.5mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加适量甲醇超声使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(每1ml含苦木碱己对照品0.15mg)

2.2供试品溶液的制备

取苦木提取物(过20目)约10mg，精密称定，置于25ml量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3测定法

精密吸取供试品溶液与对照品溶液各1ml，分置2个50ml具塞锥形瓶中，分别水浴蒸干，放至室温后，各精密加入BTB显色剂10ml，摇匀，再分别精密加入氯仿10ml，剧烈振摇2分钟，定量转移至50ml分液漏斗中，静置2h，随行空白溶液对照，分别取氯仿层，分别在波长374nm处测定吸光度，照外标一点法计算总生物碱含量。

本发明所述的中药组合物(苦木提取物)具有很好的抗肿瘤活性，将其作为活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学上可以接受的剂型。所述的辅料选自淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠或明胶等常规辅料。所述的药剂学可接受的剂型为口服制剂或者注射制剂。例如：片剂、丸剂、滴丸剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射液或冻干粉针剂等。利用本发明得到的苦木提取物制备所需药物的各种剂型时，可以按照药剂学领域的常规生产方法制备。本发明对此不作限定，故在此不予详述。

本发明所述的中药组合物对肿瘤有较好的治疗效果。为了便于理解该中药组合物在抗肿瘤方面的药用价值，本发明人使用实施例2方法制备得到的苦木提取物进行了抗肿瘤的药效学试验：

实验名称：中药组合物(苦木提取物)对小鼠H₂₂肝癌实体瘤的影响试验

按体重将小鼠随机分为荷瘤对照组，5-氟尿嘧啶组(30mg/kg)，中药组合物小(50mg/kg)、中(100mg/kg)、大(200mg/kg)剂量组。5-氟尿嘧啶组按0.1ml/10g腹腔注射给药，隔日一次；各给药组均按0.2ml/10g灌胃给药，空白对照组及荷瘤对照组给予等体积生理盐水，每天一次，连续17天。在给药第7天取另外制备的生长良好的腹腔荷瘤小鼠，无菌抽取腹水瘤细胞，以生理盐水稀释，计数并配制成2.5×10⁷/ml浓度的溶液，接种于小鼠腋部皮下，每鼠0.2ml。接种肿瘤后继续给药10天。于末次给药后1h剥取肿瘤，称瘤重，计算肿瘤抑制率。中药组合物对小鼠H₂₂肝癌实体瘤的影响，试验结果见表1，表2。

表1组合物对荷H₂₂肝癌小鼠体重的影响(x±s)

注：与荷瘤对照组比较，^***P＜0.001。

5-氟尿嘧啶组与荷瘤对照组比较，药后体重明显降低，经统计学处理差异有显著性(P＜0.001)；其余各组与荷瘤对照组比较，药后体重无明显改变，差异不具有显著性(P＞0.05)。

表2组合物对小鼠H₂₂肝癌实体瘤瘤重的影响(x±s)

注：与荷瘤对照组比较，^*P＜0.05，^***P＜0.001。

从上表可以看出：5-氟尿嘧啶组与荷瘤对照组比较，肿瘤重量明显降低，经统计学处理差异有显著性(P＜0.001)，抑瘤率为75.94％；组合物小、中、大剂量组与荷瘤对照组比较，瘤重均有不同程度的减轻，其中小、中剂量组瘤重降低出现了显著性差异(P＜0.05)，组合物小、中、大剂量组抑瘤率分别为29.08％、34.32％、46.77％。说明组合物具有一定抑制H₂₂肝癌实体瘤生长的作用，且毒副作用较小。

具体实施方式

以下通过实施例详细说明本发明的技术方案，并不以此限定不本发明的实施范围。

实施例1 苦木提取物的制备方法

取苦木药材粉碎，用10倍药材重量的水回流提取3次，得提取液；将提取液直接与DM301树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；将样品A直接加载于已经装好的DM301树脂柱上；干法上样后，用7倍柱体积的水洗脱杂质；再用16倍柱体积的40％乙醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；洗脱液经减压浓缩、真空干燥，粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量为60％。

实施例 2苦木提取物的制备方法

取苦木药材粉碎，用10倍药材重量的0.5％盐酸水溶液回流提取3次，得提取液；将提取液直接与D101树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；将样品A直接加载于已经装好的D101树脂柱上；干法上样后，用6倍柱体积的20％乙醇洗脱杂质；再用12倍柱体积的60％乙醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量为72％。

实施例3 苦木提取物的制备方法

取苦木药材粉碎，用12倍药材重量的40％乙醇渗漉提取，得提取液；将提取液直接与AB-8树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；将样品A直接加载于已经装好的AB-8树脂柱上；干法上样后，用4倍柱体积的40％乙醇洗脱杂质；再用10倍柱体积的80％乙醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量为56％。

实施例4 苦木提取物的制备方法

取苦木药材粉碎，用10倍药材重量的60％乙醇渗漉提取，得提取液；将提取液直接与ZTC-1树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；将样品A直接加载于已经装好的ZTC-1树脂柱上；干法上样后，用5倍柱体积的30％乙醇洗脱杂质；再用6倍柱体积的95％乙醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量为52％。

实施例5 苦木提取物的制备方法

取苦木药材粉碎，用6倍药材重量无水乙醇回流提取3次，得提取液；将提取液直接与DM301树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；将样品A直接加载于已经装好的DM301树脂柱上；干法上样后，用7倍柱体积的10％乙醇洗脱杂质；再用12倍柱体积的70％乙醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量为58％。

实施例6 苦木提取物的制备方法

取苦木药材粉碎，用8倍药材重量80％乙醇渗漉提取，得提取液；将提取液直接与D101树脂混合，搅拌均匀，蒸干溶剂，得干燥样品A；将样品A直接加载于已经装好的D101树脂柱上；干法上样后，用6倍柱体积的20％乙醇洗脱杂质；再用14倍柱体积的50％乙醇洗脱吸附于树脂柱上的苦木总生物碱；洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎，得苦木提取物；提取物中总生物碱的含量为66％。

实施例7

取实施例2制备方法制备的苦木提取物适量，按照苦木提取物∶微晶纤维素为1∶1比例混合，以80％乙醇为黏合剂，制粒、干燥，按常规片剂工艺压片，制成片剂。

实施例8

取实施例2制备方法制备的苦木提取物适量，按照苦木提取物∶淀粉∶微晶纤维素为1∶0.75∶0.25的比例混合均匀，以乙醇作为粘合剂，制粒，干燥、整粒、装囊，制成胶囊剂。

实施例9

取实施例2制备方法制备的苦木提取物适量，过80目筛；按照苦木提取物∶糊精∶蔗糖以1∶1.5∶1比例混合均匀，以80％乙醇为润湿剂，制粒，干燥、整粒，按常规颗粒剂工艺生产，制成颗粒剂。

实施例10

取实施例2制备方法制备的苦木提取物适量溶解于适宜溶剂中，搅拌溶解，加入矫味剂、防腐剂等附加剂，调整pH7～8，加纯化水至足量，过滤，按常规工艺生产，制成口服液。

Claims

1.一种治疗肝癌的中药组合物，它是以中药苦木为原料，经树脂分离纯化方法所得到的苦木提取物，其中总生物碱含量在50％以上，该提取物是通过下述方法得到：

(1)提取：取苦木药材粉碎，用6～12倍药材重量的水、稀盐酸水溶液、C1-C5的低级醇或者含水的C1-C5低级醇提取，得提取液；

(3)上样：将样品A直接加载于已经装好的树脂柱上；

(4)除杂：干法上样后，用水或含水的C1-C5低级醇洗脱杂质；

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中提取方法为回流提取方法或者渗漉提取方法。

3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，0＜X≤95％。

4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，40％≤X≤80％。

5.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中树脂为苯乙烯型骨架材料的树脂。

6.根据权利要求5所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中树脂为ZTC-1、D101、AB-8或DM301型树脂。

7.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中除杂用的含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，0＜X≤40％。

8.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中洗脱用的含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，40％≤X≤95％。

9.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的制备方法中洗脱用的含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，60％≤X≤80％。

10.一种治疗肝癌的中药制剂，其特征在于该中药制剂是以权利要求1～9任一权利要求所述的苦木提取物为活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学上可以接受的剂型。

11.根据权利要求10所述的中药制剂，其特征在于所述辅料选自淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠和明胶中的任意一种或几种。

12.根据权利要求10所述的中药制剂，其特征在于所述的药剂学可接受的剂型为口服制剂或者注射制剂。

13.根据权利要求10所述的中药制剂，其特征在于所述的口服制剂为片剂、丸剂、滴丸剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。

14.根据权利要求10所述的中药制剂，其特征在于所述的注射制剂为注射液或冻干粉针剂。

15.权利要求1～14中任一权利要求所述的中药组合物或中药制剂在制备治疗肝癌药物中的应用。