CN101112459B - 一种臭梧桐提取物、制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种臭梧桐提取物，该提取物中主要活性成分为芹菜素，其中主要活性成分的含量为0.1～99％。本发明还公开了臭梧桐提取物的制备方法、用途以及含有这种臭梧桐提取物的药物组合物。本发明首次提出了一种以芹菜素为主要活性成分的臭梧桐提取物，经药效实验表明，本臭梧桐提取物具有明显的抗高血压作用。

Description

一种臭梧桐提取物、制备方法及用途

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种从中药臭梧桐中获得的提取物，以及它的提取方法和用途。

背景技术

臭梧桐，又名海州常山，为马鞭草科植物海州常山的枝叶，为常用中药，味苦、微辛，性平。归肝经。功能祛风湿，降血压(宋立人等：现代中药大词典，人民卫生出版社，2001，P.1751)。臭梧桐作为一种降血压中药应用于临床，已有悠久的历史，其临床疗效明显。二十世纪五、六十年代，我国学者对臭梧桐的降血压作用进行了研究，发现臭梧桐桐的提取物具有降血压作用；其化学成分主要有：海州常山苷(clerodendrin)、刺槐素-7-二葡萄糖醛酸苷(acacetin-7-di-β-glucuronide)，海州常山苦味素A(clerodendrin A)、海州常山苦味素B(clerodendrin B)，臭梧桐素A、B；5，6，7-三羟基-4′-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷(Clerodendroside)及其它苦味质；内消旋肌醇(mesoinositol)等；另含挥发油，挥发油中的主要成分由芳香族类化合物、醇、酚、醛、酮、酯类化合物、长链脂肪烃、酸类化合物组成。

发明内容

本发明的目的是对现有的臭梧桐进行研究，提供一种以芹菜素为主要活性物质的臭梧桐提取物。

本发明的另一目的是提供一种臭梧桐提取物的制备方法。

本发明还有一目的是提供一种臭梧桐提取物在抗高血压方面的应用。

本发明另一目的是提供一种含有臭梧桐提取物的药物组合物。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种臭梧桐提取物，该提取物中主要活性成分为芹菜素，其中主要活性成分的含量为0.1～99％；主要活性成分的含量优选为5～70％。

一种臭梧桐提取物的制备方法，包含以下步骤：取臭梧桐药材，用水或乙醇提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用50～95％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液浓缩、干燥。

具体的制备方法包含以下步骤：取臭梧桐药材，用水或乙醇作提取溶剂，提取2～4次(优选3次)，每次加7～10倍(优选8倍)质量的提取溶剂，提取0.5～1.5小时(优选1小时)；提取液经过大孔吸附树脂柱吸附后，先以水洗，至洗脱液无色，再以10～90％的乙醇洗脱，树脂与药材的比例为1∶1～3∶1，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液量为药材量的4～20倍，减压回收乙醇，得到相对密度为1.1～1.4的清膏；清膏干燥，得到臭梧桐提取物。

用水作提取溶剂时，水提取液经离心后，将澄清液加入到大孔吸附树脂柱进行吸附；用乙醇作提取溶剂时，乙醇提取液经离心后，将澄清液减压回收乙醇至无醇味，再加入到大孔吸附树脂柱进行吸附。

洗脱用乙醇的浓度优选为50～75％，乙醇洗脱液量优选为药材量的7～12倍(最优选为10倍)，树脂与药材的比例优选为2∶1。

大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂，优选为(1)非极性大孔吸附树脂：如DA-201、DA-101等；(2)弱极性大孔吸附树脂：如HPD100、AB-8等。

干燥的方法有：热干燥、减压真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥、微波真空干燥等。

本发明得到的臭梧桐提取物经过更进一步精制可以得到活性成份含量更高的提取物，一种方法为：将臭梧桐提取物溶解于有机溶剂中形成过饱和溶液，再冷却得到沉淀物，干燥沉淀物可到活性成份含量更高的臭梧桐提取物；具体如将得到的干燥的臭梧桐提取物溶于热乙酸乙酯，使成过饱和溶液，再置0～4℃冷却，滤取沉淀物，减压干燥，得到精制的臭梧桐提取物。

臭梧桐提取物中主要活性成分芹菜素的含量可以用HPLC的方法进行测定。

本发明的臭梧桐提取物在制备抗高血压药物中的应用。

一种含有本发明臭梧桐提取物的药物组合物，将臭梧桐提取物与药学上可接受的辅料组成口服制剂或注射剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、注射液或冻干粉针。

本发明的臭梧桐提取物的用量范围为：口服制剂，成人每日剂量为600mg～1800mg；注射剂，成人每日剂量为：400mg～1200mg。

本发明的提取物中芹菜素的含量测定方法：采用HPLC(高效液相色谱法)测定其活性成分芹菜素的含量，色谱条件及方法为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水(70∶30)；检测波长：283nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温。

发明人从臭梧桐中分离得到了三种新成分，分别是：正十六烷酸、正十八烷酸、芹菜素，以上三种成分，均为本发明人首次从臭梧桐中分离得到，其中芹菜素具有明显的抗高血压作用，为臭梧桐抗高血压的主要活性成分。

本发明首次提出了一种以芹菜素为主要活性成分的臭梧桐提取物，药效实验表明，本臭梧桐提取物具有明显的抗高血压作用。

具体实施方式

实施例1：臭梧桐提取物

取臭梧桐药材10kg，以8倍水提取3次，每次1小时，提取液经连续式离心机离心，澄清液过HPD100树脂柱(Φ15×150cm，20kg)，待药液吸附后，先以水洗至洗出液无色，继以75％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液100kg，减压回收乙醇并浓缩成清膏，测定其相对密度为1.30，将清膏于60℃减压干燥，得到臭梧桐提取物360g。经HPLC测定其中活性成分芹菜素的含量为26.8％。

实施例2：臭梧桐提取物

取臭梧桐药材20kg，以8倍乙醇提取3次，每次1小时，提取液经连续式离心机离心，澄清液减压回收乙醇至无醇味，再加至DA101树脂柱(Φ15×180cm，30kg)，待药液吸附后，先以水洗至洗出液无色，继以50％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液150kg，减压回收乙醇并浓缩成清膏，测定其相对密度为1.25，将清膏冷冻干燥，得到臭梧桐提取物650g。经HPLC测定其中活性成分芹菜素的含量为27.5％。

实施例3：臭梧桐提取物

取臭梧桐药材20kg，以8倍水提取3次，每次1小时，提取液经连续式离心机离心，澄清液过DA201树脂柱(Φ20×200cm，30kg)，待药液吸附后，先以水洗至洗出液无色，继以50％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液300kg，减压回收乙醇并浓缩成清膏，测定其相对密度为1.35，将清膏于60℃减压干燥，将干燥物溶于热乙酸乙酯，使成过饱和溶液，再置0～4℃冷却，滤取沉淀物，减压干燥，得到臭梧桐提取物220g。经HPLC测定其中活性成分芹菜素的含量为65％。

实施例4：臭梧桐提取物

取臭梧桐药材20kg，以7倍水提取2次，每次0.5小时，提取液经连续式离心机离心，澄清液减压回收乙醇至无醇味，再加至AB-8树脂柱(Φ15×180cm，30kg)，待药液吸附后，先以水洗至洗出液无色，继以60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液130kg，减压回收乙醇并浓缩成清膏，测定其相对密度为1.23，将清膏冷冻干燥，得到臭梧桐提取物550g。经HPLC测定其中活性成分芹菜素的含量为10.5％。

实施例5：胶囊剂

取实施例1所得臭梧桐提取物200g，加入辅料(如淀粉)100g，混匀，装填于1号胶囊，每粒装0.25g，制成1000粒。口服，每次2粒，一日3次。

实施例6：颗粒剂

取实施例1所得臭梧桐提取物400g，加入适量辅料(如糊精、蛋白糖等)，混匀，以75％乙醇制粒，干燥，装袋，每袋1g，制成1000袋。口服，每次1袋，一日3次。

实施例7：注射剂

取实施例2所得臭梧桐提取物400g，加入注射用水5000mL，搅拌，使提取物溶解，以0.45μm滤膜滤过，滤液分装于10mL西林瓶，每支5mL，制成1000支。压口，消毒灭菌，即得。静脉或肌肉注射，每次1支，一日1次。

实施例8：冻干剂

取实施例3所得臭梧桐提取物200g，加入注射用水2500mL，搅拌，使提取物溶解，以0.22μm滤膜滤过，滤液分装于10mL西林瓶，每支2.5mL，置冷冻干燥箱干燥，制成1000支。压口，即得。静脉或肌肉注射，使用时以灭菌生理盐水溶解稀释，每次1支。

臭梧桐提取物对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用试验

1.受试药物：

实施例2所得的臭梧桐提取物，以0.5％羧甲基纤维素钠分别配制成10mg/mL、20mg/mL、40mg/mL的药液。硝苯地平片：北京紫竹药业有限公司产品，批号：050621，规格：10mg/片。使用时研碎，以0.5％羧甲基纤维素钠配制成0.5mg/mL的溶液。

2.实验动物：

自发性高血压大鼠(SHR)，6周龄，体重：190±30g，购自上海瑞金医院高血压研究所。将动物饲养在25±0.5℃的恒温室内，每日人工照明12h，按性别分笼饲养，自由饮水，颗粒全价饲料喂养。

3.试验方法：选SHR 40只，雌雄兼用，于28～30℃下，用HME-80F型血压计间接测定大鼠的尾动脉血压。训练一周后进行实验。

药前连续测定血压5天，每天1次，每次测定3～5个数据，测定间隔2～3分钟，取均值。按药前5天血压均值将SHR随机分成5组，每组6只：(1)空白对照组：0.5％羧甲基纤维素钠；(2)硝苯地平组：5mg/kg；(3)臭梧桐提取物组：400mg/kg；(4)臭梧桐提取物组：200mg/kg；(5)臭梧桐提取物组：100mg/kg。各组均灌胃给药，每日一次，连续3周，隔天药后2h测定血压。停药后，再连续测定一周恢复期血压。

4.试验结果

4.1对SHR收缩压的影响

给药前5天的收缩压基本平稳，维持在20.3～21.2kPa。对照组在整个给药期间收缩压波动较小，与药前基本相同。硝苯地平组药后第一天开始至13天，收缩压呈缓慢下降；臭梧桐提取物100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg组从药后第5天开始，至第9天，收缩压呈锯齿状缓慢下降，第11天开始至21天，收缩压基本维持在14.8～16.2kPa之间，并呈量效关系；停药后，硝苯地平组收缩压逐渐恢复，5～7天，基本恢复到药前水平；而臭梧桐提取物组在停药4天后收缩压逐渐恢复，至第七天，基本恢复至对照组水平。见表1。

表1臭梧桐提取物对SHR收缩压的影响(kPa，n＝6)

4.2对SHR舒张压的影响

给药前5天的舒张压基本平稳，维持在13.1～12.0kPa。对照组在整个给药期间舒张压无明显变化，与药前基本相同。硝苯地平组药后第一天开始至13天，舒张压呈缓慢下降；臭梧桐提取物100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg组从药后第5天开始，至第11天，舒张压呈锯齿状缓慢下降，第11天开始至21天，舒张压基本维持在9.2～10.6kPa之间，并呈量效关系；硝苯地平组停药三天后，舒张压逐渐恢复到药前水平；而臭梧桐提取物组在停药5天后舒张压逐渐恢复至对照组水平。见表2。

表2臭梧桐提取物对SHR舒张压的影响(kPa，n＝6)

Claims (9)

1.一种抗高血压的臭梧桐提取物，该提取物中主要活性成分为芹菜素，其中主要活性成分的含量为5～70％。

2.一种抗高血压的臭梧桐提取物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

取臭梧桐药材，用水或乙醇提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用50～95％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液浓缩、干燥。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

取臭梧桐药材，用水或乙醇作提取溶剂，提取2～4次，每次加7～10倍质量的提取溶剂，提取0.5～1.5小时；提取液经过大孔吸附树脂柱吸附后，先以水洗，至洗脱液无色，再以10～90％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液量为药材量的4～20倍，减压回收乙醇，得到相对密度为1.1～1.4的清膏；清膏干燥，得到臭梧桐提取物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于洗脱用乙醇的浓度为50～75％，乙醇洗脱液量为药材量的7～12倍。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂为DA-201型大孔吸附树脂、DA-101大孔吸附树脂、HPD100大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂。

7.权利要求1所述的臭梧桐提取物在制备抗高血压药物中的应用。

8.一种含有权利要求1所述的臭梧桐提取物的药物组合物，其特征在于将臭梧桐提取物与药学上可接受的辅料组成口服制剂或注射剂。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于将臭梧桐提取物与药学上可接受的辅料组成胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、注射液或冻干粉针。