CN103923043A - 一种有效制备丹酚酸b提取物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种有效制备丹酚酸B提取物的方法，包括如下步骤： （1）取经80-100%乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入PH值为2-8，含醇量为30-60%的乙醇溶液进行提取，得提取液；（2）提取液浓缩，得浓缩液，降温；（3）浓缩液酸沉，低温静置，固液分离，得液体；（4）柱层析法分离、纯化丹酚酸B；（5）浓缩、干燥，得丹酚酸B提取物。

Description

一种有效制备丹酚酸B提取物的方法

技术领域

本发明属于天然产物的提取与分离纯化技术领域，涉及从鼠尾草属植物丹参中提取纯化丹酚酸B的方法，特别涉及从丹参经高醇提取后的药渣中提取纯化丹酚酸B的方法。

背景技术

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，为多年生草本植物，是我国传统医学中的常用药之一，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功效。临床主要用于治疗肾病、肝病、心脑血管疾病等，有着广泛的应用领域。

丹参经过高醇提取后的药渣尚含有大量的丹酚酸B成分。药理研究表明，丹酚酸B在清除自由基、保护心脑缺血再灌注损伤和保肝护肾等方面具有较强的药理作用。丹酚酸B在水中不稳定，易降解，同时水溶性丹酚酸类化合物在结构和理化性质上具有很大的相似性，要大规模的分离出高纯度的丹酚酸B非常困难。现有技术中从丹参中提取丹酚酸B的方法主要有：①用水浸提、渗滤提取、超声破碎提取或微波辅助提取，提取液经酸化后，经柱层析法分离纯化丹酚酸B；②用水提取后，再用壳聚糖絮凝，醇沉、有机溶剂萃取，柱层析法纯化。现有技术的不足是，用水提取，提取杂质量大，丹酚酸B降解较多，产业化难度大，且丹酚酸B提取物纯度低；尤其是针对高醇提取后的丹参药渣提取丹酚酸B成分的方法少有研究。因而利用高醇提取后的丹参药渣开发易产业化、高含量的丹酚酸B提取物制备方法具有重要的意义。

发明内容

本发明提供一种从丹参经高醇提取后产生的药渣中制备丹酚酸B提取物的方法，经80-100%乙醇溶液提取后的丹参药渣加入PH值为2-8，含醇量为30-60%的乙醇溶液再次提取，浓缩，酸沉，固液分离，柱层析法纯化，浓缩，干燥等工艺过程得到丹酚酸B提取物，提取物中丹酚酸B含量高于80%，得率达到1.7%以上（以干药渣计）。

本发明通过下述技术方案予以实施。

本发明的一种有效制备丹酚酸B提取物的方法，按顺序包括如下步骤：

（1）取经80-100%乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入PH值为2-8，含醇量为30-60%的乙醇溶液进行提取，得提取液；

（2）提取液浓缩，得浓缩液，降温；

（3）浓缩液酸沉，低温静置，固液分离，得液体；

（4）柱层析法分离、纯化丹酚酸B；

（5）浓缩、干燥，得丹酚酸B提取物。

其中，所述步骤（1）中的丹参药渣选自丹参根或根茎或根与根茎比例混合物或湿品或干品或整株或饮片或颗粒或粉末的丹参经，PH值为2-8，80-100%乙醇溶液提取后的湿药渣或干燥后药渣。步骤（1）中的丹参药渣提取所用含醇量为30-60%乙醇溶液总用量为干药渣量的2-15倍；提取次数1-5次；每次提取时间0.5-5小时；提取温度为20-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取或渗漉提取或超声提取或微波提取。

所述步骤（2）中的浓缩液采用减压或常压浓缩；浓缩温度为40-100℃；浓缩液比重为0.80-1.20（55±5℃）。步骤（2）中的浓缩液采用降温处理，使浓缩液温度降为0-25℃。

所述步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；调PH值使用酸的种类为无机酸或有机酸。步骤（3）中的低温静置酸沉液温度控制为0-20℃，静置0-48小时。步骤（3）中的固液分离方式选自管式离心或碟式离心或膜过滤或线隙过滤或板框过滤或滤布过滤或纸浆板过滤或滤纸过滤或直接移取上清液。

所述步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为大孔树脂类，优选AB-8或D101或聚酰胺树脂；用量为溶胀后体积（ml）与药材干重量（g）比值=0.5-2.5：1。步骤（4）中的柱层析法洗脱用溶液为乙醇或乙醇水溶液。步骤（4）中的柱层析法洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为2-6倍填料溶胀后体积量；然后用10-25%浓度的乙醇水溶液洗脱除杂，用量为3-6倍填料溶胀后体积量；再用40-60%浓度的乙醇水溶液洗脱，用量为3-6填料溶胀后体积量，弃去前0-1倍填料溶胀后体积洗脱液，收集后续洗脱液。

所述步骤（5）中的浓缩方式可以为减压浓缩或常压浓缩；温度控制40-120℃；浓缩至比重为1.0-1.5（55±2℃）。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为步骤（4）中收集的洗脱液直接干燥或浓缩后干燥；干燥温度40-120℃。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为干燥后的干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。

优选的，其中，

所述步骤（1）中的丹参药渣选自丹参根或根茎或干品或整株或饮片或颗粒或粉末的丹参经，PH值为2-8，80-100%乙醇溶液提取后的湿药渣或干燥后的药渣。步骤（1）中丹参药渣提取用的乙醇溶液总用量为干药渣量的5-13倍；提取次数1-3次；每次提取时间1-3小时；提取温度为60-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取或超声提取或微波提取。

所述步骤（2）中的浓缩液采用减压浓缩；浓缩温度为40-80℃；浓缩液比重为0.80-1.20（55±5℃）。步骤（2）中的浓缩液采用降温处理，控制浓缩液温度为0-25℃。

所述步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值酸沉混合溶液PH值为1-3；调PH值使用酸的种类为无机酸或有机酸。步骤（3）中的低温静置酸沉液温度控制为0-20℃，静置0-24小时。步骤（3）中的固液分离方式选自管式离心或线隙过滤或板框过滤或纸浆板过滤或直接移取上清液。

所述步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为AB-8或D101或聚酰胺树脂；用量为溶胀后体积（ml）与药材干重量（g）比值=0.5-2.0：1。步骤（4）中的柱层析法洗脱用溶液为乙醇或乙醇水溶液。所述步骤（4）中的柱层析法洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为2-6倍填料溶胀后体积量；然后用10-25%浓度的乙醇水溶液洗脱除杂，用量为3-6倍填料填料溶胀后体积量；再用40-60%浓度的乙醇水溶液洗脱，用量为3-6倍填料填料溶胀后体积量，弃去前0-1倍洗脱液，收集后续洗脱液。

所述步骤（5）中的浓缩方式为减压浓缩；温度控制40-90℃；浓缩至比重为1.0-1.40（55±2℃）。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为步骤（4）中收集的洗脱液直接干燥或浓缩后干燥；干燥温度60-100℃。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为干燥后的干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。

更优选的，其中：

所述步骤（1）中的丹参药渣选自丹参根干品的饮片或颗粒或粉末的丹参经，PH值为5-7，80-100%乙醇溶液提取后的湿药渣或干燥后的药渣。步骤（1）中丹参药渣提取用的乙醇溶液总用量为干药渣量的5-10倍；提取次数1-3次；每次提取时间1-2小时；提取温度为60-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取。

所述步骤（2）中的浓缩液采用减压浓缩；浓缩温度为55-75℃；浓缩液比重为1.00-1.20（55±5℃）。步骤（2）中的浓缩液采用降温处理，控制浓缩液温度为0-20℃。

所述步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；调PH值使用酸的种类为盐酸或硫酸或醋酸。步骤（3）中的低温静置酸沉液温度控制为0-15℃，静置2-16小时。步骤（3）中的固液分离方式选自管式离心或纸浆板过滤。

所述步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为AB-8或D101；用量为溶胀后体积（ml）与药材重量（g）比值=0.7-1.5：1。步骤（4）中的柱层析法洗脱用溶液为乙醇或乙醇水溶液。所述步骤（4）中的柱层析法洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为3-5倍填料溶胀后体积量；然后用10-25%浓度的乙醇溶液洗脱除杂，用量为3-5倍填料溶胀后体积量；再用40-60%浓度的乙醇溶液洗脱，用量为3-5倍填料溶胀后体积量，弃去前1倍洗脱液，收集后续洗脱液。

所述步骤（5）中的浓缩方式为减压浓缩；温度控制50-80℃；比重控制为1.05-1.20（55±2℃）。步骤（5）中的干燥方式选自减压干燥，干燥温度60-80℃。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为干燥后的干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。

最优选的本发明的丹酚酸B提取物的制备方法，按顺序包括如下步骤：

（1）取经80-100%乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入ph5-7，40-50%乙醇溶液提取两次（溶媒量为5倍干药渣量/次，提取时间为1.5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液60℃以下浓缩比重为0.90-1.05（55±5℃），得浓缩液；浓缩液冷却降温至20℃以下，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至1.5-2.5，进行酸沉，10℃以下冷藏静置12小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积（ml）与药材重量（g）比值1：1；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④然后采用4BV树脂体积的15%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤然后采用4BV树脂体积的50%乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.10-1.20（55±2℃），得浓缩液；浓缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。

为检测丹酚酸B提取物中丹酚酸B含量，本发明对所述提取物进行了含量测定，测定方法如下：

照高效液相色谱法(中国药典2010年版附录Ⅵ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-磷酸(23.5：76.5：0.02)为流动相；检测波长为288nm；柱温30℃；流速1ml/min。理论板数按丹酚酸B峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备  取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.14mg的溶液。

供试品溶液的制备 精密称取本品约25.8mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，附图1和2的图谱，对照溶液峰面积：4248436，保留时间13.470min；供试品溶液峰面积：5266519，保留时间13.500min。计算得丹酚酸B提取物中丹酚酸B含量为84.4%。

用本发明方法制备的丹酚酸B提取物中丹酚酸B含量高于80%，提取物得率达到干药渣的1.7%以上。

本发明所制备的丹酚酸B提取物可单独或者与其他活性成分合用制备成适合服用的药物组合物，如与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸、羟丙基-β-环糊精等混合制成的各种药物剂型，例如，可制成注射剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。

本发明的丹酚酸B提取物具有以下医药用途：

丹酚酸B是丹参的水溶性主要活性成分之一，具有显著的抗脂质过氧化，清除自由基和抗血栓的作用，具有很好的研究前景。

与现有技术相比，本发明的丹酚酸B提取物的提取方法具有利用丹参药渣（高醇提取后产生）进一步开发产品的优势，同时制备的提取物具有丹酚酸B含量高等优点，可保持更高的生理活性。另外，通过本发明的方法，使提取物中去除了毒性比较大的成分，更有利于产品的制药应用。

附图说明：

图1丹酚酸B对照谱图

图2实施例1方法得到的供试品谱图

具体实施方式

参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

（1）取经80%乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入ph为5，50%乙醇溶液提取两次（溶媒量为5倍干药渣量/次，提取时间为1.5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液60℃以下浓缩比重为0.95（56℃），得浓缩液；浓缩液冷却降温至20℃以下，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至1.96，进行酸沉，10℃以下冷藏静置13小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积（ml）与药材重量（g）比值1：1；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④然后采用4BV树脂体积的15%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤然后采用4BV树脂体积的50%乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.10-1.20（55±2℃），得浓缩液；浓缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量85%，得率1.9%）

实施例2：

（1）取丹参干燥的根茎经85%乙醇提取后的湿药渣，加入PH值为2，含醇量为30%的乙醇溶液提取1次（溶媒量为2倍(v/w)干药渣量，提取时间为0.5小时），提取液过滤，药渣弃去；

（2）提取液40℃浓缩至比重为0.8（56℃），得浓缩液；降温至0℃，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的硫酸溶液调PH值至1，进行酸沉，浓缩液2℃静置1小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为D101树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5：1(v/v)；②上样流速1BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的10%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的40%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.0（56℃），得浓缩液；浓缩液于40℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量82%，得率1.8%）

实施例3

（1）取鲜丹参的根茎经90%乙醇溶液提取后的湿药渣，加入PH值为8，含醇量为60%的乙醇溶液提取5次（溶媒量为15倍(v/w)干药渣量/次，提取时间为5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液100℃浓缩至比重为1.20（56℃），得浓缩液；降温至25℃，放置24小时，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的乙酸溶液调PH值至3，进行酸沉，浓缩液20℃静置48小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为聚酰胺树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值2.5：1(v/v)；②上样流速3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的25%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的60%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.5（56℃），得浓缩液；浓缩液于120℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量80%，得率1.7%）

实施例4

（1）取经95%(v/v)乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入用稀硫酸调节PH值为3的40%乙醇溶液提取1次（溶媒量为5倍(v/w)干药渣量，提取时间为1小时），提取液过滤，药渣弃去；

（2）提取液40℃浓缩至比重为0.8（56℃），得浓缩液；降温至0℃，放置24小时，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的盐酸溶液调PH值至1，进行酸沉，浓缩液0℃静置1小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5：1(v/v)；②上样流速1BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的10%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的40%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.0（56℃），得浓缩液；浓缩液于60℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量83%，得率1.8%）

实施例5

（1）取经95%(v/v)乙醇溶液提取后的丹参药渣加入用10倍量50%乙醇溶液渗滤提取，浸泡15h后，渗滤流速为0.3-1.5bv/h，提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液80℃浓缩至比重为1.2（56℃），得浓缩液；降温至25℃，放置24小时，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的盐酸溶液调PH值至3，进行酸沉，浓缩液20℃静置24小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值2：1(v/v)；②上样流速3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的25%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的60%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.2（56℃），得浓缩液；浓缩液于100℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量86%，得率1.7%）

实施例6

（1）取经95%(v/v)乙醇溶液提取后的丹参药渣加入50%(v/v)乙醇溶液提取1次（溶媒量为5倍(v/w)干药渣量，提取时间为1小时），提取液过滤，药渣弃去；

（2）提取液55℃以下浓缩至比重为1.0（56℃），得浓缩液；降温至5℃，放置12小时，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的盐酸溶液调PH值至2，进行酸沉，浓缩液5℃静置2小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.7：1(v/v)；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的10%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的40%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.05（56℃），得浓缩液；浓缩液于60℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量81%，得率1.7%）

实施例7

（1）取经95%(v/v)乙醇溶液提取后的丹参药渣加入50%(v/v)乙醇溶液提取3次（溶媒量为10倍(v/w)干药渣量/次，提取时间为3小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液75℃以下浓缩至比重为1.10（56℃），得浓缩液；降温至15℃，放置24小时，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的盐酸溶液调PH值至3，进行酸沉，浓缩液20℃静置25小时，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值1：1(v/v)；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的20%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的50%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.15（56℃），得浓缩液；浓缩液于80℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量83%，得率1.8%）

实施例8

（1）取经95%(v/v)乙醇溶液提取后的丹参药渣加入ph为,7，50%(v/v)乙醇溶液提取两次（溶媒量为5倍(v/w)干药渣量/次，提取时间为1.5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液60℃以下浓缩至比重为0.95（56℃），得浓缩液；降温至10℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的盐酸溶液调PH值至1.96，进行酸沉，浓缩液10℃以下静置12小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值1：1(v/v)；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的15%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的50%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.15（56℃），得浓缩液；浓缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量85%，得率1.9%）

实施例9

与实施例1基本相同，所不同的是步骤（3）酸沉液混合均匀后，不静置直接管式离心，得滤液。（丹酚酸B含量80%，得率1.7%）

实施例10

与实施例1基本相同，所不同的是步骤（4）所采用的填料为D101树脂。（丹酚酸B含量86%，得率1.7%）

实施例11

与实施例1基本相同，所不同的是步骤（4）所采用的填料为聚酰胺树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5：1。（丹酚酸B含量85%，得率1.7%）

实施例12

与实施例1基本相同，所不同的是步骤（5）洗脱液直接喷雾干燥。（丹酚酸B含量86%，得率1.8%）

实施例13

与实施例1基本相同，所不同的是步骤（5）干膏不粉碎，直接作为丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量85%，得率1.8%）

实施例14

与实施例1基本相同，所不同的是步骤（3）降温浓缩液加入10%草酸溶液搅拌调节PH值为2.6。（丹酚酸B含量80%，得率1.7%）

Claims (10)

1.一种有效制备丹酚酸B提取物的方法，按顺序包括如下步骤：

（1）取经80-100%乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入PH值为2-8，含醇量为30-60%的乙醇溶液进行提取，得提取液；

（2）提取液浓缩，得浓缩液，降温；

（3）浓缩液酸沉，低温静置，固液分离，得液体；

（4）柱层析法分离、纯化丹酚酸B；

（5）浓缩、干燥，得丹酚酸B提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中的丹参药渣提取所用含醇量为30-60%乙醇溶液体积总用量为干药渣重量的2-15倍；ph 5-7；提取次数1-5次；每次提取时间0.5-5小时；提取温度为20-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取或渗漉提取或超声提取或微波提取。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中的丹参药渣提取所用含醇量为30-60%乙醇溶液体积总用量为干药渣重量的5-10倍；ph 5-7；提取次数1-3次；每次提取时间1-2小时；提取温度为60-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取或渗漉提取或超声提取或微波提取。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的浓缩液采用减压或常压浓缩；浓缩温度为40-100℃；浓缩后比重55±5℃为0.80-1.20，浓缩后采用的降温处理是将浓缩液温度降为0-25℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的浓缩液采用减压或常压浓缩；浓缩温度为55-75℃；浓缩后比重55±5℃为比重为1.0-1.2，浓缩后采用的降温处理是将浓缩液温度降为0-20℃。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；低温静置酸沉液温度控制为0-20℃，静置0-48小时，；固液分离方式选自管式离心或碟式离心或膜过滤或线隙过滤或板框过滤或滤布过滤或纸浆板过滤或滤纸过滤或直接移取上清液。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；低温静置酸沉液温度控制为0-15℃，静置2-16小时；固液分离方式选自管式离心或碟式离心或膜过滤或线隙过滤或板框过滤或滤布过滤或纸浆板过滤或滤纸过滤或直接移取上清液。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为大孔树脂类，选自AB-8或D101或聚酰胺树脂；填料树脂溶胀后体积与药材干重的比值为0.5-2.5：1ml/g；其中柱层析法洗脱用溶液为乙醇或乙醇水溶液，洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为2-6倍的填料溶胀后体积量；然后用10-25%浓度的乙醇水溶液洗脱除杂，用量为3-6倍的填料溶胀后体积量；再用40-60%浓度的乙醇水溶液洗脱，用量为3-6的填料溶胀后体积量，弃去前0-1倍洗脱液，收集后续洗脱液。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中的浓缩方式为减压浓缩或常压浓缩；温度控制40-120℃优选50-80℃；浓缩至55±2℃比重为1.0-1.5；优选1.05-1.20；也可以为步骤（4）中收集的洗脱液直接干燥或浓缩后干燥；干燥温度40-120℃，干燥后得干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）取经80-100%乙醇溶液提取后的丹参药渣，加入PH值为2-8，含醇量为40-50%乙醇溶液回流提取两次，每次提取溶酶体积用量为5倍药材重量，提取时间为1.5小时/次，提取液过滤，合并，药渣弃去；

（2）提取液60℃以下浓缩，浓缩至55±5℃时比重为0.90-1.05，得浓缩液；浓缩液冷却降温至20℃以下，得降温浓缩液；

（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至1.5-2.5，进行酸沉，10℃以下冷藏静置12小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；

（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，树脂溶胀体积即与药材干重的比值为1：1；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④然后采用4BV树脂体积的15%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤然后采用4BV树脂体积的50%乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；

（5）洗脱液60℃以下减压浓缩，浓缩至55±2℃时ρ＝1.10-1.20，得浓缩液；浓缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。