CN103923042B - 丹酚酸b提取物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种丹酚酸B提取物的制备方法，所述方法包括如下步骤：（1）取丹参药材，加入PH值为2‑8，含醇量为30‑60%的乙醇溶液进行提取，得提取液；（2）提取液浓缩，得浓缩液，降温；（3）浓缩液酸沉，低温静置，固液分离，得液体；（4）柱层析法分离、纯化丹酚酸B；（5）浓缩、干燥，得丹酚酸B提取物。

Description

丹酚酸B提取物的制备方法
技术领域
本发明属于天然产物的提取与分离纯化技术领域，涉及从鼠尾草属植物丹参中提取纯化丹酚酸B的方法，特别涉及从丹参中提取纯化丹酚酸B的方法。
背景技术
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，为多年生草本植物，是我国传统医学中的常用药之一，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功效。临床主要用于治疗肾病、肝病、心脑血管疾病等，有着广泛的应用领域。
丹酚酸B是丹参主要水溶性有效成分之一。药理研究表明，丹酚酸B在清除自由基、保护心脑缺血再灌注损伤和保肝护肾等方面具有较强的药理作用。丹酚酸B在水中不稳定，易降解，同时水溶性丹酚酸类化合物在结构和理化性质上具有很大的相似性，要大规模的分离出高纯度的丹酚酸B非常困难。现有技术中从丹参中提取丹酚酸B的方法主要有：①用水浸提、渗滤提取、超声破碎提取或微波辅助提取，提取液经酸化后，经柱层析法分离纯化丹酚酸B；②用水提取后，再用壳聚糖絮凝，醇沉、有机溶剂萃取，柱层析法纯化。现有技术的不足是，用水提取，提取杂质量大，丹酚酸B降解较多，产业化难度大，且干膏收率低，丹酚酸B提取物纯度低等问题。因而开发易产业化、高含量的丹酚酸B提取物制备方法具有重要的意义。
发明内容
本发明提供一种从丹参中制备丹酚酸B提取物的方法，该方法包括：丹参加入溶剂进行提取，浓缩，酸沉，固液分离，柱层析法纯化，浓缩，干燥，粉碎等工艺过程得到丹酚酸B提取物，提取物中丹酚酸B含量高于65%，得率达到2.5%以上。
本发明通过下述技术方案予以实施。
本发明的丹酚酸B提取物的制备方法，按顺序包括如下步骤：
（1）取丹参药材，加入PH值为2-8，含醇量为30-60%的乙醇溶液进行提取，得提取液；
（2）提取液浓缩，得浓缩液，降温；
（3）浓缩液酸沉，低温静置，固液分离，得液体；
（4）柱层析法分离、纯化丹酚酸B；
（5）浓缩、干燥，得丹酚酸B提取物。
其中，步骤（1）中的丹参选自丹参根或根茎或根与根茎任何比例混合物或湿品或干品或整株或饮片或颗粒或粉末。步骤（1）中的提取溶剂乙醇溶液体积总用量为药材的重量的2-15倍；提取次数1-5次；每次提取时间0.5-5小时；提取温度为20-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取或渗漉提取或超声提取或微波提取。
其中，步骤（2）中的浓缩液采用减压或常压浓缩；浓缩温度为40-100℃；浓缩液比重控制为0.80-1.20（60±5℃）。所得浓缩液采用降温处理，控制浓缩液温度为0-40℃。
其中，步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；调PH值使用酸的种类为无机酸或有机酸。步骤（3）中的低温静置的酸沉液温度控制为20℃以内，静置时间为0.5-72小时。步骤（3）中的固液分离方式选自管式离心或碟式离心或膜过滤或线隙过滤或板框过滤或滤布过滤或纸浆板过滤或滤纸过滤或直接移取上清液。
其中，步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为大孔树脂类，优选AB-8或D101或聚酰胺树脂；用量为溶胀后体积（ml）与药材干重量（g）比值=0.5-2.5：1。步骤（4）中的柱层析法洗脱用溶液为乙醇或水。洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为2-6倍填料溶胀后体积量；然后用10-25%浓度的乙醇水溶液洗脱除杂，用量为3-6倍填料溶胀后体积量；再用40-60%浓度的乙醇水溶液洗脱，用量为3-6填料溶胀后体积量，弃去前0-1倍洗脱液，收集后续洗脱液。
其中，步骤（5）中的浓缩方式可以为减压浓缩或常压浓缩；温度控制 40-120℃；比重控制为1.0-1.5（60±5℃）。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为收集的洗脱液直接干燥或浓缩后干燥；干燥温度40-120℃。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为干燥后的干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。
优选的，本发明的丹酚酸B提取物的制备方法，
其中，步骤（1）中的丹参选自丹参根或根茎干品的整株或饮片或颗粒或粉末。步骤（1）中的提取溶剂乙醇溶液是含醇量为30-60%的乙醇溶液，ph-5-7；总用量为药材的5-13倍；提取次数1-3次；每次提取时间1-3小时；提取温度为60-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取或超声提取或微波提取。
其中，步骤（2）中的浓缩液采用减压浓缩；浓缩温度为40-80℃；浓缩液比重为0.80-1.20（60±5℃）。步骤（2）中的浓缩液采用降温处理至温度为0-40℃。
其中，步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；调PH值使用酸的种类为无机酸或有机酸。步骤（3）中的低温静置的酸沉液温度控制为20℃以内，静置时间为6-72小时。步骤（3）中的固液分离方式选自管式离心或线隙过滤或板框过滤或纸浆板过滤或直接移取上清液。
其中，步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为AB-8或D101或聚酰胺树脂；用量为溶胀后体积（ml）与药材干重（g）比值=0.5-2.0：1。步骤（4）中的柱层析法洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为2-6倍填料溶胀后体积量；然后用10-25%浓度的乙醇水溶液洗脱除杂，用量为3-6倍填料溶胀后体积量；再用40-60%浓度的乙醇水溶液洗脱，用量为3-6倍填料溶胀后体积量，弃去前0-1倍洗脱液，收集后续洗脱液。
其中，步骤（5）中的浓缩方式为减压浓缩；温度控制40-90℃；比重控制为1.0-1.4（60±5℃）。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为收集的洗脱液直接干燥或浓缩后干燥；干燥温度60-100℃。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为干燥后的干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。
更优选的，本发明的丹酚酸B提取物的制备方法，
其中，步骤（1）中的丹参选自丹参根干品的饮片或颗粒或粉末。步骤（1）中的提取溶剂乙醇溶液是含醇量为40-60%的乙醇溶液，ph为5-7；总用量为药材的5-10倍；提取次数1-3次；每次提取时间1-2小时；提取温度为60-120℃；提取方式可以采用加热提取或浸渍提取。
其中，步骤（2）中的浓缩液采用减压浓缩；浓缩温度为55-75℃；浓缩至比重为1.00-1.20（60±5℃）。步骤（2）中的浓缩液采用降温处理至温度为0-40℃。
其中，步骤（3）中的浓缩液加入酸类调节PH值，酸沉混合溶液PH值为1-3；调PH值使用酸的种类为盐酸或硫酸或醋酸。步骤（3）中的低温静置的酸沉液温度控制为20℃以内，静置时间为8-72小时。步骤（3）中的固液分离方式选自管式离心或纸浆板过滤。
其中，步骤（4）中的柱层析法所采用的填料为AB-8或D101；用量为溶胀后体积与药材量比值=0.7-1.5：1。步骤（4）中的柱层析法洗脱方式为先用水洗脱除杂质，用量为3-5倍填料用量；然后用10-25%浓度的乙醇溶液洗脱除杂，用量为3-5倍填料用量；再用40-60%浓度的乙醇溶液洗脱，用量为3-5倍填料用量，弃去前1倍洗脱液，收集后续洗脱液。
其中，步骤（5）中的浓缩方式为减压浓缩；温度控制50-80℃；比重控制为1.05-1.20（60±5℃）。步骤（5）中的干燥方式选自减压干燥，干燥温度60-80℃。步骤（5）中的丹酚酸B提取物可以为干燥后的干膏或粉碎至不同程度的颗粒或粉末。
最优选的本发明的方法如下：
（1）取丹参饮片，加入50%乙醇溶液提取两次（溶媒量为5倍药材量/次，提取时间为1.5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液60℃以下浓缩至比重为1.00-1.05（60±5℃），得浓缩液；浓缩液降温至20℃以下，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至1.5-2.5，进行酸沉，10℃以下冷藏静置12小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值1：1；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的15%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的50%乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.10-1.20（45-50℃），得浓缩液；浓 缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。
以上步骤得到的提取物中丹酚酸B含量高于65%，得率达到2.5%以上。
为检测丹酚酸B提取物中丹酚酸B含量，本发明对所述提取物进行了含量测定，测定方法如下：
照高效液相色谱法(中国药典2010年版附录Ⅵ D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-磷酸(23.5：76.5：0.02)为流动相；检测波长为286nm；柱温30℃；流速1ml/min。理论板数按丹酚酸B峰计算，应不低于2000。
对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.14mg的溶液。
供试品溶液的制备：精密称取本品约45mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
如说明书附图1和2。参照以上检验方法，配置的丹酚酸B对照品浓度为0.1406mg/ml，精密称取制备的丹酚酸B提取物46.1mg按以上方法检测，得对照溶液峰面积（附图1）：715834，保留时间26.860min；供试品溶液峰面积（附图2）：1283096，保留时间26.346min。计算得制备丹酚酸B提取物中丹酚酸B含量为68.33%。请对图谱进行简要分析，已得出下述结论。
经以上方法检测，用本发明方法制备的丹酚酸B提取物中丹酚酸B含量均高于65%，提取物得率均达到2.5%以上。
本发明所制备的丹酚酸B提取物可单独或者与其他活性成分合用制备成适合服用的药物组合物，如与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸、羟丙基-β-环糊精等混合制成的各种药物剂型，例如，可制成注射剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。
本发明的丹酚酸B提取物具有以下医药用途：
丹酚酸B是丹参的水溶性主要活性成分之一，具有显著的抗脂质过氧化，清 除自由基和抗血栓的作用，具有很好的研究前景。
与现有技术相比，本发明的丹酚酸B提取物，丹酚酸B的含量高，可保持更高的生理活性，得率高，有利于工业化，降低成本，提高效率，更有利于产品的制药应用。
附图说明：
图1丹酚酸B对照谱图
图2实施例1方法得到的供试品谱图
具体实施方式
参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例1
（1）取丹参饮片，加入50%(v/v)乙醇溶液（ph值为6.1）回流提取两次（溶媒量为5倍(v/w)药材量/次，提取时间为1.5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液60℃以下浓缩至比重1.02（56℃），得浓缩液；浓缩液降温至10℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的盐酸溶液调PH值至1.96，进行酸沉，10℃以下低温静置12小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值1：1(v/v)；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的15%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的50%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.15（56℃），得浓缩液；浓缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量75%(w/w)，得率3.5%(w/w)）
实施例2：
（1）取丹参干燥的根茎部位，加入PH值为2，含醇量为30%回流提取两次（溶媒量为2倍药材量/次，提取时间为05小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液65℃以下浓缩至比重0.80。（56℃），得浓缩液；浓缩液降温至40℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至1，进行酸沉，10℃以下低温静置0.5小时，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为D101树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5：1；②上样流速1BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的10%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的40%乙醇溶液洗脱，流速1BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液40℃减压浓缩至ρ＝1（56℃），得浓缩液；浓缩液于40℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量78%，得率4.0%）
实施例3
（1）取丹参根茎部位的鲜品，加入加入PH值为8，含醇量为60%乙醇溶液回流提取两次（溶媒量为15倍药材量/次，提取时间为5小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液60℃以下浓缩至比重1.2（56℃），得浓缩液；浓缩液降温至0℃，放置24小时，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至3，进行酸沉，0℃低温静置72小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为聚酰胺树脂树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值2.5：1；②上样流速3BV树脂体积/h；③采用6BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速3BV树脂体积/h；④采用6BV树脂体积的25%乙醇溶液洗脱除杂，流速3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的60%乙醇溶液洗脱，流速1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液， 得洗脱液；
（5）洗脱液120℃减压浓缩至ρ＝1.5（56℃），得浓缩液；浓缩液于120℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量66%，得率2.5%）
实施例4
（1）取丹参饮片，加入采用稀硫酸调节PH值为3的40%乙醇溶液回流提取1次（溶媒量为5倍药材量/次，提取时间为1小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液40℃浓缩至比重0.8（56℃），得浓缩液；浓缩液降温至10℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液搅拌加入10%的盐酸溶液调PH值至2，进行酸沉，20℃以下低温静置12小时以上，离心，得离心液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5：1；②上样流速1BV树脂体积/h；③采用2BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；④采用3BV树脂体积的10%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；⑤采用3BV树脂体积的40%乙醇溶液洗脱，流速1BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1（56℃），得浓缩液；浓缩液于60℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量65%，得率4.1%）
实施例5
（1）取丹参饮片，加入用10倍药材量50%乙醇溶液渗滤提取，渗滤流速为0.3-1.5bv/h。，提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液40℃以下浓缩至比重1.20（56℃），得浓缩液；浓缩液降温至40℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液搅拌加入10%的乙酸溶液调PH值至1，进行酸沉，10℃以下 低温静置6小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值2：1；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的25%乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的60%乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.0（56℃），得浓缩液；浓缩液于60℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量71%，得率2.5%）
实施例6
（1）取丹参饮片，加入40%(v/v)乙醇溶液回流提取两次（溶媒量为10倍(v/w)药材量/次，提取时间为2小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）常压90℃浓缩至比重为1.10（62℃），浓缩液降温至温度为35℃以下，放置48小时。
（3）降温浓缩液搅拌加入10%(v/v)的硫酸溶液调PH值至3，进行酸沉，10℃以下低温静置72小时，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.7：1(v/v)；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的15%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的50%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液50℃以下减压浓缩至ρ＝1.05（56℃），得浓缩液；浓缩液于60℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量65%，得率2.5%）
实施例7
（1）取丹参饮片，加入60%(v/v)乙醇溶液回流提取两次（溶媒量为8倍(v/w)药材量/次，提取时间为2小时/次），提取液过滤，合并，药渣弃去；
（2）提取液60℃以下浓缩至比重1.02（56℃），得浓缩液；浓缩液降温至10℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；
（3）降温浓缩液加入10%硫酸溶液搅拌调节PH值为1.21。进行酸沉，10℃以下低温静置12小时以上，纸浆板框抽滤，得滤液；
（4）滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为AB-8树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值1.5：1(v/v)；②上样流速1BV-3BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的25%(v/v)乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV-3BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的60%(v/v)乙醇溶液洗脱，流速1BV-1.5BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
（5）洗脱液60℃以下减压浓缩至ρ＝1.15（56℃），得浓缩液；浓缩液于60-65℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量68%，得率3.0%）
实施例8
与实施例1基本相同，所不同的是步骤（3）降温浓缩液加入10%草酸溶液搅拌调节PH值为2.6。（丹酚酸B含量66%，得率3.2%）
实施例9
与实施例1基本相同，所不同的是步骤（3）酸沉液混合均匀后，溶液温度为18℃，不静置直接管式离心，得滤液。（丹酚酸B含量68%，得率3.1%）
实施例10
与实施例1基本相同，所不同的是步骤（4）所采用的填料为D101树脂。（丹酚酸B含量71%，得率3.0%）
实施例11
与实施例1基本相同，所不同的是步骤（4）所采用的填料为聚酰胺树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5：1。（丹酚酸B含量76%，得率2.5%）
实施例12
与实施例1基本相同，所不同的是步骤（5）洗脱液直接喷雾干燥。（丹酚酸B含量69%，得率2.6%）
实施例13
与实施例1基本相同，所不同的是步骤（5）干膏不粉碎，直接作为丹酚酸B提取物。（丹酚酸B含量67%，得率2.7%）。

Claims (1)

1.一种丹酚酸B提取物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)取丹参干燥的根茎部位，加入pH值为2，含醇量为30％的乙醇溶液回流提取两次，其中溶媒量为2倍药材量/次，提取时间为0.5-5小时/次，提取液过滤，合并，药渣弃去；
(2)提取液65℃以下浓缩至56℃时测比重为0.80，得浓缩液；浓缩液降温至40℃以下，放置24小时，得降温浓缩液；
(3)降温浓缩液搅拌加入10％的盐酸溶液调pH值至1，进行酸沉，10℃以下低温静置0.5小时，纸浆板框抽滤，得滤液；
(4)滤液进行柱层析法分离、纯化：①填料为D101树脂，用量为树脂溶胀体积与药材量比值0.5ml：1g；②上样流速1BV树脂体积/h；③采用4BV树脂体积的纯化水洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；④采用4BV树脂体积的10％乙醇溶液洗脱除杂，流速2BV树脂体积/h；⑤采用4BV树脂体积的40％乙醇溶液洗脱，流速1BV树脂体积/h，弃去第1BV的洗脱液，收集第2-4BV的洗脱液，得洗脱液；
(5)洗脱液40℃减压浓缩至56℃时测比重为1，得浓缩液；浓缩液于40℃真空干燥，得干膏；干膏粉碎过80目，得丹酚酸B提取物。
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