CN101856382B

CN101856382B - 一种提取分离桔梗皂苷有效成分的方法

Info

Publication number: CN101856382B
Application number: CN2010102165369A
Authority: CN
Inventors: 朱月信; 曹勇; 马凯; 李文军; 杨景生; 杨春杰
Original assignee: ANHUI JIREN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: Anhui Jiren Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2010-07-02
Filing date: 2010-07-02
Publication date: 2011-09-14
Anticipated expiration: 2030-07-02
Also published as: CN101856382A

Abstract

一种提取分离桔梗皂苷有效成分的新方法，是一种集碱性乙醇水溶液浸提-溶剂萃取-柱层析分离方法。用该方法对桔梗进行深加工，制备较高纯度的桔梗皂苷提取物。用pH＝8～9、30～60％乙醇水浸提；丁醇萃取；柱层析分离填料为硅胶、聚酰胺等，配位剂为硼酸钠、硫酸铜等，流动相为丁醇-乙酸乙酯(25∶75～80∶20，V/V)。制得桔梗皂苷提取物中早皂苷纯度80～90％，总收率≥20％。该提取分离工艺，方法简便、成本低、易于工业生产应用。

Description

一种提取分离桔梗皂苷有效成分的方法

一、技术领域

本发明涉及一种中药有效成分提取分离方法，确切地说是一种桔梗皂苷的提取分离方法。

二、背景技术

桔梗为桔梗科植物桔梗的干燥Platyodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根。桔梗为多年生草本植物。文献报道桔梗有紫花、白花和黄花类型，目前种植的主要是紫花类型。可药、食、赏多用，是我国销量最大的40种传统中药材之一。桔梗分布广泛，全国除西北外均有产。东北及内蒙古野生产量较大，安徽、河南、湖北、河北、江苏、四川、浙江、山东则栽培产量较大，全国以东北、华北产量大，华东地区所产质量较好。

桔梗味苦、辛，性平，归肺经，有开宣肺气，祛痰排脓之功效。用于治疗外感咳嗽，咽喉肿痛，肺痈吐痰，胸满胁痛，痢疾腹痛等病。近年来，桔梗在免疫调节、抗炎、祛痰、保肝、降血脂等方面的药理作用引起了广泛天注。其主要成分为齐蹲果酸型五环三萜皂苷，还含有黄铜、聚炔、甾体、酚酸、脂肪酸等类型的化合物。目前，研究较多的单体化合物为桔梗皂苷。

考虑到桔梗皂苷具有专属功效，有必要进行提取分离。国内对桔梗皂苷的主要提取方法有冷浸法、热提法、醇提法(例如，徐丽萍.桔梗皂苷提取方法的比较，《食品工业科技》，2007，28(4)：133-134)，提取分离方法有水提醇沉-树脂吸附脱糖脱色法(例如，徐宝军，郑毅男.桔梗总皂苷制备工艺研究，《大连大学学报》，2000，21(2)：77-79)，或采用乙醇提取-溶剂萃取-大孔树脂吸附分离-硅胶柱层析-高效液相色谱法，进行单体组分的微量制备与结构鉴定(例如，付文卫，窦德强，侯文彬，程保辉，刘菲，陈英杰，裴月湖，竹田忠.桔梗中三萜皂苷的分离与结构鉴定，《中国药物化学杂志》，2005，15(5)：297-301)。

经由国家知识产权局网站检索，截至2010年6月16日，与桔梗皂苷提取分离方法直接相关的授权发明专利或申请主要有：

(1)ZL02132764.5(《从桔梗中提取桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D的方法及其医药新用途和中药制剂》)：该发明公开了一种从桔梗中提取桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D的方法及其医药用途和中药制剂。将中药桔梗用乙醇提取，或用水提取乙醇沉淀纯化，再经D101大孔树脂柱纯化干燥得桔梗总皂苷。上述得到的桔梗总皂苷在中低压柱层析上分离，用硅胶薄层鉴定，相同Rf值斑点的流份合并(其中最大斑点为桔梗皂苷D)，挥去溶剂，得单体桔梗皂苷D。

(2)CN1566137A(申请号03139761.1，《桔梗总皂苷生产工艺》)：该发明公开了一种桔梗总皂苷相关技术。本技术步骤为：①桔梗粗颗粒加水煮沸提取三次，合并提取液浓缩；②上吸附树脂床分离；③用去离子水水洗树脂床；④用70％乙醇醇洗树脂床；⑤收集乙醇洗脱液减压回收乙醇，浓缩、喷雾干燥的桔梗总皂苷提取物。

(3)CN101084971A(申请号200610014212.0，《一种桔梗总皂苷的制备方法》)：该发明公开了一种桔梗总皂苷的制备方法，按顺序包括如下步骤：(1)取桔梗药材，加入溶剂，将溶液调至碱性后再进行提取，得提取液；(2)提取液上大孔型碱性阴离子交换柱，先用碱水和纯水冲洗，冲洗液弃去，再用含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即得桔梗总皂苷。

三、发明内容

本发明旨在为开发中药新药或保健食品提供优质原料-桔梗提取物，所要解决的技术问题桔梗皂苷有效成分的提取、分离问题。

本发明的技术方案是以桔梗为原料，包括粉碎、提取、分离、萃取、浓缩和纯化，其特征是将粉碎过100～150目筛的桔梗用pH8～9的质量百分浓度30～60％乙醇水溶液搅拌提取(动态提取)至少两次，分离后合并提取液，浓缩至原体积的1/2～1/3，调pH4～5，用丁醇萃取至少两次，分离后合并萃取液，脱溶后用配位色谱柱分离纯化，固定相为硅胶或聚酰胺中添加0.5～1.5％(质量百分比)配位剂硼酸钠或硫酸铜等，流动相(即洗脱剂)为丁醇-乙酸乙酯按25∶75～80∶20的体积比混合的混合溶剂，收集洗脱液、脱溶、干燥后得到桔梗皂苷含量80～90％的桔梗提取物。

备注：测定桔梗总皂苷含量方法为《中华人民共和国药典》(2005年版)规定的称重法。

具体操作步骤是：

(1)首先将桔梗通过粉碎机进行破碎，过100～150目筛子，置于8～20倍体积的30-60％乙醇水(采用5％NaOH溶液调pH8～9)中，动态搅拌提取，转速60r/min，时间120min左右，提取至少2次；

(2)将提取液合并，真空浓缩至原体积的1/2～1/3，再采用HCl将其调pH至4～5；

(3)添加2～3倍体积的丁醇进行萃取，萃取至少2次，合并萃取液，真空浓缩至干，再溶于3倍以上体积乙酸乙酯，用于上柱；

(4)进行柱层析分离，固定相为分离介质硅胶、聚酰胺中添加0.5～1.5％配位剂硼酸钠或硫酸铜等构成的填料，流动相为丁醇-乙酸乙酯(25∶75～80∶20，V/V)，进行洗脱；

(5)收集洗脱液，真空浓缩、干燥，可制得桔梗皂苷纯度80～90％的桔梗提取物。

本发明提供了一种集成廉价乙醇水(碱化)浸提-溶剂萃取-柱层析分离纯化的方法，制备出桔梗皂苷含量80～90％桔梗提取物。总收率≥20％。

四、具体实施方式

实施例1：

①称取1kg桔梗(桔梗总皂苷含量6.5％)，通过粉碎机进行破碎，过120目筛子，溶于15倍体积的pH＝8的40％乙醇水中，动态搅拌，转速60r/min，时间120min左右，提取2次；

②将提取液合并，真空浓缩至原体积的1/2，再添加HCl调pH至4；

③添加2倍体积的丁醇进行萃取，萃取3次，合并萃取液，真空浓缩至干，再溶于3倍体积乙酸乙酯，用于上柱

④进行柱层析分离，分离介质为添加1％硼酸钠的硅胶填料，流动相为丁醇-乙酸乙酯(70∶30，V/V)，进行洗脱；

⑤收集洗脱液，真空浓缩、干燥，得16.5g桔梗总皂苷纯度为86.7％的桔梗提取物，总收率22.0％。

实施例2：

①称取1kg桔梗(桔梗总皂苷含量6.5％)，通过粉碎机进行破碎，过100目筛子，溶于20倍体积的pH＝9的50％乙醇水中，动态搅拌，转速60r/min，时间120min左右，提取2次；

②将提取液合并，真空浓缩至原体积的1/3，再添加HCl调pH至4；

③添加3倍体积的丁醇进行萃取，萃取2次，合并萃取液，真空浓缩至干，再溶于4倍体积乙酸乙酯，用于上柱

④进行柱层析分离，分离介质为添加1％硫酸铜的聚酰胺填料，流动相为丁醇-乙酸乙酯(55∶45，V/V)，进行洗脱；

⑤收集洗脱液，真空浓缩、干燥，得17.2g桔梗总皂苷纯度为81.7％的桔梗提取物，总收率21.6％。

Claims

1.一种提取分离桔梗皂苷有效成分的方法，以桔梗为起始原料，包括粉碎、提取、分离、萃取、浓缩和纯化，其特征在于：所述的提取是将粉碎过100～150目筛的桔梗用pH8～9、浓度30～60％的乙醇水溶液进行动态搅拌提取至少两次，提取液浓缩至原体积的1/2～1/3后调pH4～5，用丁醇萃取至少两次，萃取液脱溶后上配位色谱柱，收集丁醇-乙酸乙酯混合洗脱液，浓缩、干燥，获得桔梗皂苷含量80～90％的桔梗提取物；所述的配位色谱柱中固定相组成为硅胶或聚酰胺中添加0.5～1.5％配位剂硼酸钠或硫酸铜；所述的混合洗脱液丁醇-乙酸乙酯的体积比为25∶75～80∶20。