CN102775461A

CN102775461A - 一种20(r)-人参皂苷的制备方法

Info

Publication number: CN102775461A
Application number: CN2012102229425A
Authority: CN
Inventors: 沈勇; 艾洪莲; 赵大克; 郑丽; 张丽梅; 李晓波; 字淑慧
Original assignee: Yunnan Agricultural University
Current assignee: Yunnan Agricultural University
Priority date: 2012-07-02
Filing date: 2012-07-02
Publication date: 2012-11-14

Abstract

20(R)-人参皂苷Rg₃的制备方法：将三七总皂苷用水溶解，加入酸（盐酸、磷酸、硫酸、乙酸、冰醋酸、甲酸等酸）调pH至1~3，加热回流30~60 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物。粗转化产物进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇-水进行梯度洗脱，收集洗脱液，以人参皂苷Rg₃为对照经薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并主含人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至转化前三七总皂苷量的2倍，静置，过滤，滤饼干燥，即得20(R)-人参皂苷Rg₃。经高效液相色谱法(HPLC)检测，所得产品20(R)-人参皂苷Rg₃含量大于90%。该法具有方法简单，成本低，产品纯度高等优点，易于工业化生产。

Description

一种20(R)-人参皂苷的制备方法

技术领域：

本发明属于天然药物制备领域，具体涉及一种人参皂苷Rg₃的制备方法。

背景技术：

20(R)-人参皂苷Rg₃由日本学者北川勋于1980年首先制备得到，并确定其分子式。随后日本、中国、韩国、德国、美国等国家学者也不同程度地开展了对其研究。20(R)-人参皂苷Rg₃是从红参（栽培人参经晒干或烘干再蒸制而成）中微量提取，其提取率仅为0.003%，是人参二醇类四环三萜皂苷中人参皂苷，分子式为C₄₂H₇₂O₁₃，分子量为784.30，化学名为：20(R)-达玛烷烯二醇-3-O-β-D-葡萄吡喃糖基(1-2)-β-D-葡萄吡喃糖。可溶于甲醇、乙醇，水中溶解度低，不溶于乙醚、氯仿。20(R)-人参皂苷Rg₃是人参中的有效活性成分，对于很多疾病有改善和预防作用，对于中老年的常见疾病，心脑血管疾病、冠心病、四肢乏力、腿脚不便、记忆力减退都有很好的疗效。Rg₃是抗肿瘤的主要药物之一，现在是世界热门研究项目，为克服癌症提供了很好的材料。

20(R)-人参皂苷Rg₃是一种人参二醇类四环三萜皂苷，具有较好的抗癌、抗癌转移作用，近年来国内外医学工作者进行大量研究，取得了可喜的成绩。药理研究表明，20(R)-人参皂苷Rg₃能显著提高荷瘤小鼠的免疫功能；抑制肿瘤内新生血管形成；阻止脱落癌细胞在血管壁的着床；抑制肿瘤细胞对血管壁基底膜的浸润，有显著抗浸润、抗转移作用。临床实验证实人参皂苷Rg₃能有效抑制肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌细胞的生长，明显改善临床症状、提高生存质量、预防和治疗癌症、改善心脏血管功能、抗血小板凝集、保护脑神经细胞、提高机体免疫力。

由于20(R)-人参皂苷Rg₃在人参中含量极微，仅为十万分之三，提取制备极其复杂昂贵，难以实现产业化生产。

发明内容：

基于目前20(R)-人参皂苷Rg₃主要从红参中获得且提取率低，成本高的特点。本发明旨在提供一种以三七提取物三七总皂苷为原料，经过酸化处理，一次硅胶柱层析获得纯度大于90%的20(R)-人参皂苷Rg₃的方法。该方法提取率高，可大大降低生产成本，生产过程更为简化，并且更适合于工业化生产。

本发明的上述目的是通过下述的技术方案加以实现的：

20(R)-人参皂苷Rg₃的制备方法，包括酸化、柱层析分离纯化、结晶纯化步骤，所述酸化是将三七总皂苷用水溶解，加入酸调pH至1~3，加热回流30~60 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物；所述柱层析分离纯化是将酸化步骤所得的粗转化产物，用甲醇溶解吸附于1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿:甲醇:水的混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液，以20(R)-人参皂苷Rg₃为对照用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主含20(R)-人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至转化前三七总皂苷量的2倍；所述结晶纯化是将柱层析分离纯化步骤所得溶液，静置，过滤，滤饼干燥。

上述方法中，酸化步骤中所用酸为盐酸或磷酸或硫酸或乙酸或冰醋酸或甲酸。

上述方法中，柱层析分离纯化步骤中所述的硅胶为200-300目，柱层析的硅胶用量为样品量的10 - 40倍量。

上述方法中，柱层析分离纯化步骤中所述的洗脱剂为8-9.5:0.5-2:0.05-0.2的氯仿:甲醇:水。

上述方法中，结晶纯化步骤中所述的结晶溶剂为洗脱剂回收溶剂至转化前三七总皂苷的量。

具体实施方式：

下面结合本发明的实施例来对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

实施例1：

本发明的制备20(R)-人参皂苷Rg₃的方法具体步骤如下：

（1）酸化

将三七总皂苷用水溶解，加入酸（盐酸、磷酸、硫酸、乙酸、冰醋酸、甲酸等酸）调pH至1~3，加热回流30~60 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物。

（2）柱层析分离纯化

将步骤（1）所得的粗转化产物，用甲醇溶解吸附于1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水的混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液，以20(R)-人参皂苷Rg₃为对照用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并主含20(R)-人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至转化前三七总皂苷量的2倍。

（3）结晶纯化

将步骤（2）所得溶液，静置，过滤，滤饼干燥，即得人参皂苷Rg₃。

经上述步骤所得，用参一胶囊的HPLC色谱条件检测。即为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇:水(90:10)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按20(R)-人参皂苷Rg₃峰计算应不低于3000。纯度大于90%。用本发明的方法所制得的产物的结构式为：

具体地，三七（Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen）药材粉碎，用8倍量的70%乙醇加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩至无醇味，加水使总量为药材量4倍，搅拌，静置过夜。取上清液过预处理的AB - 8大孔吸附树脂，依次水洗至无molish反应，再用65%乙醇洗脱，收集65%乙醇洗脱液。洗脱液过预处理的D-280大孔强碱性阴离子交换树脂，收集流出液，回收乙醇，浓缩至干，得三七总皂苷提取物。

然后将三七总皂苷100 g用水1000 ml溶解，用盐酸调pH至2，加热回流40 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物100.5 g。粗转化产物用适量甲醇溶解，吸附于150 g 200~300目硅胶上拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水（9-8:1-2:0.1-0.2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以20(R)-人参皂苷Rg₃为对照用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并主含20(R)-人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至200 ml，静置，过滤，滤饼干燥，即得20(R)-人参皂苷Rg₃16.2 g。经高效液相色谱法(HPLC)检测，所得产品20(R)-人参皂苷Rg₃含量为91.3%。该法具有制备方法简单，成本低，产品纯度高，易于工业化生产等优点。

实施例2：

先按实施例1的方法得到三七总皂苷，然后将三七总皂苷100 g用水1000 ml溶解，用盐酸调pH至3，加热回流60 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物101.2 g。粗转化产物用适量甲醇溶解，吸附于150 g 200~300目硅胶上拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水（9-8:1-2:0.1-0.2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以20(R)-人参皂苷Rg₃为对照用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并主含20(R)-人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至200 ml，静置，过滤，滤饼干燥，即得20(R)-人参皂苷Rg₃16.8 g。经高效液相色谱法(HPLC)检测，所得产品20(R)-人参皂苷Rg₃含量为90.3%。

实施例3：

先按实施例1的方法得到三七总皂苷，然后将三七总皂苷100 g用水1000 ml溶解，用盐酸调pH至1，加热回流50 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物102.5 g。粗转化产物用适量甲醇溶解，吸附于150 g 200~300目硅胶上拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水（9-8:1-2:0.1-0.2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以20(R)-人参皂苷Rg₃为对照用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并主含20(R)-人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至200 ml，静置，过滤，滤饼干燥，即得20(R)-人参皂苷Rg₃15.9 g。经高效液相色谱法(HPLC)检测，所得产品20(R)-人参皂苷Rg₃含量为91.6%。

Claims

1.20(R)-人参皂苷Rg₃的制备方法，包括酸化、柱层析分离纯化、结晶纯化步骤，所述酸化是将三七总皂苷用水溶解，加入酸调pH至1~3，加热回流30~60 min，回收酸液并浓缩至膏状，干燥得粗转化产物；所述柱层析分离纯化是将酸化步骤所得的粗转化产物，用甲醇溶解吸附于1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿:甲醇:水的混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液，以20(R)-人参皂苷Rg₃为对照用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主含20(R)-人参皂苷Rg₃的流份，回收溶剂至转化前三七总皂苷量的2倍；所述结晶纯化是将柱层析分离纯化步骤所得溶液，静置，过滤，滤饼干燥。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于酸化步骤中所用酸为盐酸或磷酸或硫酸或乙酸或冰醋酸或甲酸。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于柱层析分离纯化步骤中所述的硅胶为200-300目，柱层析的硅胶用量为样品量的10 - 40倍量。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于柱层析分离纯化步骤中所述的洗脱剂为8-9.5:0.5-2:0.05-0.2的氯仿:甲醇:水。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于结晶纯化步骤中所述的结晶溶剂为洗脱剂回收溶剂至转化前三七总皂苷的量。