CN102775462A - 一种人参皂苷的制备方法 - Google Patents
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Abstract
从野三七（Panax vietnamensis Ha et Grushv.）中制备人参皂苷Rg1的方法，包括提取、大孔吸附树脂分离纯化、硅胶柱色谱分离纯化、RP-18硅胶柱色谱分离纯化步骤，先制得总皂苷提取物，再制得主要含人参皂苷Rg1部分，然后再进行RP-18反相硅胶柱层析进行纯化，55%甲醇洗脱，以人参皂苷Rg1为对照用HPLC跟踪检测，减压浓缩至干，得到含量大于95%的高纯度的人参皂苷Rg1。该方法制备步骤简单，易于工业化生产，人参皂苷Rg1的收率和纯度较高。
Description
技术领域：
本发明属于天然药物制备领域，具体涉及人参皂苷Rg1的制备方法。
背景技术：
人参皂苷Rg1具有多方面的药理活性：（1）具有对中枢神经有兴奋作用，能提高脑力和体力活动，表现出抗疲劳作用；（2）具有抗血栓作用，人参皂苷Rg1可明显降低实验性血栓形成，能够抑制凝血酶诱导血小板聚集；（3）具有对脑缺血的保护作用，人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡具有明显的保护作用；（4）具有促进缺血心肌血管生成、保护缺血心肌、缩小梗死面积、改善心功能的作用；（5）具有抗突变和抗肿瘤等作用。
随着我国经济、文化事业的发展，寿命延长，老年人口占总人口的比例将加大，随着老年人口的增加，老年性痴呆患者急剧地增加。老年性痴呆是危害老年人身心健康的常见病，多发病。在国内，寻找具有抗老年痴呆的活性成分已取得显著的成效。人参皂苷Rg1是最具有代表性的有效成分之一。它具有预防治疗老年痴呆、益智、抗衰老、对中枢神经系统有很好的改善作用等多种功效。
七生力片是以人参皂苷Rg1为单一成分开发的药物，市场需求量很大，具有活血化瘀，益气通络作用。主要用于气虚血瘀所致头昏乏力，健忘等症。
野三七（Panax vietnamensis Ha et Grushv.）为五加科（Araliaceae）人参属（Panax）植物，其根入药。野三七与人参属其他植物化学成分也较为类似。野三七块根的化学成分已有报道，主要含有四环三萜人参皂苷类成分，并含有三七（Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen）特征成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R 1、人参皂苷Rd及人参皂苷Re。野三七具有与人参、三七等同属植物相似的生物活性，如低剂量兴奋中枢神经系统，高剂量抑制中枢神经系统并显示精神病作用；增强体力并显示滋补强壮、抗疲劳、适应原样作用(抗压力、肝毒素等)；增加雄性和雌性性器官重量；抗动脉硬化作用、对低血压动物有升高血压作用；降血糖等作用。
野三七中含有的人参皂苷Rg1，含量与三七相当，为人参属植物含人参皂苷 Rg1含量较高的植物。近几年来，人参皂苷Rg1的需求量很大，并且三七资源短缺，价格急剧上升，从三七中制备人参皂苷Rg1的生产成本也就随之上升，通过资源调查，发现了野三七含有人参皂苷Rg1与三七含量相当的植物资源，这样，可以用野三七并代替三七来制备高纯度的人参皂苷Rg1。现有技术均采用三七来制备人参皂苷Rg1，本法首次采用野三七代替三七来制备高纯度的人参皂苷Rg1，制备方法简单，适合工业化生产。
发明内容：
针对现有技术存在的上述不足，本发明通过科学实验，旨在发明一种发明了一种适合工业化生产、提取率和纯度较高的人参皂苷Rg1的制备方法。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
人参皂苷Rg1的制备方法，包括提取、大孔吸附树脂分离纯化、硅胶柱色谱分离纯化、RP-18硅胶柱色谱分离纯化步骤，所述的提取是将野三七Panax vietnamensis Ha et Grushv. 药材粉碎，用8倍量的70%乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至无醇味，加水使总量为药材量4倍，搅拌，静置过夜；所述的大孔吸附树脂分离纯化是将提取步骤的上清液过预处理的AB - 8大孔吸附树脂，依次用水洗脱，水洗至无molish反应，再用80%乙醇洗脱，回收乙醇洗脱液，浓缩至干，得粗总皂苷；所述的硅胶柱色谱分离纯化步骤是将上一步骤得到的粗总皂苷用适量甲醇溶解，加入1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，以氯仿:甲醇:水的混合溶剂梯度洗脱，分段收集洗脱液，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并含人参皂苷Rg1的流份，回收溶剂至干，得到主要含人参皂苷Rg1部分，经高效液相色谱法HPLC检测人参皂苷Rg1含量；所述的RP-18硅胶柱色谱分离纯化步骤是取硅胶柱色谱分离纯化步骤所得的硅胶纯化物用RP-18柱层析进行纯化，50%的甲醇进行洗脱，以人参皂苷Rg1为对照，用HPLC跟踪检测，减压浓缩至干，得高纯度的人参皂苷Rg1。
上述方法中，大孔吸附树脂分离纯化步骤中所用的大孔吸附树脂型号为AB-8。
上述方法中，硅胶柱色谱分离纯化步骤中所用的硅胶为200-300目的硅胶，柱层析的硅胶用量为样品量的5-20倍。
上述方法中，硅胶柱色谱分离纯化步骤中所用的氯仿:甲醇:水为 8-9:1-2:0.1-0.2。
上述方法中，RP-18硅胶柱色谱分离纯化步骤采用50%的甲醇。
本方法的方法还可具体描述如下：
（1）提取
野三七（Panax vietnamensis Ha et Grushv.）药材粉碎，用8倍量的70%乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至无醇味。加水使总量为药材量4倍，搅拌，静置过夜。
（2）大孔吸附树脂分离纯化
取步骤（1）上清液过预处理的AB-8大孔吸附树脂，依次用水洗脱，水洗至无molish反应，再用80%乙醇洗脱，回收乙醇洗脱液，浓缩至干，得粗总皂苷。
（3）硅胶柱色谱分离纯化
取步骤（2）粗总皂苷用适量甲醇溶解，加入1.5倍量硅胶拌样，室温挥干。以氯仿：甲醇：水的混合溶剂梯度洗脱，分段收集洗脱液，以人参皂苷Rg1为对照，用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并含人参皂苷Rg1的流份，回收溶剂至干，得到主要含人参皂苷Rg1部分，经高效液相色谱法(HPLC)检测人参皂苷Rg1含量约为50%。
（4）RP-18硅胶柱色谱分离纯化
取步骤（3）的硅胶纯化物用RP-18柱层析进行纯化，50%的甲醇进行洗脱，以人参皂苷Rg1为对照，用HPLC跟踪检测，减压浓缩至干，得到高纯度的人参皂苷Rg1，含量大于95%。
附图说明：
图 1 为本发明制备的人参皂苷Rg1 的结构式；
图2 为人参皂苷Rg1 对照品的HPLC图谱；
图3 为本发明制备的自制人参皂苷Rg1 的HPLC图谱；
图4为本发明制备的人参皂苷Rg1的1H NMR 图谱；
图5 为本发明制备的人参皂苷Rg1的13C NMR 图谱；
图6为本发明制备的人参皂苷Rg1的ESI-MS (+) 图谱。
具体实施方式
下面结合附图，用本发明的实施例来对本发明作进一步详细说明，但不构成 对本发明的任何限制。
实施例1：
人参皂苷Rg1的制备：
取野三七药材1 kg，加入8 kg 70%的乙醇，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，回收乙醇并浓缩至无醇味，加水3.5 kg，搅拌，静置过夜。取上清液过预处理的AB-8大孔吸附树脂，依次水洗至无molish反应，再用3.0 kg 80%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩至干，得野三七总提物0.28 kg。野三七总提物用甲醇0.5 L溶解，加入0.42 kg硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水（8-9:1-2:0.1-0.2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以人参皂苷Rg1为对照，用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并含人参皂苷Rg1的流份，回收溶剂至干，得到主要含人参皂苷Rg1部分（45 g），经高效液相色谱法(HPLC)检测人参皂苷Rg1含量约为50%。继续进行RP - 18反相硅胶（0.9 kg）进行柱层析，50%甲醇洗脱，以人参皂苷Rg1为对照，用HPLC跟踪检测，减压浓缩至干，得到高纯度的人参皂苷Rg1（22 g），含量大于95%（见表1、图1、3、4、5、6）。
表1 本发明制备的人参皂苷Rg1的化学位移值
| 碳原子序号 | 化学位移值 | 碳原子序号 | 化学位移值 |
| C-1 | 40.0 | C-22 | 36.6 |
| C-2 | 27.8 | C-23 | 24.3 |
| C-3 | 78.2 | C-24 | 125.9 |
| C-4 | 40.5 | C-25 | 132.3 |
| C-5 | 61.8 | C-26 | 26 |
| C-6 | 77.6 | C-27 | 18.1 |
| C-7 | 44.3 | C-28 | 31.6 |
| C-8 | 41.9 | C-29 | 16.2 |
| C-9 | 50.6 | C-30 | 17.3 |
| C-10 | 40.4 | 6-glc 1 | 105.6 |
| C-11 | 31.5 | 2 | 75.5 |
| C-12 | 71.2 | 3 | 80.9 |
| C-13 | 49.5 | 4 | 71.9 |
| C-14 | 52.5 | 5 | 79.9 |
| C-15 | 31.1 | 6 | 62.9 |
| C-16 | 27.4 | 20-glc 1 | 98.3 |
| C-17 | 53.2 | 2 | 75.3 |
| C-18 | 17.7 | 3 | 79 |
| C-19 | 17.9 | 4 | 71.7 |
| C-20 | 84.9 | 5 | 77.9 |
| C-21 | 23 | 6 | 62.5 |
[0035] 实施例2：
人参皂苷Rg1的制备：
取野三七药材2 kg，加入16 kg 70%的乙醇，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，回收乙醇并浓缩至无醇味，加水7 kg，搅拌，静置过夜。取上清液过预处理的AB-8大孔吸附树脂，依次水洗至无molish反应，再用6.0 kg 80%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩至干，得野三七总提物0.58 kg。野三七总提物用甲醇1.0 L溶解，加入0.87 kg硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水（8-9:1-2:0.1-0.2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以人参皂苷Rg1为对照，用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并含人参皂苷Rg1的流份，回收溶剂至干，得到主要含人参皂苷Rg1部分（91 g），经高效液相色谱法(HPLC)检测人参皂苷Rg1含量约为50%。继续进行RP - 18反相硅胶（1.8 kg）进行柱层析，50%甲醇洗脱，以人参皂苷Rg1为对照，用HPLC跟踪检测，减压浓缩至干，得到高纯度的人参皂苷Rg1（43 g），含量大于95%。
实施例3：
人参皂苷Rg1的制备：
取野三七药材3 kg，加入24 kg 70%的乙醇，回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，回收乙醇并浓缩至无醇味，加水10.5 kg，搅拌，静置过夜。取上清液过预处理的AB-8大孔吸附树脂，依次水洗至无molish反应，再用9.0 kg 80%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩至干，得野三七总提物0.87 kg。野三七总提物用甲醇1.5 L溶解，加入1.31 kg硅胶拌样，室温挥干，进行硅胶柱层析，以氯仿：甲醇：水（8-9:1-2:0.1-0.2）进行梯度洗脱，收集洗脱液，以人参皂苷Rg1为对照，用薄层色谱（TLC）跟踪检测，合并含人参皂苷Rg1的流份，回收溶剂至干，得到主要含人参皂苷Rg1部分（138 g），经高效液相色谱法(HPLC)检测人参皂苷Rg1含量约为50%。继续进行RP - 18反相硅胶（2.7 kg）进行柱层析，50%甲醇洗脱，以人参皂苷Rg1为对照，用HPLC跟踪检测，减压浓缩至干，得到高纯度的人参皂苷Rg1（67 g），含量大于95%。
Claims (4)
1.人参皂苷Rg1的制备方法，包括提取、大孔吸附树脂分离纯化、硅胶柱色谱分离纯化、RP-18硅胶柱色谱分离纯化步骤，所述的提取是将野三七Panax vietnamensis Ha et Grushv. 药材粉碎，用8倍量的70%乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至无醇味，加水使总量为药材量4倍，搅拌，静置过夜；所述的大孔吸附树脂分离纯化是将提取步骤的上清液过预处理的AB - 8大孔吸附树脂，依次用水洗脱，水洗至无molish反应，再用80%乙醇洗脱，回收乙醇洗脱液，浓缩至干，得粗总皂苷；所述的硅胶柱色谱分离纯化步骤是将上一步骤得到的粗总皂苷用适量甲醇溶解，加入1.5倍量硅胶拌样，室温挥干，以氯仿:甲醇:水的混合溶剂梯度洗脱，分段收集洗脱液，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并含人参皂苷Rg1的流份，回收溶剂至干，得到主要含人参皂苷Rg1部分，经高效液相色谱法HPLC检测人参皂苷Rg1含量；所述的RP-18硅胶柱色谱分离纯化步骤是取硅胶柱色谱分离纯化步骤所得的硅胶纯化物用RP-18柱层析进行纯化，50%的甲醇进行洗脱，以人参皂苷Rg1为对照，用HPLC跟踪检测，合并，减压浓缩至干，得高纯度的人参皂苷Rg1。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于大孔吸附树脂分离纯化步骤中所用的大孔吸附树脂型号为AB-8。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于硅胶柱色谱分离纯化步骤中所用的硅胶为200-300目的硅胶，柱层析的硅胶用量为样品量的5-20倍。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于硅胶柱色谱分离纯化步骤中所用的氯仿:甲醇:水为8-9:1-2:0.1-0.2。
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