CN103193855B

CN103193855B - 一种金樱子皂苷单体的制备方法

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Publication number: CN103193855B
Application number: CN201310111084.1A
Authority: CN
Inventors: 刘学贵; 高品一; 金梅; 蒋福宇; 杨頔; 张振学
Original assignee: Shenyang University of Chemical Technology
Current assignee: Shenyang University of Chemical Technology
Priority date: 2013-04-02
Filing date: 2013-04-02
Publication date: 2015-07-29
Anticipated expiration: 2033-04-02
Also published as: CN103193855A

Abstract

一种金樱子皂苷单体的制备方法，涉及一种天然药物的制备方法，主要步骤包括：制备金樱子提取液，将中药金樱子干燥果皮粉碎后按常规用4-50倍体积量的30%-85%乙醇水溶液浸泡，冷浸、渗辘、超声、提取；制备金樱子皂苷A粗品，提取液经减压浓缩。制备金樱子皂苷A，使用有机溶剂对金樱子总皂苷进行重结晶处理，收集不同批次结晶后母液浓缩至近饱和后用1-5倍量硅胶拌样，干燥后采用大型减压硅胶柱色谱对其进行纯化处理，洗脱、蒸干，即得到金樱子皂苷A纯品。本方法通过精制去除溶剂残留，产品安全性得到保证，同时简化了制备流程，节省了溶媒溶剂用量，适合用于工业化大生产。

Description

一种金樱子皂苷单体的制备方法

技术领域

本发明涉及一种天然药物的制备方法，一特别是涉及一种金樱子皂苷单体的制备方法。

背景技术

金樱子的药用价值：中药金樱子Rosa laevigata Michx.为蔷薇科蔷薇属植物在我国分布非常广泛。始载于《蜀本草》，其果实，根和叶均可入药。《本草纲目》中记载金樱子：性酸、涩、平、无毒；主治脾泻下痢、止小便利、涩精气。金樱子果实中含有丰富的三萜皂苷、黄酮及多糖类化合物，药理学研究表明其具有保肝、抗炎、抗应激、抗肿瘤、抑菌，以及降血糖、降血脂、抗心率失常等多种生物活性。尤其近年来为国内外学者研究的热点。

金樱子的保健功用：民间历来有金樱子泡酒的治疗风湿炎症的做法。2002年在《卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知》（卫法监发[2002]51号）一文中正式将“金樱子”列入保健食品的行列。2010年经国家食品药品监督管理局批准认证的“过江龙牌金樱杜仲酒”（广东过江龙酒业有限公司国食健字G20100185）也成为目前以金樱子为主要成分的国食健字成品。

金樱子皂苷A，又名19α-羟基亚细亚酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，为金樱子果实中的主要三萜皂苷，其含量可达10mg/g，即每1kg金樱子药材中含有10g金樱子皂苷A。研究表明金樱子中的三萜类成分（包括金樱子皂苷A）能显著抑制脂多糖(LPS)引起的293-nfkb细胞中荧光素酶表达，且呈现剂量依赖关系，表明具有明显的保肝、抗炎活性。所以金樱子皂苷A作为天然植物来源的药用原料或者中间体，具有重要的应用价值。

以往该化合物的分离主要经过以下步骤：金樱子果实粉碎，用工业甲醇热回流，甲醇液浓缩。浸膏趁热全部分散在水中，依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取物浓缩得到三部分。乙酸乙酯和正丁醇部分经硅胶柱反复层析，氯仿-甲醇梯度洗脱得到金樱子皂苷A。传统做法获得该化合物的方式是用体积分数70%乙醇回流提取5次，减压浓缩后，得到水液和不溶物。不溶物用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。选择了乙酸乙酯部分进行分离。经过反复硅胶柱色谱、ODS、Sephadex LH 20和重结晶得到金樱子皂苷A。

上述制备方法步骤繁琐，操作费时，产品收率低，成本高，有机溶剂用量较大，对环境易造成污染，产品易残留有机溶剂而不能充分保证产品的安全性，不适合工业化制备生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金樱子皂苷单体的制备方法。本方法通过精制去除溶剂残留，产品安全性得到保证，同时简化了制备流程，节省了溶媒溶剂用量，适合用于工业化大生产。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种金樱子皂苷单体的制备方法，所述方法包括以下步骤：

将粉碎后干燥的金樱子果皮用有机溶剂进行提取，提取液减压浓缩，浓缩液低温下放置，高速离心或过滤，滤液上大孔吸附树脂，收集30-60%乙醇水洗脱液，减压回收溶剂，沉淀物干燥即得金樱子皂苷A粗品，粗品经过2-3次重结晶，精制后即得金樱子皂苷A纯品：

。

所述的一种金樱子皂苷单体的制备方法，所述提取液经减压浓缩，浓缩液放置，高速离心或过滤，滤液上大孔树脂，洗脱，干燥后得到的金樱子皂苷A粗品，再次上大孔树脂精制1次。

所述的一种金樱子皂苷单体的制备方法，所述重结晶为使用有机溶剂对金樱子总皂苷进行重结晶处理，利用减压柱色谱纯化结晶后的母液。

所述的一种金樱子皂苷单体的制备方法，所述精制包括经活性炭脱色精制。

本发明的优点与效果是：

本发明的制备方法简单，适合用于工业化大生产。

产品纯度达85-99%，收率1%以上。

3. 本发明提高操作效率，省时，产品收率高，节省溶媒溶剂用量，可以进行工业化生产。

4. 本发明精制去除溶剂残留，产品安全性得到保证。

附图说明

图1是金樱子皂苷A的HPLC图谱；

图2是金樱子皂苷A的ESI-MS图谱；

图3是金樱子皂苷A的¹H NMR图谱；

图4是金樱子皂苷A的¹³C NMR图谱。

注：本发明的图1图4为产物状态的分析示意图或照片（仅供参考），图中文字或影像不清晰并不影响对本发明技术方案的理解。

具体实施例

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

本发明制备金樱子皂苷A的方法如下:

1、制备金樱子提取液

将中药金樱子干燥果皮粉碎后按常规用4-50倍体积量的30%-85%乙醇水溶液浸泡5-12小时，冷浸、渗辘、超声、微波或加热回流提取2-4次，每次0.1-3小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得提取液；

2、制备金樱子皂苷A粗品

提取液经减压浓缩后，浓缩液低温下放置，高速离心或过滤，滤液上大孔树脂吸附后，依次用水、10-20%、30-60%，70-95%乙醇液洗脱至流出液无色，收集30-60%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，沉淀物干燥即得，本发明中的百分比均为重量百分比。

上述得到的金樱子皂苷A粗品优选再次上大孔树脂精制1次。

3、制备金樱子皂苷A

结晶：使用有机溶剂对金樱子总皂苷进行重结晶处理，即得到金樱子皂苷A纯品。

母液：收集不同批次结晶后母液浓缩至近饱和后用1-5倍量硅胶（100-400目）拌样，干燥后采用大型减压硅胶柱色谱对其进行纯化处理，洗脱顺序为：先用二氯甲烷：乙醇90：10洗脱5-10个柱体积后，用二氯甲烷：乙醇75：15洗脱柱体积，收集二氯甲烷：乙醇75：15洗脱液，蒸干，即得。

有机溶剂选自甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、石油醚、正己烷中的一种或几种。

上述制备方法得到的样品优选还包括精制，精制方法优选下列几种：

1、将得到的金樱子皂苷A经活性炭脱色精制。

2、将得到的金樱子皂苷A用截留分子量为1500Da以上的超滤膜超滤。

3、将得到的金樱子皂苷A用水醇溶解后上反相色谱柱(C18柱或C8柱)，先用5-20%的乙醇洗脱3-4倍柱体积后，用40-60%的乙醇洗脱10-15倍柱体积后用乙醇洗脱，收集40-60%的乙醇洗脱液，蒸干。

上述三种方法中，可以只选一种方法精制，还可任选其中的两种或三种。

其中高速离心的转速优选8000转/分钟以上。

大孔树脂优选D-101、HPD-100、HPD-600、HPD-900，HP-20，CHp20，AB-8或ADS-7。

实施例1：

取金樱子药材10kg，其药材来源为蔷薇科蔷薇属植物金樱子Rosa laevigata Michx.的干燥果皮，以5倍量75%乙醇回流提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩至无醇味，经12000转/分高速离心，上清液用乙酸乙酯等体积萃取3次，水液上AB-8型大孔树脂柱吸附后，依次用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得金樱子皂苷A粗品，金樱子皂苷A粗品再经HP-20柱，用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，该提取物进一步，用乙醇：三氯甲烷：石油醚（6：1：3）混合溶液重结晶2次得到针状结晶，为金樱子皂苷A纯品，干燥后即得金樱子皂苷A 56g。

金樱子皂苷A的含量测定(HPLC-RI法)

色谱条件:色谱柱 : Venusil-XBP C18 (5μm，4.6×250mm);

柱温：25oC;

流动相：甲醇：水(45:55)

流速：0.8ml/min;

样品溶液的制备:精密称取金樱子皂苷A样品10mg至10ml量瓶中，以甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜 (0.45μm)，取续滤液20μL注入高效液相色谱仪，计算，即得，色谱图见图1。

计算方法:面积归一化法。

金樱子皂苷A的保留时间：16 min

分析结果：纯度为91.2%。

实施例2：

取金樱子药材5kg，其药材来源为蔷薇科蔷薇属植物金樱子Rosa laevigata Michx.的干燥叶，以20倍量40%乙醇冷浸提取2次，每次1.5小时，提取液减压浓缩至无醇味，经10000转/分高速离心，上清液用正己烷等体积萃取3次，水液上HPD-600型大孔树脂柱吸附后，依次用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得金樱子皂苷A粗品，金樱子皂苷A粗品再经HP-20柱，用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，该提取物进一步，用甲醇：二氯甲烷：正己烷（7：3：2）混合溶液重结晶3次得到针状结晶，为金樱子皂苷A纯品，干燥后即得金樱子皂苷A，白色针状结晶（甲醇），mp228～230℃。ESI- MS(m/z): 1355[2M+Na]⁺, 689[M+Na]⁺。¹H-NMR (600 MHz, MeOD): δppm: 5.31(2H, m), 3.79(1H, dd, J=12.0 Hz, J=2.4 Hz), 3.67(2H, m), 3.49(1H, d, J=10.8 Hz), 3.33-3.34(5H, m), 3.26(1H, d, J=10.8 Hz), 1.33(3H, s), 1.20 (3H, s), 1.02(3H, s), 0.92(3H, d, J=6.8 Hz), 0.77(3H, s), 0.69(3H, s)。¹³C-NMR (150 MHz, MeOD): δppm: 47.9(C-1), 69.7(C-2), 78.3(C-3), 42.9(C-4), 48.8(C-5), 19.2(C-6), 33.5(C-7), 41.2(C-8), 48.2(C-9), 39.0(C-10), 24.8(C-11), 129.5(C-12), 139.7(C-13), 41.2(C-14), 29.6(C-15), 26.5(C-16), 48.5(C-17), 54.9(C-18), 73.6(C-19), 42.8(C-20), 27.2(C-21), 38.3(C-22), 66.4(C-23), 13.8(C-24), 16.6(C-25), 17.6(C-26), 24.7(C-27), 178.5(C-28), 27.0(C-29), 17.6(C-30), 95.7(C-1′), 73.8(C-2′), 78.3(C-3′), 71.1(C-4′), 78.5(C-5′), 62.4(C-6′)。

实施例3：

取金樱子药材5kg，其药材来源为蔷薇科蔷薇属植物金樱子Rosa laevigata Michx.的干燥枝条，以7倍量60%乙醇微波提取5次，每次0.1小时，提取液减压浓缩至无醇味，经9000转/分高速离心，上清液用石油醚等体积萃取3次，水液上ADS-7型大孔树脂柱吸附后，依次用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得金樱子皂苷A粗品，金樱子皂苷A粗品再经HP-20柱，用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，该提取物进一步，用乙醇：丙酮：正己烷（6：2：3）混合溶液重结晶3次得到无定型粉末，为金樱子皂苷A纯品，干燥后即得金樱子皂苷A 41g，纯度为92.7%。

实施例4：

取金樱子药材10kg，其药材来源为蔷薇科蔷薇属植物金樱子Rosa laevigata Michx.的干燥根，以6倍量60%乙醇渗流提取5次，每次2小时，提取液减压浓缩至无醇味，经8000转/分高速离心，上清液用石油醚等体积萃取3次，水液上ADS-7型大孔树脂柱吸附后，依次用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得金樱子皂苷A粗品，金樱子皂苷A粗品再经HP-20柱，用水、10-20%乙醇液、30-60%，70-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集40-60%乙醇洗脱液，减压蒸干，该提取物进一步，用乙醇：二氯甲烷：正己烷（6：3：2）混合溶液重结晶3次得到无定型粉末，为金樱子皂苷A纯品，干燥后即得金樱子皂苷A 66g，纯度为90.7%。

实施例5：

收集不同批次结晶剩下的母液，经活性炭脱色后浓缩至近饱和，用2倍量硅胶（100-200目）拌样，干燥后采用固相萃取技术（硅胶100-400目）对其进行纯化处理，每100g样品对应500g硅胶，洗脱顺序为：先用二氯甲烷：乙醇90：10洗脱10个柱体积后，用二氯甲烷：乙醇75：15洗脱柱体积，收集二氯甲烷：乙醇75：15洗脱液，蒸干，即得金樱子皂苷A。纯度为87.2%。

实施例6：

收集不同批次结晶剩下的母液，经活性炭脱色后浓缩至近饱和，用1.5倍量硅胶（100-200目）拌样，干燥后采用大型减压硅胶柱色谱对其进行纯化处理，每100g样品对应500g硅胶，洗脱顺序为：先用二氯甲烷：甲醇90：10洗脱10个柱体积后，用二氯甲烷：甲醇80：20洗脱柱体积，收集二氯甲烷：甲醇80：20洗脱液，蒸干，即得金樱子皂苷A。纯度为89.5%。

Claims

1.一种金樱子皂苷单体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

；

所述提取液经减压浓缩，浓缩液放置，高速离心或过滤，滤液上大孔树脂，洗脱，干燥后得到的金樱子皂苷A粗品，再次上大孔树脂精制1次；

所述重结晶为使用有机溶剂对金樱子总皂苷进行重结晶处理，利用减压柱色谱纯化结晶后的母液。

2.根据权利要求1所述的一种金樱子皂苷单体的制备方法，其特征在于，所述精制包括经活性炭脱色精制。