CN101926811A - 络石藤的三萜皂苷类总提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

络石藤的三萜皂苷类总提取物及其制备方法和用途，其三萜皂苷类总提取物包括络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯、金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯等7种三萜皂苷，该7种三萜皂苷在总提取物中的含量≥75％；本总提取物的用途是用于制备抗炎、抗疲劳制剂；从络石藤中提取三萜皂苷类总提取物的工艺方法包括浸泡、提取浸膏、两相萃取法制取三萜皂苷类粗品和树脂吸附提纯等步骤。本发明成功地为从天然植物络石藤中提取三萜皂苷类总提取物提供了一种适于工业化生产的工艺方法和医药用途。

Description

络石藤的三萜皂苷类总提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及从天然植物中提取的总皂苷类化合物，特别是从络石藤中提取的三萜皂苷类化合物及其制备方法和提取物的用途。

背景技术

络石藤为夹竹桃科植物络石藤的干燥带叶藤茎，它具有祛风通络、凉血消肿之功，主治风湿热痹、筋脉拘挛、腰膝酸痛等症。络石藤所含成份十分复杂，包括有木脂素类、黄酮类、三萜皂苷类、紫罗兰酮衍生物，还有酚、醇类和生物碱等化合物。据有关文献报道，从白酒草、九节龙、走马胎、山茶种子、西洋参茎叶等各种天然植物中提取的三萜皂苷类化合物分别具有抗肿瘤、降血糖降血脂、保护胃粘膜等功效。但目前，尚未见有从络石藤中提取的三萜总皂苷类化合物及其提取方法及用途的报道。

发明内容

本发明的目的之一，是提供一种以络石藤为原料制备的三萜皂苷类总提取物产品；本发明的目的之二，是提供一种以络石藤为原料制备三萜皂苷类总提取物的工艺方法；本发明的目的之三是提供三萜皂苷类总提取物产品的用途。

实现本发明的技术方案为：

本发明的络石藤的三萜皂苷类总提取物，主要组成为下列七种三萜皂苷：络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯，其分子结构通式如下：

                                     R₁＝glc；R₂＝H    络石皂苷D-1

R＝glc络石皂苷B-1

                                     R₁＝H；R₂＝glc    络石皂苷F

                                     R＝glc    金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷

R＝glc    络石皂苷E-1                27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯

所述七种三萜皂苷在总提取物中的含量≥75％。

本发明的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，包括下列工艺步骤：

①，浸提可溶物：将络石藤原料粉碎成细粉，加溶剂浸泡，使其溶出可溶物；

②，提取浸膏：取上述浸泡液进行加热回流脱除其中有机溶剂，然后浓缩成浸膏；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：用蒸馏水溶解浸膏为浸膏液，加入非极性有机溶剂萃取去非三萜皂苷类化合物，于是浸膏液中余留下三萜皂苷类总提取物；

④，三萜皂苷类粗提液：将上述分离去了萃取液的余液进行加热回流，脱除部分夹带的非极性有机溶剂，并加入适量的水使尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣；

⑤，纯化：上述滤液通过大孔吸附树脂柱吸附三萜皂苷类化合物，然后用溶剂洗脱下大孔吸附树脂柱上的三萜皂苷类化合物，将洗脱液去除溶剂后加适量蒸馏水溶解，尔后经聚酰胺树脂柱吸附除去其中微量的酚类、酸类、醌类、黄酮类等富含酚羟基的化合物，余液经加热干燥即得纯度较高的三萜皂苷类总提取物产品；或者上述滤液先通过聚酰胺树脂柱吸附处理，再经大孔吸附树脂柱吸附处理。

上述工艺方法中：

作为优选，用于浸提的溶剂是水或体积百分比浓度为30～95％的乙醇或甲醇溶液。

作为优选，所述乙醇或甲醇的体积百分比浓度为55～85％。

作为优选，浸提在20～30℃温度下，浸提时间为24～72小时。

作为优选，用于萃取的非极性有机溶剂是氯仿或石油醚、苯、二甲苯。

作为优选，用于纯化的大孔吸附树脂柱是型号为D101或AB-8、HP-20系列的大孔吸附树脂柱。

作为优选，用于纯化的聚酰胺树脂是聚酰胺-6或聚酰胺-66。

上述工艺方法的原理是：

先将络石藤粉碎、浸泡，破坏其中蛋白质、多糖等大分子结构，使其分解为小分子结构的化合物；然后用溶剂浸提出包括木脂素苷、苷元、黄酮类、三萜皂苷类、紫罗兰酮衍生物、其它酚、醇类、生物碱等化合物的混合物成浸膏；对浸膏加蒸馏水溶解，根据三萜皂苷类在亲脂性有机溶剂中溶解度小的特性，采用非极性有机溶剂萃取浸膏溶解液中的非三萜皂苷类成份，而使三萜皂苷类留于水溶液中而达到初步分离的目的；然后将皂苷水溶液脱去剩余有机溶剂，上大孔吸附树脂柱，利用大孔吸附树脂的吸附性和分子筛相结合的原理，根据欲分离的三萜皂苷类依其分子体积的大小及吸附力的强弱，选择一定规格的大孔吸附树脂进行吸附分离，然后以适当的溶剂将三萜皂苷类从树脂上洗脱下来，并将洗脱液中的溶剂除去；加蒸馏水溶解后上聚酰胺树脂柱，利用聚酰胺可与酚类、酸类、醌类、黄酮类等富含酚羟基的化合物形成氢键而吸附的原理，使溶液中可能存在的黄酮类苷元吸附在聚酰胺树脂柱上，余下即得纯度较高的三萜皂苷类总提取物。

本发明的络石藤的三萜皂苷类总提取物的用途，是用于制备抗炎、抗疲劳制剂。

本发明的有益效果是：

从天然植物络石藤中提取了纯度较高的三萜皂苷类产品，为进一步研究三萜皂苷类的药理作用，或配制有关药物制剂提供了优质原料产品；同时为从络石藤中提取三萜皂苷类总提取物提供了一种适于工业化生产的工艺方法，它工艺简单、稳定、可靠，操作方便，生产成本较低，特别是采用了溶剂萃取法、大孔树脂吸附法一步步分离纯化，从而大大提高了产品收得率和产品中有效成份的总含量。

具体实施方式

实施例1

①，浸提可溶物：取络石藤中药材1000g，粉碎过60目筛，加入蒸馏水2000ml，于20-30℃下，浸泡48小时；

②，提取浸膏：将浸泡液在95℃下加热4小时，静置过滤去渣、减压浓缩，得密度为1.195的浸膏352g；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：先用蒸馏水加热超声溶解浸膏，并加入浸膏液2倍体积量的氯仿进行萃取，然后分离氯仿萃取层与水溶层；

④，三萜皂苷类粗提液：取上述水溶层进行加热回流，脱除部分夹带的氯仿，再加入适量的水使其中可溶物尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣得滤液；

⑤，纯化：将上述滤液缓慢加入D-101型大孔吸附树脂柱，洗脱液反复上柱4遍，经薄层检识无对应点，表明充分吸附；依次用3倍滤液量的蒸馏水和体积百分比浓度为10％、20％、95％的乙醇作梯度洗脱，但仅收集体积百分比浓度为20％的乙醇洗脱液，加热回流至无醇味；加入适量蒸馏水溶解后缓慢加入聚酰胺-6树脂柱，充分吸附后，依次用蒸馏水、体积百分比浓度为95％的乙醇洗脱，合并收集蒸馏水洗脱液，加热干燥，得呈疏松状总提取物22.05g，经分析检测，总提取物中的络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯7种三萜皂苷总含量为16.56g，纯度达75.10％。

实施例2

①，浸提可溶物：取络石藤中药材1000g，粉碎过60目筛，加入药材量3倍的体积百分比浓度为55％的乙醇，于20-30℃下，浸泡72小时；

②，提取浸膏：将浸泡液进行加热回流脱除乙醇，静置过滤去渣、减压浓缩，得密度为1.201的浸膏315g；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：先用蒸馏水加热超声溶解浸膏，并加入浸膏液3倍量的石油醚进行萃取，然后分离石油醚萃取层与水溶层；

④，三萜皂苷类粗提液：取上述水滤层进行加热回流，脱除部分夹带的石油醚，再加入适量的水使其中可溶物尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣得滤液；

⑤，纯化：将上述滤液缓慢加入AB-8型大孔吸附树脂柱，洗脱液反复上柱4遍，经薄层检识无对应点，表明充分吸附；依次用5倍滤液量的蒸馏水、体积百分比浓度为10％、20％、95％的乙醇作梯度洗脱，但仅收集体积百分比浓度为20％的乙醇洗脱液，加热回流至无醇味；加入适量蒸馏水溶解后缓慢加入聚酰胺-66树脂柱，充分吸附后，依次用蒸馏水、体积百分比浓度为95％的乙醇洗脱，合并收集蒸馏水洗脱液，加热干燥，得呈疏松状总提取物25.03g，经分析检测，总提取物中的络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯7种三萜皂苷总含量为18.77g，纯度达75.00％。

实施例3

①，浸提可溶物：取络石藤中药材1000g，粉碎过60目筛，加入药材量4倍的体积百分比浓度为65％的乙醇，于20-30℃下，浸泡36小时；

②，提取浸膏：将浸泡液进行加热回流脱除乙醇，静置过滤去渣、减压浓缩，得密度为1.190的浸膏298g；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：先用蒸馏水加热超声溶解浸膏，并加入浸膏液6倍量的氯仿进行萃取，然后分离氯仿萃取层与水溶层；

④，三萜皂苷类粗提液：取上述水溶层进行加热回流，脱除部分夹带的氯仿，再加入适量的水使其中可溶物尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣得滤液；

⑤，纯化：将上述滤液缓慢加入HP-20型大孔吸附树脂柱，洗脱液反复上柱4遍，经薄层检识无对应点，表明充分吸附；依次用7倍滤液量的蒸馏水、体积百分比浓度为10％、20％、95％的乙醇作梯度洗脱，但仅收集体积百分比浓度为20％的乙醇洗脱液，加热回流至无醇味；加入适量蒸馏水溶解后缓慢加入聚酰胺-6树脂柱，充分吸附后，依次用蒸馏水、体积百分比浓度为95％的乙醇洗脱，合并收集蒸馏水洗脱液，加热干燥，得呈疏松状总提取物30.15g，经分析检测，总提取物中的络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯7种三萜皂苷总含量为23.52g，纯度达78.10％。

实施例4

①，浸提可溶物：取络石藤中药材1000g，粉碎过60目筛，加入药材量6倍的体积百分比浓度为75％的甲醇，于20-30℃下，浸泡24小时；

②，提取浸膏：将浸泡液进行加热回流脱除乙醇，静置过滤去渣、减压浓缩，得密度为1.205的浸膏319g；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：先用蒸馏水加热超声溶解浸膏，并加入浸膏液4倍量的苯进行萃取，然后分离苯萃取层与水溶层；

④，三萜皂苷类粗提液：取上述水溶层进行加热回流，脱除部分夹带的苯，再加入适量的水使其中可溶物尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣得滤液；

⑤，纯化：将上述滤液缓慢加入聚酰胺-66树脂柱，洗脱液反复上柱4遍，经薄层检识无对应点，表明充分吸附；依次用8倍滤液量的蒸馏水、体积百分比浓度为95％的乙醇洗脱，收集蒸馏水洗脱液；将蒸馏水洗脱液缓慢加入HP-20型大孔吸附树脂柱，充分吸附后，依次用水、体积百分比浓度为10％、20％、95％的乙醇作梯度洗脱，仅收集体积百分比浓度为20％的乙醇洗脱液，加热干燥，得呈疏松状总提取物28.26g，经分析检测，总提取物中的络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯7种三萜皂苷总含量为21.74g，纯度达76.93％

实施例5

①，浸提可溶物：取络石藤中药材1000g，粉碎过60目筛，加入药材量7倍的体积百分比浓度为85％的乙醇，于20-30℃下，浸泡24小时；

②，提取浸膏：将浸泡液进行加热回流脱除乙醇，静置过滤去渣、减压浓缩，得密度为1.193的浸膏301g；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：先用蒸馏水加热超声溶解浸膏，并加入浸膏液5倍量的二甲苯进行萃取，然后分离二甲苯萃取层与水溶层；

④，三萜皂苷类粗提液：取上述水溶层进行加热回流，脱除部分夹带的二甲苯，再加入适量的水使其中可溶物尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣得滤液；

⑤，纯化：将上述滤液缓慢加入聚酰胺-6树脂柱，洗脱液反复上柱4遍，经薄层检识无对应点，表明充分吸附；依次用8倍滤液量的蒸馏水、体积百分比浓度为95％的乙醇洗脱，收集蒸馏水洗脱液；将蒸馏水洗脱液缓慢加入AB-8型大孔吸附树脂柱，充分吸附后，依次用水、体积百分比浓度为10％、20％、95％的乙醇作梯度洗脱，仅收集体积百分比浓度为20％的乙醇洗脱液，加热干燥，得呈疏松状总提取物26.37g，经分析检测，总提取物中的络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯7种三萜皂苷总含量为20.10g，纯度达76.22％

本发明对制得的络石藤总皂苷进行了抗炎和抗疲劳试验，表明其具有一定的抗炎作用和明显的抗疲劳作用。

具体试验方法如下：

一、抗炎：以蛋清致大鼠足趾肿胀和二甲苯致小鼠耳廓肿胀为模型，以大鼠足趾肿胀度和肿胀率、小鼠耳廓肿胀度和肿胀率为指标进行了实验。结果表明，络石藤总皂苷提取物中剂量能明显降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀度，各剂量均能显著降低耳廓肿胀率。

附表1：提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x±s)

注：与阴性组相比：^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

二、抗疲劳：以小鼠负重力竭游泳训练为模型，以体重、负重游泳时间、抓力、低温游泳时间及定量负荷运动后全血乳酸、血尿素氮及丙二醛含量为指标进行试验。结果表明，络石藤总皂苷提取物能延长小鼠负重力竭游泳时间、低温游泳时间、饥饿24h游泳时间，增强小鼠抓力，降低定量负荷后全血LD及血浆MDA、BUN含量。

附表2：给药1-10天小鼠常温负重游泳时间(x±s，25±2℃，n＝12)

注：与模型组相比：^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

附表3：提取物对小鼠低温游泳时间的影响(x±s，4±1℃，n＝12)

注：与正常组相比^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与模型组相比^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

附表4：提取物对小鼠抓力的影响(x±s，n＝12)

注：与正常组相比^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与模型组相比^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

附表5：提取物对小鼠定量负荷运动后血浆BUN含量的影响(x±s，n≥10)

注：与正常组相比^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与模型组相比^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

附表6：提取物对小鼠定量负荷运动后全血LD含量的影响(x±s，n≥11)

注：与正常组相比^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与模型组相比^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

附表7：提取物对小鼠定量负荷运动后血浆MDA含量的影响(x±s，n≥9)

注：与正常组相比^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与模型组相比^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01

上述试验结果表明，络石藤总皂苷提取物有一定的抗炎作用和明显的抗疲劳作用。

Claims (10)

1.一种络石藤的三萜皂苷类总提取物，其特征在于主要组成为下列七种三萜皂苷：络石皂苷B-1、络石皂苷D-1、络石皂苷E-1、络石皂苷F、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎诺酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯和金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯，其分子结构通式如下：

                                       R₁＝glc；R₂＝H  络石皂苷D-1

R＝glc络石皂苷B-1

                                       R₁＝H；R₂＝glc  络石皂苷F

                                       R＝glc  金鸡勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷

R＝glc  络石皂苷E-1                    27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯 

2.按权利要求1所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物，其特征在于所述七种三萜皂苷在总提取物中的含量≥75％。

3.一种如权利要求1所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于它包括下列工艺步骤：

①，浸提可溶物：将络石藤原料粉碎成细粉，加溶剂浸泡，使其溶出可溶物；

②，提取浸膏：取上述浸泡液进行加热回流脱除其中有机溶剂，然后浓缩成浸膏；

③，分离出浸膏中的三萜皂苷类总提取物：用蒸馏水溶解浸膏为浸膏液，加入非极性有机溶剂萃取去非三萜皂苷类化合物，于是浸膏液中余留下三萜皂苷类总提取物；

④，三萜皂苷类粗提液：将上述分离去了萃取液的余液进行加热回流，脱除部分夹带的非极性有机溶剂，并加入适量的水使尽可能溶解，静置放冷，过滤去渣；

⑤，纯化：上述滤液通过大孔吸附树脂柱吸附三萜皂苷类化合物，然后用 溶剂洗脱下大孔吸附树脂柱上的三萜皂苷类化合物，将洗脱液去除溶剂后加适量蒸馏水溶解，尔后经聚酰胺树脂柱吸附除去其中微量的酚类、酸类、醌类、黄酮类等富含酚羟基的化合物，余液经加热干燥即得纯度较高的三萜皂苷类总提取物产品；或者上述滤液先通过聚酰胺树脂柱吸附处理，再经大孔吸附树脂柱吸附处理。

4.按权利要求3所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于用于浸提的溶剂是水或体积百分比浓度为30～95％的乙醇或甲醇溶液。

5.按权利要求4所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于所述乙醇或甲醇的体积百分比浓度为55～85％。

6.按权利要求3所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于浸提在20～30℃温度下，浸提时间为24～72小时。

7.按权利要求3所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于用于萃取的非极性有机溶剂是氯仿或石油醚、苯、二甲苯。

8.按权利要求3所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于用于纯化的大孔吸附树脂柱是型号为D101或AB-8、HP-20系列的大孔吸附树脂柱。

9.按权利要求3所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的制备方法，其特征在于用于纯化的聚酰胺树脂是聚酰胺-6或聚酰胺-66。

10.一种如权利要求1所述的络石藤的三萜皂苷类总提取物的用途，其特征在于用于制备抗炎、抗疲劳制剂。