CN101200487A - 一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法。方法的操作步骤如下：1)积雪草干草中加入乙醇水溶液浸泡、提取，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，浓缩液用水稀释后过滤得积雪草总皂苷水溶液；2)在层析柱中装入预处理的大孔吸附树脂；3)总皂苷水溶液过树脂柱，至流出液中总皂苷穿透；4)用水洗涤树脂柱，接着用有机溶剂－水混合流动相洗脱，洗脱液经薄层色谱分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥得总皂苷产品；5)树脂柱分别经有机溶剂－水混合溶剂、水冲洗再生后可重复使用。本发明采用的大孔吸附树脂对积雪草总皂苷的吸附量大，解吸容易，总皂苷回收率及含量均较高，方法简单，可操作性强，积雪草总皂苷的得率高，成本低。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法。
背景技术
积雪草【Centella asiatica(L.)Urban】为伞形科积雪草属植物，蔓生，又名胡薄荷、地钱草、崩大碗、缺碗草、马蹄草、落得打、十八缺等，在许多国家和地区传统医药领域中的应用有悠久的历史，我国中医中药对积雪草的内服和外用已有两千年的历史。积雪草味苦、辛，性寒，无毒，归肝、脾、肾、胃经。古药典记载主要用于治疗湿热黄疸、中暑腹泻、砂淋血淋、痈肿疮毒、跌打损伤等病症。现代药理学研究和应用表明，积雪草可用于治疗抑郁症、皮肤创伤、胃溃疡、传染性肝炎、皮肤病和流行性脑脊髓膜炎等。
积雪草的药理作用同它的化学成分是密不可分的。积雪草的化学成分十分复杂，其主要成分有三萜类、多炔烯烃类、黄酮类和挥发油类等。此外，积雪草中还含有氯原酸、内消旋肌醇、黄酮醇、脂肪酸、天胡荽碱、甾醇、蜡、叶绿素、烃类、木脂素类、糖、鞣质和多元酚类等成分。积雪草的化学成分中，三萜类皂苷是研究的最早、生物学活性研究最深入的一大类组分。积雪草总皂苷主要由积雪草苷(Aisaticoside，CAS No.：16830-15-2)、羟基积雪草苷(Madecassoside，CAS No.：34540-22-2)和积雪草苷B(Asaiticoside B，CAS No.：125265-68-1)组成，它们属于乌苏烷型的五环三萜皂苷，是积雪草药理活性的最主要成分，其结构式分别如下：
图1积雪草苷(A)、羟基积雪草苷(B)和积雪草苷B(C)的结构式研究表明，积雪草总皂苷具有抗增生、抗纤维化、抗抑郁、抗癌症、抗氧化和改善智力等功效，特别是积雪草苷对皮肤创伤、消除瘢痕、乳腺增生、抗抑郁等有明显的疗效。因此，高效地提取制备积雪草总皂苷产品对更好地利用积雪草资源具有重要的意义。
目前，从积雪草中制备总皂苷的工艺有一些文献及专利报道，但总体而言，存在工艺步骤繁琐，产物纯度低，质量控制水平低下等不足。现有技术从积雪草中制备总皂苷的步骤较为繁琐或关键技术要求较高，难以实现工业化生产或生产成本太高，而且产品得率低或产品含量不高，从而造成产品价格过高。如专利CN97117787.2所公开的方法制备时使用大量的卤化物和高级醇等难挥发的有机溶剂，不仅造成生产成本高，而且对环境造成一定的污染；专利CN200380109575.3公开的方法中，使用了阴离子交换树脂和阳离子交换树脂，中间采用选择性脱脂的步骤，工艺复杂；专利CN01113014.8所公开的方法中，使用了D101和ZTC-1两种大孔吸附树脂，但对积雪草总皂苷的吸附量小、产品回收率和含量均不高。
本发明拟利用大孔吸附树脂来制备积雪草总皂苷。大孔吸附树脂是一类不带离子交换基团的、具有大孔结构的高分子吸附剂，属于多孔性交联聚合物，是继离子交换树脂后发展起来的一类新型分离介质，根据大孔树脂化学结构不带或带有不同极性的功能基团以及树脂的表面性质，通常将大孔树脂分为非极性、弱极性和中极性等类型。大孔吸附树脂具有网络结构良好，比表面积大、稳定性高、再生简便、条件温和、使用周期长、费用低等优点，现已广泛应用于提取纯化天然植物中的活性成分，如皂苷、黄酮、内酯、生物碱等。
本发明所公开的利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，所选择的树脂对积雪草总皂苷吸附量大、解吸容易，产品回收率和含量较高，而且方法简便，可操作性强，利于大规模生产运用，能够降低生产成本。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法。
方法的步骤如下：
1)积雪草干草中加入6～14倍重量，体积浓度为50～90％的乙醇水溶液浸泡、提取三次，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得到积雪草总皂苷水溶液；
2)在层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂，树脂柱高径比为3～9；
3)积雪草总皂苷水溶液以0.5～3BV/h的流速过树脂柱，至流出液中积雪草总皂苷穿透；
4)先用2～8个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用体积比为20～80％的有机溶剂-水混合流动相以0.5～3BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，洗脱液经薄层色谱分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷；
5)树脂柱分别经体积比为60～90％的有机溶剂-水混合溶剂和水冲洗再生后可重复使用。
所述步骤1)中的乙醇水溶液中乙醇的体积浓度优选为60～80％。步骤2)中所述的大孔吸附树脂为HPD100、HPD200，HPD300，HPD400，HPD500，HPD600、HPD700、X-5、AB-8或D4020。有机溶剂为乙醇或甲醇。步骤4)中的有机溶剂-水混合流动相中有机溶剂的体积比优选为40～60％。步骤5)中的有机溶剂-水混合溶剂中有机溶剂的体积比优选为70～80％。
积雪草总皂苷结晶、真空干燥过程如下：收集的积雪草总皂苷洗脱液减压蒸干，以少量甲醇溶解，再用8倍量(体积比)的乙酸乙酯结晶析出，于50℃下真空干燥，得积雪草总皂苷产品。
本发明选择的树脂对积雪草总皂苷吸附量大、解吸容易，产品回收率和含量较高，而且方法简便，可操作性强，利于大规模生产运用，能够降低生产成本。
附图说明
附图是利用大孔树脂制备积雪草总皂苷的工艺流程简图。
具体实施方式
本发明利用大孔树脂HPD100、HPD200，HPD300，HPD400，HPD500，HPD600、HPD700、X-5、AB-8和D4020来制备积雪草总皂苷，所得产品中积雪草总皂苷质量含量60～80％，回收率70～90％，本发明所选择的树脂对积雪草总皂苷不仅吸附量大，而且解吸容易，积雪草总皂苷的含量和回收率等各方面性能均优于专利CN01113014.8所公开的树脂D101和ZTC-1。
本发明中大孔吸附树脂的预处理过程如下：
大孔吸附树脂HPD100，HPD200，HPD300，HPD400，HPD500，HPD600，HPD700预处理过程如下：将树脂装柱，用水洗去细小树脂及破碎树脂，然后在柱内加入高于树脂层10CM的乙醇浸泡4小时，放出浸液，至洗涤液在试管中加水稀释不浑浊，再用水洗涤至乙醇含量小于1％，即可使用。
大孔吸附树脂X-5、AB-8和D4020的预处理过程如下：先将树脂用甲醇、乙醇等有机溶剂浸泡充分溶胀，然后再按表1进行处理。
表1大孔吸附树脂预处理过程
| 次序 | 物料 | 用量 | 流速 | 备注 |
| 1234567 | 水2％NaOH水5％HCl水甲醇或乙醇水 | 2-5BV2BV2-5BV2BV2-5BV2-4BV4-6BV | 4-6SV4-6SV4-6SV4-6SV4-6SV4-6SV4-6SV | SV为空速，即单位体积树脂在单位时间通过液体的体积，BV为树脂床层体积 |
本发明所采用的薄层色谱(TLC)条件如下：
展层剂为正丁醇-乙酸乙酯-水＝4∶1∶5(取上层溶液使用)，显色剂为10％的浓硫酸乙醇溶液。
积雪草总皂苷含量的测定方法如下：
高效液相色谱法(HPLC)分析条件为Agelingt1100液相色谱分析系统；Eclipse XDB-C18反相柱(4.6mm×250mm，5μm，Agilent)；流动相为甲醇-乙腈-醋酸溶液(0.3％)-水＝41∶11∶2∶46，流速0.8mL/min；柱温为30℃；检测波长205nm。
实施例1
取积雪草干草500g，分别加入7000g，4000g，4000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为70％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液4.8L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为2.2g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD100，树脂柱高为32cm(高径比为8)，树脂柱的床层体积为402mL；浓缩液以0.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液7600mL；先用2个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以0.5BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为50％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷18.0g，树脂柱纯化过程回收率为83.2％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为77.3％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为60％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例2
取积雪草干草500g，分别加入6000g，5000g，4000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为90％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液1.7L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.3g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD200，树脂柱高为25cm(高径比为5)，树脂柱的床层体积为490mL；浓缩液以3BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液7400mL；先用8个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以3BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为60％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷11.0g，树脂柱纯化过程回收率为76.9％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为67.3％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为90％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例3
取积雪草干草500g，分别加入7000g，5000g，3000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为80％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液6.5L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.6g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD300，树脂柱高为36cm(高径比为9)，树脂柱的床层体积为452mL；浓缩液以0.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6800mL；先用3个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以1BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为40％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷12.2g，树脂柱纯化过程回收率为86.5％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为67.3％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为90％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例4
取积雪草干草500g，分别加入7000g，4500g，3500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为60％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液5.6L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.9g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD400，树脂柱高为40cm(高径比为8)，树脂柱的床层体积为785mL；浓缩液以2.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液7050mL；先用2个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以3BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为70％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷13.9g，树脂柱纯化过程回收率为70.7％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为68.1％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为90％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例5
取积雪草干草500g，分别加入6500g，4500g，4500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为50％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液7.7L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.6g/L；在内径为6cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD500，树脂柱高为48cm(高径比为8)，树脂柱的床层体积为1356mL；浓缩液以3BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6800mL；先用个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以2BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为80％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷12.6g，树脂柱纯化过程回收率为74.2％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为64.1％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为60％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例6
取积雪草干草500g，分别加入7000g，4000g，3000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为90％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液1.5L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.2g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD600，树脂柱高为15cm(高径比为3)，树脂柱的床层体积为294mL；浓缩液以1.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液5100mL；先用4个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以0.5BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为80％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷7.6g，树脂柱纯化过程回收率为76.9％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量61.9为％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为70％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例7
取积雪草干草500g，分别加入7000g，3500g，3500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为70％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液4.5L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为2.1g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD700，树脂柱高为20cm(高径比为4)，树脂柱的床层体积为392mL；浓缩液以2BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液5600mL；先用5个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以1BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为20％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷12.2g，树脂柱纯化过程回收率为73.7％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为71.0％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为80％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例8
取积雪草干草500g，分别加入6500g，4500g，3000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为60％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液6.0L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.8g/L；在内径为7cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂D4020，树脂柱高为63cm(高径比为9)，树脂柱的床层体积为2423mL；浓缩液以3BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6400mL；先用4个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以3BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为30％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷11.8g，树脂柱纯化过程回收率为74.1％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为72.3％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为70％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例9
取积雪草干草500g，分别加入7000g，3000g，4000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为80％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液3.0L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.5g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂X-5，树脂柱高为24cm(高径比为6)，树脂柱的床层体积为301mL；浓缩液以3BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液4500mL；先用8个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以1BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为70％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷8.9g，树脂柱纯化过程回收率为81.0％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为61.4％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为90％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例10
取积雪草干草500g，分别加入6000g，4000g，4000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为50％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液7.2L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液8L，经检测积雪草总皂苷含量为1.5g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂AB-8，树脂柱高为25cm(高径比为5)，树脂柱的床层体积为490mL；浓缩液以2BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6400mL；先用3个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以2.5BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为60％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷10.1g，树脂柱纯化过程回收率为71.4％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为67.9％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为70％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例11
取积雪草干草500g，分别加入7000g，4500g，3000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为60％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液6.2L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为2.0g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD300，树脂柱高为32cm(高径比为8)，树脂柱的床层体积为402mL；浓缩液以0.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6800mL；先用7个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以1BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为50％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷15.6g，树脂柱纯化过程回收率为88.5％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为77.2％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为75％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例12
取积雪草干草500g，分别加入7000g，4000g，3500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为70％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液4.7L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为2.3g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD100，树脂柱高为25cm(高径比为5)，树脂柱的床层体积为490mL；浓缩液以2.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液mL；先用5个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以1BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为40％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷18.5g，树脂柱纯化过程回收率为87.9％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为78.7％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为80％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例13
取积雪草干草500g，分别加入7000g，3500g，4000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为70％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液4.7L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为2.3g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD100，树脂柱高为28cm(高径比为7)，树脂柱的床层体积为351mL；浓缩液以1.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6300mL；先用3个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以1.5BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为40％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷15.6g，树脂柱纯化过程回收率为86.2％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为80.1％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为70％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例14
取积雪草干草500g，分别加入6500g，5000g，3000g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为70％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液4.7L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为2.3g/L；在内径为5cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD300，树脂柱高为20cm(高径比为4)，树脂柱的床层体积为392mL；浓缩液以0.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6800mL；先用6个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以1.5BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为50％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷17.8g，树脂柱纯化过程回收率为86.7％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为76.2％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比75％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例15
取积雪草干草500g，分别加入6000g，5000g，3500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为80％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液3.1L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为1.6g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD100，树脂柱高为20cm(高径比为5)，树脂柱的床层体积为251mL；浓缩液以1.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液6800mL；先用4个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用乙醇-水混合流动相以2BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙醇-水混合流动相中乙醇的体积百分比为30％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷12.1g，树脂柱纯化过程回收率为89.1％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为80.1％；树脂柱分别经乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分比为70％)、水冲洗再生后可重复使用。
实施例16
取积雪草干草500g，分别加入7000g，4000g，3500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为60％，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，得浓缩液6.2L，浓缩液用水稀释后过滤，定容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为2.0g/L；在内径为4cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD300，树脂柱高为28cm(高径比为7)，树脂柱的床层体积为351mL；浓缩液以0.5BV/h的流速过层析柱，至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓缩液7000mL；先用2个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用甲醇-水混合流动相以2BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，甲醇-水混合流动相中甲醇的体积百分比为40％，洗脱液经TLC分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷16.4g，树脂柱纯化过程回收率为90.4％，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为77.2％；树脂柱分别经甲醇-水混合溶剂(甲醇的体积百分比为80％)、水冲洗再生后可重复使用。
Claims (6)
1.一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，其特征在于，方法的步骤如下：
1)积雪草干草中加入6～14倍重量，体积浓度为50～90％的乙醇水溶液浸泡、提取三次，提取液合并，减压浓缩去除乙醇，浓缩液用水稀释后过滤，得到积雪草总皂苷水溶液；
2)在层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂，树脂柱高径比为3～9；
3)积雪草总皂苷水溶液以0.5～3BV/h的流速过树脂柱，至流出液中积雪草总皂苷穿透；
4)先用2～8个床层体积的水洗涤树脂柱，接着用体积比为20～80％的有机溶剂-水混合流动相以0.5～3BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，洗脱液经薄层色谱分析后合并，再经浓缩、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷；
5)树脂柱分别经体积比为60～90％的有机溶剂-水混合溶剂和水冲洗再生后可重复使用。
2.根据权利要求1所述的一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，其特征在于所述步骤1)中的乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为60～80％。
3.根据权利要求1所述的一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，其特征在于所述步骤2)中所述的大孔吸附树脂为HPD100、HPD200，HPD300，HPD400，HPD500，HPD600、HPD700、X-5、AB-8或D4020。
4.根据权利要求1所述的一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，其特征在于所述的有机溶剂为乙醇或甲醇。
5.根据权利要求1所述的一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，其特征在于所述步骤4)中的有机溶剂-水混合流动相中有机溶剂的体积比为40～60％。
6.根据权利要求1所述的一种利用大孔吸附树脂制备积雪草总皂苷的方法，其特征在于所述步骤5)中的有机溶剂-水混合溶剂中有机溶剂的体积比为70～80％。
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