CN1850979A - 络石藤的木脂素苷元总提取物及其提取工艺 - Google Patents
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Abstract
络石藤的木脂素苷元总提取物及其提取工艺,其总提取物包括络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素,上述四种苷元在总提取物中的含量≥80%。从络石藤中提取木脂素苷元总提取物的工艺方法包括发酵、提取浸膏、用酸解或酶解法将浸膏中所含木脂素苷转化为苷元、制取木脂素苷元粗品和进行提纯等步骤。本发明工艺较简单,操作方便,生产成本较低,特别是采用了酸解、酶解法使原料中的苷转化为苷元一并提取,大大提高了产品收得率和产品中有效成份的总含量,从而为从天然植物络石藤中提取木脂素苷元总提取物提供了一种适于工业化生产的工艺方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种从天然植物中提取糖类衍生物,特别是从络石藤中提取的木脂素苷元总提取物及其提取工艺方法。
背景技术
络石藤为夹竹桃科植物络石的带叶藤茎,具有祛风通络,凉血消肿的作用,是一种主治风湿痹痛、筋脉拘挛、诸疮肿毒的中药。络石藤所含成份十分复杂,包括有木脂素类、黄酮类、三萜皂苷、紫罗兰衍生物,还有酚、醇类和生物碱等化合物。其中含量较多的一种为二苯基丁酸内脂类木脂素,它主要由络石苷及络石苷元,去甲络石苷及去甲络石苷元,牛蒡子苷及牛蒡子苷元和罗汉松脂苷及罗汉松脂素等组成。其苷和苷元的分子结构通式如下:
R1=glc,R2=CH3,R3=OH 络石苷R1=H,R2=CH3,R3=OH 络石苷元R1=glc,R2=H,R3=OH 甲络石苷R1=R2=H,R3=OH 去甲络石苷元R1=glc,R2=CH3,R3=H 牛蒡子苷R1=R3=H,R2=CH3 牛蒡子苷元R1=glc,R2=R3=H 罗汉松脂苷R1=R2=R3=H 罗汉松脂素
经研究证明,木脂素苷元具有抗菌消炎和抗艾滋病毒等多种药理活性(日本学者西部三省等.“络石藤中的木脂素类成分及其生物活性”,《中国民族民间医药》杂志2001年)。但目前,尚未见有从络石藤中提取木脂素苷元的产品及其提取方法的报道。
发明内容
本发明的目的,旨在提供一种从络石藤中提取的木脂素苷元总提取物产品以及从络石藤中提取木脂素苷元总提取物的适于工业化生产的工艺方法。
实现本发明的技术方案为:
本发明从络石藤中提取的木脂素苷元总提取物包括络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素,上述四种苷元在总提取物中的含量为80%以上。
本发明从络石藤中提取木脂素苷元总提取物的工艺方法,包括以下工艺步骤:
①,发酵,将络石藤粉碎成细粉,加入水或稀酸或加入络石藤细粉重量2~15%的糖苷酶和一定的水浸润络石藤细粉,于20~40℃温度下,发酵3~7天;
②,提取浸膏,在发酵物中加入8~10倍量的浓度为30~95%的乙醇或甲醇溶液浸泡24~48小时,然后进行加热回流脱除乙醇或甲醇,静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩成浸膏;
③,用酸解法或酶解法将浸膏中所含木脂素苷转化为苷元,制取木脂素苷元粗品:
A,酸解法,在浸膏中加入稀酸1~3.5当量,于100±5℃温度下搅拌水解3~8小时,冷却、离心分离,取得沉淀物;
B,酶解法,在浸膏中加入无菌水或无菌生理盐水或无菌含盐磷酸缓冲液,煮沸溶解,冷却至室温,用酸和碱调节PH值至3~8,加入浸膏量1/2.5~1/10的水解酶,置恒温振荡器中于37℃温度下培养36~48小时,尔后加入6~10倍酶解液体积量的甲醇或乙醇或甲醇、乙醇的丙酮混合溶剂,以终止酶解反应,然后加热回流脱除并回收溶剂,减压过滤,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入稀碱液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即为络石藤木脂素苷元总提取物产品。
上述工艺方法中:
用于溶提发酵物成份的乙醇或甲醇的优选浓度为50~80%。
用于浸膏酸解的酸可以是硫酸或盐酸、硝酸、醋酸等,也可以多酸组合。
用于浸膏酶解的水解酶优选蜗牛酶。
用于提纯工艺步骤中的酸可以是硫酸或盐酸、硝酸、醋酸等,也可以多酸组合。
用于提纯工艺步骤中的碱可以是氢氧化钠或碳酸钠、碳酸氢钠、氨水等之任一种或多种组合。
上述工艺方法的原理是,先将络石藤粉碎、发酵,破坏其中蛋白质、多糖等大分子结构,使其分解为小分子结构的化合物;然后用有机溶剂浸提出包括木脂素苷、苷元、黄酮类、三萜皂苷、紫罗兰衍生物、其它酚、醇类、生物碱等化合物的混合物成浸膏;对浸膏进行酸解或酶解,使其中苷类化合物脱糖而转化为苷元化合物;尔后设法分离出苷元化合物,分离过程首先是在酸解或酶解后的沉淀物中加酸,使其中水溶性较强的化合物和碱性化合物溶解而分离去,留下的沉淀物主要为酸性的木脂素苷元和脂溶性较强的化合物;在留下的沉淀物中加碱液,使酸性的木脂素苷元类化合物溶解,而分离去不溶解的脂溶性化合物;再在上述分离液中加酸液,即还原沉淀出纯度较高的木脂素苷元总提取物。
本发明的有益效果是:从天然植物络石藤中提取了纯度较高的木脂素苷元产品,为直接高效发挥木脂素苷元的药理作用,或配制有关药物提供了优质原料产品。同时为从络石藤中提取木脂素苷元总提取物提供了一种适于工业化生产的工艺方法,它工艺简单,操作方便,生产成本较低,特别是采用了酸解、酶解法使原料中的苷转化为苷元一并提取,从而大大提高了产品收得率和产品中有效成份的总含量。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
①,发酵,取络石藤中药材1000g,粉碎过20目筛,加入水浸润络石藤粉,于20-40℃温度下发酵7天,得发酵物;
②,提取浸膏,在发酵物中加入10倍量、浓度为50%的乙醇溶液,于室温下浸泡48小时,然后进行加热回流脱除并回收乙醇,余液静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩,得相对密度为1.04的浸膏235g;
③,酸解,在浸膏中加入浓度为1mol/L的稀硫酸2当量,于100±5℃温度下搅拌水解5小时,冷却、离心分离,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀盐酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入氢氧化钠溶液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀盐酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即得络石藤木脂素苷元总提取物12.14g。经分析检测,总提取物中的络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素总含量为9.65g,纯度为79.5%。
实施例2
①,发酵,取络石藤中药材1000g,粉碎为20目粗粉,加入浓度为1mol/L的稀硫酸水浸润络石藤粉,于20-40℃温度下发酵6天,得发酵物;
②,提取浸膏,在发酵物中加入8倍量、浓度为70%的乙醇溶液,于室温下浸泡36小时,然后进行加热回流脱除并回收乙醇,余液静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩,得相对密度为1.03的浸膏265g;
③,酸解,在浸膏中加入浓度为1mol/L的稀盐酸3.5当量,于100±5℃温度下搅拌水解3小时,冷却、离心分离,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀硫酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入碳酸钠溶液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀硫酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即得络石藤木脂素苷元总提取物14.15g。经分析检测,总提取物中的络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素总含量为11.50g,纯度为81.3%。
实施例3
①,发酵,取络石藤中药材1000g,粉碎为20目粗粉,加入粗粉重量7%的糖苷酶和一定的水浸润络石藤粉,于20-40℃温度下发酵5天,得发酵物;
②,提取浸膏,在发酵物中加入9倍量、浓度为80%的甲醇溶液,于室温下浸泡24小时,然后进行加热回流脱除并回收乙醇,余液静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩,得相对密度为1.04的浸膏287g;
③,酸解,在浸膏中加入浓度为1mol/L的稀硝酸1当量,于100±5℃温度下搅拌水解8小时,冷却、离心分离,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀硝酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入氨水溶液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀硝酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即得络石藤木脂素苷元总提取物12.17g。经分析检测,总提取物中的络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素总含量为9.75g,纯度为80.1%。
实施例4
①,发酵,取络石藤中药材1000g,粉碎成20目粗粉,加入粗粉重量2%的糖苷酶和一定的水浸润络石藤粉,于20-40℃温度下发酵6天,得发酵物;
②,提取浸膏,在发酵物中加入8倍量、浓度为30%的甲醇溶液,于室温下浸泡40小时,然后进行加热回流脱除并回收乙醇,余液静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩,得相对密度为1.05的浸膏305g;
③,酶解,在浸膏中加入无菌水500ML,煮沸溶解浸膏,冷却至室温,用酸和碱调节PH值为4~5时,加入浸膏重量0.2倍的蜗牛酶,置恒温振荡器中于37℃温度下培养40小时,尔后加入6倍酶解液体积量、浓度为70%的甲醇液终止酶解反应,过滤分离,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀盐酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入氢氧化钠溶液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀盐酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即得络石藤木脂素苷元总提取物11.47g。经分析检测,总提取物中的络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素总含量为9.60g,纯度达83.7%。
实施例5
①,发酵,取络石藤中药材1000g,粉碎成粗粉,加入粗粉重量15%的糖苷酶和一定的水浸润络石藤粉,于20-40℃温度下发酵3天,得发酵物;
②,提取浸膏,在发酵物中加入8倍量、浓度为95%的甲醇溶液,于室温下浸泡30小时,然后进行加热回流脱除并回收乙醇,余液静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩,得相对密度为1.03的浸膏282g;
③,酶解,在浸膏中加入无菌含盐磷酸缓冲液500ML,煮沸溶解浸膏,冷却至室温,用酸和碱调节PH值为4~5时,加入浸膏重量0.4倍的蜗牛酶,置恒温振荡器中于37℃温度下培养36小时,尔后加入10倍酶解液体积量、浓度为70%的乙醇液终止酶解反应,过滤分离,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀醋酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入碳酸氢钠溶液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀醋酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即得络石藤木脂素苷元总提取物12.1g。经分析检测,总提取物中的络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素总含量为10.3g,纯度达85.1%。
Claims (7)
1、一种络石藤的木脂素苷元总提取物,其特征在于它包括络石苷元、去甲络石苷元、牛蒡子苷元和罗汉松脂素,上述四种苷元在总提取物中的含量为80%以上。
2、一种如权利要求1所述的络石藤的木脂素苷元总提取物的提取工艺方法,其特征在于它包括下列工艺步骤:
①,发酵,将络石藤粉碎成细粉,加入水或稀酸或加入络石藤细粉重量2~15%的糖苷酶和一定的水浸润络石藤细粉,于20~40℃温度下,发酵3~7天;
②,提取浸膏,在发酵物中加入8~10倍量的浓度为30~95%的乙醇或甲醇溶液浸泡24~48小时,然后进行加热回流脱除乙醇或甲醇,静置过滤去渣,将过滤液减压浓缩成浸膏;
③,用酸解法或酶解法将浸膏中所含木脂素苷转化为苷元,制取木脂素苷元粗品:
A,酸解法,在浸膏中加入稀酸1~3.5当量,于100±5℃温度下搅拌水解3~8小时,冷却、离心分离,取得沉淀物;
B,酶解法,在浸膏中加入无菌水或无菌生理盐水或无菌含盐磷酸缓冲液,煮沸溶解,冷却至室温,用酸和碱调节PH值至3~8,加入浸膏量1/2.5~1/10的水解酶,置恒温振荡器中于37℃温度下培养36~48小时,尔后加入6~10倍酶解液体积量的甲醇或乙醇或甲醇、乙醇的丙酮混合溶剂,以终止酶解反应,然后加热回流脱除并回收溶剂,减压过滤,取得沉淀物;
④,提纯:i),在上述步骤③得到的沉淀物中加入稀酸调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,然后过滤或离心分离,弃去分离液,留下沉淀物;ii),在留下沉淀物中加入稀碱液,调节PH值为8~10,搅拌反应2小时,过滤分离去沉淀物,取过滤液;iii),向过滤液中加入稀酸,调节PH值为3~6,搅拌反应2小时,分离得沉淀物,经减压干燥,即为络石藤木脂素苷元总提取物产品。
3、按权利要求2所述的络石藤的木脂素苷元总提取物的提取工艺方法,其特征在于用于溶提发酵物成份的乙醇或甲醇的优选浓度为50~80%。
4、按权利要求2所述的络石藤的木脂素苷元总提取物的提取工艺方法,其特征在于用于浸膏酸解的酸可以是硫酸或盐酸、硝酸、醋酸,也可以多酸组合。
5、按权利要求2所述的络石藤的木脂素苷元总提取物的提取工艺方法,其特征在于用于浸膏酶解的水解酶为蜗牛酶。
6、按权利要求2所述的络石藤的木脂素苷元总提取物的提取工艺方法,其特征在于用于提纯工艺步骤中的酸可以是硫酸或盐酸、硝酸、醋酸,也可以多酸组合。
7、按权利要求2所述的络石藤的木脂素苷元总提取物的提取工艺方法,其特征在于用于提纯工艺中的碱可以是氢氧化钠或碳酸钠、碳酸氢钠、氨水中任一种或多种组合。
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GR01 | Patent grant | ||
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Granted publication date: 20080625 Termination date: 20110307 |