CN101054384A - 一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯b的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法，采用高速逆流萃取、柱层析分离、重结晶相结合的方法，不但可除去银杏叶粗提物中的烷基酚酸类等多种有害杂质，而且，提高了银杏内酯B的收率，提高了产品的含量，达到十分理想的分离纯化目的，且适于工业化生产。

Description

一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法

技术领域

本发明涉及植物提取物制备技术领域，特别涉及一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取药物有效成分银杏内酯B的制备方法。

背景技术

银杏(Ginkgo hiloba L.)为银杏科银杏属植物。随着国内外对银杏叶的研究不断深入，发现银杏叶中含有银杏内酯A、B、C，银杏黄酮和其他杂质等多种组分，而银杏叶中有效成分银杏内酯B为一种高效的血小板活化因子拮抗剂，具有独特的药理作用和治疗价值，可用以治疗中风、休克、移植排拆、血液透析、哮喘等疾病，引起了世界范围制药工业的极大兴趣。在银杏内酯B的生产过程中，最关键的步骤是分离提纯。

目前，生产银杏内酯B，一种方法是经过多步分离得到含量较高的产品，这些分离过程包括浸提、过滤、萃取、沉淀等粗提过程，在粗提物中仍有不少杂质；另一种方法是采用树脂柱层析、三氧化二铝柱层析法，树脂柱层析是药物与食品工业中常采用的精制手段，这种设备简单，设备一次投资低，这种方法的不足之处在于分离的效率较低，流动相和固定相的利用率较低，成本高，产量低，产品含量和收率之间的矛盾在柱层析中难以兼顾，要保持含量，只有牺牲收率，这种低收率必将导致高成本；还有一种是采用模拟移动床色谱和重结晶有机结合的方法通过萃取、模拟移动床纯化、重结晶得到成品，该方法收率高(约1.5％)、提取率高(60％以上)、含量高，但是难以实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法。本发明方法简单易行，成本低，收率高，无树脂残留，得到的银杏内酯B含量达95％以上，收率为2％以上。

本发明提供的银杏内酯B的制备方法包括以下步骤：

一、原料的选择及处理：

1、银杏浸膏(总黄酮24％、总内酯6％，15-25婆美度)；

2、银杏提取物(粉末：总黄酮24％、总内酯6％)，用适量(1-2倍体积)纯净水溶解后，待用；

3、新鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，温度控制在70℃，去杂、粉碎，过60目筛，用60％乙醇提取2次，每次60-90分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍的水，沉淀24小时，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩。

二、高速逆流萃取：

1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的1.5～2.5倍，循环次数为4～5次，不同塔体，分开收集；

2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至20-25婆美度，65-70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；

三、柱层析、重结晶：

1)将得到的银杏内酯，用75-85％乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；

2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75-85％的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25婆美度的浸膏；

3)将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用75-85％乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达95％以上。

本发明与现有技术相比，对于不同制备方法，结果见下表(所有原药材为同批次，采用同一工艺)：

序号	分离方法	含量(％)	收率(％)
				①	传统法方式萃取+氧化铝树脂	95	0.01
②	传统方式萃取+模拟移动床色谱	90	1.48
				③	传统方式萃取+聚酰胺树脂+大孔树脂	98	0.015
④	高速逆流萃取+聚酰胺树脂+大孔树脂	95	1.25

由上表可知：①传统法方式萃取+氧化铝树脂、②传统方式萃取+模拟移动床色谱、③传统方式萃取+聚酰胺树脂+大孔树脂、④高速逆流萃取+聚酰胺树脂+大孔树脂对银杏内酯B进行分离、纯化的效果：

●从含量上看：①、③、④的三种方式都可以达到95％以上，②较低；

●从收率上看，②的收率最高，④其次，①、③最后；

●①、③、④的三种方式都可以达到9 5％以上，但是①、③的收率低；

●②的收率最高，但是，模拟移动床色谱的设备资金投入大，产量小，不适合工业化规模生产；

●高速逆流溶剂萃取，有效避免了传统溶剂萃取方法中溶剂损耗大，萃取率低的问题，达到了很好的效果，此工艺使产品收率及品质都有了较大提高，且节约溶媒用量，降低成本。

本发明与现有技术相比，从银杏叶或银杏叶提取物中分离提取出银杏内酯B，其含量可达95％以上，收率2％以上，优点如下：

1、高速逆流溶剂萃取是在传统溶剂萃取法的基础上改进的一种新的分离手段，它巧妙利用了传统溶剂萃取法中，溶剂和物料的密度差异及不混溶的特性，先将提取浓缩液装入萃取塔内，如萃取溶媒密度大则从塔顶加入，这样萃取溶媒由于重力作用缓慢下降至塔底，再用泵抽上塔顶，往复循环，密度小的萃取溶媒则由塔底进，由于浮力作用而上升到塔顶，再回至塔底，期间并不断补充新的溶剂，如此往复循环；

2、采用高速逆流萃取取代普通的固液萃取，使得萃取的连续性大大增强；同时，萃取用溶剂以乙酸乙酯代替含水的乙酸乙酯(如：30-40％乙酸乙酯)，针对性更强，使得萃取液中银杏黄酮甙等物质的含量降低，银杏内酯的含量提高；

3、将结晶的步骤置于4℃以下环境进行，避免了常温结晶过程中，银杏内酯A的大量析出，提高了产品银杏内酯B的含量。

本发明与目前精提银杏内酯B的柱层析法比较，收率高，产量大，提纯所得银杏内酯B含量大于95％；与模拟移动床方法比较，工艺简单，设备投入小，适于工业化生产；与多步萃取、分离法相比，得到的产品含量高。高速逆流萃取、柱层析分离、重结晶都是成熟的规模化纯化工艺，三者的有机结合是本发明的突出特点，是工业化精细分离的保证。

具体实施方式

实施例1

一、以银杏浸膏(总黄酮24％、总内酯6％，15-25婆美度，桂林莱茵生物科技股份有限公司生产)为原料；

二、高速逆流萃取：

1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的1.5倍，循环次数为4次，不同塔体，分开收集；

2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至20婆美度，65℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；

三、柱层析、重结晶：

1)将得到的银杏内酯，用75％乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；

2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75％的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至25婆美度的浸膏；

3)将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用75％乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达95.5％。

实施例2

一、银杏提取物(粉末：总黄酮24％、总内酯6％，桂林兴达制药厂生产)为原料，用2倍量纯净水溶解；

二、高速逆流萃取：

1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的2倍，循环次数为4次，不同塔体，分开收集；

2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至22婆美度，70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；

三、柱层析、重结晶：

1)将得到的银杏内酯，用80％乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；

2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为80％的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至25婆美度的浸膏；

3)将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用80％乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达96.1％。

实施例3

一、取新鲜、干燥的银杏绿叶100kg，烘干，温度控制在70℃，去杂、粉碎，过60目筛，用60％乙醇提取2次，第一次90分钟，第二次60分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍的水，沉淀24小时，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩。

二、高速逆流萃取：

1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的2.5倍，循环次数为5次，不同塔体，分开收集；

2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至22婆美度，70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；

三、柱层析、重结晶：

1)将得到的银杏内酯，用85％乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；

2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为85％的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至25婆美度的浸膏；

3)将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用85％乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达97.7％以上。

Claims (1)

1、一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法，包括下列步骤：

一、原料的选择及处理：

(1)、银杏浸膏(总黄酮24％、总内酯6％，15-25婆美度)；

(2)、银杏提取物(粉末：总黄酮24％、总内酯6％)，用适量(1-2倍体积)纯净水溶解后，待用；

(3)、新鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，温度控制在70℃，去杂、粉碎，过60目筛，用60％乙醇提取2次，每次60-90分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍的水，沉淀24小时，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩。

二、高速逆流萃取：

1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的1.5～2.5倍，循环次数为4～5次，不同塔体，分开收集；

2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至20-25婆美度，65-70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；

三、柱层析、重结晶：

1)将得到的银杏内酯，用75-85％乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；

2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75-85％的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25婆美度的浸膏；

3)将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用75-85％乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达95％以上。