CN105434338A - 一种银杏内酯b氯化钠注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种银杏内酯B氯化钠注射液及其制备方法，其是由银杏内酯B脂质纳米粒与5％的氯化钠溶液混合而成的银杏内酯B质量浓度为0.02％的注射液；其中银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：银杏内酯B？0.4％-0.5％；单硬脂酸甘油酯0.3％-0.5％；静脉注射大豆磷脂0.2％-0.3％；乙酸乙酯0.5％-1％；聚氧乙烯100-硬脂酸酯0.3％-0.5％；甘油0.2％-0.3％；去离子水余量。本发明所述的银杏内酯B氯化钠注射液性能稳定可靠、具有缓释作用、毒副作用少，解决了现有银杏内酯B水溶性差，生物半衰期短。

Description

一种银杏内酯B氯化钠注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及医用品注射液技术领域，具体涉及一种银杏内酯B氯化钠注射液及其制备方法。

背景技术

银杏叶为银杏科银杏属植物银杏的树叶，主要含有黄酮苷和特有的萜烯：黄酮苷主要是山柰酚及槲皮素的葡萄糖苷和鼠李塘苷；萜烯主要是银杏内酯和白果内酯。银杏内酯是银杏中的脂溶性有效成分，是具有高度专属性的血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂，具有扩张冠状血管、改善脑循环、抑制血小板聚集防止动脉粥样硬化、拮抗血管通透性增加等药理作用，临床已广泛用于治疗心脑血管等疾病川，已经上市的银杏制剂有银杏叶片、金纳多注射液和银杏舒心胶囊等。其中银杏内酯B是银杏治疗心脑血管疾病的有效成分，但其水溶性差，生物半衰期短。

目前，对于银杏内酯B的制备及纯化的方法一般采用有机溶剂多级萃取联合硅胶吸附色谱，活性炭吸附色谱和醋酸铅沉淀法等收段，但普遍得率较低、方法繁琐。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种性能稳定可靠、具有缓释作用、毒副作用少的银杏内酯B氯化钠注射液，解决现有银杏内酯B水溶性差，生物半衰期短。

本发明的另一目的在于提供一种银杏内酯B氯化钠注射液的制备方法，通过该方法获得一种性能稳定可靠、具有缓释作用、毒副作用少的银杏内酯B氯化钠注射液，同时简化制备方法，提高产物得率。

为实现上述目的本发明所采用的技术方案如下：

一种银杏内酯B氯化钠注射液，其特征在于，其是由银杏内酯B脂质纳米粒与5％的氯化钠溶液混合而成的银杏内酯B质量浓度为0.02％的注射液；其中银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：

银杏内酯B0.4％-0.5％；

单硬脂酸甘油酯0.3％-0.5％；

静脉注射大豆磷脂0.2％-0.3％；

乙酸乙酯0.5％-1％；

聚氧乙烯100-硬脂酸酯(Myrj59)0.3％-0.5％；

甘油0.2％-0.3％；

去离子水余量。

进一步的方案中，本发明所述的银杏内酯B是从新鲜银杏绿叶中提取而来。

进一步的方案中，本发明所述的银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：

银杏内酯B0.45％；

单硬脂酸甘油酯0.4％；

静脉注射大豆磷脂0.25％；

乙酸乙酯0.75％；

聚氧乙烯100-硬脂酸酯(Myrj59)0.4％；

甘油0.25％；

去离子水余量。

一种银杏内酯B氯化钠注射液的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

1)提取银杏内酯B：

a.选用新鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，去杂、粉碎，用环乙醇提取，提取液减压浓缩，回收环乙醇；浓缩液加水，沉淀20-25h，离心，取上清液上吸附柱，先用水冲洗，然后用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，得到浓缩提取液；

b.将上述浓缩提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加人乙酸乙酯进行逆流溶剂萃取，不同塔体，分开收集；将萃取后的乙酸乙酯萃取液回收，得到稠膏，浓缩至20-25波美度，干燥，粉碎，得到银杏内酯粗品；

c.上述银杏内酯粗品用乙醇溶解，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；将流出液再通过大孔树脂柱，去离子水冲洗树脂至流出液无色，再用乙醇溶液洗脱至流出液颜色再次接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25波美度的浸膏；将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，有晶体析出，收集结晶，抽滤，再用乙醇溶解，重结晶2-3次后，将白色析出物真空烘干至恒重，得银杏内酯B；

2)制备银杏内酯B脂质纳米粒：按照配方量将上述银杏内酯B、单硬脂酸甘油酯、静脉注射大豆磷脂，在加热水浴中完全溶解于适量的乙酸乙酯中，作为有机相；取聚氧乙烯100-硬脂酸酯和甘油分散于与所述有机相同温度的水中形成水相；将有机相缓慢注入水相中，持续搅拌至形成初乳；然后在高压乳匀机上乳匀，迅速冷至室温，得到水分散体的银杏内酯B脂质纳米粒；

3)制备银杏内酯B氯化钠注射液：将上述银杏内酯B脂质纳米粒中加入到5％的氯化钠溶液中，搅拌溶解，得到银杏内酯B氯化钠注射液，控制银杏内酯B在银杏内酯B氯化钠注射液中的的质量浓度为0.02％。

进一步的方案，上述方法中，提取银杏内酯B时，银杏绿叶烘干的温度为65-75℃，环乙醇的质量浓度为60％，洗脱时的乙醇采用80％的乙醇溶液。

进一步的方案，上述方法中，步骤2)制备银杏内酯B脂质纳米粒时，高压乳匀机的压力为75-85MPa。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

1.本发明所述的银杏内酯B氯化钠注射液具有良好的稳定性，银杏内酯B脂质纳米粒，可以提高银杏内酯B的生物利用度，达到缓制和靶向的目的，减少毒副作用，同时可以在体内避免单核巨噬细胞的吞噬、实现长循环释药。；

2.本发明所述的制备方法工艺简单、污染少、安全性高、降低生产成本。

附图说明

图1为本发明所述提取的银杏内酯B与购买的分析纯的银杏内酯B的红外对照图；其中a为银杏内酯B对照品，b为本发明的银杏内酯B。

具体实施方式

下面结合具体的实施方式对本发明作进一步详细说明。

本发明所述的一种银杏内酯B氯化钠注射液，其是由银杏内酯B脂质纳米粒与5％的氯化钠溶液混合而成的银杏内酯B质量浓度为0.02％的注射液；其中银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：

银杏内酯B0.4％-0.5％；

单硬脂酸甘油酯0.3％-0.5％；

静脉注射大豆磷脂0.2％-0.3％；

乙酸乙酯0.5％-1％；

聚氧乙烯100-硬脂酸酯0.3％-0.5％；

甘油0.2％-0.3％；

去离子水余量。

进一步的方案中，本发明所述的银杏内酯B是从新鲜银杏绿叶中提取而来。

进一步的方案中，本发明所述的银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：

银杏内酯B0.45％；

单硬脂酸甘油酯0.4％；

静脉注射大豆磷脂0.25％；

乙酸乙酯0.75％；

聚氧乙烯100-硬脂酸酯0.4％；

甘油0.25％；

去离子水余量。

一种银杏内酯B氯化钠注射液的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

1)提取银杏内酯B：

a.选用新鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，去杂、粉碎，用环乙醇提取，提取液减压浓缩，回收环乙醇；浓缩液加水，沉淀20-25h，离心，取上清液上吸附柱，先用水冲洗，然后用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，得到浓缩提取液；

b.将上述浓缩提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加人乙酸乙酯进行逆流溶剂萃取，不同塔体，分开收集；将萃取后的乙酸乙酯萃取液回收，得到稠膏，浓缩至20-25波美度，干燥，粉碎，得到银杏内酯粗品；

c.上述银杏内酯粗品用乙醇溶解，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；将流出液再通过大孔树脂柱，去离子水冲洗树脂至流出液无色，再用乙醇溶液洗脱至流出液颜色再次接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25波美度的浸膏；将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，有晶体析出，收集结晶，抽滤，再用乙醇溶解，重结晶2-3次后，将白色析出物真空烘干至恒重，得银杏内酯B；

2)制备银杏内酯B脂质纳米粒：按照配方量将上述银杏内酯B、单硬脂酸甘油酯、静脉注射大豆磷脂，在加热水浴中完全溶解于适量的乙酸乙酯中，作为有机相；取聚氧乙烯100-硬脂酸酯和甘油分散于与所述有机相同温度的水中形成水相；将有机相缓慢注入水相中，持续搅拌至形成初乳；然后在高压乳匀机上乳匀，迅速冷至室温，得到水分散体的银杏内酯B脂质纳米粒；

3)制备银杏内酯B氯化钠注射液：将上述银杏内酯B脂质纳米粒中加入到5％的氯化钠溶液中，搅拌溶解，得到银杏内酯B氯化钠注射液，控制银杏内酯B在银杏内酯B氯化钠注射液中的的质量浓度为0.02％。

进一步的方案，上述方法中，提取银杏内酯B时，银杏绿叶烘干的温度为65-75℃，环乙醇的质量浓度为60％，洗脱时的乙醇采用80％的乙醇溶液。

进一步的方案，上述方法中，步骤2)制备银杏内酯B脂质纳米粒时，高压乳匀机的压力为75-85MPa。

上述方法中，通过高压乳均法成银杏内酯B脂质纳米粒，可以提高银杏内酯B的生物利用度，达到缓制和靶向的目的，减少毒副作用，同时可以在体内避免单核巨噬细胞的吞噬、实现长循环释药。

以下是本发明具体的实施例，在下述实施例中，所用到的试剂、原料和设备除明确限定外，均可以通过购买方式获得。

实施例1

一种银杏内酯B氯化钠注射液，通过以下方法制备而成：

1)提取银杏内酯B的：

a：将新鲜、干燥的银杏绿叶，在70℃烘干，去杂、粉碎，过60目筛，用60％环乙醇提取2次；每次1h，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍量(体积)的水，沉淀24h，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩；

b：将浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加人乙酸乙酯进行逆流溶荆萃取，乙酸乙酯用量为药液的1.5倍体积，循环次数为4次，不同塔体，分开收集；将萃取后的乙酸乙酯萃取液回收，得到稠膏，浓缩至20波美度，65℃真空干燥，粉碎至90目，得到银杏内酯粗品；

c:将得到的银杏内酯用80％乙醇溶解，通过80目的聚酰胺柱，收集流出液；将流出液再通过HP-20大孔树脂柱，去离子水冲洗树脂至流出液无色，再用80％乙醇溶液洗脱，当流出液颜色再次接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20波美度的浸膏；将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3h后，收集结晶，抽滤，再用80％乙醇溶解，重结晶两次后，将白色析出物真空烘干至恒重，得银杏内酯B；

2)制备银杏内酯B脂质纳米粒：

称取以重量百分比计的上述银杏内酯B0.4％、单硬脂酸甘油酯0.3％、静脉注射大豆磷脂0.2％、乙酸乙酯0.5％、Myrj590.3％、甘油0.2％、去离子水余量；将银杏内酯B精制产品、单硬脂酸甘油酯、静脉注射大豆磷脂，在80士5℃水浴下，使其完全溶解于适量的乙酸乙酯中，作为有机相；取一定量的Myrj59和甘油分散于同温度的水中形成水相。将水相置于恒温磁力搅拌器上，将有机相缓慢注入80±5℃水相中，持续搅拌2h，形成初乳；在高压乳匀机上80MPa乳匀7次，迅速冷至室温，得到银杏内酯B脂质纳米粒水分散体；

3)制备银杏内酯B氯化钠注射液：

上述银杏内酯B脂质纳米粒加到5％的氯化钠溶液中，搅拌溶解，制得质量分数为0.02％的银杏内酯B氯化钠注射液。

实施例2

一种银杏内酯B氯化钠注射液，通过以下方法制备而成：

1)提取银杏内酯B的：

a：将新鲜、干燥的银杏绿叶，在65℃烘干，去杂、粉碎，过55目筛，用60％环乙醇提取2次；每次1h，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍量体积的水，沉淀20h，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩；

b：将浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加人乙酸乙酯进行逆流溶荆萃取，乙酸乙酯用量为药液的2倍体积，循环次数为5次，不同塔体，分开收集；将萃取后的乙酸乙酯萃取液回收，得到稠膏，浓缩至20波美度，65℃真空干燥，粉碎至90目，得到银杏内酯粗品；

c:将得到的银杏内酯用80％乙醇溶解，通过100目的聚酰胺柱，收集流出液；将流出液再通过HP-20大孔树脂柱，去离子水冲洗树脂至流出液无色，再用80％乙醇溶液洗脱，当流出液颜色再次接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至22波美度的浸膏；将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3h后，收集结晶，抽滤，再用80％乙醇溶解，重结晶两次后，将白色析出物真空烘干至恒重，得银杏内酯B；

2)制备银杏内酯B脂质纳米粒：

称取以重量百分比计的上述银杏内酯B0.45％、单硬脂酸甘油酯0.4％、静脉注射大豆磷脂0.25％、乙酸乙酯0.75％、Myrj590.4％、甘油0.25％、去离子水余量；将银杏内酯B精制产品、单硬脂酸甘油酯、静脉注射大豆磷脂，在80±5℃水浴下，使其完全溶解于适量的乙酸乙酯中，作为有机相；取一定量的Myrj59和甘油分散于同温度的水中形成水相。将水相置于恒温磁力搅拌器上，将有机相缓慢注入80±5℃水相中，持续搅拌2h，形成初乳；在高压乳匀机上80MPa乳匀8次，迅速冷至室温，得到银杏内酯B脂质纳米粒水分散体；

3)制备银杏内酯B氯化钠注射液：

上述银杏内酯B脂质纳米粒加到5％的氯化钠溶液中，搅拌溶解，制得质量分数为0.02％的银杏内酯B氯化钠注射液。

实施例3

一种银杏内酯B氯化钠注射液，通过以下方法制备而成：

1)提取银杏内酯B的：

a：将新鲜、干燥的银杏绿叶，在65℃烘干，去杂、粉碎，过65目筛，用60％环乙醇提取2次；每次2h，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍量体积的水，沉淀25h，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩；

b：将浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加人乙酸乙酯进行逆流溶荆萃取，乙酸乙酯用量为药液的2.5倍体积，循环次数为6次，不同塔体，分开收集；将萃取后的乙酸乙酯萃取液回收，得到稠膏，浓缩至25波美度，70℃真空干燥，粉碎至90目，得到银杏内酯粗品；

c:将得到的银杏内酯用80％乙醇溶解，通过120目的聚酰胺柱，收集流出液；将流出液再通过HP-20大孔树脂柱，去离子水冲洗树脂至流出液无色，再用80％乙醇溶液洗脱，当流出液颜色再次接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至25波美度的浸膏；将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3h后，收集结晶，抽滤，再用80％乙醇溶解，重结晶两次后，将白色析出物真空烘干至恒重，得银杏内酯B；

2)制备银杏内酯B脂质纳米粒：

称取以重量百分比计的上述银杏内酯B0.5％、单硬脂酸甘油酯0.5％、静脉注射大豆磷脂0.3％、乙酸乙酯1％、Myrj590.5％、甘油3％、去离子水余量；将银杏内酯B精制产品、单硬脂酸甘油酯、静脉注射大豆磷脂，在80±5℃水浴下，使其完全溶解于适量的乙酸乙酯中，作为有机相；取一定量的Myrj59和甘油分散于同温度的水中形成水相。将水相置于恒温磁力搅拌器上，将有机相缓慢注入80±5℃水相中，持续搅拌2h，形成初乳；在高压乳匀机上80MPa乳匀8次，迅速冷至室温，得到银杏内酯B脂质纳米粒水分散体；

3)制备银杏内酯B氯化钠注射液：

上述银杏内酯B脂质纳米粒加到5％的氯化钠溶液中，搅拌溶解，制得质量分数为0.02％的银杏内酯B氯化钠注射液。

效果验证

1.将实施例1所得到的银杏内酯B用傅里叶红外光谱仪进行检测，采用购买的银杏内酯B分析纯作为对照，测试结果见图1。

2.产品副毒效果实验

选取健康小鼠50只，体质量20±2g，随机分为5组，每组10只，分别单次按照注射500mg/kg、400mg/kg、300mg/kg、200mg/kg、100mg/kg的银杏内酯B氯化钠注射液0.5ml/20g，连续观察15天，记录动物毒性反应和死亡情况；实验结果见表1：

表1：银杏内酯B氯化钠注射液对小鼠静脉注射急性毒性试验结果

各动物给药后立即出现颤抖、竖毛，中毒严重者出现惊厥、呼吸急促，并立刻死亡，中毒较轻者在30min内逐渐恢复正常。500mg/kg、400mg/kg、300mg/kg、200mg/kg、100mg/kg分别死亡8、4、2、0、0只小鼠。死亡小鼠肉眼观察全身组织，未见明显病变。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种银杏内酯B氯化钠注射液，其特征在于，其是由银杏内酯B脂质纳米粒与5％的氯化钠溶液混合而成的银杏内酯B质量浓度为0.02％的注射液；其中银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：

银杏内酯B0.4％-0.5％；

单硬脂酸甘油酯0.3％-0.5％；

静脉注射大豆磷脂0.2％-0.3％；

乙酸乙酯0.5％-1％；

聚氧乙烯100-硬脂酸酯0.3％-0.5％；

甘油0.2％-0.3％；

去离子水余量。

2.根据权利要求1所述的银杏内酯B氯化钠注射液，其特征在于，所述银杏内酯B是从新鲜银杏绿叶中提取而来。

3.根据权利要求1所述的银杏内酯B氯化钠注射液，其特征在于，所述银杏内酯B脂质纳米粒是由以重量百分比计的以下组分制备而成：

银杏内酯B0.45％；

单硬脂酸甘油酯0.4％；

静脉注射大豆磷脂0.25％；

乙酸乙酯0.75％；

聚氧乙烯100-硬脂酸酯0.4％；

甘油0.25％；

去离子水余量。

4.一种如权利要求1所述的银杏内酯B氯化钠注射液的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：

1)提取银杏内酯B：

a.选用新鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，去杂、粉碎，用环乙醇提取，提取液减压浓缩，回收环乙醇；浓缩液加水，沉淀20-25h，离心，取上清液上吸附柱，先用水冲洗，然后用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，得到浓缩提取液；

b.将上述浓缩提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加人乙酸乙酯进行逆流溶剂萃取，不同塔体，分开收集；将萃取后的乙酸乙酯萃取液回收，得到稠膏，浓缩至20-25波美度，干燥，粉碎，得到银杏内酯粗品；

c.上述银杏内酯粗品用乙醇溶解，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；将流出液再通过大孔树脂柱，去离子水冲洗树脂至流出液无色，再用乙醇溶液洗脱至流出液颜色再次接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25波美度的浸膏；将浸膏置于4℃以下环境冷藏，静置后，有晶体析出，收集结晶，抽滤，再用乙醇溶解，重结晶2-3次后，将白色析出物真空烘干至恒重，得银杏内酯B；

2)制备银杏内酯B脂质纳米粒：按照配方量将上述银杏内酯B、单硬脂酸甘油酯、静脉注射大豆磷脂，在加热水浴中完全溶解于适量的乙酸乙酯中，作为有机相；取聚氧乙烯100-硬脂酸酯和甘油分散于与所述有机相同温度的水中形成水相；将有机相缓慢注入水相中，持续搅拌至形成初乳；然后在高压乳匀机上乳匀，迅速冷至室温，得到水分散体的银杏内酯B脂质纳米粒；

3)制备银杏内酯B氯化钠注射液：将上述银杏内酯B脂质纳米粒中加入到5％的氯化钠溶液中，搅拌溶解，得到银杏内酯B氯化钠注射液，控制银杏内酯B在银杏内酯B氯化钠注射液中的的质量浓度为0.02％。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，提取银杏内酯B时，银杏绿叶烘干的温度为65-75℃，环乙醇的质量浓度为60％，洗脱时的乙醇采用80％的乙醇溶液。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)制备银杏内酯B脂质纳米粒时，高压乳匀机的压力为75-85MPa。