CN102836281A - 黑果枸杞果总黄酮提取物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于黑果枸杞果的深度开发技术领域，特别涉及一种黑果枸杞果总黄酮提取物在制备具备降血压、降血糖或降血脂功效的食品添加剂、保健品或药品上的新用途。即黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品中的重量含量为0.5—100%。优点是首次发现黑果枸杞果总黄酮提取物具有降血糖、降血脂和降血压活性的新用途，可给有以上病症的病人新的治疗选择，本发明黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防糖尿病、高血脂和高血压的产品中得到了有效充分应用。

Description

黑果枸杞果总黄酮提取物的用途

一、技术领域：本发明属于黑果枸杞果的深度开发与应用技术领域，特别涉及一种黑果枸杞果总黄酮提取物在制备具备降血压、降血糖或降血脂功效的食品添加剂、保健品或药品上的用途。

二、技术背景: 黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）是茄科枸杞属的多年生耐盐、抗旱植物，分布于我国西北地区，是民族医药中的常用药材。在传统中（藏）药中的主要作用为治疗心热病、心脏病、月经不调、停经，高血压，在民间还被用作滋补强壮和明目药。黑果枸杞的果实简称为黑果枸杞果。

黑果枸杞果总黄酮提取物的药理性质的报道较少。白红进等测定黑果枸杞叶片甲醇提取物对DPPH自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力，黑果枸杞叶片甲醇提取物对DPPH· ，·OH和O2^-·自由基均具有较好的清除作用（时珍国医国药，2008，19(2):326-327）。陶大勇等发现如果将黑果枸杞果实花色苷类物质添加到植物油中，可以增强这些植物油的抗氧化能力（中兽医医药杂志，2007，26(4):15-17）。目前尚未发现黑果枸杞果总黄酮提取物具有降糖、降脂或者降压作用的报道。

高血脂症（hyperlipidemia）是脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于正常的病症。高血脂症是一种全身性疾病，指血中总胆固醇（TC）和/或甘油三酯（TG）过高或高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）过低，现代医学称之为血脂异常。脂质不溶或微溶于水，必须与蛋白质结合以脂蛋白形式存在，因此，高血脂症通常也称为高脂蛋白血症。高血脂是引起人类动脉粥样硬化性疾病的主要危险因素。像常见的动脉粥样硬化性疾病有：冠心病（包括心肌梗塞、心绞痛及猝死）、脑梗塞以及周围血管血栓栓塞性疾病。这些心脑血管性疾病的发病率高，危害大，病情进展凶险，其死亡率约占人类总死亡率的半数左右。

糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点。糖尿病可导致感染、心脏病变、脑血管病变、肾功能衰竭、双目失明、下肢坏疽等而成为致死致残的主要原因。糖尿病高渗综合症是糖尿病的严重急性并发症，初始阶段可表现为多尿、多饮、倦怠乏力、反应迟钝等。随着机体失水量的增加病情急剧发展，出现嗜睡、定向障碍、癫痫样抽搐，偏瘫等类似脑卒中的症状，甚至昏迷。国外给它的别名叫“沉默的杀手”（Silent Killer）。

高血压（hypertensive disease）是一种以动脉血压持续升高为主要表现的慢性疾病，常引起心、脑、肾等重要器官的病变并出现严重的后果。长期的高血压可促进动脉粥样硬化的形成和发展。冠状动脉粥样硬化会阻塞或使血管腔变狭窄，或因冠状动脉功能性改变而导致心肌缺血缺氧、坏死而引起冠心病。高血压患者的脑动脉如果硬化到一定程度时，会非常容易引起中风。重症高血压患者的血压超过了脑血流的自动调节范围，脑组织因血流灌注过多而引起脑水肿。临床上以脑病的症状和体征为特点，表现为弥漫性严重头痛、呕吐、意识障碍、精神错乱，严重的甚至会昏迷和抽搐。在我国每年用于高血压病治疗的费用高达366亿元，高血压病已经为家庭和国家带来了沉重的负担。

目前还没有关于黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗/预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品添加剂、保健品和药品制备过程中应用的报道。

        三、发明内容：

本发明的目的是提供上述黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗/预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品添加剂、保健品和药品制备过程中的新用途，使黑果枸杞果这种物品为人类防病治病以及身体的保健方面提供强大的物质和技术支撑，造福于人类社会，把黑果枸杞果高效充分利用，其经济和社会效益十分显著。

       本发明的申请人于本发明的申请日同日申请了另一件“黑果枸杞果总黄酮提取物及其制备方法”，该发明的黑果枸杞果总黄酮提取物是采用如下制备方法制备而来的，其制备方法是用水、含水或者不含水的甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或其它的液体有机化合物之一种或几种的混合物作提取溶剂，以黑果枸杞果：提取溶剂为1:5-30的重量比进行配比，把配比后的黑果枸杞果和提取溶剂进行混合，再经浸泡、煎熬或回流提取、过滤去渣、浓缩回收有机试剂得浸膏，然后对浸膏进行分离纯化得黑果枸杞果总黄酮提取物。分离纯化方法有三种，它们分别为：①采用丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或其它的液体有机化合物之一种或几种的混合物作溶剂对浸膏进行萃取，回收有机溶剂后，经过真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥再去除残余的水和溶剂得黑果枸杞果总黄酮提取物；②采用吸附树脂对浸膏进行柱层析，上柱过程中任意选择黄酮类显色剂检测流出液以确定树脂是否吸附饱和，前后两次各用1-5倍柱体积的水、0.5-5倍柱体积的乙醇体积浓度为1-99%的乙醇水溶液洗涤，再用3-10倍树脂柱体积的乙醇体积浓度为1-99%的乙醇水溶液洗脱，浓缩，并将浓缩液进行真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥去除残余的水和溶剂得黑果枸杞果总黄酮提取物；③用无机酸将浸膏的pH值调至0.1-3，在0—42℃下静置，分离沉淀物并干燥沉淀物去除残余的水和溶剂得黑果枸杞果总黄酮提取物。

技术方案是：在进行“黑果枸杞果总黄酮提取物及其制备方法”的深入研究中，特别针对‘黑果枸杞果总黄酮提取物’的应用进行了大量地研究工作，研究找到了黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品中的重量含量为0.5—100%，也就是说添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的药品中可不加其它任何东西直接使用，也可再添加其它东西作为治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品使用。

本发明所提供的黑果枸杞果总黄酮提取物是指采用任何方法从植物黑果枸杞果中提取得到的，以黄酮类化合物作为主要成分（或主要功效成分）的提取物，该提取物中，黄酮类化合物的总重量之和占提取物总重量的1%-100%。所述的黄酮类化合物是指化学结构属于黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、花色素类、黄烷醇类、双苯吡酮类、异黄酮类、查尔酮类、二氢查尔酮类、橙酮类、高异黄酮类的化合物以及它们与单糖或寡糖形成的衍生物。提取物中各种黄酮类化合物之间的含量比例可以与天然植物中的含量比例一致，也可以与天然植物中的含量比例不尽相同。本发明提供的以黑果枸杞果总黄酮提取物为添加剂制得的治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品可以是本身和药学上可利用的载体和/或稀释剂和辅料，呈片剂、糖衣片剂、丸剂、胶囊、注射剂、栓剂、膏剂、可被吸入使用的粉末制剂、悬浮液、霜剂和软膏形式。

黑果枸杞果总黄酮提取物降脂实验

受试药物：三组不同质量浓度的黑果枸杞果总黄酮提取物水分散液（HZH）。

阳性对照药：血脂康胶囊，北京北大维信生物科技有限公司生产，市售成品。

动物：SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体重180-220g，青海省疾控中心提供。

高脂饲料：猪油12%；胆固醇2%；丙硫氧嘧啶0.2%；3号胆盐0.5%；普通饲料粉85%。按以上各种成分的质量比将各成分充分混合，再用机器搅拌，压成圆条状颗粒，用Co⁶⁰辐照消毒后，于阴凉干燥处密封保存。

化学试剂及检测仪器：乙醇，天津百世化工生产。AU5421全自动生化分析仪，奥林巴斯公司生产。BECKMAN^TM30低温高速离心机，美国BECKMAN公司生产。万分之一天平，德国梅特勒-托利多公司生产。

实验方法：每组10只动物，雌雄各半。除正常组外，其他各组均用高脂饲料代替正常饲料投喂，每天每只20g左右。正常组和模型对照组灌胃已消毒的自来水，其他组如表1所示灌胃相应的浓度的药物水分散液，灌胃量为1mL/100g大鼠体重。以上动物自造模开始，连续灌胃三周。实验结束前一天晚上给最后一次药幷禁食，不禁水，次日上午麻醉之后，腹部主动脉采血，进行血脂五项的检验。实验结果用Origin 8.5统计软件进行统计分析。

实验结果：

1、  各组实验组大鼠的体重的变化

表1各组实验组大鼠的体重的变化

组别	第1天	第8天	第15天	第21天	第22天空腹
						HZH 100mg/Kg	192±16	207±17	217±21	225±24	207±15
HZH 200mg/Kg	193±14	203±18	211±18	216±21	204±14
						HZH 300mg/Kg	191±12	201±16	206±22	215±22	204±11
血脂康组	193±13	197±17	211±24	215±23	206±14
						模型对照组	193±12	211±19	211±15	211±21	206±13
正常对照组	192±13	242±22**	266±31**	286±34**	251±28**

注：**与模型组比较p<0.01

2、 饲料消耗量

表2 各组大鼠的饲料消耗量（N=10，单位：g）

组别	饲料消耗总量	饲料平均消耗量
			HZH 100mg/Kg	3367	336.7
HZH 200mg/Kg	3282	328.2
			HZH 300mg/Kg	3212	321.2
血脂康组	3495	349.5
			模型对照组	3434	343.4
正常对照组	5234	523.4

3、 血脂检验结果

表3 大鼠血脂检验结果（N=10，单位mmol/L）

组别	甘油三酯	总胆固醇	高密度脂蛋白	低密度脂蛋白	极低密度脂蛋白
						HZH 100mg/Kg	0.76±0.56	8.21±3.87	1.11±0.21	6.79±2.75	0.76±0.14
HZH 200mg/Kg	0.64±0.43	7.76±3.39	1.13±0.43	5.65±1.81	0.65±0.16
						HZH 300mg/Kg	0.67±0.48	7.91±2.71	0.91±0.21	5.91±1.09	0.63±0.19
血脂康组	0.95±0.44	18.6±7.03	2.49±1.12	15.2±7.87	1.42±1.03
						模型对照组	1.46±0.59	23.8±8.43	2.87±1.76	18.6±4.61	1.22±0.89
正常对照组	0.31±0.11	1.15±0.96	0.91±0.11	0.35±0.11	0.19±0.02

注：1、 各给药组与模型组相比，均有显著差异。

2、  总胆固醇=低密度脂蛋白+高密度脂蛋白+极低密度脂蛋白

实验结论：

1、  正常对照组大鼠体重在实验第八天之后明显高于其他各组大鼠的体重。各用药组大鼠体重与模型组相比没有显著性差异，但是远远小于正常组大鼠的体重，可能是因为高脂肪食物导致脂肪肝影响了大鼠的进食。

2、  正常组大鼠摄取食物的量显著高于其他组大鼠，这是因为其他组大鼠因为高脂肪食物形成脂肪肝，从而严重影响进食量。

3、  与模型组相比，在连续摄入高脂肪食物21天后，模型组大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白含量显著上升。而用药组上述血清指标显著低于模型组。

从上述实验结果可以得出，黑果枸杞果总黄酮提取物可以显著降低长期摄入高脂肪食物大鼠的血脂，具有显著的降血脂功效。

黑果枸杞果总黄酮提取物的降血糖活性实验

受试药物：三组不同质量浓度的黑果枸杞果总黄酮提取物水分散液（HZH）。

阳性对照药：二甲双胍片，广州白云山制药厂，市售成品。

动物：Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，青海省疾控中心提供。

化学试剂及检测仪器：乙醇，天津百世化工生产。AU5421全自动生化分析仪，奥林巴斯公司生产。BECKMAN^TM30低温高速离心机，美国BECKMAN公司生产。万分之一天平，德国梅特勒-托利多公司生产。

实验方法：每组10只动物，雌雄各半。除正常组外，其他各组均使用链脲佐菌素以40mg/Kg进行腹腔注射建成糖尿病模型。正常组和模型对照组灌胃已消毒的自来水，其他组如表4所示灌胃相应的浓度的药物水分散液，灌胃量为1mL/100g大鼠体重。以上动物自造模开始，连续灌胃11周。于第6、8、10、11周用毛细管法从眼眶取血，用奥林巴斯全自动生化分析仪测定血糖含量。实验结果用Origin 8.5统计软件进行统计分析。

实验结果：

表4黑果枸杞果总黄酮提取物对糖尿病大鼠血糖浓度的影响（mmol/L）

组别	第6周	第8周	第10周	第11周
					HZH 100mg/Kg	8.5±0.6	8.4±0.2	8.5±0.4	7.1±0.5
HZH 200mg/Kg	8.9±0.5	7.3±0.4	8.1±0.9	8.7±0.4
					HZH 300mg/Kg	8.1±0.9	7.7±0.5	8.1±0.4	8.4±0.3
二甲双胍组200mg/Kg	8.1±0.4	7.6±0.4	7.7±0.5	7.5±0.6
					模型对照组	8.6±0.2	10.3±0.5	12.5±0.4	13.3±0.5
正常对照组	4.5±0.4	4.6±0.3	4.5±0.4	4.5±0.6

注：各黑果枸杞果总黄酮提取物组动物的血糖浓度与模型组动物的血糖浓度比较，第八周和第八周之后具有显著性差异，明显低于模型组。但是黑果枸杞果总黄酮提取物组与二甲双胍组没有显著性差异。

实验结论：1、 各实验组大鼠经过链脲佐菌素的腹腔注射，血糖浓度明显高于正常组大鼠，说明链脲佐菌素有选择性的破坏了大鼠的胰岛细胞，导致胰岛素产生不足，引起了高血糖的症状。

2、 在第八周之后，模型组大鼠的血糖浓度显著增高，但是黑果枸杞果总黄酮提取物各组却可以将血糖控制在一个中等的水平，降血糖效果和阳性药二甲双胍相当，表明黑果枸杞果总黄酮提取物具有降血糖活性。

黑果枸杞果总黄酮提取物的降压实验

受试药物：三组不同质量浓度的黑果枸杞果总黄酮提取物水分散液（HZH）。

阳性对照药：卡托普利，广州白云山制药厂，市售成品。

动物：SHR大鼠，雌雄各半，青海省疾控中心提供。

化学试剂及检测仪器：乙醇，天津百世化工生产。大鼠血压计，北京科思佳科技有限责任公司。BECKMAN^TM30低温高速离心机，美国BECKMAN公司生产。万分之一天平，德国梅特勒-托利多公司生产。

实验方法：每组10只动物，雌雄各半。正常组大鼠为健康的大鼠，其他组的大鼠为高血压模型大鼠。正常组和阳性组灌胃已消毒的自来水和阳性药卡托普利水分散液，其他组如表5所示灌胃相应的浓度的药物水分散液，灌胃量为1mL/100g大鼠体重。以上动物自造模开始，一次性给药。于第0、2、4、6、8小时用大鼠血压计测定大鼠血压。实验结果用Origin 8.5统计软件进行统计分析。

表5黑果枸杞果总黄酮提取物对糖尿病大鼠血糖浓度的影响（mmHg）

组别	第0小时	第2小时	第4小时	第6小时	第8小时
						HZH 100mg/Kg	183.9±13.4	163.8±11.2	151.4±12.5	154.4±15.7	161.2±14.2
HZH 200mg/Kg	184.5±10.6	158.7±16.8	151.5±11.4	153.2±16.3	166.2±15.8
						HZH 300mg/Kg	182.7±12.6	151.9±14.4	152.5±16.6	151.3±13.9	161.5±17.7
卡托普利组1.0mg/Kg	183.3±13.1	162.7±11.9	153.1±10.1	161.4±11.9	172.7±11.4
						模型对照组	185.6±13.5	184.7±12.8	181.3±15.6	183.1±14.9	189.8±13.6
正常对照组	155.5±10.6	156.2±11.6	157.4±10.9	158.4±12.1	156.7±10.1

注：各黑果枸杞果总黄酮提取物组动物的血压与模型组动物的血压比较，从第2小时开始具有显著性差异，明显低于模型组。但是黑果枸杞果总黄酮提取物组与卡托普利组没有显著性差异。

实验结论：高血压大鼠在一次性服用黑果枸杞果总黄酮提取物之后，从第2小时开始血压明显降低，降血压效果与阳性药卡托普利相当，黑果枸杞果总黄酮提取物具有降血压的效果。

本发明具有如下优点：本发明首次发现黑果枸杞果总黄酮提取物具有降血糖、降血脂和降血压活性的新用途，一方面可以给有以上病症的病人新的治疗选择，一方面对深入开发黑果枸杞果资源具有重要意义；其次本发明提供的黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防糖尿病、高血脂和高血压的产品中的有效应用，资源得到高效充分利用，经济和社会效益十分显著。

四、具体实施方案：

实施例1：黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的药品中的重量含量为100%。

实施例2：黑果枸杞果总黄酮提取物在预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品中的重量含量为0.5%。 

实施例3：黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血糖病的保健品和药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血糖病的保健品和药品中的重量含量为40%。 

实施例4：黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗或预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品中的重量含量为15%。

实施例5：黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的药品中的重量含量为60%， 

实施例6：黑果枸杞果总黄酮提取物在预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品中的重量含量为6%。 

实施例7：黑果枸杞果总黄酮提取物的含量测定

标准曲线的制备：准确称取芦丁标准品10.0000mg溶于50%体积分数的乙醇溶液中，定容至25mL，得到400μg/mL的芦丁标准液。准确量取上述芦丁标准液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置入10mL容量瓶中，加50%体积分数的乙醇溶液补足5mL，先后加入5%的NaNO₂和10%的Al(NO₃)₃各0.3mL，混匀后放置5min后，加4%NaOH溶液4mL，最后用50%体积分数的的乙醇水溶液定容，混匀放置10min后于510nm测定吸光度值A。得标准曲线回归方程：y=0.9803x+0.0015，R²=0.09975。

测定：准确称取黑果枸杞果总黄酮提取物A和B各6.0000mg溶于50%体积分数的乙醇水溶液，定容至10mL，得600μg/mL的待测液。

准确量取上述待测液1mL置入10mL容量瓶中，按标准曲线制作中的步骤进行测定吸光度A，根据上述标准曲线回归方程计算得黑果枸杞果总黄酮提取物A和B的黄酮含量分别为：68.3%和89.2%。

Claims (2)

1.一种黑果枸杞果总黄酮提取物的用途，其特征是黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在治疗高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品中的重量含量为0.5—100%。

2. 一种黑果枸杞果总黄酮提取物的用途，其特征是黑果枸杞果总黄酮提取物在预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品制备过程中作为添加剂使用的新用途，添加剂黑果枸杞果总黄酮提取物在预防高血压病、高血脂病、高血糖病的食品、保健品和药品中的重量含量为0.5—100%。