CN103520451B - 一种具有降血脂作用的分蘖葱头组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种以分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖为主要成分的组合物，该组合物具有调节血脂作用。其中，按重量百分比计：分蘖葱头黄酮占30-65%，荷叶生物碱占20-40%，木耳多糖占10-40%。还公开其制备方法。本发明组合物具有成分明确、服用剂量小、是一种安全有效的降血脂的组合物，并且本发明组合物较单一分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖具有更强的药理活性。体现了化学组合物的协同作用，可用于制备和预防具有降血脂作用的药品、保健食品。

Description

一种具有降血脂作用的分蘖葱头组合物

技术领域

本发明一种以分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖为主要成分的组合物。该组合物具有降血脂作用，可用于预防和治疗由高血脂症引起的心脑血管疾病。本发明也涉及该药物的药物制剂，属于医药技术领域。。

技术背景

脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于正常称为高血脂症。高血脂症是一种全身性疾病，是指血中胆固醇(TC)和／或甘油三酯(TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低。高血脂症的主要危害是导致动脉粥样硬化，进而导致众多的相关疾病，该病对身体的损害是隐匿、逐渐、进行性和全身性的。它的直接损害是加速全身动脉粥样硬化，因为全身的重要器官都要依靠动脉供血、供氧，一旦动脉被粥样斑块堵塞，就会导致严重后果。动脉硬化引起的肾功能衰竭等，都与高血脂症密切相关。大量研究资料表明，高血脂症是脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死独立而重要的危险因素。这些心脑血管性疾病的发病率高，危害大，病情进展凶险，其死亡率约占人类总死亡率的半数左右。目前调整血脂的药物很多，主要分为以下三类：(1)他汀类，以降低胆固醇为主，如舒降之、普拉固等；(2)贝特类：以降低甘油三酯为主，如诺衡、力平脂等；(3)天然药物类，对降低胆固醇和甘油三酯均有效，且可以升高高密度脂蛋白，具有综合调节血脂的功效，且副作用小，如龙泰牌降脂宁等。因为血脂增高是一个缓慢的过程，血脂的调节特别是消除血脂的不良影响也同样需要一个持续作用的过程，因此患者应根据自身的不同情况，选择降脂作用明显的药物。因此，一个安全有效、毒副作用小的降脂药物，正是高血脂患者所需要的。本发明正是符合该条件的天然药物在治疗高血脂方面的应用。

过去几年，中药类制剂和保健食品以及具有保健功能的食品已明显压倒西药成为大中型城市的主要使用品种，逐渐成为国内市场上的畅销品种。国内医药专家普遍认为：与西药制剂相比，中药制剂和保健食品具有“多靶点、多效应”作用，适合长期服用，在价格上也比西药更具竞争力，故中药类制剂和保健食品与作用单一的西药制剂相比更具优势。众所周知，中药是我国的“国粹”，使用中药类功能性食品用于降血脂无疑拥有广阔市场空间和良好发展前景。本发明具有利用中药“多靶点、多效应”的特点，科学合理的将分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖组方，可用于预防和治疗高血脂症，本发明完成前未发现有关以分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖组成的组合物作为防治高血脂疾病药物的报道,也未发现三者组方用于防治高血脂疾病的临床方面应用。

分蘖葱头为百合科葱属植物Allium cepa L.var.agrogatum Don.的鳞茎，盛产于我国东北各地,多为民间食用,又称毛葱，鬼子葱，小葱头。杨晓虹等对分蘖葱头干扰花生四烯酸代谢系列及有效成分进行研究，发现其提取物具有干扰血小板花生四烯酸代谢，抑制环氧化酶活性，抑制血栓素A₂（TXA₂）及12(S)-羟基-十七碳三烯酸（HHT）的合成等作用（1988年，药学学报，第1期，第8页）。杨晓红等报道了分蘖葱头正丁醇提取物具有抑制血小板聚集的作用（1999年，人参研究，第2期，第25页）。孙启良等对分蘖葱头研究表明，分蘖葱头既能明显抑制TXA₂合成，又能增强PGI₂合成，且本身又含有扩血管降血压的PGA₁单体（1988年，中草药，第4期，第146页）。苏曼曼等观察了分蘖葱头提取物对实验性高脂血症大鼠血清总胆固醇、甘油三脂、脂蛋白胆固醇代谢的影响及其抗氧化作用（2005年，吉林大学硕士研究论文），但是，该实验用的分蘖葱头提取物为一种混合物，没有明确药效物质。本发明人杨晓虹的另一个发明专利（专利号03127033.6）报道，分蘖葱头提出物具有调血脂的作用，但是其中的提取物是一种混合物，含有含氮化合物及萜类成分，而且其降血脂活性尚需要进一步提高。本发明人的博士生张沐新论文报道了（2007年）分蘖葱头总黄酮的制备方法，利用乙醇提取，大孔树脂进行分离，但是其制备方法需要进一步优化纯化，以便更加适合总黄酮的富集。

荷叶系睡莲科莲属植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶。陶波等通过研究荷叶水煎剂对高脂血症大鼠血脂及血液流变学具有影响作用，但是其研究提取物是一种混合物（2001年，中医药信息，第2期，第4页）。涂长春等以肥胖高脂血症大鼠为模型，对荷叶生物总碱的药效作用进行了研究（2001年，江西中医学院学报，第3期，第120页），结果表明荷叶生物总碱明显抑制肥胖大鼠的体重增长，并且可使肥胖高脂血症大鼠TC、TG及动脉硬化指数(AI)明显下降，虽然说明了荷叶总碱具有降血脂作用，但是并没有明确其中的药效物质是哪一种，而且降脂活性不理想。龚康敏等对于荷叶预防大鼠高脂血症的作用进行了观察（1998年，中国中医药科技，第5期，第294页），结果发现荷叶组大鼠的TC、TG、LDL-C、AI以及全血比粘度、红细胞压积均显著低于模型组，同时脂肪肝数、体重增值较模型组显著降低，认为荷叶具有改善血液的浓、粘状态，减缓体重增值的作用，并且可以抑制脂肪肝的发生，该试验也是一种混合物，没有明确药效物质。朱兰镇报道了荷叶总生物碱提取物具有调节高血脂大鼠血脂的作用（2010年，黑龙江医药，第3期，第364页），但是没有总生物碱中各个药效成分及含量，并且用于药效学试验的提取物也是一种很粗的提取物。

木耳多糖是从木耳中提取的多糖成分，具有降血脂降低胆固醇的功效。木耳多糖能明显降低高血脂症大鼠血清游离胆固醇、胆固醇脂、三酰甘油、β-脂蛋白含量，降低高胆固醇引起的小鼠高胆固醇血症的形成（《中国药科大学学报》1989，6；《第五届全国药用真菌学术会议论文集》1990）。木耳多糖可明显延长家兔特异性血栓及纤维蛋白血栓的形成时间，缩短血栓长度，减轻血栓湿重和干重，减少血小板数，降低血小板粘附率和血液粘度，并可明显缩短豚鼠优球蛋白溶解时间，降低血浆纤维蛋白原含量，升高纤溶酶活性，具有明显抗血栓形成的作用（《药用真菌》1988，1）。但是没有任何提示或暗示与分蘖葱头提取物共同使用，更没有发现其协同作用。因此，本发明的目的是提供一种疗效更高的组合物，将分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖进行组合，使其发挥互补性的协同作用。

本发明人基于以前多年从事分蘖葱头研究的经验，利用活性追踪技术进一步分离并筛选出分蘖葱头中的黄酮类成分，并成功地制备了以分蘖葱头黄酮为基本活性成分用于预防和治疗高脂血症和肥胖症，同时配伍以荷叶生物碱及木耳多糖，根据拆方实验，完成本发明。

虽然现有技术中分别公开了分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖都具有降脂作用，但是，没有将其联合用于降脂的报道。本发明的发明人发现，三者在降脂方面具有互补性，将分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖联合后，意想不到地获得了更好的效果。本发明人根据三类成分拆分组方，发现了三类成分按照一定比例组方，较单一分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖具有更加明显的药理活性，较三类成分任意两种组合具有较好的药理活性。因此，本发明的发明人对三种成分进行科学合理组方，得到了具有预防和治疗高血脂症组合物，并且，发明人还详细研究了分蘖葱头黄酮及荷叶生物碱中的主要药效物质，并且确定了其中各个成分的范围。本发明完成前，还未有由分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖组成的组合物具有防治高血脂症的报道。

发明内容

本发明人对分蘖葱头、荷叶及木耳的有效成分进行了研究，寻找到了活性更强、实用性强的有效部位，用于高血脂症的预防和治疗。更进一步地，本发明的发明人通过进一步的研究发现，分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖按一定比例配方组成的组合物较单一成分分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖在调节血脂方面有更显著的作用。这种天然的药物组合物是本发明人首次通过实验筛选得到，也体现了复方中药的协同作用，具有突出的贡献及显著的技术进步。

因此，本发明一个目的是提供一种用于预防和治疗高血脂症的组合物，其中活性成分由分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖组成。

本发明再一个目的是提供该组合物的优选重量百分比，在从属权利要求中得到体现。其特征在于按重量百分比计：分蘖葱头黄酮占30-65%、荷叶生物碱占20-40%、木耳多糖占10-40%，优选分蘖葱头黄酮占50%、荷叶生物碱占30%、木耳多糖占20%。

本发明另一个突出贡献在于，将人们长期食用的分蘖葱头，首次用于药品或保健食品，提供一种可以用于治疗疾病的新的药用资源。同时本发明将分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖按照最佳比例组方，制成各种制剂，掩盖了分蘖葱头的气味，适用人群更广泛。同时，本品原料便宜，制备工艺简单，体现了价格低廉的优点。并且本品疗效确切，无毒副作用，服用方便，剂型科学，体现了本发明的实用性。

本发明采用了乙醇提取和大孔树脂柱层析的方法纯化分蘖葱头黄酮，可操作性强，适合工业生产。本发明首次采用了乙醇提取分蘖葱头的提取液不经过浓缩，直接在大孔树脂柱上吸附纯化，解决了乙醇或甲醇提取液浓缩后药液粘度大，不利于在大孔树脂柱上吸附纯化的问题。由于通过试验选择使用合适型号的大孔树脂进行纯化，使有效成分更加富集，更利于今后制成药品或者保健食品的应用。本发明中先通过大孔树脂柱除掉大部分的粘液质，再进一步的纯化，也是本发明的创新点之一。

传统上对于荷叶的提取方法一般为水提，在本发明中，发明人通过试验发现用水进行提取指标性有效成分荷叶碱的转移率非常低，仅可达到15%左右。而采用适当浓度（通过试验选取的浓度为40-90％乙醇）进行提取，其转移率可达到75%左右。因此，通过醇提可将荷叶碱更充分地提取出来，再通过阳离子交换树脂进行进一步的纯化，使荷叶碱得到更有效的富集。因此，本发明对于荷叶碱的提取技术与以往的技术相比，具有突出的特点和显著的技术进步，也是本发明所具有的创新点。

本发明首次将利用大孔树脂吸附纯化得到分蘖葱头黄酮，阳离子交换树脂吸附纯化得到荷叶生物碱及水提取、乙醇沉淀、透析得到木耳多糖组合应用于药品及保健食品中。这种采用活性成分富集的办法得到分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖，三者按照比例配比，得到具有降血脂作用的组合物，此组合物较市场上现有荷叶制剂及木耳制剂相比服用量小，疗效确切，是一种高端的药品及保健食品，具有明显的创新性及显著的技术进步。

本发明的另一目的是提供了分别从分蘖葱头、荷叶及木耳中提取活性组分的方法，以及将活性组分制成组合物制剂的制备方法，该方法包括：

（1）将分蘖葱头切碎，用5-10倍的70-95%的乙醇提取2-3次，每次1-3小时，提取液直接通过已处理好的D101大孔树脂柱，接着用60-80%乙醇洗脱3-5倍柱体积，收集流出液及乙醇洗脱液，回收乙醇至无乙醇味，再次通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗脱3-6倍柱体积，再用60-80%乙醇洗脱3-5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得到分蘖葱头总黄酮；

（2）取荷叶，加6-15倍量40-90％乙醇，回流提取1-3次，每次提取1-3小时，过滤，滤液回收乙醇，提取物加0.2-2％盐酸水溶液分散溶解，使每1ml含1g药材，以3000转/分钟的转速离心，取上清液，通过D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂，先用10-50％乙醇洗脱3-5倍树脂体积进行除杂，再用50-90％氨性乙醇(氨浓度为1％)洗脱4-7倍树脂体积，收集氨性乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为荷叶生物碱。

（3）取黑木耳，加8-16倍量水提取2-4次，每次1-3小时，过滤，滤液浓缩，加乙醇至乙醇浓度为80%，放置，过滤，滤渣透析，透析液浓缩，干燥，得木耳多糖；

（4）将制得的分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖按配方比例混合后，再与药用辅料一起混合，按常规方法制成药物制剂。

本发明以分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖组方。通过调节脂质代谢，提高自由基清除酶活性、抵抗体内自由基及过氧化脂质，调节PGI₂/TXA₂平衡；通过胰脂肪酶抑制剂作用达到降低血脂的作用；通过有效增强机体的免疫机制，加快肝胆循环，使肝内生存的酮体和肝外组织所能利用的限度达到很好的一个平衡，从而降低了血脂在血液中的堆积；通过3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMG－CoA）还原酶抑制剂作用达到降低血脂的作用。体现了中药化学成分之间协同增效，多靶点、多部位入手，从而到达防治高血症的作用，具有组方的新颖性和创新性。同时，本发明将分蘖葱头黄酮及荷叶生物碱中的主要化学成分进行研究，确定了主要化学成分的比例，具有明显的技术进步。

本发明突出贡献提供一种具有降血脂作用的组合物，其特征在于按重量百分比计：分蘖葱头黄酮占30-65%、荷叶生物碱占20-40%、木耳多糖占10-40%，优选分蘖葱头黄酮占50%、荷叶生物碱占30%、木耳多糖占20%。

本发明另一贡献在于分蘖葱头黄酮主要由槲皮素、槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3，4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷组成，三者总含量占分蘖葱头黄酮的50-85%，其中槲皮素占20-45%，槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷占10-30%，槲皮素-3，4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷占10-30%。荷叶生物碱主要由荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱组成，三者总含量占荷叶生物碱的55-95%，其中荷叶碱占15-55%，原荷叶碱占10-40%，前荷叶碱占10-25%。

为实现以上发明，采用以下方案确定分蘖葱头黄酮及荷叶生物碱中主要化学成分的配比组成。取提取的分蘖葱头黄酮，用甲醇溶解，利用常压或中低压ODS柱进行分离，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（44:56）为流动相，分别收集槲皮素、槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷流分，点样，合并，得到高纯度的槲皮素、槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷；取提取的荷叶生物碱，用甲醇溶解，利用常压或中低压ODS柱进行分离，以乙腈-0.1%三乙胺水溶液为流动相，梯度洗脱，分别收集荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱流分，点样，合并，得到高纯度的荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱。以上采用常压或中低压分离柱，可跟据需要设计柱的规格，分离柱可反复使用，易操作，可大量制备以上化合物，并且各化合物的纯度高。

为实现以上技术方案，分蘖葱头黄酮中各化合物含量及总黄酮含量通过以下方法测定：

槲皮素、槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷含量测定方法：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.1%磷酸水=44：56为流动相；检测波长为370nm。理论板数按槲皮素峰计算不低于3000。

对照品溶液的制备 精密称取槲皮素、槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷对照品各8mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备 取本品20mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定方法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品10.0mg，置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

标准曲线的制备：取对照品10mg，用无水乙醇配制成每1mL含0.2mg的溶液，依次取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL置于1OmL容量瓶中，精密加入1％AlCl₃溶液3mL,用无水乙醇定容，摇匀后室温放置30min，随行空白，于波长370nm处测吸收度，以含量为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线。

供试品溶液的制备 取本品内容物10.0mg，置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法 精密量取供试品溶液0.3mL，置10mL量瓶中，精密加入1%AlCl₃溶液3mL，用无水乙醇定容，摇匀后室温放置30min，随行空白。照分光光度法，在波长370nm处分别测定吸收度，计算。

为实现以上技术方案，荷叶生物碱中各化合物含量及总生物碱含量通过以下方法测定：

荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱含量测定方法：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－0.1%三乙胺水溶液为流动相，梯度洗脱，具体比例见下表；检测波长为270nm。理论板数按荷叶碱峰计算不低于3000。

对照品溶液的制备精密称取荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱对照品各5mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取本品20mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

总生物碱含量测定方法：

对照品溶液的制备 称取荷叶碱对照品约4mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml至10ml量瓶，加氯仿至刻度，作为对照品溶液。

标准曲线的制备：精密吸取荷叶碱对照品溶液0，0.3，0.6，0.9，1.2，1.5和1.8ml，蒸干，分别加入pH为5.0溴甲酚绿缓冲液4ml，氯仿6ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中静置2h，分取氯仿层于415nm波长处测定吸光度。以荷叶碱对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备 称取荷叶生物碱25mg，精密加入氨水0.5ml，氯仿25ml，常温下超声提取30min，放冷，滤过，滤渣用少量溶剂洗涤两次，合并溶剂，并定容至50ml量瓶中，备用。

测定法 取1ml提取液，蒸干，加入4ml pH5.0溴甲酚绿缓冲液，6ml氯仿，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中，静置2h，分取氯仿层，在415nm波长处测定其吸光度，计算。

为了实现以上技术方案，木耳多糖的含量通过以下方法测定：

对照品溶液的制备 取105℃干燥3h的葡萄糖10.0mg，精密称定，加蒸馏水定容于10ml容量瓶中，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备 取木耳多糖1.0g，加水50ml使溶解，再加入95%乙醇使含醇量达到80%，以250r/min离心15min，倾去上清液，残渣挥干溶剂后，用水溶解并定容为100ml，成为供试品溶液。

标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml置干燥具塞试管中，分别加水使成2.0ml，再分别加人4%苯酚溶液1.0ml，摇匀，最后迅速加人浓硫酸7.0ml，充分振摇，在40℃水浴中加热30min，取出置冷水浴中放5min，在490nm处进行比色测定，计算回归方程。

测定 分别取供试品溶液2.0ml，再分别加人4%苯酚溶液1.0ml，摇匀，最后迅速加人浓硫酸7.0ml，充分振摇，在40℃水浴中加热30min，取出置冷水浴中放5min，在490nm处进行比色测定，

由分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖组成的组合物（简称组合物）具有防治高血脂症作用，通过以下药效学实验得到证实。

实验原料：本药效学中用到的组合物、各种比例配比的样品及单一提取物均为发明人提供。

本药效学试验中提到的组合物为分蘖葱头黄酮：荷叶生物碱：木耳多糖（5:3:2），由实例1-3提取方法提取得到分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖，按照实例4配置而成。

本药效学试验中提到的分蘖葱头黄酮为实例1提取的样品、荷叶生物碱为实例2提取的样品、木耳多糖为实例3提取的样品。

本药效学试验中提到的组合物1为分蘖葱头黄酮：荷叶生物碱：木耳多糖按（1:1:1）的比例组成，所用的三者原料为实例1-3提取方法提取得到。

本药效学试验中用到的血脂康胶囊为北京北大维信生物科技有限公司生产，批号为：20120301。

1、本品组合物对大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响

取雄性大鼠80只，随机分为8组，除空白对照组外，其余各组每天给予高脂饲料：2％胆固醇，10％猪油，0.5％胆酸钠，0.2％丙基硫氧嘧啶，87％基础饲料。除空白对照组自由饮水外，高脂模型组给予等量生理盐水，其余各组灌胃给药，每日1次，按照表1分组，给药，连续给药15d。用药后禁食12h，测定血清总胆固醇（TC）、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量，结果见表1。

表1、本品组合物对高脂血症大鼠血脂指标的影响结果

与模型对照组比较，^*P<0.05；^**P<0.01；与正常组比较，^△P<0.05；^△△P<0.01；

结果表明，模型对照组血清TC、TG、LDL-C值明显升高，HDL-C明显下降。与模型对照组比较，本品组合物能明显降低血清TC、TG含量，显著降低血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量，显著升高血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量。同时，说明本发明组合物较单一分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖均具有较强的活性。同时，说明本发明组合物较蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖按照（1：1:1）组成的组合物具有较强的活性。

2、肝组织MDA及SOD测定

末次取血后将动物断头处死，取大鼠肝左叶0.1g制备10%组织匀浆，3000rpm离心15min，再取上清1500rpm离心10min，利用总蛋白试剂盒测定蛋白浓度（考马斯亮蓝法），按试剂盒说明测定MDA含量及SOD活性。

表2、本品组合物对大鼠肝组织内MDA及SOD的影响

与模型对照组比较，^*P<0.05；^**P<0.01；与正常组比较，^△P<0.05；^△△P<0.01；

结果显示，本品组合物高、中、低剂量组均有清除体内脂质过氧化产物MDA的能力，并随剂量的增加，效果加强。对SOD活力也有提高的能力。但是，无论是分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱还是木耳多糖均较组合物的活性差。同时说明，本发明组合物较分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖按照（1:1:1）比例组成的组合物活性较强。

3、本品组合物对肝脂变的影响

取肝左叶，浸入20％中性甲醛溶液中固定，常规HE染色，光镜下观察。结果显示，空白组织无肝脂变，高脂模型肝脂变达85%以上为重度脂肪肝；本品组合物低剂量组肝脂变约为70%为中度脂肪肝，中剂量组肝脂变约为50%为轻度脂肪肝，高剂量组肝脂变约为35%为轻度脂肪肝。说明本发明组合物有抑制脂肪肝发展并逆转脂肪肝的作用。分蘖葱头黄酮组（600mg/kg）肝脂变约为70%为中度脂肪肝，荷叶生物碱组（600mg/kg）肝脂变约为60%为中度脂肪肝，木耳多糖组（600mg/kg）肝脂变约为70%为中度脂肪肝，组合物1肝脂变约为65%，为中度脂肪肝。说明单一分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖较本发明组合物活性弱。同时说明，本发明组合物较蘖葱头黄酮、荷叶生物碱、木耳多糖按照（1：1:1）的比例组成的组合物活性强。

从以上的药效学实验可知，本品组合物具有较强降血脂的作用。药理试验数据说明，本发明组合物高、中、低剂量组与对照组相比均具有显著性差异，本发明组合物较分蘖葱头黄酮组、荷叶生物碱组及木耳多糖组均表现出更强的药理活性，体现了本发明的创新性及显著的技术进步。

本发明是通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明仅限于此，具体实施方案如下：

实施例1分蘖葱头黄酮的制备方法

将分蘖葱头切碎，称取20kg，用10倍的85%的乙醇提取3次，每次2小时，过滤，滤液合并，直接通过已处理好的D101大孔树脂柱，接着用70%乙醇洗脱4倍柱体积，收集流出液及乙醇洗脱液，回收乙醇至无乙醇味，再次通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗脱4倍柱体积，再用70%乙醇洗脱5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得到分蘖葱头总黄酮。测定各个成分的含量，槲皮素含量为35.5%，槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量为20.6%，槲皮素-3，4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷含量为21.2%。总黄酮的含量为98.9%。

实施例2荷叶生物碱的制备方法

取荷叶20kg，加10倍量80％乙醇，回流提取2次，每次提取3小时，过滤，滤液回收乙醇，提取物加1.0％盐酸水溶液分散溶解，使每1ml含1g药材，以3000转/分钟的转速离心，取上清液，通过D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂，先用30％乙醇洗脱4倍树脂体积进行除杂，再用75％氨性乙醇(氨浓度为1％)洗脱6倍树脂体积，收集氨性乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为荷叶生物碱。测定各个成分的含量，荷叶碱含量为30.6%，原荷叶碱占15.9%，前荷叶碱占16.8%，总生物碱的含量为86.9%。

实施例3木耳多糖的制备方法

取黑木耳20kg，加10倍量水提取3次，每次2小时，过滤，滤液浓缩至每1ml含0.8g药材，加乙醇至乙醇浓度为80%，放置过夜，过滤，滤渣透析，透析液浓缩，干燥，得木耳多糖；多糖的含量为93.8%。

实例3胶囊剂

称取分蘖葱头黄酮100g，荷叶生物碱60g，木耳多糖40g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。每次1粒、每日2次。

实例4片剂

称取分蘖葱头黄酮100g，荷叶生物碱60g，木耳多糖40g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，压片，制成1000片，即得。每次1片、每日2次。

显然，本领域技术人员在阅读说明书后可作各种改良和补充，但是并未超出本发明的精神和权利要求书范围。

Claims (9)

1.一种具有降血脂作用的组合物，其特征在于：按重量百分比计：分蘖葱头黄酮占30-65％，荷叶生物碱占20-40％，木耳多糖占10-40％。

2.根据权利要求1所述的具有降血脂作用的组合物，其特征在于，按重量百分比计：分蘖葱头黄酮占50％，荷叶生物碱占30％，木耳多糖占20％。

3.根据权利要求1-2中任意一项所述的的组合物，其特征在于,所述分蘖葱头黄酮主要由槲皮素、槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3，4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷组成，三者总含量占分蘖葱头黄酮的50-85％。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述分蘖葱头黄酮中，按重量百分比计：槲皮素占20-45％，槲皮素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷占10-30％，槲皮素-3，4'-二-O-β-D-葡萄吡喃糖苷占10-30％。

5.根据权利要求1-2中任意一项所述的组合物，其特征在于，所述荷叶生物碱主要由荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱组成，三者总含量占荷叶生物碱的55-95％。

6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述荷叶生物碱中，按重量百分比计：荷叶碱占15-55％，原荷叶碱占10-40％，前荷叶碱占10-25％。

7.根据权利要求1所述的一种具有降血脂作用的组合物，其特征在于：所述组合物的制备方法包括以下步骤：

(1)将分蘖葱头切碎，用5-10倍的70-95％的乙醇提取2-3次，每次1-3小时，提取液直接通过已处理好的D101大孔树脂柱，接着用60-80％乙醇洗脱3-5倍柱体积，收集流出液及乙醇洗脱液，回收乙醇至无乙醇味，再次通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗脱3-6倍柱体积，再用60-80％乙醇洗脱3-5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得到分蘖葱头总黄酮；

(2)取荷叶，加6-15倍量40-90％乙醇，回流提取1-3次，每次提取1-3小时，过滤，滤液回收乙醇，提取物加0.2-2％盐酸水溶液分散溶解，使每1ml含1g药材，以3000转/分钟的转速离心，取上清液，通过D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂，先用10-50％乙醇洗脱3-5倍树脂体积进行除杂，再用氨浓度为1％的50-90％氨性乙醇洗脱4-7倍树脂体积，收集氨性乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为荷叶生物碱；

(3)取黑木耳，加8-16倍量水提取2-4次，每次1-3小时，过滤，滤液浓缩，加乙醇至乙醇浓度为80％，放置，过滤，滤渣透析，透析液浓缩，干燥，得木耳多糖；

(4)将制得的分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖按配方比例混合后，再与药用辅料一起混合，按常规方法制成药物制剂。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的组合物在制备防治高血脂症的药品和保健食品中的应用。

9.权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将分蘖葱头切碎，用5-10倍的70-95％的乙醇提取2-3次，每次1-3小时，提取液直接通过已处理好的D101大孔树脂柱，接着用60-80％乙醇洗脱3-5倍柱体积，收集流出液及乙醇洗脱液，回收乙醇至无乙醇味，再次通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗脱3-6倍柱体积，再用60-80％乙醇洗脱3-5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得到分蘖葱头总黄酮；

(2)取荷叶，加6-15倍量40-90％乙醇，回流提取1-3次，每次提取1-3小时，过滤，滤液回收乙醇，提取物加0.2-2％盐酸水溶液分散溶解，使每1ml含1g药材，以3000转/分钟的转速离心，取上清液，通过D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂，先用10-50％乙醇洗脱3-5倍树脂体积进行除杂，再用氨浓度为1％的50-90％氨性乙醇洗脱4-7倍树脂体积，收集氨性乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为荷叶生物碱；

(3)取黑木耳，加8-16倍量水提取2-4次，每次1-3小时，过滤，滤液浓缩，加乙醇至乙醇浓度为80％，放置，过滤，滤渣透析，透析液浓缩，干燥，得木耳多糖；

(4)将制得的分蘖葱头黄酮、荷叶生物碱及木耳多糖按配方比例混合后，再与药用辅料一起混合，按常规方法制成药物制剂。