CN101366829B - 一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及农副产品深加工领域，特别是一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法，其独到之处在于：以新鲜荷叶为原料，依次经过荷叶预处理、酸性醇溶液提取、石油醚脱脂、超滤膜浓缩、凝胶强酸性阳离子交换树脂富集纯化生物碱，层析聚酰胺树脂吸附纯化荷叶黄酮等环节，采用一步法同时获得生物碱和黄酮两种产品。本发明的优点在于：该方法不仅可以运用于大规模工业生产，而且制备的产品纯度高，满足国家二类新药原料提取物的要求。

Description

一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法

技术领域

本发明涉及农副产品深加工领域，特别是一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法。

背景技术

荷叶为天然药食两用成分，荷叶中含有丰富的黄酮和生物碱等生物活性因子，其“三降”和减肥等功效近年来倍受关注。

目前，研究提取荷叶中的黄酮和生物碱的文献报道较多。如专利文献ZL02139048.7、CN 200610141952.0、CN 200610085626.2都公开了荷叶黄酮的提取方法；CN 200610069039.4、CN 200710009464.9虽然公开了同时提取分离荷叶黄酮和生物碱方法，但其缺点在于产品杂质含量高、纯度低，没能达到国家二类新药对提取物纯度的要求。非专利文献如“荷叶黄酮及生物碱的提取研究”(陈海光等，《食品科学》，2002，23(1)：69-72)报道了水提法工艺；“HP-20树脂分离与纯化荷叶黄酮的技术研究”(肖文军等，《天然产物研究与开发》，2007，19(4)：692-695)报道了大孔树脂纯化荷叶黄酮；“荷叶总生物碱的提取与纯化研究”(李宇亮等，《应用化工》，2007，36(1)：4-6)报道了90％乙醇提取，大孔树脂纯化荷叶总生物碱。至今为止，荷叶中黄酮和生物碱的提取还没有工业化生产，其技术仍处于研究探索阶段。

现有关于荷叶黄酮和生物碱提取的技术方案，其缺陷在于提取液上柱前未进行脱脂去杂，更未去除大分子杂质，上柱后对树脂污染很大，产品得率低，纯度不高，难于大规模工业生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法，该方法不仅可以运用于大规模工业生产，而且制备的产品纯度高，满足国家二类新药原料提取物的要求。

实现本发明目的的技术方案是：一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法，其特征在于：包括以下步骤，

1.1.将新鲜荷叶清洗、风干，粉碎，过20目，得荷叶粉末；

1.2.将荷叶粉末与50％～70％、pH为2～3的乙醇溶液，按质量比1∶15～20混合置入提取釜中，升温到60～70℃提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液；

1.3.减压浓缩提取液至乙醇量的1/10～1/15，得浓缩提取液，再过滤除去沉淀物；

1.4.加入石油醚，搅拌萃取，静置30分钟～1小时，除去脂溶性杂质，得萃余液；

1.5.用0.1mol/L NaOH溶液调萃余液pH值为8～11，静置，过滤除去碱不溶性杂质，用0.1mol/L醋酸溶液调pH值至中性，加入萃余液10～15倍的蒸馏水稀释后，在温度为25℃压力为0.15Mpa的环境下用5040PP聚丙烯超滤膜过滤，除去水溶性大分子杂质，直至料液剩10％～20％，加蒸馏水透析2～3次，得超滤浓缩液；

1.6.将超滤浓缩液加入装有苯乙烯系凝胶强酸阳离子交换树脂的上端，直至生物碱吸附饱和，用2～3倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液以及2～3倍树脂量30％乙醇溶液洗涤吸附力较生物碱弱的杂质；

1.7.用8～10倍树脂量pH值为6～6.5浓度为55～60％乙醇酸溶液洗脱生物碱，减压回收乙醇，冷却生物碱洗脱液至开始析出生物碱晶体，在6～8℃下静置养晶，过滤，得生物碱粗品，再用5～6倍量的乙醚于70～80℃条件下萃取2～3次，每次萃取时间为40分钟～1小时，合并萃取液，回收乙醚后，析出生物碱晶体；

1.8.将步骤1.6中未被阳离子交换树脂吸附的残余料液，用层析聚酰胺树脂吸附荷叶黄酮至饱和，再用3～4倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液和洗涤吸附力较荷叶黄酮弱的杂质；

1.9.用8～10倍树脂量30～40％乙醇溶液洗脱荷叶黄酮，减压浓缩至黄酮洗脱液一半后，再用等量的、水饱和的乙酸乙酯萃取1～2次，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥、粉碎得荷叶黄酮粉末。

本发明的优点在于：1.用一步法同时提取黄酮和生物碱，工艺简便，易于操作和大规模生产。2.采取去杂和后处理工艺，提高了荷叶黄酮和生物碱产品的纯度与品质，满足国家二类新药原料提取物的要求。

具体实施方式

本发明涉及农副产品深加工领域，特别是一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法，其独到之处在于：包括以下步骤，

1.1.将新鲜荷叶清洗、风干，粉碎，过20目，得荷叶粉末；

1.2.将荷叶粉末与50％～70％、pH为2～3的乙醇溶液，按质量比1∶15～20混合置入提取釜中，升温到60～70℃提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液；

1.3.减压浓缩提取液至乙醇量的1/10～1/15，得浓缩提取液，再过滤除去沉淀物；

1.4.加入石油醚，搅拌萃取，静置30分钟～1小时，除去脂溶性杂质，得萃余液；

1.5.用0.1mol/L NaOH溶液调萃余液pH值为8～11，静置，过滤除去碱不溶性杂质，用0.1mol/L醋酸溶液调pH值至中性，加入萃余液10～15倍的蒸馏水稀释后，在温度为25℃压力为0.15Mpa的环境下用5040PP聚丙烯超滤膜过滤，除去水溶性大分子杂质，直至料液剩10％～20％，加蒸馏水透析2～3次，得超滤浓缩液；

1.6.将超滤浓缩液加入装有苯乙烯系凝胶强酸阳离子交换树脂的上端，直至生物碱吸附饱和，用2～3倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液以及2～3倍树脂量30％乙醇溶液洗涤吸附力较生物碱弱的杂质；

1.7.用8～10倍树脂量pH值为6～6.5浓度为55～60％乙醇酸溶液洗脱生物碱，减压回收乙醇，冷却生物碱洗脱液至开始析出生物碱晶体，在6～8℃下静置养晶，过滤，得生物碱粗品，再用5～6倍量的乙醚于70～80℃条件下萃取2～3次，每次萃取时间为40分钟～1小时，合并萃取液，回收乙醚后，析出生物碱晶体；

1.8.将步骤1.6中未被阳离子交换树脂吸附的残余料液，用层析聚酰胺树脂吸附荷叶黄酮至饱和，再用3～4倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液和洗涤吸附力较荷叶黄酮弱的杂质；

1.9.用8～10倍树脂量30～40％乙醇溶液洗脱荷叶黄酮，减压浓缩至黄酮洗脱液一半后，再用等量的、水饱和的乙酸乙酯萃取1～2次，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥、粉碎得荷叶黄酮粉末。

实施例一：

将新鲜荷叶清洗、风干，粉碎，过20目，得荷叶粉末；然后将荷叶粉末与50％、pH为2的乙醇溶液，按质量比1∶15混合置入提取釜中，升温到60℃提取2次，每次1小时，合并提取液；减压浓缩提取液至乙醇量的1/10，得浓缩提取液，再过滤除去沉淀物；接着加入石油醚，搅拌萃取，静置30分钟，除去脂溶性杂质，得萃余液；用0.1mol/L NaOH溶液调萃余液pH值为8，静置，过滤除去碱不溶性杂质，用0.1mol/L醋酸溶液调pH值至中性，加入萃余液10倍的蒸馏水稀释后，在温度为25℃压力为0.15Mpa的环境下用5040PP聚丙烯超滤膜过滤，除去水溶性大分子杂质，直至料液剩10％，加蒸馏水透析2次，得超滤浓缩液；再将超滤浓缩液加入装有C004苯乙烯系凝胶强酸阳离子交换树脂的上端，直至生物碱吸附饱和，用2倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液以及2倍树脂量30％乙醇溶液洗涤吸附力较生物碱弱的杂质；接下来用8倍树脂量pH值为6浓度为55％乙醇酸溶液洗脱生物碱，减压回收乙醇，冷却生物碱洗脱液至开始析出生物碱晶体，在6℃下静置养晶，过滤，得生物碱粗品，再用5倍量的乙醚于70℃条件下萃取2次，每次萃取时间为40分钟，合并萃取液，回收乙醚后，析出生物碱晶体，检测生物碱的纯度约为93％，收率约为72％；将未被阳离子交换树脂吸附的残余料液，用层析聚酰胺树脂吸附荷叶黄酮至饱和，再用3倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液和洗涤吸附力较荷叶黄酮弱的杂质；最后用8倍树脂量30％乙醇溶液洗脱荷叶黄酮，减压浓缩至黄酮洗脱液一半后，再用等量的、水饱和的乙酸乙酯萃取1次，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥、粉碎得荷叶黄酮粉末，检测荷叶黄酮的纯度为89％，收率为68％。

实施例二：

将新鲜荷叶清洗、风干，粉碎，过20目，得荷叶粉末；然后将荷叶粉末与70％、pH为3的乙醇溶液，按质量比1∶15混合置入提取釜中，升温到70℃提取3次，每次2小时，合并提取液；减压浓缩提取液至乙醇量的1/15，得浓缩提取液，再过滤除去沉淀物；接着加入石油醚，搅拌萃取，静置1小时，除去脂溶性杂质，得萃余液；用0.1mol/L NaOH溶液调萃余液pH值为11，静置，过滤除去碱不溶性杂质，用0.1mol/L醋酸溶液调pH值至中性，加入萃余液15倍的蒸馏水稀释后，在温度为25℃压力为0.15Mpa的环境下用5040PP聚丙烯超滤膜过滤，除去水溶性大分子杂质，直至料液剩20％，加蒸馏水透析3次，得超滤浓缩液；再将超滤浓缩液加入装有C004苯乙烯系凝胶强酸阳离子交换树脂的上端，直至生物碱吸附饱和，用3倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液以及3倍树脂量30％乙醇溶液洗涤吸附力较生物碱弱的杂质；接下来用10倍树脂量pH值为6.5浓度为60％乙醇酸溶液洗脱生物碱，减压回收乙醇，冷却生物碱洗脱液至开始析出生物碱晶体，在8℃下静置养晶，过滤，得生物碱粗品，再用6倍量的乙醚于80℃条件下萃取3次，每次萃取时间为1小时，合并萃取液，回收乙醚后，析出生物碱晶体，检测生物碱的纯度约为92％，收率约为70％；；将未被阳离子交换树脂吸附的残余料液，用层析聚酰胺树脂吸附荷叶黄酮至饱和，再用4倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液和洗涤吸附力较荷叶黄酮弱的杂质；最后用10倍树脂量40％乙醇溶液洗脱荷叶黄酮，减压浓缩至黄酮洗脱液一半后，再用等量的、水饱和的乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥、粉碎得荷叶黄酮粉末，检测荷叶黄酮的纯度为88％，收率为70％。

Claims (1)

1.一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法，其特征在于：包括以下步骤，

1.1.将新鲜荷叶清洗、风干，粉碎，过20目，得荷叶粉末；

1.2.将荷叶粉末与50％～70％、pH为2～3的乙醇溶液，按质量比1∶15～20混合置入提取釜中，升温到60～70℃提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液；

1.3.减压浓缩提取液至乙醇量的1/10～1/15，得浓缩提取液，再过滤除去沉淀物；

1.4.加入石油醚，搅拌萃取，静置30分钟～1小时，除去脂溶性杂质，得萃余液；

1.5.用0.1mol/L NaOH溶液调萃余液pH值为8～11，静置，过滤除去碱不溶性杂质，用0.1mol/L醋酸溶液调pH值至中性，加入萃余液10～15倍的蒸馏水稀释后，在温度为25℃压力为0.15Mpa的环境下用5040PP聚丙烯超滤膜过滤，除去水溶性大分子杂质，直至料液剩10％～20％，加蒸馏水透析2～3次，得超滤浓缩液；

1.6.将超滤浓缩液加入装有苯乙烯系凝胶强酸阳离子交换树脂的上端，直至生物碱吸附饱和，用2～3倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液以及2～3倍树脂量30％乙醇溶液洗涤吸附力较生物碱弱的杂质；

1.7.用8～10倍树脂量pH值为6～6.5浓度为55～60％乙醇酸溶液洗脱生物碱，减压回收乙醇，冷却生物碱洗脱液至开始析出生物碱晶体，在6～8℃下静置养晶，过滤，得生物碱粗品，再用5～6倍量的乙醚于70～80℃条件下萃取2～3次，每次萃取时间为40分钟～1小时，合并萃取液，回收乙醚后，析出生物碱晶体；

18.将步骤1.6中未被阳离子交换树脂吸附的残余料液，用层析聚酰胺树脂吸附荷叶黄酮至饱和，再用3～4倍树脂量的蒸馏水洗涤未发生离子交换的残余料液和洗涤吸附力较荷叶黄酮弱的杂质；

1.9.用8～10倍树脂量30～40％乙醇溶液洗脱荷叶黄酮，减压浓缩至黄酮洗脱液一半后，再用等量的、水饱和的乙酸乙酯萃取1～2次，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥、粉碎得荷叶黄酮粉末。