CN101007063A

CN101007063A - 一种荷叶提取物的制备方法与用途

Info

Publication number: CN101007063A
Application number: CN 200610141952
Authority: CN
Inventors: 陈剑锋; 郭养浩; 陈浩
Original assignee: Fuzhou University
Current assignee: Fuzhou University
Priority date: 2006-09-09
Filing date: 2006-09-23
Publication date: 2007-08-01

Abstract

本发明提供一种荷叶提取物的制备方法与用途。该制备方法的特征在于：以荷叶为原料，采用极性有机溶剂，提取以荷叶生物碱和荷叶黄酮为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂，真空浓缩成荷叶提取物。该荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，如：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，而且所制的荷叶提取物具有现代中药产品的“三高”、“三小”和“三便”等优点，能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广意义。

Description

一种荷叶提取物的制备方法与用途

技术领域

本发明涉及一种从植物中提取药用活性成分的绿色化工生产方法，更具体涉及一种荷叶提取物的制备方法与用途。

背景技术

荷叶(Nelumbo nucifera leaf)为睡莲科植物莲的叶子，又名莲叶或藕叶，是一种常用的药食两用中草药，在1991年11月中华人民共和国卫生部第45号文件中，荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”名单。

传统医学认为，荷叶性味寒，具有清暑利湿、减肥降脂、清心去热、止血利水的活性。现代药理研究表明，荷叶所含的黄酮和生物碱等成分为荷叶中主要的药用活性成分，具有明显的减肥、降脂、抑菌、抗病毒、解毒、戒毒、抗氧化、抗衰老、防治心脑血管疾病等功能[孔文琦等，《中药研究与信息》，2005，7(6)：22-24]。

在中国，荷叶资源丰富，价廉易得，药效明确，民间广泛用于食物和药物中，为不可多得的大宗天然药食两用植物资源。但在产地，大量荷叶被作为废弃物而未被合理利用，造成资源的极大浪费，也带来一定程度的环境污染。研究以荷叶生物碱和荷叶黄酮为主要药用成分的提取物的制备方法与用途，对于荷叶的综合利用和系列产品开发具有一定的指导意义。

陈海光等[《食品科学》，2002，23(1)：69-72；《食品与机械》，2001，17(5)：16-17]和蒋益虹[《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2004，30(5)：519-523]曾撰文报道了关于水提取法制取荷叶药用成分的一种方法。

通常，荷叶黄酮苷一般易溶于热水、甲醇、乙酸乙酯等极性有机溶剂，但是，荷叶黄酮苷元则不溶于水，只能溶于乙醇、甲醇、丙酮等极性有机溶剂水溶液，因此，采用水提取法不能将荷叶中的黄酮类化合物全部提取出。

虽然生物碱与酸作用生成盐类后，可溶于水中，荷叶中的生物碱常用偏酸性的水溶液提取，但荷叶中生物碱主要以苄基异喹啉类、阿朴啡类为主，碱性较弱，不能直接溶解于水，采用水提取法也存在着荷叶生物碱提取率不高的缺点。

另外，由于荷叶化学成分复杂，既含有易溶于乙醇等极性有机溶剂的生物碱、黄酮等醇溶性药用活性成分，也含有易溶于水或缓冲液的蛋白质、酶、多糖等水溶性生物大分子杂质和无机盐、有机酸、氨基酸、低聚糖等水溶性生物小分子杂质，甚至还含有易溶于石油醚等非极性有机溶剂的叶绿素、蜡状物、油脂、树胶、精油等脂溶性杂质成分。因此，采用水提取方法制备的荷叶提取物，虽然含有荷叶生物碱和荷叶黄酮等主要药用活性成分，但也有大量的蛋白质、多糖、精油、鞣质、叶绿素、无机盐和有机酸等杂质成分存在，产品明显存在易吸湿、保存困难、生物碱和黄酮的纯度不高、药效成分含量较低、药效不明显等缺陷，产品的品质、科技含金量和附加值均不高。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种荷叶提取物的制备方法，该制备方法不仅工艺简单、提取效率高，而且提取的生物碱和黄酮的收率高。

本发明的目的之二在于可按常规的制剂方法，将制备的荷叶提取物制成临床上可适用的任何一种具有减肥、降血脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或者抗氧化作用的口服药剂，如：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。

本发明荷叶提取物的制备方法，其特征在于：以鲜荷叶或荷叶粉末为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂，真空浓缩成荷叶提取物。

上述极性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂，优先选用甲醇或丙酮。这主要基于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮等极性有机溶剂的提取效果相当，但相对于其它极性有机溶剂而言，甲醇或丙酮的沸点更低、能耗更小，能显著降低产品的制备成本。

较之已有的提取方法而言，本发明采用甲醇、乙醇或丙酮等极性有机溶剂水溶液，提取以荷叶生物碱和荷叶黄酮等醇溶性药用活性成分为主要成分的荷叶提取物，其优点在于：

一是充分利用了荷叶生物碱和荷叶黄酮等活性成分与蛋白质、多糖、精油、无机盐等杂质成分在极性有机溶剂水溶液中溶解度的明显差异，真正达到了荷叶生物碱和荷叶黄酮等药用活性成分与杂质成分的高效分离。

二是甲醇、乙醇或丙酮等极性有机溶剂的溶解性能好，对荷叶植物细胞的穿透能力强，更容易渗透到荷叶内部组织结构中，大大提高了荷叶生物碱、荷叶黄酮等活性成分的溶出速率和提取效率。

三是甲醇、乙醇或丙酮等极性有机溶剂对荷叶生物碱、荷叶黄酮等目标活性物质的溶解度很大，而对蛋白质、多糖、精油、无机盐等杂质的溶解度较小，能使生物碱、黄酮等活性成分被高效地从荷叶中被选择性分离出来的同时，大大降低了提取液中蛋白质、多糖、精油、叶绿素等杂质的含量，更利于后续进一步的分离纯化和高纯度荷叶生物碱和荷叶黄酮的制备，显著提升了产品的品质和附加值，明显增加了产品的市场竞争力。

四是采用中药现代化生产技术提取荷叶主要药用活性成分制成国际通行的中药提取物，具有现代中药产品的“三高”、“三小”和“三便”等优点，能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策。

具体实施方式

本发明的制备方法是：以鲜荷叶或荷叶粉末为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂，真空浓缩成荷叶提取物。

本发明荷叶提取物的用途是：可按照常规的制剂方法制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂。所述的口服药剂为：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。

本发明各制备物的理化参数测定方法如下：

(1)荷叶黄酮含量的测定：采用高效液相色谱法，以槲皮素为对照。色谱条件：色谱柱选用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，预柱C18(3.9mm×15mm)，流动相为甲醇∶0.2％磷酸水溶液(45∶55)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长365nm，进样量20μL。样品的测定：取待测液4mL(或待测物粉末0.1g，溶于4mL溶剂中)，加甲醇6mL及12mol/L盐酸1mL，摇匀后置80℃水浴回流水解1h。而后将水解液转入50mL容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，作为HPLC待测液。HPLC测定过程中采用外标法定量，以槲皮素为对照，计算水解后各苷元的含量，统一用因子2.51计算荷叶黄酮含量。

(2)荷叶生物碱含量的测定：采用高效液相色谱法，以荷叶碱为对照。色谱条件为：色谱柱选用Waters Nova-Pak C₁₈柱(Φ3.9×15mm，4μm)，预柱C₁₈(3.9mm×15mm)，流动相为甲醇∶H₂O∶二乙胺(75∶25∶0.01，pH值9.0～10.5)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长270nm，进样量20μL。

(3)荷叶黄酮的定性判断采用铝盐比色法，以芦丁为对照。黄酮类化合物的测定可采用在亚硝酸盐存在时，Al(NO₃)₃在碱性条件下与黄酮形成络合物，在510nm波长处有最大吸收峰的特点，进行比色分析。将试样溶液稀释到一定的倍数，取1mL到试管中，加入0.1mL 5％NaNO₂溶液，摇匀，5min后加入0.1mL 10％Al(NO₃)₃溶液，6min后再加入1mL 1mol/L NaOH溶液，混匀，10min后若产生红色或紫红色表明存在荷叶黄酮，以试剂作为空白。

(4)荷叶生物碱的的定性判断采用碘-碘化钾比色法，以荷叶碱为对照。将试样溶液稀释到一定的倍数，取1mL到试管中，加入1～2滴碘-碘化钾试剂溶液，摇匀，放置5min，若产生棕色或褐色沉淀表明存在荷叶生物碱，以试剂作为空白。

本发明口服药剂制备方法如下：

(1)喷雾干燥条件为：进料液浓度10～20波美度(60℃)，PG-5型喷雾干燥机进口温度160～250℃，出口温度60～110℃，离心转头工作压力1.6～3.0kgf/cm²。

(2)胶囊剂制备：按照常规的制剂方法，选择1号硬胶囊，每粒内容物装填量约0.30g，于NJP-1000B型全自动硬胶囊充填机上进行药粉充填，于JPB-25IIB型平板式自动泡罩包装机上进行铝箔泡罩包装，可制成临床适用的荷叶提取物口服胶囊剂。

(3)滴丸剂制备：按照常规的制剂方法，调整TZDW-1型通用滴丸机的温度控制系统，使滴头温度保持在50～85℃，液体石蜡等冷却剂的温度保持在-4～40℃；取荷叶提取物及其1～9倍重量的甘油明胶，置于加热器中，在搅拌条件下加热制成混悬液，将其置于滴丸机的滴头罐内，通过滴头滴入冷却剂中，由滴丸机出口将收缩成型的滴丸取出，去掉表面的冷却剂，干燥成荷叶提取物口服滴丸剂。

(4)颗粒剂制备：按照常规的制剂方法，于SHK-220型高效湿法混合制粒机上造粒，于JXD-30A型颗粒自动包装机上进行包装，可制成临床适用的荷叶提取物口服颗粒剂。

本发明制备方法的实施例陈述如下：

实施例1

以福建省建宁产荷叶为原料，将鲜荷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过16～20目筛得荷叶粉末，将3.0kg荷叶粉末放入提取罐中，用荷叶粉末10倍干重(W/W)的40％甲醇水溶液，于63℃条件下提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为96.7％，荷叶生物碱的提取率为95.9％。

实施例2

将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末20倍干重(W/W)的30％甲醇水溶液，于50℃条件下提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为93.4％，荷叶生物碱的提取率为92.3％。

实施例3

将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末17倍干重(W/W)的65％甲醇水溶液，于80℃条件下回流提取1小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为92.7％，荷叶生物碱的提取率为91.2％。

实施例4

以福建省建宁产荷叶为原料，将鲜荷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过16～20目筛得荷叶粉末，将3.0kg荷叶粉末放入提取罐中，用荷叶粉末20倍干重(W/W)的65％乙醇水溶液，于80℃条件下提取1小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为92.1％，荷叶生物碱的提取率为90.4％。

实施例5

将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末15倍干重(W/W)的45％乙醇水溶液，于65℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为93.2％，荷叶生物碱的提取率为91.5％。

实施例6

将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末10倍干重(W/W)的38％乙醇水溶液，于50℃条件下提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为94.7％，荷叶生物碱的提取率为95.1％。

实施例7

以福建省建宁产荷叶为原料，将鲜荷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过16～20目筛得荷叶粉末，将3.0kg荷叶粉末放入提取罐中，用荷叶粉末14倍干重(W/W)的30％丙酮水溶液，于50℃条件下提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为94.6％，荷叶生物碱的提取率为93.8％。

实施例8

将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末10倍干重(W/W)的65％丙酮水溶液，于80℃条件下回流提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为93.2％，荷叶生物碱的提取率为92.1％。

实施例9

将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末20倍干重(W/W)的55％丙酮水溶液，于72℃条件下回流提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的提取率为92.9％，荷叶生物碱的提取率为90.8％。

关于本发明荷叶提取物用途的说明

将前述实施例1制备的荷叶提取物进行喷雾干燥，然后直接充填制成临床使用的口服胶囊，进行减肥降脂动物药效学评价。

1材料

雌性小鼠(体重14～16g)，由福建医科大学动物中心提供。基础饲料，购自福建医科大学动物中心。高脂饲料(基础饲料92.5％、食盐2％、蛋黄粉2％、猪油3％、胆固醇0.5％)，本所自制。总胆固醇(TCH)试剂盒(CHOD-PAP法)，浙江东欧生物工程有限公司。甘油三酯(TG)试剂盒(GPO-PAP法)，浙江东欧生物工程有限公司。丙二醛(MDA)试剂盒(TBA法)，南京建成生物工程研究所。胆固醇，上海试一化学试剂有限公司。

2实验方法

将小鼠以基础饲料饲养5天后随机分为A、B、C组，每组10只，小鼠自由进食和饮水，其中A、B、C组分别为荷叶提取物给药组、高脂阳性对照组、正常阴性对照组。A和B组采用高脂饲料造模，C组以基础饲料饲养，各组小鼠均在饲养7天后开始给药，各药物均配成1g/mL，给药量均为0.6ml/只·天，其中B组和C组改成生理盐水。分别给药42天，禁食12h后摘眼球取血并解剖，进行各项生化指标的测定。TCH、TG和MDA均用相应的试剂盒并严格按照说明书测定。数据用SPSS软件进行，采用Independent-Sample T Test方法对各组数据进行均值、标准误计算以及显著性检验。

3降脂动物药效学结果

荷叶提取物对小鼠血浆总胆固醇、甘油三酯和MDA含量的影响见表1。

给药42天后，高脂阳性对照组小鼠血浆的胆固醇比正常阴性对照组显著提高了96.7％，说明本实验条件下小鼠高胆固醇模型已建模成功。同时发现，给药组荷叶提取物的小鼠血浆胆固醇含量均显著低于高脂阳性对照组，胆固醇含量显著减少了34.3％，说明荷叶提取物样品有明显的降血脂、降胆固醇效果。

表1荷叶提取物对小鼠血浆总胆固醇、甘油三酯和丙二醛含量(X±SD)的影响 n＝10

Group	TCH(mmol/L)	TG(mmol/L)	MDA(mmol/L)
Group	TCH(mmol/L)	TG(mmol/L)	MDA(mmol/L)	A	2.34±0.32^***	1.13±0.12^**	6.62±0.98^**
B	3.56±0.50	1.49±0.24	11.06±2.63	A	2.34±0.32^***	1.13±0.12^**	6.62±0.98^**

C

1.81±0.24

1.24±0.10

9.64±2.16

A、B、C分别为荷叶提取物给药组、高脂阳性对照组、正常阴性对照组。

与高脂阳性对照组比较*：P＜0.05；**：P＜0.01；***：P＜0.001。

以上实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。

本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，而且所制的荷叶提取物具有现代中药产品的“三高”、“三小”和“三便”等优点，能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广意义。

Claims

1.一种荷叶提取物的制备方法，其特征在于：以荷叶为原料，采用极性有机溶剂，提取以荷叶生物碱和荷叶黄酮为主要药用成分的荷叶提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。

2.根据权利要求1所述的荷叶提取物的制备方法，其特征在于：以荷叶为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶提取物。

3.根据权利要求1或2所述的荷叶提取物的制备方法，其特征在于：所述极性有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂，优先选用甲醇或丙酮。

4.一种如权利要求1或2所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。

5.根据权利要求4所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。

6.根据权利要求3所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。

7.根据权利要求6所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。