CN102711515A - 含有荷叶提取物的用于水产饲料的小球藻悬浮液 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有缓冲剂的用于水产饲料的小球藻悬浮液，提供一种用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征为，含有荷叶提取物作为小球藻的活性保存剂。本发明的小球藻悬浮液不仅长期保存稳定性高，而且作为轮虫的饲料，可以维持高的小球藻活性，因此可有效地用于轮虫水产饲料中。

Description

含有荷叶提取物的用于水产饲料的小球藻悬浮液
技术领域
本发明涉及一种用于水产饲料的小球藻悬浮液，更详细地，涉及一种用于水产饲料的小球藻悬浮液，其含有荷叶提取物作为小球藻的活性保存剂。
背景技术
植物性浮游生物小球藻（Chorella）被广泛用作轮虫（Brachionusrotundiformis）等的主要饲料。所述轮虫在水产养殖场中作为海水鱼的初期饲料进行供应。已知小球藻含有对轮虫生长有利的成分，如蛋白质、维生素、矿物质、膳食纤维、叶绿素等。此外，小球藻的增殖能力强，已确立有工业生产方法，因此可稳定供应。
现今，作为轮虫的饲料而被商品化的大部分小球藻，通过在工厂等进行工业化生产，以高于培养结束阶段的浓度的浓缩悬浮液的形态移送到种菌培养器等中，然后提供给轮虫。以小球藻为饲料的轮虫，已知如果提供死亡的小球藻的情况下，其增殖会显著降低。因此，一直以来将用于轮虫饲料的小球藻以浓缩悬浮液的形态在0~4℃下冷藏保存。即，将小球藻放置在低温环境下，从而能够抑制小球藻的代谢，谋求小球藻的存活，但是，其存活期约为30天左右，因此存在长期保存稳定性低的问题。
为了解决含小球藻的悬浮液（以下称为“小球藻悬浮液”）保存稳定性低的问题，公开有以下方法。日本特开平10-295285公开了一种使用抗酸剂或缓冲剂来维持pH的小球藻悬浮液。根据日本特开平10-295285，其通过添加作为缓冲剂的磷酸二氢钠及磷酸氢二钠来制得小球藻悬浮液，在冰箱（1~4℃）中保存的情况下，pH值能够维持在高于6.4的状态，即使超过60天，小球藻也可以存活。
但是，如上述现有技术中指出的一样，虽然制备含缓冲剂的小球藻，可以将其用作轮虫养殖中的饲料，但是长期（例如，约60天）冷藏保存的小球藻悬浮液的情况下，出现了轮虫培养效率大幅降低的现象。这说明除了单纯地维持小球藻的存活数量之外，还需要维持作为轮虫饲料的小球藻的活性。
发明内容
要解决的技术问题
本发明人为了开发出不仅长期保存稳定性高，而且能够得到使作为轮虫饲料的小球藻活性维持得高的水性（aqueous）小球藻悬浮液的方法，进行了各种研究。尤其对于能够长期维持高的作为轮虫饲料的小球藻活性（以下，称为“小球藻活性”）的各种添加剂进行了试验。其结果，惊讶地发现将获自荷叶（lotus leaf）的提取物加入到小球藻悬浮液中时，能够长期地维持高的小球藻活性，并且可以稳定地进行小球藻的养殖。
此外，本发明的目的在于提供一种作为含缓冲剂的小球藻悬浮液，含有荷叶提取物作为小球藻的活性保存剂的小球藻悬浮液。
技术方案
对于含有缓冲剂的用于水产饲料的小球藻悬浮液，根据本发明的一个实施方式，提供一种用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征为，其含有荷叶提取物作为小球藻的活性保存剂。
优选地，所述荷叶提取物可以使用水、C1~C4的醇、或水与C1-C4的醇的混合溶剂作为提取溶剂获得。在悬浮液中，所述荷叶提取物的浓度范围可以为5~150ppm。此外，在悬浮液中，小球藻的浓度范围可以为120~150g（干重）/L。所述缓冲剂可以为磷酸氢二钠（Sodiumphosphate dibasic anhydrous）及磷酸二氢钠（Sodium phosphatemonobasic anhydrous）。
发明的效果
本发明指出了荷叶提取物可以作为小球藻的活性保存剂。此外，含缓冲剂及荷叶提取物的小球藻悬浮液不仅长期保存稳定性高，而且作为轮虫的饲料，可以维持高的小球藻活性，因此可有效地用于水产饲料中。
具体实施方式
对于含有缓冲剂的用于水产饲料的小球藻悬浮液，本发明提供一种用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征为，其含有荷叶提取物作为小球藻的活性保存剂。
所述小球藻可以无限制地包括：如普通小球藻（Chlorellavulgaris）、蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）、淡水规则小球藻（Chlorella regularis）、海水小球藻（Chlorella saccharophila）、索罗奇尼纳小球藻（Chlorella sorokiniana）等。只要是本领域技术人员可以获得的小球藻均包括在内。
作为原料使用的小球藻悬浮液可以采用根据小球藻通常的培养方法（例如韩国授权专利第10-0193748号）进行培养，然后向分离的小球藻中加入水进行悬浮的小球藻悬浮液。例如，所述培养可以在无菌槽中，按照无菌或有机异养（例如，使用无水葡萄糖作为糖原）来实施。可以在下述条件下进行流加培养。空气调至0.3~1.0vvm，在200~500rpm下搅拌，pH调节至6.5~7.5。将培养得到的小球藻通过连续离心分离，用水清洗后获得。对所述悬浮液中小球藻的浓度没有大的限制，但可以浓缩为120~150g（干重）/L的范围，优选120~140g（干重）/L的范围，更优选120~130g（干重）/L的范围。
本发明的用于水产饲料的小球藻悬浮液，作为小球藻的活性保存剂的荷叶提取物是指从荷花（Lotus，学名：Nelumbo nucifera）的叶子（leaf）中提取的提取物。对所述荷叶提取物的提取溶剂没有大的限制，例如，可以使用水、C1~C4的醇、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯或其混合溶剂。优选地，所述荷叶提取物可以使用水、C1~C4的醇、或水与C1~C4的醇的混合溶剂等极性溶剂进行提取而获得。更优选地，可以使用水或水与乙醇的混合溶剂进行提取而获得。所述提取可以在70~100℃，优选约85℃下，实施2~5小时，优选实施约3小时。分离上清液和沉淀物，可以获得上清液。所述提取可以重复实施2次以上，收集获得的上清液，使用通常的方法进行浓缩及干燥，从而可以制得荷叶提取物。此外，需要的情况下，可以将上清液通过过滤、离心分离等去除杂质，然后实施浓缩及干燥过程。当然，所述提取条件没有大的限制，本领域技术人员可以做适当的变形。此外，也可以按照韩国公开专利第10-2009-0105491号中公开的方法制备荷叶提取物。悬浮液中所述荷叶提取物的浓度范围为5~150ppm，优选约50ppm。
所述缓冲剂可以使用日本特开平10-295285中公开的缓冲剂，优选磷酸盐缓冲剂，即，磷酸氢二钠（Sodium phosphate dibasicanhydrous）及磷酸二氢钠（Sodium phosphate monobasic anhydrous）。磷酸氢二钠及磷酸二氢钠的浓度分别可以为约0.35M及约0.1M。悬浮液的最终pH范围为7~8.5。
如上所述，含缓冲剂及荷叶提取物的本发明的小球藻悬浮液不仅长期（2个月以上）保存稳定性高，作为轮虫的饲料，可以维持高的小球藻活性，因此可有效地用于水产饲料中。
下面，通过实施例及试验例对本发明进行更详细的说明。但是，下述实施例仅是用来例示本发明，本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
按照韩国授权专利第10-0193748号中公开的方法培养普通小球藻（Chlorella vulgaris），然后对培养得到的小球藻通过连续离心分离，使用水清洗，从而获得。向获得的小球藻中加入水，制备小球藻悬浮液。将小球藻悬浮液以干重125g/L的浓度进行浓缩后，加入磷酸氢二钠及磷酸二氢钠，使磷酸氢二钠为0.35M，磷酸二氢钠为0.1M，然后添加荷叶提取物，使其最终浓度为50ppm，从而制得小球藻悬浮液。制得的小球藻悬浮液的pH值为7.05。所述荷叶提取物使用了按照韩国公开专利第10-2009-0105491号中公开的制备方法（制备例1）获得的荷叶提取物。
实施例2
除了使荷叶提取物的最终浓度为5ppm之外，其余按照与实施例1相同的方法制得了小球藻悬浮液（pH7.05）。
实施例3
除了使荷叶提取物的最终浓度为150ppm之外，其余按照与实施例1相同的方法制得了小球藻悬浮液（pH7.05）。
比较例1
除了没有添加荷叶提取物，其余按照与实施例1相同的方法制得了小球藻悬浮液（pH7.05）。
试验例小球藻活性试验
使用海产轮虫类轮虫（Brachionus rotundiformis）作为轮虫，其购自江陵大学海洋生物研究中心。所述轮虫在1.6~1.9%的盐度及28~29℃的温度下实施了种菌培养，使用长0.5m，宽0.5m的滤网（filter）去除了培养中产生的渣滓。此外，使用泵连续提供了空气。轮虫的高浓度培养，除了使用长0.1m，宽0.25m的滤网，提供0.5vvm的纯氧之外，其余与种菌培养的方法相同。
将实施例1中制备的小球藻悬浮液分别分成4份，按照0天、30天、45天及60天在冰箱（1~4℃）中保存，然后提供给轮虫，对高浓度培养可能性进行了试验。此外，为了比较，将比较例1中制得的小球藻悬浮液在冰箱（1~4℃）中保存60天后，提供给轮虫，进行了相同的试验。
将轮虫菌种按照每CC约4000~5000只进行浓缩，放入装有5L培养水的6L的水槽中，边注入纯氧，同时注入空气，以用于培养水的搅拌。接种的轮虫在上述培养条件下培养了48小时。小球藻，其是用联动式微量泵进行调节，使得小球藻干重为2mg/1000只轮虫/24小时，连续进行提供，每12小时对轮虫孵卵率进行一次计数，并计算了根据所述计数的小球藻提供量。其结果如下表1所示。
表1
轮虫细胞数（只/cc）的变化
Figure BDA00001913004500061
如上述表1的结果，将只含有缓冲剂的小球藻悬浮液保存60天的情况下，培养24小时的轮虫的生产能力约为8525只/cc，相反地，将同时含有缓冲剂及荷叶提取物的小球藻悬浮液保存60天的情况下，培养24小时的轮虫的生产能力约为10625只/cc，约增加了25%。这表明不仅需要维持小球藻的存活率，而且使小球藻的活性变化最小化也很重要，荷叶提取物起到作为小球藻的活性保存剂的作用。虽然还没有确切地表明，荷叶提取物的量很少，但是由于其具有抗菌活性（参见韩国公开专利第10-2009-0105491号），因此可以得出以下结论。在不会影响小球藻的同时，通过抑制可在固定周期内产生的其它微生物的繁殖与迁移，从而能够防止小球藻的变质。此外，能够想到荷叶提取物通过抑制溶解存活的其它微生物的生长，从而使得在保存中悬浮液的小球藻细胞活性不会发生大的改变。所述溶解存活的其它微生物是通过摄取小球藻的死菌被破坏而溶出的提取（extract）成分（例如含氮成分；蛋白质、氨基酸、碳水化合物、脂质等所有细胞内成分）而存活。

Claims (5)

1.一种用于水产饲料的小球藻悬浮液，其为含有缓冲剂的用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征在于，其含有荷叶提取物作为小球藻的活性保存剂。
2.根据权利要求1所述的用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征在于，所述荷叶提取物是使用水、C1~C4的醇、或水与C1~C4的醇的混合溶剂作为提取溶剂获得。
3.根据权利要求1所述的用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征在于，在悬浮液中，所述荷叶提取物的浓度范围为5~150ppm。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征在于，在悬浮液中，小球藻的浓度范围为120~150g（干重）/L。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的用于水产饲料的小球藻悬浮液，其特征在于，所述缓冲剂为磷酸氢二钠及磷酸二氢钠。
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