JPH10295285A - ワムシ餌料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 保存時のクロレラの生存期間を長くすること
によって、長期保存が可能なワムシ餌料用のクロレラを
提供すること。 【解決手段】 ワムシ餌料用クロレラ懸濁液において、
前記懸濁液が有効量の制酸剤又は緩衝剤を含有すること
によりｐＨが維持されることを特徴とする懸濁液。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、海産魚の初期餌料
として重要なワムシを生産するためのクロレラに関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】植物プランクトンであるクロレラ(Chlor
ella）は、海産魚の初期餌料として重要なワムシ(Brach
ionus plicatilis, Brachionus rotundiformis等）の餌
料として使用されている。これは、クロレラが、クロレ
ラエキス、蛋白質、ビタミン、ミネラル、食物繊維、葉
緑素等のワムシの成長に有用な成分を含有していること
の外に、増殖能が高く、工業的な生産方法が確立されて
いるため、安定供給が可能なこと等によるものである。

【０００３】現在、ワムシの餌料として商品化されてい
るクロレラの多くは、工場等で工業的に生産され、培養
を終了した段階での濃度よりも濃縮された懸濁液の状態
で種苗生産機関等に輸送後、ワムシに与えられている。
クロレラを餌料とするワムシは、死滅したクロレラを与
えられるとその増殖が著しく低下することが知られてい
る。したがって、クロレラは生きた状態でワムシに与え
ることが好ましい。

【０００４】従来のワムシ餌料用クロレラは、濃縮懸濁
液の状態で０〜４℃の冷蔵保存されることにより、クロ
レラの生存化が図られ、製造から３０日程度生存するこ
とができる。クロレラを低温環境下に置くことにより、
クロレラの代謝が押さえられるため、より長期間生存さ
せることができると考えられている。

【０００５】しかしながら、クロレラは、冷蔵保存中に
もわずかではあるが代謝を行い、有機酸や炭酸ガスを細
胞外に排出する。このような代謝により排出される酸
は、クロレラ懸濁液のｐＨ値を下げ得るものである。事
実、クロレラ懸濁液のｐＨ値は、冷蔵保存開始後１〜２
日間で保存開始時のｐＨよりも下がり、６程度になる。
しかしながら、その後、クロレラの代謝は低下し、クロ
レラの懸濁液のｐＨは比較的安定であり、冷蔵保存中を
通してほぼ一定値を保つ。したがって、クロレラはｐＨ
６の懸濁液で冷蔵保存され、約一カ月の間生存が可能で
あった( 実施例２、図１及び実施例３、図２）。

【０００６】このｐＨ６という値は、クロレラが十分生
育することのできる値として広く知られている４〜９の
範囲内であり、クロレラの増殖の最適ｐＨとされる６〜
７の範囲にも含まれる値である。

【０００７】したがって、クロレラがｐＨ６の懸濁液中
で冷蔵保存され、一カ月生存できるということは、クロ
レラ懸濁液の冷蔵保存状態では、生存に必要な栄養塩、
炭素源、酸素等の供給がないため、クロレラの寿命が一
カ月であると判断されており、保存中のｐＨが影響して
いるとは全く考えられていなかった。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記事情に
鑑みてなされたものであり、保存時のクロレラの生存期
間を長くすることにより、長期保存が可能なワムシ餌料
用のクロレラを提供することを課題とするものである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究した結果、濃縮懸濁液の状態
で長期間冷蔵保存されたクロレラが死滅するのは、従来
はその死滅とは関連があるとは考えられていないｐＨが
密接に関連することを見いだした。さらに、本発明者ら
は、クロレラが十分生育できるとして知られている懸濁
液のｐＨ値の下限よりも高い値に懸濁液のｐＨ値の下限
を維持することにより、クロレラを長期間生存させるこ
とができることを見いだし、本発明を完成するに至っ
た。

【００１０】すなわち、本発明は、ワムシ餌料用クロレ
ラ懸濁液において、前記懸濁液が有効量の制酸剤又は緩
衝剤を含有することによりｐＨが維持されることを特徴
とする懸濁液を提供するものである。

【００１１】前記制酸剤として、カルシウム、マグネシ
ウム及びアルミニウムからなる群から選択される金属の
酸化物若しくは水酸化物、又は炭酸、ケイ酸及びリン酸
からなる群から選択される酸の塩を用いることができ
る。

【００１２】前記緩衝剤として、炭酸ナトリウム及び炭
酸水素ナトリウムの混合物、又はリン酸二水素カリウム
及びリン酸水素二ナトリウムの混合物を用いることがで
きる。

【００１３】

【発明の実施の形態】以下、本発明のワムシ餌料用クロ
レラ懸濁液について詳細に説明する。本発明で用いるこ
とのできるクロレラは、緑色植物門、緑藻綱、クロレラ
(Chlorella) 属に属する藻種（以下、単にクロレラとも
いう）であれば特に制限はない。クロレラの一例を挙げ
ると、クロレラ・ブルガリス(Chlorella vulgaris)、ク
ロレラ・ピレノイドサ(chlorella pyreno idosa)、クロ
レラ・レギュラリス(Chlorella regularis) 、クロレラ
・サッカロフィラ(Chlorella saccharophila)、クロレラ・ソロキ
ニアナ(Chlorella sorokiniana) がある。これらのクロレ
ラは、当業者が容易に入手することができるものであ
る。例えば、東京大学ＩＡＭカルチャーコレクションか
ら入手することができる。

【００１４】本発明で用いるクロレラは、それ自体既知
の方法により培養することができる。一例を挙げると、
クロレラの培養には、ブリストール培地やソロキン・ク
ラウス培地（藻類実験法、南江堂、６８〜１０４頁）の
ような一般的なものを培地として使用することができ
る。

【００１５】培養方法としては、光照射下で炭酸ガスを
供給して光合成培養が可能である。また、上記の培地に
グルコースや酢酸などの有機炭素、ペプトン等の有機窒
素やビタミン類などを添加して、従属栄養培養あるいは
混合栄養培養を行うことも可能である。

【００１６】培養装置は、培養方法や培養スケールによ
って、様々なものが使用できる。小型培養では、振盪フ
ラスコ、偏平フラスコ、小型ジャーファメンター等が使
用できる。特に、工業生産の為には、通常、大規模な培
養が行なわれ、屋外大型池や大型ジャーファメンター等
を使用することができる。

【００１７】培養の温度は、５〜４０℃の範囲に設定す
ることができるが、生産性の観点から１０〜３７℃が望
ましい。培養液のｐＨ値は、４〜９の範囲に設定するこ
とができるが、生産性の観点から５〜８が好ましい。

【００１８】培養されたクロレラは、遠心分離機等を用
いて水洗する。水洗されたクロレラは、水を添加し、懸
濁液の状態にする。懸濁液中のクロレラの濃度は、任意
の値に設定することができる。例えば、実用上の観点か
ら１〜２５０ｇ（乾燥重量）／リットルの範囲、好まし
くは、５０〜２００ｇ（乾燥重量）／リットルの範囲、
より好ましくは１００〜１５０ｇ（乾燥重量）／リット
ルの範囲の濃度に設定することができる。

【００１９】このようにして調製されたクロレラの懸濁
液は、そのｐＨ値を６．５〜８．５の範囲に設定するこ
とが好ましい。このようにして調製されたクロレラ懸濁
液のｐＨ値を６．０〜９．０、好ましくは、６．５〜
８．５、さらに好ましくは６．５〜７．０に維持するこ
とのできる試薬を添加する。

【００２０】懸濁液のｐＨ値を上記の範囲に維持するこ
とのできる試薬としては、クロレラの生存に悪影響を及
ぼさないかぎりいずれもの試薬を用いることができる。
例えば、制酸剤あるいは緩衝剤としてそれ自体は既知の
ものを用いることができる。

【００２１】制酸剤の一例を挙げると、カルシウム、マ
グネシウム及びアルミニウム等の金属の酸化物又は水酸
化物、並びに炭酸、ケイ酸及びリン酸のような弱酸の塩
がある。具体的には、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシ
ウム、ケイ酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、酸化
マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、水酸化マグネシウ
ム、炭酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム等を用い
ることができる。

【００２２】制酸剤の添加量は、懸濁液の量、クロレラ
の濃度、用いる制酸剤の種類、所望するｐＨ値の範囲、
クロレラの生理条件等に応じて当業者が適宜設定するこ
とができる。例えば、１００〜１５０ｇ( 乾燥重量）／
リットルのクロレラを含有する懸濁液に炭酸水素ナトリ
ウムを添加する場合、ｐＨ維持の効果、経済性等を考慮
すると、３〜３０％（重量／体積）程度の添加量が望ま
しい。

【００２３】制酸剤は、１種添加することも複数種添加
することもできる。緩衝剤としては、クロレラ懸濁溶液
中でそのｐＨ値を６．５〜８．５の範囲に維持すること
のできるいずれもの化合物を用いることができる。具体
的には、炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの混合
物、リン酸二水素カリウムとリン酸水素二ナトリウムの
混合物などを用いることができる。

【００２４】緩衝剤の添加量は、懸濁液の量、クロレラ
の濃度、用いる緩衝剤の種類、所望するｐＨ値の範囲、
クロレラの生理条件等に応じて当業者が適宜設定するこ
とができる。例えば、１００〜１５０ｇ( 乾燥重量）／
リットルのクロレラを含有する懸濁液に炭酸水素ナトリ
ウム及び炭酸ナトリウムを添加する場合、ｐＨ維持の効
果及び経済性等を考慮すると、懸濁液中の濃度がそれぞ
れ０．０２〜０．５Ｍになるように添加することができ
る。

【００２５】ｐＨ値を所望する範囲に維持するように試
薬を添加されたクロレラの懸濁液は、通常、０〜３０
℃、好ましくは０〜１０℃、さらに好ましくは０〜４℃
に保存することが、クロレラを長期間生存させる観点か
ら好ましい。

【００２６】従来、クロレラの懸濁液は冷蔵保存に限ら
れていた。ところが、本発明の制酸剤又は緩衝剤を添加
されたクロレラ懸濁液により、室温を含む冷蔵庫外での
保存が可能となった。

【００２７】

【実施例】

（実施例１）ジャーファメンターを用い、クロレラ・ブ
ルガリス(Clorella vulgaris C-30東京大学ＩＡＭカル
チャーコレクションから入手) の培養を行った。培地
は、水道水１リットル当たり、尿素１．５ｇ、リン酸二
水素カリウム０．５ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、Ｅ
ＤＴＡ−鉄１５ｍｇ、微量金属Ａ5 溶液（「藻類実験
法」、田宮博、渡辺篤編集、南江堂、９９頁）６ミリリ
ットル、グルコース２０ｇを添加した。培養液量は、３
キロリットル、培養温度は、３０℃の条件で通気攪拌培
養を行った。

【００２８】培養を終了したクロレラは、遠心分離機を
用いて水洗し、細胞濃度１３５ｇ乾燥重量／リットルの
懸濁液とした。上記のようにして調製した懸濁液に制酸
剤高く緩衝剤を加えた。

【００２９】制酸剤として、炭酸水素ナトリウム、炭酸
カルシウム、ケイ酸アルミニウム、水酸化アルミニウ
ム、酸化マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、水酸化マ
グネシウム、炭酸マグネシウム及びリン酸水素カルシウ
ムを用い、それぞれ５％( 重量／体積）となるようにク
ロレラ懸濁液に添加した。

【００３０】緩衝剤として、１Ｍ炭酸水素ナトリウム・
炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ８）、及び０．５Ｍリン酸二
水素ナトリウム・リン酸水素二ナトリウム溶液（ｐＨ
８）をそれぞれクロレラ懸濁液に対し１／１０量( 体
積）添加した。

【００３１】また、比較の為に、制酸剤又は緩衝剤の代
わりに水酸化ナトリウムを懸濁液に加え、懸濁液のｐＨ
を８に調整した。上記クロレラ懸濁液を冷蔵庫（１〜４
℃）にて保存し、３５日後のクロレラ懸濁液のｐＨ値の
変化及びクロレラの生細胞数の変化を調べた。得られた
結果を以下の表１に示す。

【００３２】

【表１】

【００３３】上記表１の対照試料の結果から明らかなよ
うに、３５日後のクロレラ懸濁液のｐＨ値は６．０まで
下がり、クロレラは全て死滅した。また、水酸化ナトリ
ウムを添加することにより、保存開始時のｐＨ値を８に
した場合も同様に、クロレラは全て死滅した。

【００３４】これに対して、制酸剤又は緩衝剤を添加す
ることにより懸濁液のｐＨ値を６．３よりも高く維持さ
れた試料は、３５日経過時もクロレラが生存していた。
従来、クロレラ懸濁液のｐＨは、クロレラの死滅と関連
があるとは考えられていなかったところ、ｐＨ値が６．
３よりも高く維持されることによりクロレラが生存しつ
づけることは、全く予想外のことであった。

【００３５】また、クロレラ生存の効果は、ｐＨの調整
の為に一般に用いられる水酸化ナトリウムを用いても奏
されないが、制酸剤又は緩衝剤を用いることにより奏さ
れることも予想外の結果であった。

【００３６】( 実施例２）実施例１と同様に製造したク
ロレラ懸濁液に、炭酸水素ナトリウム５％( 重量／体
積）を添加し、冷蔵庫（１〜４℃）にて保存し、クロレ
ラ懸濁液のｐＨ値の変化及びクロレラの生細胞数の変化
を調べた。対照として、炭酸水素ナトリウムを添加しな
いこと以外は上記の試料と同じクロレラ懸濁液を調製し
た。

【００３７】得られた結果を添付の図１に示す。図１に
おいて、（ａ）は、保存期間中のクロレラ生細胞数を表
すグラフであり、（ｂ）は、保存期間中のクロレラ懸濁
液中のｐＨを表すグラフである。（ａ）、（ｂ）の両者
とも○−○−○は、炭酸水素ナトリウムを添加したもの
を、□…□…□は、炭酸水素ナトリウムを添加していな
いものを表す。

【００３８】図１に示される結果から、対照区のクロレ
ラが３０日経過時に生細胞数が減少したのに対し、炭酸
水素ナトリウムを添加することによりそのｐＨ値を６．
５よりも高く維持された試験区のクロレラは、９１日経
過時も生存していた。

【００３９】制酸剤を添加されることによりｐＨ値が低
下することを妨げられた試験区のクロレラが９１日を越
える長期間にわたり生存し続けることは、全く予想外の
結果である。

【００４０】( 実施例３）実施例１と同様に製造したク
ロレラ懸濁液に、０．５Ｍリン酸二水素ナトリウム・リ
ン酸水素二ナトリウム溶液（ｐＨ８）をクロレラ懸濁液
に対し１／１０量( 体積）添加し、冷蔵庫（１〜４℃）
にて保存し、クロレラ懸濁液のｐＨ値の変化及びクロレ
ラの生細胞数の変化を調べた。

【００４１】得られた結果を添付の図２に示す。図２に
おいて、（ａ）は、保存期間中のクロレラ生細胞数を表
すグラフであり、（ｂ）は、保存期間中のクロレラ懸濁
液中のｐＨを表すグラフである。（ａ）、（ｂ）の両者
とも○−○−○は、リン酸二水素ナトリウム・リン酸水
素二ナトリウム溶液を添加したものを、□…□…□は、
リン酸二水素ナトリウム・リン酸水素二ナトリウム溶液
を添加していないものを表す。

【００４２】図２の結果から明らかなように、懸濁液の
ｐＨを維持するための試薬が何も添加されていない対照
区において３０日経過時にクロレラの生細胞数が減少し
たのに対し、緩衝剤を添加されることによりｐＨ値が
６．４よりも高く維持された試験区では６０日を越えて
もクロレラが生存していた。

【００４３】緩衝剤を添加することによりその懸濁液の
ｐＨ値が低下することを妨げられた試験区のクロレラが
６０日を越える長期間にわたり生存し続けることは、全
く予想外の結果である。

【００４４】上記実施例２と３との結果を比較すると、
制酸剤を添加されたクロレラ懸濁液の方が緩衝剤を添加
されたものよりもクロレラの生存期間が長い。このこと
から、少なくとも実施例の条件下では、制酸剤を添加さ
れたものが好ましいことが分かる。

【００４５】

【発明の効果】以上説明したように、クロレラ懸濁液中
のクロレラの生存期間は、制酸剤又は緩衝剤を添加し、
ｐＨを調整することにより顕著に長くなる。これは、従
来、ｐＨはクロレラの生死とは関連があるとは考えられ
ていなかったことを鑑みると、全く予想外の効果であ
る。このような本発明のクロレラ懸濁液により、長期保
存が可能なワムシ餌料用のクロレラを提供することがで
きる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、保存期間中のクロレラ生細胞数とクロ
レラ懸濁液中のｐＨの変化を表すグラフである。

【図２】図２は、保存期間中のクロレラ生細胞数とクロ
レラ懸濁液中のｐＨの変化を表すグラフである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ワムシ餌料用クロレラ懸濁液において、
   前記懸濁液が有効量の制酸剤又は緩衝剤を含有すること
   によりｐＨが維持されることを特徴とする懸濁液。
2. 【請求項２】 前記制酸剤が、カルシウム、マグネシウ
   ム及びアルミニウムからなる群から選択される金属の酸
   化物若しくは水酸化物、又は炭酸、ケイ酸及びリン酸か
   らなる群から選択される酸の塩である請求項１のクロレ
   ラ懸濁液。
3. 【請求項３】 前記緩衝剤が、炭酸ナトリウム及び炭酸
   水素ナトリウムの混合物、又はリン酸二水素カリウム及
   びリン酸水素二ナトリウムの混合物である請求項１のク
   ロレラ懸濁液。