JPH10113095A

JPH10113095A - ミジンコの培養方法

Info

Publication number: JPH10113095A
Application number: JP8271027A
Authority: JP
Inventors: Kuniaki Oda; 邦明織田
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 1996-10-14
Filing date: 1996-10-14
Publication date: 1998-05-06

Abstract

(57)【要約】【課題】有害微生物の繁殖を防止しながら、高い収穫
量でタマミジンコを培養する。【解決手段】ミジンコを培養するに当たり、ビタミン
Ｂ₁₂および栄養成分を含む培地を殺菌した後、餌として
無菌のクロレラを添加し、さらに無菌のミジンコ卵を接
種し、無菌的に培養を行う。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、稚魚の餌として有
用なミジンコを培養する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、水産養殖業における天然種苗の確
保が年々難しくなっているため人工種苗の増産が求めら
れており、それにつれて種苗用餌料の需要も増大してい
る。餌料の中でも稚魚用の初期餌料は、適した餌が極め
て限られていることから、良質の餌の安定供給に対する
要望が強い。

【０００３】天然の初期餌料としては、従来、ミジンコ
やワムシ等の動物性プランクトンが有用であることが知
られている。ミジンコ類の中では増殖率が高く、比較的
容易に培養が可能なタマミジンコが初期餌料として多く
の種苗生産機関で用いられている。タマミジンコは、鶏
糞、油粕、醤油粕等の有機肥料、または化学肥料を餌料
として培養されている。その他にもパン酵母がタマミジ
ンコの増殖に有効であることも分かっており、また、最
近では単細胞緑藻類のクロレラを餌料として培養してい
る場合もある。培養槽は、開放状態の大型水槽であり、
培養時は、その設備等に応じて間引き培養、回分培養等
好適な方法が用いられている。また、タマミジンコの体
成分組成は、培養餌料の影響を強く受けるので、例えば
パン酵母で培養したものは、栄養価が低くなることが分
かっている。

【０００４】一方、クロレラは光合成により独立的に増
殖するのみならず、有機炭素源を利用し従属的にも増殖
できる緑藻である。増殖速度が速く生産性が高い上に、
良質の蛋白質、ビタミン類、ミネラル類を豊富に含むた
め栄養価も高く食品として非常に有用な素材である。こ
のため、クロレラは主に健康食品として利用されている
が、ミジンコ、ワムシ等の培養にもすでに使用されてい
る。クロレラを餌料として培養されたミジンコは、稚魚
の初期餌料としても栄養価が高く良好なものである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
ような従来の開放系の培養方法ではタマミジンコのみで
なく、他の微生物等も水槽内で増殖するため、餌料の利
用効率が悪く、しかも有害微生物が繁殖してタマミジン
コの増殖を阻害することもあった。また、繁殖した有害
微生物がタマミジンコを経由して魚の病気を引き起こす
という問題も生じていた。

【０００６】また、上記のようにタマミジンコの餌料に
は有機肥料を使うことが多かったため、餌料の品質が不
安定で、水槽内の生物相が変化し易く、タマミジンコの
生育にとって良好な状態を維持することは困難であっ
た。水槽内での生活環境が悪化すると、タマミジンコの
増殖が低下したり、有害な原生動物が発生してしまうこ
ともあり、これは、特に高密度培養に顕著であった。こ
のため、初期餌料として有用な天然のタマミジンコを安
定的に収穫し供給することが困難であるという問題があ
った。タマミジンコの供給量を安定させる試みとして
は、培養槽内の状態に応じて餌の投与量を調節する等の
手段が講じられているが、現状では問題を解決するに至
ってはいない。

【０００７】上記課題に鑑み、本発明者等は培養槽内の
微生物群によるタマミジンコへの影響を避けるためにタ
マミジンコの無菌培養を試みた。しかしながら、クロレ
ラを唯一の餌料として培養を行うとタマミジンコは５日
程度で死滅してしまう。これは、クロレラ単独ではタマ
ミジンコの増殖に必要なビタミン、ミネラル等種々の成
分が補足しきれないためである。従来の方法では培地中
には餌料のみでなく他の微生物の代謝産物も多量に存在
しており、この中から必須の成分を補給できたが、無菌
培養を行うことによりそれらの代謝産物を得ることがで
きなくなったのである。そこで、本発明者等は鋭意研究
の結果ビタミンＢ₁₂及び他の栄養成分を添加することで
タマミジンコの増殖が促進され、栄養分を豊富に含むタ
マミジンコを安定的に得られることを見出した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
の本発明は、ミジンコを培養するに当たり、餌として無
菌のクロレラ、ビタミンＢ₁₂、栄養成分を用い、無菌的
に培養を行うことを特徴とするミジンコの培養方法を提
供するものである。また、栄養成分としてイーストエキ
ス、肉汁エキス、ペプトンのうち１または２以上の成分
を用いる培養方法を提供するものである。

【０００９】

【発明の実施の形態】以下に本発明について説明する
が、ここでは、ミジンコとしてタマミジンコを用いるこ
ととする。本発明に係るクロレラはどの種類のものを使
用しても良く、通常、ミジンコ、ワムシ等の動物性プラ
ンクトンの餌として利用されているものが用いられる。
また、従属栄養培養、独立栄養培養どちらの方法で培養
されたものでも使用に供され得るが、無菌的条件を満た
すためにはタンク中で従属栄養的に純粋培養されたもの
が好ましい。

【００１０】次に第２成分のビタミンＢ₁₂について、ミ
ジンコ培養液１リットルあたりの添加量を検討すると、
１０〜５０μｇ／リットルで良好なタマミジンコの増殖
が認められた。１０μｇ／リットル以下では培養開始後
７日程度でタマミジンコは死滅してしまい、５０μｇ／
リットル以上では増殖するもののコスト面で不利とな
る。また、第３成分の栄養成分としては、イーストエキ
ス、肉汁エキス、ペプトン等が単独または組み合わせて
使用できるが、好ましくはイーストエキスを用いる。添
加量としては、重量換算で０.０５〜０.１％で良好な増
殖が認めらた。

【００１１】しかしながら、両者の内どちらかを単独に
添加しても最終的にタマミジンコは死滅するか増殖を停
止してしまう。そこで、両者を添加した際の相乗効果を
検討したところ、ビタミンＢ₁₂１０μｇ／リットル、イ
ーストエキス０.１％程度で良好なタマミジンコの増殖
が確認された。

【００１２】

【実施例】次に、タマミジンコの無菌培養法について詳
述する。培養を無菌的に行うためには、まず培養槽、培
地の殺菌を行う。殺菌方法は特に制限されるものではな
く、オートクレーブ、蒸気による加圧殺菌、塩素殺菌、
濾過滅菌等種々の方法が用いられる。これと併せてタマ
ミジンコの卵を塩素等により無菌化し、さらに純粋培養
により無菌的に培養されたクロレラを使用してタマミジ
ンコの無菌培養を行う。

【００１３】培養方法としては半連続培養が好適である
が、その他連続培養、回分培養等を行っても良い。半連
続培養とはタマミジンコを培養する際に、経時的にタマ
ミジンコの増殖分だけを抜き取る培養方法のことであ
り、これにより、タマミジンコを安定的に供給すること
が可能となる。また、培養条件については以下のように
して検討を行った。

【００１４】試験例１：タマミジンコ卵の無菌化塩素処理により卵を無菌化するにあたり、処理時間が卵
に与える影響を調べるために、次の試験を行った。タマ
ミジンコの卵を、０.１％非イオン系洗浄剤１０ｍｌで
３回洗浄し、次いで、ミジンコ培地（ＭｇＣｌ₂ ・６Ｈ
₂Ｏ：０.２ｇ／リットル、ＣａＣｌ₂ ２Ｈ₂Ｏ：０.０７
４ｇ／リットル、ｐＨ６.５）にＮａＣｌＯ液を添加し
て塩素量０.０２％として調製した無菌化液を試験管に
１０ｍｌ分注し、卵を表１に示すように１２〜１４個収
容し、常温で１〜１２０分間処理し、次いで上記の培地
１０ｍｌにて３回洗浄した。このようにして無菌化処理
された卵を、ペニシリン０.５ｍｇ／ｍｌ、ストレプト
マイシン０.６２５ｍｇ／ｍｌを含む培地に、２５℃で
置き、４８時間後の孵化個体数を測定した。結果を表１
に示す。表１から分かるように、塩素処理時間は１５〜
３０分が適当であることが分かる。処理時間１分でも孵
化率は５０％と高いが、無菌化を確実にするためには、
これよりも長い時間が勧められる。

【００１５】

【表１】

【００１６】試験例２：クロレラによるタマミジンコの
無菌培養３００ｍｌ容コルベンに、試験１で使用したのと同じ成
分の培地１００ｍｌを入れ、これに無菌培養したクロレ
ラをＶｐ＝２ｍｌ／リットルおよびタマミジンコを投与
したが増殖はしなかった。ここで、Ｖｐとは packed Ce
ll Volumeであり、１リットルのクロレラ懸濁液中に含
まれるクロレラ細胞のｍｌ数で表現されるものである。
したがって、Ｖｐ＝１ｍｌ／リットルとは、懸濁液１リ
ットル中にクロレラ細胞１ｍｌを含むことを示してい
る。一方、上記と同様の培地にイーストエキス０.１
％、ビタミンＢ₁₂１０μｇ／リットル添加して培養する
と、イーストエキス＋ビタミンＢ₁₂添加区が最も増殖が
早かった（表２）。イーストエキス又はビタミンＢ₁₂の
みの添加区では、やや改善されたが、増殖の持続性は見
られなかった。表３中の数値は、培地中のタマミジンコ
の濃度（個体数／ｍｌ）を示す。

【００１７】

【表２】

【００１８】試験例３：タマミジンコのビタミンＢ₁₂要
求量試験例１と同様の培地にクロレラをＶｐ＝２ｍｌ／リッ
トルおよびイーストエキス０.１％加え、ビタミンＢ₁₂
添加量０〜５０μｇ／リットルとし、タマミジンコの増
殖をみた。ビタミンＢ₁₂添加量５μｇ／リットル以下で
はタマミジンコの増殖は停止し、１０μｇ／リットル以
上の添加量が必要であった（表３）。表３中の数値は、
培地中のタマミジンコの濃度（個体数／ｍｌ）を示す。

【００１９】

【表３】

【００２０】試験例４：タマミジンコの増殖とイースト
エキス添加量試験例１と同様の培地にビタミンＢ₁₂１０μｇ／リット
ル加え、イーストエキス添加量０〜０.１％でタマミジ
ンコの増殖をみた。０.０２％以下では増殖は停止し、
０.０５〜０.１％添加区で良好な増殖を示した（表
４）。表４中の数値は、培地中のタマミジンコの濃度
（個体数／ｍｌ）を示す。

【００２１】

【表４】

【００２２】試験例５：クロレラ添加量とタマミジンコ
収量試験管に試験例１と同様の培地にビタミンＢ₁₂ １０μ
ｇ/ リットル、イーストエキス０.０５％添加したもの
１０ｍｌを入れ、タマミジンコを２個体収容し、クロレ
ラをＶｐ（Packed Cell Volume)＝２ｍｌ／リットルと
なるように投与し、クロレラを食べつくした時のタマミ
ジンコの個体数を測定した。培養開始後５日目にクロレ
ラは食べつくされ、その密度は３５個体／ｍｌであった
（表５）。クロレラ湿重量１ｇ当たりに換算すると、１
７,５００個体であった。

【００２３】

【表５】

【００２４】実施例１：タマミジンコの無菌培養以下のようにして、タマミジンコの無菌培養を試みた。
培養温度は２５℃とし、培地にはミジンコ培地（ＭｇＣ
ｌ₂・６Ｈ₂Ｏ：０.２ｇ／リットル、ＣａＣｌ₂・２Ｈ
₂Ｏ：０.０７４ｇ／リットル）にビタミンＢ₁₂：１０μ
ｇ/ リットルおよびイーストエキス：０.５ｇ／リット
ルを加えたものを使用した。培地の殺菌はオートクレー
ブで１２０℃、２０分行った。培地にはクロレラをＶｐ
＝２ｍｌ／リットルとなるように投与し、次いで、タマ
ミジンコを１個体／ｍｌの割合で無菌的に添加し、培養
を開始した。その後、タマミジンコの密度が２０個体／
ｍｌに達した後、シード分を残しタマミジンコを回収し
た。さらに、新しい培地およびクロレラを加え、タマミ
ジンコ密度１個体／ｍｌより始め、同様の操作を繰り返
した。結果を図１に示す。図１から分かるように、培地
にクロレラならびにビタミンＢ₁₂とイーストエキスを加
えたものは、短時日で高い増殖率を示し、かつシード分
のみを残した半連続培養法においても安定した増殖率を
保っていた。

【００２５】

【発明の効果】上述のように、本発明の無菌培養方法を
用いれば培養槽内へ有害微生物を混入させずに培養を行
うことができるので、タマミジンコの増殖は妨害され
ず、稚魚の初期餌料中への有害微生物の混入も防止でき
る。また、タマミジンコの安定供給も可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例１によりタマミジンコを無菌培
養した結果を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ミジンコを培養するに当たり、ビタミンＢ
₁₂および栄養成分を含む培地を殺菌した後、餌として無
菌のクロレラを添加し、さらに無菌のミジンコ卵を接種
し、無菌的に培養を行うことを特徴とするミジンコの培
養方法。
【請求項２】栄養成分がイーストエキス、肉汁エキス、
ペプトンのうち１または２以上の成分からなる請求項１
記載の培養方法。