CN102614276A - 刺玫叶总黄酮提取物及其提取方法和其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种刺玫叶总黄酮提取物及其提取方法和其医药用途,属于一种中药材新的药用部位中的提取物及其提取、纯化方法和其药物用途。将刺玫叶干燥、粉碎后用70-80%乙醇微波提取,提取液上大孔吸附树脂,经水洗脱至无色后,继用70-90%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇可得到用于中药新药研究的原料药。本发明提取纯化的刺玫叶总黄酮提取物,具有治疗冠心病、心肌缺血、高血脂及高血糖等疾病的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药材新的药用部位中的提取物及其提取方法和其药物用途。
背景技术
山刺玫Rosa davurica Pall.为蔷薇科蔷薇属落叶灌木植物,主要分布于我国东北地区,其果实为刺玫果。传统医学将刺玫果列为补药,据《中华大辞典》称:刺玫果具有健脾理气、养血调经之功效。现代医学研究发现,刺玫果具有抗衰老、抗疲劳、耐缺氧,增强人体免疫功能作用,长期服用能显著提高人体中SOD含量。刺玫果为药食同源的宝贵资源,其富含有机酸,黄酮、香豆素、甾醇、三萜、烯烃、皂甙、挥发油、多种矿物质、微量元素等多种活性成分,其中的黄酮类化合物具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、降低心肌耗氧量、防治血管硬化、降压、抗衰老、抗自由基和抗癌、防癌等作用。钟方丽,等对刺玫果总黄酮的提取、纯化方法及医药用途进行了研究并申请了专利:刺玫果总黄酮提取物及其提取方法和其医药用途,申请号:201110091577.4。
目前,未见有关刺玫叶的活性成分提取、化学成分、药理作用的研究。仅有王玮、葛爱梅对刺玫叶茶的制备进行了研究,并申请了专利:野生刺玫果叶茶及其制备方法,申请号:200610010199.1,本发明利用野生刺玫果嫩叶自然资源,研制成具有茶叶色、香、形特点的新型饮品,丰富了饮品品种。刺玫叶每年均可采摘,产量丰富,经济价廉,但目前未见其药用价值研究。
发明内容
本发明提供一种刺玫叶总黄酮提取物及其提取方法和其医药用途。
本发明采取的技术方案是,刺玫叶总黄酮提取物是由下述方法制备得到的:
a.将刺玫叶干燥粉碎,用12-16倍量70-80%乙醇微波提取3次,每次提取40min、20min、10min,过滤,合并提取液;
b.将步骤a得到的提取液上大孔吸附树脂柱,经水洗至无色后,继用70-90%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇得浸膏,干燥至恒重。
本发明所述的大孔吸附树脂柱采用D101、AB-8或D4020。
本发明所述刺玫叶总黄酮提取物在制备用于治疗冠心病、抗心肌缺血、降血脂药物及降糖药物中的应用。
山刺玫为直立灌木,刺玫叶每年都可采摘利用,资源非常丰富,经过研究发现,刺玫叶中总黄酮含量可达2-5%,是十分珍贵难得的新的药用部位。刺玫叶总黄酮提取物的提取、纯化方法目前未见报道,其药物用途属首次发现,刺玫叶属新的药用部位。刺玫叶总黄酮提取物其特征为浅褐色至褐色粉末,可溶于乙醇,该刺玫叶提取物中总黄酮的含量大于50%。
当本发明用于制备治疗冠心病,心肌缺血,高血脂的药物时,其口服或胃肠外给药,均是安全的,在口服情况下,其可以任何常规形式给药,例如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等;当该药肠胃外给药时,可采用任何常规形式,例如注射剂:如静脉内注射、软膏剂、栓剂、经皮给药、吸入剂等。
本发明制备治疗冠心病,高血脂,高血糖、心肌缺血的药物是由有效部位或有效部位与固体或液体的赋形剂一起构成的,这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的,下面举几个具体例子,散剂是内服的粉末剂,它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁、碳酸氢钠、干燥酵母等;溶液剂的赋形剂有水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等;软膏剂的赋形剂可以使用脂油、含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蜡、木蜡、液体石蜡、树脂、高级蜡等组合成的疏水剂或亲水剂。
本发明的有益效果是,刺玫叶总黄酮提取物即新的有效部位,其药物用途属首次发现,扩大了药源。有效部位的剂量可以根据服用方式,病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变,口服量为:100-200mg/次,每日2-3次服用;注射80-120mg/次,每日1次。
具体实施方式
实施例1
a.将刺玫叶干燥粉碎,用12倍量70%乙醇微波提取3次,每次40min、20min、10min,过滤,合并提取液;
b.将步骤a得到的提取液上大孔吸附树脂柱D101,经水洗至无色后,继用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇得浸膏,干燥至恒重。
实施例2
a.将刺玫叶干燥粉碎,用14倍量75%乙醇微波提取3次,每次40min、20min、10min,过滤,合并提取液;
b.将步骤a得到的提取液上大孔吸附树脂柱AB-8,经水洗至无色后,继用80%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇得浸膏,干燥至恒重。
实施例3
a.将刺玫叶干燥粉碎,用16倍量80%乙醇微波提取3次,每次40min、20min、10min,过滤,合并提取液;
b.将步骤a得到的提取液上大孔吸附树脂柱D4020,经水洗至无色后,继用90%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇得浸膏,干燥至恒重。
本发明用途可通过下面的药效学实验例进一步说明。刺玫叶总黄酮提取物,以下简称DRLFE。
实验例1、DRLFE抗大鼠心肌缺血初步实验
一、实验材料
1.1动物
Wistar大鼠,雌雄各半,体重230-270g,由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。
1.2药品及试剂
本发明药物DRLFE,按本发明方法制备,褐色粉末状,用生理盐水配制成混悬液;生化试剂盒:激酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)由中生北控生物科技股份有限公司生产;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)由南京建成生物工程研究所生产;红四氮唑(TTC),分析纯,上海惠世生化试剂有限公司生产;山玫胶囊,承德御室金丹药业有限公司生产;氯化钠注射液,哈尔滨三联药业有限公司生产;乙醚,分析纯,天津市北联精细化学品开发有限公司生产。
1.3仪器
EOS-880半自动生化分析仪,意大利生产;UV-755B紫外分光光度计由上海精密科学仪器有限公司生产;BI-2000图像分析仪,成都泰盟科技有限公司生产。
二、实验方法
2.1分组及给药剂量
实验大鼠随机分为7组,每组12只。假手术对照组给予氯化钠溶液(生理盐水)10ml/kg;模型对照组给予生理盐水10ml/kg;阳性对照组给予山玫胶囊220mg/kg(2.2%);DRLFE小剂量组50mg/kg(0.5%,);DRLFE中剂量组100mg/kg(1.0%);DRLFE大剂量组200mg/kg(2.0%)。连续给药6d。于末次给药30min,制备心肌缺血模型。
2.2实验方法
大鼠乙醚全身麻醉,行开胸手术,采取冠状动脉前降支结扎24h,造成心肌缺血模型。24h后进行股动脉取血,离心取血清待测生化指标(CK、LDH、AST、SOD、MDA);开胸术取心脏剪除右心室,将左心室切心肌片5片,用TTC溶液染色1-3min,用BI-2000图像分析仪照相、测量心肌梗塞面积,计算心肌梗塞面积占左心室百分率。剪取冠脉结扎线下方小块心肌组织放入10%福尔马林溶液中固定,待做光学显微镜病理学检查。
三、实验结果
3.1对心肌缺血大鼠血清酶含量的影响
CK:模型组血清CK含量与假手术组比较明显升高,有显著性差异,P<0.05;DRLFE高剂量、中剂量组与模型组比较,CK含量明显降低,有显著性差异,P<0.05;DRLFE小剂量组及阳性药组与模型组比较,血清CK含量虽然有下降趋势,但统计学无明显差异,P>0.05,见表1。
LDH:模型组血清LDH含量与假手术组比较明显升高,有显著性差异,P<0.05;DRLFE高剂量组、中剂量组以及阳性药组与模型组比较,LDH含量明显降低,有显著性差异,P<0.05;DRLFE小剂量组LDH含量虽然有下降趋势,但与模型组比较无明显差异,无统计学意义,P>0.05,见表1。
AST:模型组血清AST含量与假手术组比较明显升高,有统计学意义,P<0.05;DRLFE高剂量组、中剂量组以及阳性药组与模型组比较,AST血清含量明显降低,有显著性差异,P<0.05;DRLFE小剂量组与模型组比较,AST含量虽然有下降趋势,但与模型组比较均无明显差异,无统计学意义,P>0.05,见表1。
与假手术组比较#P<0.05与模型组比较*P<0.05**P<0.01
3.2对心肌缺血大鼠血清SOD、MDA活性的影响
模型组血清SOD活性明显低于假手术组,而MDA含量明显高于假手术组,均有统计学意义,P<0.05;DRLFE高剂量组与模型组比较,血清的SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,有显著性差异,P<0.05;DRLFE中、小剂量组以及阳性药组与模型组比较,血清SOD、MDA含量无明显差异,均无统计学意义,P>0.05,见表2。
与假手术组比较#P<0.05
3.3对心肌缺血大鼠心肌梗塞面积的影响
模型组大鼠心肌梗塞面积明显大于假手术组,制备心肌缺血模型成功,有显著性统计学意义,P<0.001;DRLFE高剂量组、中剂量组与模型组比较,心肌梗塞面积明显小于模型组,有显著性差异,P<0.05;但DRLFE小剂量组以及阳性药组与模型组比较,心肌梗塞面积虽然有减少趋势,但统计学无明显差异,P>0.05,见表3。
与假手术组比较###P<0.001与模型组比较*P<0.05
四、实验结论
1、DRLFE高、中剂量组能显著降低实验性心肌缺血时释放的心肌三酶血清含量,减轻心肌组织损伤;
2、DRLFE高、中剂量组均能减少实验性心肌缺血导致的心肌梗塞面积,对心脏有保护作用;
3、DRLFE高剂量组能减少实验性心肌缺血时血清中MDA的含量,增加SOD活性。
实验例2、DRLFE预防和治疗高血脂症的初步试验
一、材料与方法
1.1动物 SD大鼠40只,雌雄各半,体重120-140g,由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。
1.2本发明药物DRLFE,按本发明方法制备,阳性对照药:月见草油,白求恩医科大学制药厂生产。胆固醇粉(AR),购自中国医药(集团)上海化学试剂公司。
1.3高脂饲料及各种含药高脂饲料的配制
高脂饲料的配制:基础饲料100g中加入胆固醇0.4g,猪油2mL,在高脂饲料基础上加入不同含量的药物,配制成含药的高脂饲料供实验室喂养。
二、对正常大鼠血脂水平的影响
取大鼠40只,雌雄各半,禁食给水12h,称体质量,随机分为4组(各10只):正常对照组(生理盐水,1mL/100g)、阳性对照组(月见草油1.2g/100g)、刺玫叶总黄酮提取物大剂量组(2.4g/kg)和小剂量组(1.2g/kg),上述药物均采用灌胃(ig)给药方式,每日1次,共15d,实验过程中每周称体重1次,第16天摘除大鼠眼球,眼眶取血2-3mL,送生化检验,测血清中的TG和TC含量。
三、刺玫叶总黄酮提取物(DRLFE)降血脂试验结果,试验结果见表4。
表4刺玫叶总黄酮提取物(DRLFE)降血脂试验结果
与对照组比较*P<0.05
四、实验结论
实验结果表明,刺玫叶总黄酮提取物(DRLFE)提取物有明显的降血脂作用。
实验例三、DRLFE降糖活性的初步试验
一、材料与方法
1.1动物 Wistar大鼠80只,雌雄各半,由吉林大学基础医学院动物实验中心提供,体重220-280g。
1.2药物及试剂,本发明药物DRLFE,按本发明方法制备,阳性对照药:消渴丸,广州中一药业有限公司生产,链脲霉素(STZ):美国Sigma公司出产。强生稳步型血糖试纸,强生(上海)医疗器材有限公司进口。
1.3模型的建立
Wistar大鼠80只,雌雄各半,在基础医学院动物实验中心实验观察室适应1周。一周后,禁食不禁水16h后,称体重、测血糖、做标记。留取10只作为正常对照组,将其余70只大鼠用链脲霉素(STZ)0.054g·kg-1造高血糖模型,STZ用0.05mol·L-1构椽酸溶液(pH=4.5)配成2.0%溶液(现用现配),按体重一次性腹腔注射STZ药液。8天后,禁食不禁水4h,剪尾法采血,以强生稳步型血糖仪及强生稳步型血糖试纸测各只大鼠的血糖值,其中血糖值大于11.0mmol·L-1为高血糖模型成立。选用50只血糖值大于11.0mmol·L-1的大鼠为高血糖模型动物。
1.4实验方法
将50只高血糖模型大鼠,按血糖值随机分为5组:模型组、消渴丸组(2.0g·kg-1,相当于临床用量的4倍)、DRLFE高剂量组200mg·kg-1、中剂量组100mg·kg-1和低剂量组50mg·kg-1。每组10只,雌雄各组均分。给药体积均为10ml·kg-1,模型组给生理盐水。每日上午9时左右灌胃给药,每天记录各组大鼠的进食量和饮水量,每周以SureStep稳步型血糖仪检测空腹血糖一次,并称体重,按新体重折算新的给药量,共治疗性给药4周。4周后将测量各组大鼠的体重、进食量、进水量及血糖值。
二、实验结果
2.1对体重的影响
随试验时间的增长,模型组大鼠体重逐渐下降。给药四周后,DRLFE高剂量组体重已不再下降,与模型组比较有明显差异(P<0.05),其余各给药组体重均有增长的趋势,但与模型组比较均无明显差别(P>0.05)。结果见表5。
表5 DRLFE对高血糖大鼠体重的影响
与模型组比较,*P<0.05。
2.2对进食量的影响
随试验时间的增长,模型组大鼠进食量日渐增加。各给药组大鼠进食量日渐减少。给药四周后,DRLFE高剂量组进食量减少,与模型组比较有明显差异(P<0.05),其余各给药组进食量均有减少的趋势,但与模型组比较均无明显差别(P>0.05)。结果见表6。
与模型组比较,*P<0.05。
2.3对饮水量的影响
随试验时间的增长,模型组大鼠饮水量日渐增加,各给药组大鼠饮水量日渐减少,给药四周后,DRLFE高、中剂量组饮水量减少,与模型组比较有明显差异(P<0.05),其余各给药组饮水量均有减少的趋势,但与模型组比较均无明显差别(P>0.05)。结果见表7。
与模型组比较,*P<0.05。
2.4对血糖的影响
实验结果表明,建立模型后,模型组与正常组比较,血糖值显著升高(P<0.001),各给药组血糖值与模型组比较,无明显差异。
给药三周后DRLFE高剂量组与模型组比较,血糖明显下降(P<0.05)。四周后DRLFE高、中剂量组和消渴丸组血糖值均降低,与模型组比较,具有明显统计学意义(P<0.05),DRLFE低剂量组与模型组比较,血糖无明显下降(P>0.05),结果见表8。
与正常组比较,ΔΔΔP<0.001;与模型组比较,*P<0.05。
三、实验结论
1、DRLFE高、中剂量组均可使链脲霉素所致高血糖大鼠的血糖水平下降;
2、DRLFE高剂量组可使糖尿病大鼠的体重增长,进食量和饮水量减少;DRLFE中剂量组可使糖尿病大鼠的饮水量减少。
由此可见,DRLFE在降低血糖的同时,还可以改善糖尿病“三多一少”的症状。
Claims (3)
1.一种刺玫叶总黄酮提取物,其特征在于它由下述方法制备得到的:
a.将刺玫叶干燥粉碎,用12-16倍量70-80%乙醇微波提取3次,每次提取40min、20min、10min,过滤,合并提取液;
b.将步骤a得到的提取液上大孔吸附树脂柱,经水洗至无色后,继用70-90%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇得浸膏,干燥至恒重。
2.如权利要求1所述的刺玫叶总黄酮提取物的制备方法,其特征在于包括下列步骤:
a.将刺玫果干燥粉碎,用12-16倍量70-80%乙醇微波提取3次,每次提取40min、20min、10min,过滤,合并提取液;
b.将步骤a得到的提取液上大孔吸附树脂柱,经水洗至无色后,继用70-90%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇得浸膏,干燥至恒重。
3.如权利要求1所述的刺玫叶总黄酮提取物在制备用于治疗冠心病、抗心肌缺血、降血脂及降糖药物中的应用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120801 |