CN104983767A

CN104983767A - 一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法

Info

Publication number: CN104983767A
Application number: CN201510352420.0A
Authority: CN
Inventors: 季浩; 张宇; 阚建伟; 窦长清
Original assignee: Jiangsu Tiansheng Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Tiansheng Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-06-24
Filing date: 2015-06-24
Publication date: 2015-10-21
Anticipated expiration: 2035-06-24
Also published as: CN104983767B

Abstract

本发明公开一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，包括以下步骤：昆明杯冠藤药材粉碎后，用溶剂连续回流提取，合并提取液并浓缩浸膏状，加水热溶，经过石油醚萃取两次，合并水层得到水溶液；水溶液上聚酰胺柱，用溶剂进行洗脱；聚酰胺洗脱后流出液上大孔树脂柱，用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用适当溶剂溶出；溶出液稀释到合适浓度上硅胶柱，依次用不同的洗脱溶剂洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤总皂苷。本发明应用大孔树脂和聚酰胺技术的优势，设备材料成本低，工艺流程清晰，处理量大，操作简便，产品色度好、得率和含量高，适合于工业化大生产。

Description

一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法。

背景技术

昆明杯冠藤(CynanchumwallichiiWight．)又名断节参，是萝藦科鹅绒藤属植物。产于我国四川、贵州、云南以及广西等地，并分布于印度。民间用其治疗风湿关节炎及跌打损伤，云南成药“虎力散”用其为主药。

甾体皂苷类成分为昆明杯冠藤主要的组成成分之一，现有研究虽然可以从昆明杯冠藤根中分离得到一些C21甾体类化合物，却未见报道提供一种有效提取并分离出该甾体皂苷有效部位的方法，也未见昆明杯冠藤C21甾体类化合物单体或有效部位的药理活性相关研究报道。

比如，陈刚等在《中国药物化学杂志》上发表的论文“昆明杯冠藤中C-21甾类成分的研究”中通过水提、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析分离、Sephadex LH-20柱色谱精制、制备HPLC再分离等一系列步骤分离得到了数个C21甾体类单体物质。其方法虽然可以分离得到目标物质成分，但是其所要求的设备和材料昂贵、处理量很小，氯仿和甲醇等有机溶剂用量大且不能回收利用，还会对人体造成一定的危害，故该方法仅适合于实验室研究，不能够应用于工业化大生产当中。

发明内容

发明目的：本发明的第一个目的是提供一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，包括以下步骤：

1）、昆明杯冠藤药材粉碎后，用溶剂连续回流提取，合并提取液并浓缩成浸膏状，加水热溶，经过等体积石油醚萃取两次，合并水层得到水溶液；

2）、步骤1）中得到的水溶液直接上聚酰胺柱，用合适的溶剂体系进行洗脱；

3）、步骤2）中聚酰胺洗脱后的流出液直接上大孔树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用适当溶剂溶出；

4）、步骤3）中的溶出液稀释到合适浓度后直接上硅胶柱，依次用不同的洗脱溶剂洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤总皂苷。

其中，步骤1）中的溶剂是纯化水、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒，每次溶剂量为昆明杯冠藤药材重量的3~15倍量，优选为6倍量，提取温度为30~80℃，优选为60℃。

其中，步骤1）中的溶剂是乙醇，提取次数为1~3次，优选为2次；提取时间为1~4小时，优选为2小时。

其中，步骤1）中加水溶解所需的量为浸膏重量的2~8倍量。

其中，步骤2）中所述的聚酰胺粒度为10-300目。步骤2）中的合适的溶剂是纯化水或乙醇，步骤2）中溶剂的体积为聚酰胺柱体积的2~8倍。

其中，步骤3）中所述的大孔树脂型号为H-60、D-101B、DM-130、XAD-16、LS-300和LS-46中的一种。

其中，步骤3）中所述的浸膏溶出溶剂可以为乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒

其中，步骤4）中所述的硅胶粒度为60-400目。

其中，步骤4）中所述的样品溶液稀释至重量为原药材重量的1/40~1/10。

其中，步骤4）中所述的洗脱体系依次分别为乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒。

有益效果：相对于现有技术，本发明具有以下优点：

①本发明提供了一种全新的昆明杯冠藤总皂苷的提取分离方法。

②本发明所述的制备方法，充分应用了大孔树脂和聚酰胺技术的优势，设备和材料成本低，工艺流程清晰，处理量大，操作简便，产品色度好、得率和含量高，适合于工业化大生产。

③本发明所制备的昆明杯冠藤皂苷，可以加入药学上可以接受的载体制成片剂、胶囊剂或注射液，用于医药和保健领域，使得中药昆明杯冠藤得到更加高效及广泛地应用。

具体实施方式：

实施例1：

昆明杯冠藤药材2 kg经粉碎后，用药材重量6倍量的95%乙醇连续回流提取两次，提取温度65℃，提取2小时，合并提取液并浓缩至浸膏状，加入浸膏重量4倍量的水热溶，经过等体积石油醚萃取两次，合并水层得到水溶液。水溶液直接经过聚酰胺柱，聚酰胺粒度为100目，用4倍柱体积的纯化水继续洗脱。流出液直接上LS-46型号大孔树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用乙酸乙酯溶出。溶出液稀释到0.2kg溶液后直接上硅胶柱，硅胶粒度为100目，依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯:乙醇（V:V=10:1）、乙酸乙酯:乙醇（V:V=4:1）的洗脱体系洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤皂苷26.3 g，经检测总皂苷质量含量达到92.7%。

实施例2

昆明杯冠藤药材2 kg经粉碎后，用药材重量3倍量的95%乙醇连续回流提取两次，提取温度50℃，提取2小时，合并提取液并浓缩至浸膏状，加入浸膏重量8倍量的水热溶，经过等体积石油醚萃取两次，合并水层。水溶液直接经过聚酰胺柱，聚酰胺粒度为200目，用6倍柱体积的20%乙醇继续洗脱。流出液浓缩至无醇味后直接上LS-300型号大孔树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用乙酸乙酯溶出。溶出液稀释到0.2kg溶液后直接上硅胶柱，硅胶粒度为200目，依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯:丙酮（V:V=12:1）、乙酸乙酯:丙酮（V:V=5:1）的洗脱体系洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤皂苷29.7g，经检测总皂苷质量含量达到86.3%。

实施例3：

昆明杯冠藤药材2 kg经粉碎后，用药材重量8倍量的甲醇连续回流提取两次，提取温度60℃，提取4小时，合并提取液并浓缩至浸膏状，加入浸膏重量2倍量的水热溶，经过等体积石油醚萃取两次，合并水层。水溶液直接经过聚酰胺柱，聚酰胺粒度为300目，用4倍柱体积的纯化水继续洗脱。流出液直接上DM-130型号大孔树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用乙酸乙酯溶出。溶出液稀释到0.1 kg溶液后直接上硅胶柱，硅胶粒度为400目，依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯:乙醇（V:V=10:1）、乙酸乙酯:乙醇（V:V=4:1）的洗脱体系洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤皂苷23.1g，经检测总皂苷质量含量达到90.8%。

实施例4

昆明杯冠藤药材2 kg经粉碎后，用药材重量15倍量的纯化水连续回流提取3次，提取温度80℃，提取1小时，合并提取液并浓缩至浸膏状，加入浸膏重量2倍量的水热溶，经过等体积石油醚萃取两次，合并水层。水溶液直接经过聚酰胺柱，聚酰胺粒度为10目，用2倍柱体积的纯化水继续洗脱。流出液直接上H-60型号大孔树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用乙酸乙酯溶出。溶出液稀释到0.1kg溶液后直接上硅胶柱，硅胶粒度为60目，依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯:乙醇（V:V=10:1）、乙酸乙酯:乙醇（V:V=4:1）的洗脱体系洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤皂20.7g，经检测总皂苷质量含量达到89.2%。

实施例5

昆明杯冠藤药材2 kg经粉碎后，用药材重量3倍量的甲醇连续回流提取3次，提取温度30℃，提取4小时，合并提取液并浓缩至浸膏状，加入浸膏重量6倍量的水热溶，经过等体积石油醚萃取两次，合并水层。水溶液直接经过聚酰胺柱，聚酰胺粒度为300目，用8倍柱体积的纯化水继续洗脱。流出液直接上DM-130型号大孔树脂柱，依次用纯化水、20%乙醇和95%乙醇进行洗脱，回收95%乙醇部分，浓缩至浸膏后用乙酸乙酯溶出。溶出液稀释到0.05kg溶液后直接上硅胶柱，硅胶粒度为300目，依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯:乙醇（V:V=10:1）、乙酸乙酯:乙醇（V:V=4:1）的洗脱体系洗脱，薄层监测后，合并含昆明杯冠藤皂苷部分的流出液，浓缩至干，即得昆明杯冠藤皂苷27.2g，经检测总皂苷质量含量达到90.5%。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤1）中的溶剂是纯化水、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒，每次溶剂量为昆明杯冠藤药材重量的3~15倍量，提取温度为30~80℃。

3.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤1）中的溶剂是纯化水、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒，每次溶剂量为昆明杯冠藤药材重量的6倍量，提取温度为60℃。

4.根据权利要求2所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤1）中的溶剂是乙醇，提取次数为1~3次，提取时间为1~4小时。

5.根据权利要求4所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤1）中提取次数为2次，提取时间为2小时。

6.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤1）中加水溶解所需的量为浸膏重量的2~8倍量。

7.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述的大孔树脂型号为H-60、D-101B、DM-130、XAD-16、LS-300和LS-46中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述的浸膏溶出溶剂可以为乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒。

9.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述的样品溶液稀释至重量为原药材重量的1/40~1/10。

10.根据权利要求1所述的一种昆明杯冠藤总皂苷的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述的洗脱体系依次分别为乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中的一种或其中任意几种的任意比例的混合溶媒。