CN109336942B

CN109336942B - 一种从人参中提取纯化竹节参皂苷ⅵ的方法

Info

Publication number: CN109336942B
Application number: CN201811236339.6A
Authority: CN
Inventors: 金永日; 王紫琪; 李绪文
Original assignee: Jilin University
Current assignee: Jilin University
Priority date: 2018-10-23
Filing date: 2018-10-23
Publication date: 2020-08-28
Anticipated expiration: 2038-10-23
Also published as: CN109336942A

Abstract

一种从人参中提取纯化竹节参皂苷Ⅵ的方法，将人参粉碎，加入50％‑70％甲醇水溶液超声提取，提取液减压浓缩，浓缩液用水稀释，过大孔吸附树脂柱纯化，再经硅胶柱层析和制备液相进行分离纯化，得到纯度大于98％的竹节参皂苷Ⅵ。

Description

一种从人参中提取纯化竹节参皂苷Ⅵ的方法

技术领域：

本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种从人参中提取纯化竹节参皂苷Ⅵ的方法。

背景技术：

人参为五加科(Araliaceae)人参属植物人参的干燥根。现代研究表明，人参主要化学成分为皂苷、多糖、挥发油，有机酸，木质素，无机元素等，人参皂苷具有抗疲劳，活血化瘀，保护神经系统，抑制白血病细胞增殖，提高皮质激素水平，调节免疫功能，抗病毒，抗糖尿病等活性。人参皂苷主要分为达玛烷型，齐墩果酸型和奥克梯隆型。其中达玛烷型为四环三萜类物质，目前已分离得到的人参皂苷，绝大多数都是达玛烷三萜类及其衍生物。竹节参，为五加科植物竹节参PanarjaPonicusC.A.Mey.的干燥根茎。具有散瘀止血，消肿止痛，祛痰止咳，补虚强壮之功效。常用于痨嗽咯血，跌扑损伤，咳嗽痰多，病后虚弱。文献表明，竹节参中的皂苷多为齐墩果酸型，很少有达玛烷型。竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅴ均属于齐墩果酸五环三萜类，此类结构的皂苷在竹节参中的含量较多，二者在竹节参中的含量分别为1.98％、2.68％。竹节参总皂苷具有抗炎镇痛的功效，以竹节参为主药的复方竹节参片，在临床上用于治疗各项风湿疼痛病症。竹节参总皂苷还可用于疫苗佐剂的研究，具有毒副作用小，取材广泛等优势。竹节参皂苷Ⅵ属于达玛烷四环三萜类，此类结构的皂苷在竹节参中含量较少，竹节参皂苷Ⅵ在竹节参中的含量约为0.19％，因此分离单体和活性研究的文献较少。本发明提供了一种从人参中分离纯化竹节参皂苷Ⅵ的方法，为达玛烷型竹节参皂苷单体的分离提供了一种新的方法。

发明内容：

本发明的目的是提供一种从人参中提取分离高纯度竹节参皂苷Ⅵ的方法。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

将人参粉碎，加入有机溶剂的水溶液超声提取，优选甲醇水溶液提取，合并提取液，减压回收至无醇味，浓缩液用水稀释，过大孔吸附树脂柱纯化，再经硅胶柱层析和制备液相进行分离纯化；

所述有机溶剂水溶液的体积百分比为50％-70％；

所述大孔吸附树脂吸附后用50％-70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥；大孔吸附树脂为D101、AB-8或者D4020。

所述硅胶柱层析的流动相为乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1；

制备型高效液相色谱的流动相为乙腈-水＝29：71。

本发明的制备方法，具有高效、快速、产品纯度高且有机溶剂用量较少，绿色环保等优点。

具体实施方式:

下面将结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1:

取人参药材2kg，粉碎，加入16升70％甲醇水溶液超声提取5次，每次30分钟，合并提取液，减压浓缩，浓缩液用5倍水稀释，过D101大孔吸附树脂柱吸附，水洗至流出液无色，再用10倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，回收溶剂，减压浓缩得到提取物。提取物以乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1为流动相进行硅胶柱层析(展开剂：氯仿-甲醇-水＝16：5：1和正丁醇-乙酸乙酯-水＝4:1:5)，得到含竹节参皂苷Ⅵ的皂苷粉末3.2g。将此样品用流动相溶解，在检测波长203nm下，以乙腈-水＝29：71为流动相利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，收集含竹节参皂苷Ⅵ的流份，回收溶剂后冻干，得竹节参皂苷Ⅵ1.7g。将其核磁数据与文献报道的竹节参皂苷Ⅵ核磁数据对比，确定其为竹节参皂苷Ⅵ，经高效液相色谱仪检测，其纯度为98.7％。核磁数据及色谱条件如下。

¹³CNMR(C₅D₅N，150MHz)δc：131.14(C-25),126.13(C-24),106.23(6”-xyl-1”’),106.1(2’-glc-1”),105.6(6-C-20-glc-1’),105.24(C-3-glc-1),98.18(C20-glc-1),89.08(C-3),83.66(C-3-glc-2),83.59(C-20),79.44(C-20-glc-3),78.47(C-3-glc-3),78.41(C-20-glc-3’),78.38(6”-xyl-3”’),78.25(2’-glc-5”),78.25(2’-glc-3”),78.08(C-20-glc-5’),77.31(C-20-glc-5),77.12(2’-glc-2”),77.06(C-3-glc-5),75.2(C-20-glc-2),74.98(C-20-glc-2’),74.98(6”-xyl-2”’),71.79(C-20-glc-4’),71.79(C-20-gic-4),71.70(6”-xyl-4”’),71.65(C-3-glc-4),71.25(2’-glc-4”),70.46(C-3-glc-6),70.24(C-12),70.03(C-20-glc-6),67.22(6”-xyl-5”’),63.01(C-20-glc-6’),62.81(2’-glc-6”),56.51(C-5),51.65(C-17),51.51(C-14),50.35(C-9),49.65(C-13),40.16(C-8),39.81(C-4),39.34(C-1),37.03(C-10),36.35(C-22),35.26(C-7),30.98(C-11),30.84(C-15),28.22(C-28),26.9(C-16),26.75(C-2),25.93(C-26),23.29(C-23),22.5(C-21),18.54(C-6),18.09(C-27),17.55(C-30),16.73(C-29),16.39(C-19),16.14(C-18).

色谱条件：ACCHROMS3000高效液相色谱仪，华谱TnatureC18色谱柱(4.6*250mm，5μm)，流动相乙腈(B)-水(A)，梯度洗脱(0-29min，20％B；29-35min，20％-25％B；30-40min，25％B；40-65min，25％-31％B；65-75min，31％-37％B)；流速：1ml/min；检测波长203nm；柱温30℃；进样量：20μL。

实施例2:

取人参药材2kg，粉碎,加入16升70％甲醇水溶液超声提取5次，每次30分钟，合并提取液，减压浓缩，浓缩液用5倍水稀释，过D4020大孔吸附树脂柱吸附，水洗至流出液无色，再用10倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，回收溶剂，减压浓缩得到提取物。提取物以乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1为流动相进行硅胶柱层析(展开剂：氯仿-甲醇-水＝16：5：1和正丁醇-乙酸乙酯-水＝4:1:5)，得到含竹节参皂苷Ⅵ的皂苷粉末3.0g。将此样品用流动相溶解，在检测波长203nm下，以乙腈-水＝29：71为流动相利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，收集含竹节参皂苷Ⅵ的流份，回收溶剂后冻干，得竹节参皂苷Ⅵ1.6g。经高效液相色谱仪检测，其纯度为98.6％。

实施例3:

取人参药材2kg，粉碎,加入16升50％甲醇水溶液超声提取5次，每次30分钟，合并提取液，减压浓缩，浓缩液用5倍水稀释，过AB-8大孔吸附树脂柱吸附，水洗至流出液无色，再用10倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，回收溶剂，减压浓缩得到提取物。提取物以乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1为流动相进行硅胶柱层析(展开剂：氯仿-甲醇-水＝16：5：1和正丁醇-乙酸乙酯-水＝4:1:5)，得到含竹节参皂苷Ⅵ的皂苷粉末3.2g。将此样品用流动相溶解，在检测波长203nm下，以乙腈-水＝29：71为流动相利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，收集含竹节参皂苷Ⅵ的流份，回收溶剂后冻干，得竹节参皂苷Ⅵ1.9g。经高效液相色谱仪检测，其纯度为99.0％。

Claims

1.一种从人参中提取纯化竹节参皂苷Ⅵ的方法，其特征在于:提取纯化步骤包括:将人参粉碎，加入体积百分比为50％-70％的甲醇水溶液超声提取，合并提取液，减压回收至无醇味，浓缩液用水稀释，过大孔吸附树脂柱，用50％-70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥，再经硅胶柱层析和制备液相进行分离纯化，硅胶柱层析的流动相为乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1，制备液相色谱分离的流动相为乙腈-水＝29：71。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：取人参药材2kg，粉碎，加入16升70％甲醇水溶液超声提取5次，每次 30分钟，合并提取液，减压浓缩，浓缩液用5倍水稀释，过D101大孔吸附树脂柱吸附，水洗至流出液无色，再用10倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，回收溶剂，减压浓缩得到提取物；提取物以乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1为流动相进行硅胶柱层析，得到含竹节参皂苷Ⅵ的皂苷粉末3.2g；将此样品用流动相溶解，在检测波长203nm下，以乙腈-水＝29：71为流动相利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，收集含竹节参皂苷Ⅵ的流份，回收溶剂后冻干，得竹节参皂苷Ⅵ1.7g。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：取人参药材2kg，粉碎,加入16升70％甲醇水溶液超声提取5次，每次30 分钟，合并提取液，减压浓缩，浓缩液用5倍水稀释，过D4020大孔吸附树脂柱吸附，水洗至流出液无色，再用10倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，回收溶剂，减压浓缩得到提取物；提取物以乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1为流动相进行硅胶柱层析，得到含竹节参皂苷Ⅵ的皂苷粉末3.0g；将此样品用流动相溶解，在检测波长203nm下，以乙腈-水＝29：71为流动相利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，收集含竹节参皂苷Ⅵ的流份，回收溶剂后冻干，得竹节参皂苷Ⅵ1.6g。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：取人参药材2kg，粉碎,加入16升50％甲醇水溶液超声提取5次，每次30 分钟，合并提取液，减压浓缩，浓缩液用5倍水稀释，过AB-8大孔吸附树脂柱吸附，水洗至流出液无色，再用10倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，回收溶剂，减压浓缩得到提取物；提取物以乙酸乙酯-乙醇-水＝6:1:0.1为流动相进行硅胶柱层析，展开剂：氯仿-甲醇-水＝16：5：1和正丁醇-乙酸乙酯-水＝4:1:5，得到含竹节参皂苷Ⅵ的皂苷粉末3.2g；将此样品用流动相溶解，在检测波长203nm下，以乙腈-水＝29：71为流动相利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，收集含竹节参皂苷Ⅵ的流份，回收溶剂后冻干，得竹节参皂苷Ⅵ1.9g。