CN109134580B

CN109134580B - 一种从人参叶中提取纯化vinaginsenoside R15的方法

Info

Publication number: CN109134580B
Application number: CN201811358300.1A
Authority: CN
Inventors: 李绪文; 陈宏辉; 金永日
Original assignee: Jilin University
Current assignee: Jilin University
Priority date: 2018-11-15
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2020-10-30
Anticipated expiration: 2038-11-15
Also published as: CN109134580A

Abstract

本发明涉及一种从人参叶中提取纯化vinaginsenoside R₁₅的方法，采用干燥的人参叶为提取原料，乙醇回流提取，经大孔吸附树脂纯化、利用硅胶柱层析、ODS柱层析及制备液相等手段制备vinaginsenoside R₁₅。本发明操作方法简便、快速,纯度可达98％以上。

Description

一种从人参叶中提取纯化vinaginsenoside R15的方法

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，涉及一种从人参叶中提取纯化 vinaginsenosideR₁₅的方法。

背景技术

人参叶为五加科(Araliaceae)人参属植物人参的干燥叶，具有滋补、强壮、调节机能、提高机体免疫力以及抗炎等多种作用。现代研究表明，人参叶主要化学成分为主要含有皂苷类、黄酮类、甾类、人参挥发油、有机酸类、人参多糖等多种类型化合物，其皂苷具有抗疲劳，活血化瘀，保护神经系统，抑制白血病细胞增殖，提高皮质激素水平，调节免疫功能，抗病毒，抗糖尿病等活性。人参皂苷主要分为达玛烷型，齐墩果酸型和奥克梯隆型，其中达玛烷型为四环三萜类物质。目前已分离得到的人参皂苷，绝大多数都是达玛烷三萜类及其衍生物。据文献检索，已经有人从人参的根中分离出vinaginsenoside R₁₅，而尚未见从人参叶中分离vinaginsenoside R₁₅的报道。本发明提供了一种从人参叶中提取分离纯化vinaginsenoside R₁₅的方法，为vinaginsenoside R₁₅单体的分离提供了一种新的思路和途径，本发明可为其单体的活性研究提供物质基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种从人参叶中提取纯化高纯度vinaginsenoside R₁₅的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

将人参叶适当粉碎，乙醇水溶液提取，提取液减压浓缩至无醇味后稀释，稀释液经大孔树脂吸附后用Na0H水溶液洗脱，洗脱液用37％盐酸中和至中性后重新过大孔树脂吸附，用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，拌入硅胶，干燥得上柱样品。此样品经硅胶柱层析、ODS柱层析及制备液相分离纯化后获得 vinaginsenoside R₁₅。其中所述提取溶剂乙醇水溶液的体积百分比为70％，提取方法为回流提取，提取溶剂的体积为药材的10倍。Na0H水溶液为0.1-1.0％的Na0H 水溶液，用98％硫酸中和洗脱液至pH＝6-8。硅胶柱层析的流动相体系为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝6:1:1，展开剂为氯仿-甲醇-水＝2.5：1.5：0.35。ODS柱的流动相体系仅为甲醇-水＝1:2，展开剂为甲醇-水＝1：1.5。制备液相色谱分离流速为2.5ml/min，检测波长为203nm，流动相为乙腈-水＝14：86，分段收集含 vinaginsenosideR₁₅流出液，回收溶剂，最后经冷冻干燥得产品。经HPLC测定 vinaginsenoside R₁₅的纯度可达到99.0％。

本发明的有益效果:

本发明方法具有分离效果好、高效、快速、产品纯度高、操作简单、所用有机试剂较少、绿色环保等优点。

具体实施方式

为了进一步了解本发明的技术特征，下面结合具体实施例对本发明进行详细地阐述。实施例只对本发明具有示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本领域的技术人员在本发明的基础上作出的任何非实质性的修改，都应属于本发明的保护范围。

实施例1：

取人参叶1kg，粉碎,加入10升70％乙醇水溶液回流提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩，浓缩液用水稀释5倍，上D101大孔吸附树脂柱吸附，用0.2％的Na0H水溶液洗脱，洗脱液用37％盐酸中和至pH＝7。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附，用85％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，拌入硅胶200克，干燥得上柱样品，然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝6:1:1为流动相进行硅胶柱层析，TLC检测(展开剂：氯仿-甲醇-水＝2.5：1.5：0.35)，合并相同组分，接着以甲醇-水＝1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂：甲醇水1：1.5)得到含vinaginsenoside R₁₅的皂苷粉末400mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，将样品溶于甲醇中，流速控制为2.5ml/min，检测波长为203nm，流动相为乙腈-水＝14:86。分段收集流出液，回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R₁₅165mg。经高效液相色谱仪检验，纯度为98.6％，将其核磁数据与vinaginsenoside R₁₅文献核磁数据对比，两者一致，确定其为vinaginsenoside R₁₅。

实施例2：

取人参叶1kg，粉碎,加入10升70％乙醇水溶液回流提取3次，每次1.5小时，提取液减压浓缩，浓缩液用水稀释5倍，上D4020大孔吸附树脂柱吸附，用 0.3％的Na0H水溶液洗脱，用98％硫酸中和洗脱液至pH＝6。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附，用75％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，拌入硅胶200 克，干燥得上柱样品，然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝6:1:1为流动相进行硅胶柱层析，TLC检测(展开剂：氯仿-甲醇-水＝2.5：1.5：0.35)，合并相同组分，接着以甲醇-水＝1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂：甲醇水1：1.5)得到含 vinaginsenoside R₁₅的皂苷粉末430mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，将样品溶于甲醇中，流速控制为2.5ml/min，检测波长为203nm，流动相为乙腈-水＝14:86。分段收集流出液，回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R₁₅268mg。经高效液相色谱仪检验，纯度为98.9％。

实施例3：

取人参叶1kg，粉碎,加入10升70％乙醇水溶液回流提取3次，每次1小时，提取液减压浓缩，浓缩液用水稀释5倍，上HP20大孔吸附树脂柱吸附，用0.8％的Na0H水溶液洗脱干净，用硝酸中和洗脱液至pH＝8。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附，用95％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，拌入硅胶200克，干燥得上柱样品，然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝6:1:1为流动相进行经硅胶柱层析，TLC检测(展开剂：氯仿-甲醇-水＝2.5：1.5：0.35)，合并相同组分，接着以甲醇-水＝1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂：甲醇水1：1.5)得到含vinaginsenoside R₁₅的皂苷粉末300mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，将样品溶于甲醇中，流速控制为2.5ml/min，检测波长为203nm，流动相为乙腈-水＝14:86。分段收集流出液，回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R₁₅159mg。经高效液相色谱仪检验，纯度为99.6％。

实施例4：

取人参叶1kg，粉碎,加入10升70％乙醇水溶液回流提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩，浓缩液用水稀释5倍，上AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用1.0％的Na0H水溶液洗脱，用磷酸中和洗脱液至pH＝7。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附，用55％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，拌入硅胶200克，干燥得上柱样品，然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝6:1:1为流动相进行硅胶柱层析， TLC检测(展开剂：氯仿-甲醇-水＝2.5：1.5：0.35)，合并相同组分，接着以甲醇-水＝1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂：甲醇水1：1.5)得到含vinaginsenoside R₁₅的皂苷粉末520mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化，将样品溶于甲醇中，流速控制为2.5ml/min，检测波长为203nm，流动相为乙腈-水＝14；86。分段收集流出液，回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R₁₅155mg。经高效液相色谱仪检验，纯度为99.5％。

Claims

1.一种从人参叶中提取纯化vinaginsenoside R₁₅的方法，其特征在于:其提取纯化步骤包括:将人参叶适粉碎，用体积百分比为70％的乙醇水溶液，回流提取，提取溶剂的体积为药材的10倍，提取液减压浓缩至无醇味后稀释，稀释液经大孔吸附树脂吸附后用0.1-1.0％的Na0H水溶液洗脱，洗脱液用盐酸中和后至pH＝6-8重新过大孔吸附树脂吸附，用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，拌入硅胶，干燥得上柱样品，然后经硅胶柱层析、ODS柱层析及制备液相分离纯化后获得vinaginsenoside R₁₅，制备液相色谱分离流速为检测波长为203nm，流动相为乙腈-水＝14：86；所述大孔吸附树脂为D101、AB-8、D4020或HP-20。