CN107213180B - 一种三七黄酮的分离提取方法 - Google Patents

一种三七黄酮的分离提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种三七黄酮的分离提取方法,该方法以三七茎叶为原料,采用乙醇溶液提取后,利用不同物质在丙酮水溶液的溶解性分离去除三七皂苷类化合物,然后用氢键大孔树脂进行吸附解析浓缩,浓缩液经聚酰胺柱层析将三七黄酮和三七黄酮甙分离,获得高纯度的三七黄酮;本发明方法针对性强,分离效果好,获得的黄酮产物纯度大于92%,且方法简单易操作,适于产业化生产和市场推广应用。

Description

一种三七黄酮的分离提取方法
技术领域
本发明涉及一种三七黄酮的分离提取方法。
背景技术
黄酮类化合物是自然界分布较广的一类化合物,三七全植株中,三七叶中总黄酮含量较高,含量2%左右,根茎中黄酮含量0.5%,三七茎叶中总黄酮含量高于三七根茎中总黄酮含量。三七茎叶是采挖三七后被大量抛弃的可利用资源,根据初步调查三七茎叶每年可利用资源3000t-4000t,目前仅利用了10%不到;因此三七茎叶中黄酮类物质具有开发价值。
三七黄酮具有止咳平喘祛痰、活血化瘀、保护心肌损伤、扩张血管、抗高血压,改善微循环、清除氧自由基等作用。
三七黄酮主含黄酮和黄酮甙类,主要为山奈酚、槲皮素类及其甙类。
三七黄酮提取工艺和专利报道较少,在粗提环节中大多采用水提法,水提取法能得到大量黄酮甙类化合物,水溶性较差的黄酮类化合物则难以提取完全,具有局限性。在初纯化工艺过程中通常使用AB-8、NK大孔吸附树脂等,制备所得黄酮含量较低,针对性较差,因三七皂苷和三七黄酮极性相似,洗脱条件基本一样,现有技术很难将三七黄酮和三七皂苷分离开,针对现有方法提取三七黄酮提取分离率低、纯度低等问题。
发明内容
本发明提供了一种简单、分离效果好、提取率高的三七茎叶黄酮的分离提取方法,本发明方法具体内容如下:
(1)将三七或三七茎叶粉碎后置于提取罐中,加入生药质量8-10倍的体积浓度70%-80%的乙醇溶液,同时加入氨水调节混合物pH为8-10,加热回流提取2次以上,合并每次提取液浓缩到清膏加入稀盐酸调节pH值至中性,继续浓缩干燥得棕黄色粉末;
(2)将步骤(1)干燥物粉碎后,加入其质量5-7倍体积浓度70%-90%的丙酮水溶液,室温密闭搅拌提取2-4小时,过滤后,滤渣再加入2体积浓度70%-90%的丙酮水溶液提取一次,丢弃滤渣,合并2次丙酮提取液;
(3)减压回收滤液中丙酮得流浸膏,向流浸膏中加入乙醇溶液,搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度25-30%,过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液;
(4)将步骤(3)三七黄酮粗提液经过氢键大孔树脂进行吸附,吸附后纯净水冲洗到流出液为无色,然后用体积浓度70%-80%的乙醇溶液解析,解析流速为1-2柱体积/h,收集流出的解析液,浓缩得浓缩液;
(5)将步骤(4)浓缩液进行聚酰胺柱层析,上样完后纯净水冲洗到洗出液为无色,然后用体积浓度35-45%的乙醇溶液解析聚酰胺柱,解析流速为0.5柱体积/h,收集解析液;最后用体积浓度70%-80%的乙醇溶液解析三七黄酮,解析流速为1-2柱体积/h;
(6)将步骤(5)体积浓度35-45%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得三七黄酮甙,该粉末水溶性较好,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,黄酮甙含量大于85%;将体积浓度70%-80%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得三七黄酮;该粉末微溶于水,溶于乙醇,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,黄酮含量大于92%。
所述步骤(4)中氢键大孔树脂型号为HPD417或ADS-17,用量为生药质量的0.3-0.5倍,上柱流速为1.5-2柱体积/h。
所述步骤(5)中上样流速为1-2柱体积/h。
所述聚酰胺树脂用量为生药质量的0.2-0.4倍。
所述步骤(5)中使用4-5倍柱体积的体积浓度35-45%的乙醇溶液进行解析,解析大极性黄酮甙。
所述步骤(5)中使用2-3倍柱体积的体积浓度70-80%的乙醇溶液进行解析,解析小极性黄酮类物质。
本发明优点和技术效果如下:
本发明方法利用三七皂苷类化合物很难溶解于丙酮,而三七黄酮在丙酮中溶解性较好的特点,采用丙酮纯化粗提取物;在树脂纯化环节针对黄酮分子的酚羟基结构特点,选择具有较好吸附能力和吸附选择性的氢键大孔吸附树脂,能较好的吸附黄酮类化合物,通过本发明方法能获得高纯度三七总黄酮;且本发明方法操作简单,适于工业化生产和市场推广应用。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明,但本发明保护范围不局限于所述内容。
实施例1:本三七茎叶黄酮的分离提取方法如下:
(1)将三七茎叶1kg粉碎至60目,将粉末置于提取罐加入生药质量8倍的体积浓度70%的乙醇溶液,同时加入氨水调节混合物pH为8,加热回流提取2次,第一次2小时,第二次1小时,合并两次提取液加入稀盐酸调节pH值至中性,减压真空浓缩干燥得棕黄色粉末;
(2)将步骤(1)干燥物粉碎后,加入干燥物质量5倍的体积浓度90%的丙酮水溶液,室温密闭搅拌罐中搅拌提取4小时,过滤后,滤渣再加入2体积浓度90%的丙酮水溶液提取一次,丢弃滤渣,合并2次丙酮提取液;
(3)减压回收滤液中丙酮得流浸膏,向流浸膏中加入乙醇溶液,搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度25%,过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液;
(4)将步骤(3)三七黄酮粗提液经氢键大孔树脂进行吸附,树脂用量为0.3倍生药质量,树脂型号为HPD417,上柱流速为1.5BV/h,吸附后纯净水冲洗到无色;然后用体积浓度70%的乙醇溶液解析三七黄酮,解析流速为1BV/h,收集黄色解析液,减压浓缩得混悬状浓缩液;
(5)将步骤(4)浓缩液进行聚酰胺柱层析,上样流速为1BV/h,聚酰胺粉末用量为0.2倍生药质量,上样完后纯净水冲洗到无色,然后用4倍柱体积的体积浓度35%乙醇溶液解析聚酰胺柱,解析流速为0.5柱体积/h,收集解析液,主含黄酮甙类物质;继续用2倍柱体积体积浓度70%的乙醇溶液解析三七黄酮,解析流速为1柱体积/h;
(6)将步骤(5)体积浓度35%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七叶黄酮甙粉末12.6g,该粉末水溶性较好,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,三七黄酮甙含量为90%;将体积浓度70%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七黄酮粉末5.4g,该粉末微溶于水,溶于乙醇,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,三七黄酮含量为97%。
实施例2: 本三七茎叶黄酮的分离提取方法如下:
(1)将三七茎叶1kg粉碎至60目,将粉末置于提取罐加入生药质量9倍的体积浓度80%的乙醇溶液,同时加入氨水调节混合物pH为9,加热回流提取2次,第一次2小时,第二次1小时,合并两次提取液加入稀盐酸调节pH值至中性,减压真空浓缩干燥得棕黄色粉末;
(2)将步骤(1)干燥物粉碎后,加入干燥物质量6倍的体积浓度80%的丙酮水溶液,室温密闭搅拌罐中搅拌提取3小时,过滤后,滤渣再加入2体积浓度80%的丙酮水溶液提取一次,丢弃滤渣,合并2次丙酮提取液;
(3)减压回收滤液中丙酮得流浸膏,向流浸膏中加入乙醇溶液,搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度30%,过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液;
(4)将步骤(3)三七黄酮粗提液经氢键大孔树脂进行吸附,树脂用量为0.4倍生药质量,树脂型号为ADS-17,上柱流速为2BV/h,吸附后纯净水冲洗到无色;然后用体积浓度75%的乙醇溶液解析三七黄酮,解析流速为1.5BV/h,收集黄色解析液,减压浓缩得混悬状浓缩液;
(5)将步骤(4)浓缩液进行聚酰胺柱层析,上样流速为1BV/h,聚酰胺粉末用量为0.3倍生药质量,上样完后纯净水冲洗到无色,然后用5倍柱体积的体积浓度45%乙醇溶液解析聚酰胺柱,收集解析液,主含水溶性三七黄酮甙物质;继续用3倍柱体积体积浓度80%的乙醇溶液解析三七黄酮;
(6)将步骤(5)体积浓度45%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七叶黄酮甙粉末14.7,该粉末水溶性较好,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,黄酮甙含量为87%;将体积浓度80%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七黄酮粉末6.3,该粉末微溶于水,溶于乙醇,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,黄酮含量为94%。
实施例3:本三七茎叶黄酮的分离提取方法如下:
(1)将三七叶1kg粉碎至60目,将粉末置于提取罐加入生药质量10倍的体积浓度75%的乙醇溶液,同时加入氨水调节混合物pH为10,加热回流提取3次,第一次2小时,第二次1小时,第3次1h,合并3次提取液加入稀盐酸调节pH值至中性,减压真空浓缩干燥得棕黄色粉末;
(2)将步骤(1)干燥物粉碎后,加入干燥物质量7倍的体积浓度70%的丙酮水溶液,室温密闭搅拌罐中搅拌提取2小时,过滤后,滤渣再加入2体积浓度70%的丙酮水溶液提取一次,丢弃滤渣,合并2次丙酮提取液;
(3)减压回收滤液中丙酮得流浸膏,向流浸膏中加入乙醇溶液,搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度27%,过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液;
(4)将步骤(3)三七黄酮粗提液经氢键大孔树脂进行吸附,树脂用量为0.5倍生药质量,树脂型号为ADS-17,上柱流速为2BV/h,吸附后纯净水冲洗到无色;然后用体积浓度75%的乙醇溶液解析三七黄酮,解析流速为2BV/h,收集黄色解析液,减压浓缩得混悬状浓缩液;
(5)将步骤(4)浓缩液进行聚酰胺树脂柱层析,上样流速为2BV/h,60目聚酰胺树脂用量为0.4倍生药质量,上样完后纯净水冲洗到无色,然后用4倍柱体积的体积浓度40%乙醇溶液解析聚酰胺柱,收集解析液,主含水溶性三七叶黄酮甙物质;继续用2.5倍柱体积体积浓度75%的乙醇溶液解析三七黄酮;
(6)将步骤(5)体积浓度40%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七叶黄酮甙粉末17.01,该粉末水溶性较好,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,黄酮甙含量为85%;将体积浓度75%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七黄酮粉末7.29,该粉末微溶于水,溶于乙醇,以槲皮素为对照,UV法进行含量测定,黄酮含量为92%。

Claims (6)

1.一种三七黄酮的分离提取方法,其特征在于步骤如下:
(1)将60目的三七茎叶粉碎后置于提取罐中,加入生药质量8、9或10倍的体积浓度70%-80%的乙醇溶液,同时加入氨水调节混合物pH为9,加热回流提取2次以上,合并每次提取液浓缩到清膏加入稀盐酸调节pH值至中性,继续浓缩干燥得棕黄色粉末;
(2)将步骤(1)干燥物粉碎后,加入其质量5-7倍体积浓度70%-90%的丙酮水溶液,室温密闭搅拌提取2-4小时,过滤后,滤渣再加入2体积浓度70%-90%的丙酮水溶液提取一次,丢弃滤渣,合并2次丙酮提取液;
(3)减压回收滤液中丙酮得流浸膏,向流浸膏中加入乙醇溶液,搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度25-30%,过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液;
(4)将步骤(3)三七黄酮粗提液经过HPD417或ADS-17大孔树脂进行吸附,吸附后纯净水冲洗到流出液为无色,然后用体积浓度70%-80%的乙醇溶液解析,解析流速为1-2柱体积/h,收集流出的解析液,浓缩得浓缩液;
(5)将步骤(4)浓缩液进行聚酰胺柱层析,上样完后纯净水冲洗到洗出液为无色,然后用体积浓度35-45%的乙醇溶液解析聚酰胺柱,解析流速为0.5柱体积/h,收集解析液;最后用体积浓度70%-80%的乙醇溶液解析三七黄酮,解析流速为1-2柱体积/h;
(6)将步骤(5)体积浓度35-45%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得三七黄酮甙,将体积浓度70%-80%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得三七黄酮。
2.根据权利要求1所述的三七黄酮的分离提取方法,其特征在于:步骤(4)中大孔树脂用量为生药质量的0.3-0.5倍,上柱流速为1.5-2柱体积/h。
3.根据权利要求1所述的三七黄酮的分离提取方法,其特征在于:步骤(5)中上样流速为1-2柱体积/h。
4.根据权利要求3所述的三七黄酮的分离提取方法,其特征在于:聚酰胺树脂用量为生药质量的0.2-0.4倍。
5.根据权利要求1所述的三七黄酮的分离提取方法,其特征在于:步骤(5)中使用4-5倍柱体积的体积浓度35-45%的乙醇溶液进行解析。
6.根据权利要求1所述的三七黄酮的分离提取方法,其特征在于:步骤(5)中使用2-3倍柱体积的体积浓度70-80%的乙醇溶液进行解析。
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