CN111110726A - 一种莲房总黄酮的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药技术领域，具体公开了一种莲房总黄酮的制备方法。所述方法以莲房为原料，经乙醇水溶液回流提取浓缩，浓缩物水溶解后经大孔吸附树脂色谱纯化得粗提取物，粗提取物水溶解后经聚酰胺柱色谱纯化，得到提取物，提取物的水溶液先经乙酸乙酯萃取，再用正丁醇萃取，正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。本发明制备得到的莲房总黄酮提取物含有8种黄酮类化合物其含量之和超过60%。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种莲房总黄酮的制备方法。
背景技术
莲房是睡莲科植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的干燥花托，具有化瘀止血等功效，用于崩漏，尿血，痔疮出血，产后瘀阻，恶露不尽。化学和药理研究表明，莲房主要含有黄酮类和原花青素类成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、保肝、改善记忆力、抗辐射和降血脂等作用。莲房是莲子的加工过程中的副产物，被当作废弃物大量丢弃而未加以利用。莲房中含有大量的营养成分及丰富的黄酮成分，发掘其潜在的医药用途，对于资源及环境保护也具有意义。
目前虽有莲房总黄酮提取工艺的文献报道，但其含量测定是以芦丁为指标，采用采用紫外-可见分光光度法进行测定，以此来计算莲房总黄酮提取物中黄酮的含量（郑淑霞，易骏，吴锦忠，等. 大孔树脂纯化莲房总黄酮的工艺研究，中国药房，2015,26（31）4405-4408）；陈红梅．大孔吸附树脂对莲房黄酮的吸附分离特性研究，长春师范学院学报（自然科学版），2013，32(2)：69-73）。该法考察指标单一，不能全面代表黄酮类成分的含量，且酸水解受多种因素影响，未能完全反映出莲房中黄酮的真实含量，也未能体现出莲房中主要的黄酮类化合物杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量，具有一定的局限性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种莲房总黄酮的制备方法。本方法通过乙醇和水混合溶剂来进行提取分离，保证产品的安全性，也简化了分离的流程，适用于工业化生产。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种莲房总黄酮的制备方法，以莲房为原料，经乙醇水溶液回流提取浓缩，浓缩物水溶解后经大孔吸附树脂色谱纯化得粗提取物，粗提取物水溶解后经聚酰胺柱色谱纯化，得到提取物，提取物的水溶液先经乙酸乙酯萃取，再用正丁醇萃取，正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
一种莲房总黄酮的制备方法，包括以下步骤：
a：将干燥后的莲房粉碎，用50%-95%乙醇水溶液回流提取3次，提取液减压浓缩至无乙醇后加10倍体积的水溶解，过滤，滤液上上大孔树脂，依次用5 倍柱体积（5BV）水洗脱，再用5BV 50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液洗脱的洗脱液，减压浓缩至干，得到含黄酮类成分的粗提取物；
b：向步骤a中所得的粗提取物中加入粗提取物质量40倍体积的水溶解后过聚酰胺柱色谱，以水洗脱5倍柱体积，再用5BV 30%-50%乙醇水溶液洗脱，收集乙醇水溶液洗脱的洗脱液，减压浓缩至干，得到含黄酮类成分的提取物；
c：将步骤b中所得的提取物加提取物质量40倍体积的水溶解，得提取物水溶液，提取物水溶液用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物；向乙酸乙酯萃取物中加入的40倍体积的水溶解，得萃取物水溶液，萃取物水溶液用正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
所述步骤a中的莲房药材与乙醇水溶液的质量体积比为1:10-20。
步骤a中的大孔树脂优选中极性或弱极性大孔树脂，优选HPD-722大孔树脂、HPD-400大孔树脂、D-101大孔树脂中的一种。
所述步骤c所述的乙酸乙酯与提取物水溶液的体积比为1:1-1:4，正丁醇与萃取物水溶液的体积比为1:1-1:4。
一种上述方法制备所得的莲房总黄酮提取物。
本发明莲房总黄酮提取物经高效液相色谱法测定，测得莲房总黄酮提取物中杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量之和不低于60％。
附图说明：
图1本发明实施例1莲房总黄酮提取物的高效液相色谱（HPLC）图。图中1：杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷；2 ：金丝桃苷；3 ：异槲皮苷；4 ：槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷；5 ：山柰酚-3-O-半乳糖苷；6： 异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷；7： 山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷；8：丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷。
本发明的有益效果：
本发明的方法通过乙醇和水混合溶剂提取莲房中的黄酮类物质，经大孔吸附树脂、聚酰胺柱色谱分离，有机溶剂萃取后获得莲房总黄酮提取物。本发明的方法简化了分离的流程，总黄酮提取物含量高，方法简便快速适用于工业化生产。且其原料莲房廉价易得，并实现了莲房废弃物的高值化回收利用，降低了黄酮提取物的制备成本。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，所述的是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
一种莲房总黄酮的制备方法：莲房药材2 kg，用药材量16倍体积的50%乙醇水溶液回流提取3次，提取液过滤，减压浓缩至无乙醇后加入10倍体积的水溶解，过滤，滤液上HPD-722大孔树脂，依次用5 BV水洗脱，再用5 BV 的50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液洗脱液；减压浓缩至干，得粗提取物；加入粗提取物质量40倍体积的水溶解后，上聚酰胺柱色谱，以5BV水洗脱，再用5BV的30%乙醇水溶液洗脱，收集30%乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至干，得提取物；加入提取物质量40倍体积的水溶解后，得提取物水溶液，用与提取物水溶液相等体积的乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物；加入乙酸乙酯萃取物质量40倍体积的水溶解后，得萃取物水溶液，用与萃取物水溶液相等体积的正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
通过HPLC法对莲房总黄酮提取物中8个黄酮类成分的重量百分含量进行测定(图1)，测得莲房总黄酮提取物中杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷的重量百分含量分别为1.92%、36.22%、12.44%、5.41%、1.65%、1.88%、4.11%、4.67%，莲房总黄酮提取物中8个黄酮类成分总含量达到60%以上。
实施例2
一种莲房总黄酮的制备方法：莲房药材2 kg，用药材量14倍体积的体积浓度为70%乙醇水溶液回流提取3次，提取液过滤，滤液合并，减压浓缩至无乙醇后加入10倍体积的水溶解，过滤，滤液上HPD-400大孔树脂，依次用5 BV水洗脱，再用5 BV 50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至干，得粗提取物；加入粗提取物质量40倍体积的水溶解后，上聚酰胺柱色谱，以5BV水洗脱，再用5BV 50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至干，得提取物；加提取物质量40倍体积的水溶解后，得提取物水溶液，用提取物水溶液二分之一倍体积的乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物，加入乙酸乙酯萃取物质量40倍体积的水溶解后，得萃取物水溶液，用萃取物水溶液二分之一倍体积的正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
通过HPLC法对莲房总黄酮提取物中8个黄酮类成分的重量百分含量进行测定，测得莲房总黄酮提取物中杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷的重量百分含量分别为1.65%、35.37%、11.26%、6.02%、1.86%、1.63%、3.68%、3.53%，莲房总黄酮提取物中8个黄酮类成分总含量达到60%以上。
实施例3
一种莲房总黄酮的制备方法：莲房药材2 kg，用药材量20倍体积的体积浓度为95%乙醇水溶液回流提取3次，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至无乙醇后，加入10倍体积的水溶解，过滤，滤液上D-101大孔树脂，依次用5 BV水洗脱，再用5 BV 50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至干，得粗提取物；加入粗提取物质量40倍体积的水溶解后，上聚酰胺柱色谱，以5BV水洗脱，再用5BV 30%乙醇水溶液洗脱，收集30%乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至干，得提取物；加入提取物质量40倍体积的水溶解，得提取物水溶液，用提取物水溶液四分之一倍体积的乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物；加入乙酸乙酯萃取物质量40倍体积的水溶解后，得萃取物水溶液，用萃取物水溶液四分之一倍体积的正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
通过HPLC法对莲房总黄酮提取物中8个黄酮类成分的重量百分含量进行测定，测得莲房总黄酮提取物中杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷的重量百分含量分别为1.22%、32.22%、13.37%、5.76%、1.49%、1.17%、3.82%、2.63%，莲房总黄酮提取物中8个黄酮类成分总含量达到60%以上。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (7)
1.一种莲房总黄酮的制备方法，其特征在于：以莲房为原料，经乙醇水溶液回流提取浓缩，浓缩物水溶解后经大孔吸附树脂色谱纯化得粗提取物，粗提取物水溶解后5经聚酰胺柱色谱纯化，得到提取物，提取物的水溶液先经乙酸乙酯萃取，再用正丁醇萃取，正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的一种莲房总黄酮的制备方法，其特征在于：具体步骤包括如下：
a：将干燥后的莲房粉碎，用50%-95%乙醇水溶液回流提取3次，提取液减压浓缩至无乙醇后加10倍体积的水溶解，过滤，滤液上上大孔树脂，依次用5倍柱体积水洗脱，再用5倍柱体积50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液洗脱的洗脱液，减压浓缩至干，得到含黄酮类成分的粗提取物；
b：向步骤a中所得的粗提取物加入粗提取物质量40倍体积的水溶解后过聚酰胺柱色谱，以5倍柱体积水洗脱，再用5倍柱体积30%-50%乙醇水溶液洗脱，收集乙醇水溶液洗脱的洗脱液，减压浓缩至干，得到含黄酮类成分的提取物；
c：将步骤b中所得的提取物加提取物质量40倍体积的水溶解后，得提取物水溶液，提取物水溶液用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物；向乙酸乙酯萃取物中加入的40倍体积的水溶解，得萃取物水溶液，萃取物水溶液用正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取液减压浓缩至干，即得莲房总黄酮提取物。
3.根据权利要求2所述的一种莲房总黄酮的制备方法，其特征在于：所述步骤a中的莲房与乙醇水溶液的质量体积比为1:10-20。
4.根据权利要求1所述的一种莲房总黄酮的制备方法，其特征在于：所述步骤b中的大孔树脂为中极性或弱极性大孔树脂，选自HPD-722大孔树脂、HPD-400大孔树脂、D-101大孔树脂中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种莲房总黄酮的制备方法，其特征在于：所述步骤d中的乙酸乙酯与提取物水溶液的体积比为1:1-1:4，正丁醇与萃取物水溶液的体积比为1:1-1:4。
6.一种如权利要求1-5所述制备方法制备所得的莲房总黄酮提取物。
7.如权利要求6所述的莲房总黄酮提取物，其特征在于，所述的莲房总黄酮提取物中含有8个黄酮苷：杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、丁香亭-3-O-β-D-葡萄糖苷，其含量之和超过60%。
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