CN106674312A - 高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法，包括以下步骤：S1)将原料用醇提取，得到提取液；所述原料为獐牙菜属植物或药材；S2)将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，洗脱，得到洗脱液；S3)将所述洗脱液经硅胶柱层析色谱纯化后，得到纯化洗脱液；S4)将所述纯化洗脱液通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。与现有技术相比，本发明工艺简单，成本低，且可同时得到多种不同的獐牙菜苷系类成分，产品收率与纯度均较高。
Description
技术领域
本发明属于中药提取技术领域，尤其涉及一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法。
背景技术
藏医药有着几千年的历史，是我国传统医药学宝库中的一颗璀璨明珠，为西部藏区名族的繁衍、生存、发展起着重要的作用。
藏茵陈系龙胆科植物印度獐牙菜全草。藏医古典医著《晶珠本草》以及现代藏药学著作《藏药晶镜本草》将藏茵陈分为印度獐牙菜、藏獐牙菜、普兰獐牙菜三种。
藏茵陈主要功能为清热消炎、利胆退黄，是治疗肝胆疾病的首选药物，特别对肝胆实热性疾病有较好疗效。《百科全书藏医分卷》汇集历代经典著作中以藏茵陈为主药命名的著名方剂共十余方，例如三味藏茵陈汤、四味藏茵陈汤、六味藏茵陈膏、八味藏茵陈散、十五味藏茵陈酥油丸等。这些方剂治疗肝胆疾病各有所长。
獐牙菜苦苷与獐牙菜苷是存在于獐牙菜植物中的主要活性成分，且在植物体内二者可以相互转换，但目前关于其提取的研究并不多，且其提取效率也有待提高。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种产率较高的高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法。
本发明提供了一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1)将原料用醇提取，得到提取液；所述原料为獐牙菜属植物或药材；
S2)将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，洗脱，得到洗脱液；
S3)将所述洗脱液经硅胶柱层析色谱纯化后，得到纯化洗脱液；
S4)将所述纯化洗脱液通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。
优选的，所述提取的温度为50℃～60℃；所述提取的时间为0.5～2h；所述提取的次数为2～6次。
优选的，所述反相聚合物色谱填料为大孔树脂填料或NM系列色谱填料。
优选的，所述步骤S2)具体为：
将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，先用水洗涤，然后用30％～50％的醇溶液洗脱，得到洗脱液。
优选的，所述步骤S2)还包括：
洗脱后，减压浓缩，再经反相聚合物色谱填料吸附，洗脱，得到洗脱液。
优选的，所述步骤S3)具体为：
将洗脱液减压浓缩后，用硅胶拌样，得到过柱原料；
用有机溶剂与醇溶剂对过柱原料进行梯度洗脱，得到纯化洗脱液；所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯。
优选的，所述硅胶的目数为60～80目。
优选的，所述梯度洗脱具体为：有机溶剂与醇溶剂的体积比为20:1；待小极性杂质基本除净后，有机溶剂与醇溶剂的体积比为5：1；收集有机溶剂与醇溶剂的体积比为5：1的洗脱液，得到纯化洗脱液。
优选的，所述步骤S4)具体为：
将所述纯化洗脱液减压浓缩后，通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分；所述制备型高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱；所述制备型高效液相色谱的流动相为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为20％～40％。
优选的，所述步骤S4)中通过制备型高效液相色谱分离后，经反相聚合物色谱填料吸附，洗脱后，减压浓缩，干燥，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。
本发明提供了一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法，包括以下步骤：S1)将原料用醇提取，得到提取液；所述原料为獐牙菜属植物或药材；S2)将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，洗脱，得到洗脱液；S3)将所述洗脱液经硅胶柱层析色谱纯化后，得到纯化洗脱液；S4)将所述纯化洗脱液通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。与现有技术相比，本发明工艺简单，成本低，且可同时得到多种不同的獐牙菜苷系列成分，产品收率与纯度均较高。
附图说明
图1为原料藏茵陈药材的HPLC谱图；
图2为本发明实施例1中得到的獐牙菜苷的HPLC谱图；
图3为本发明实施例1中得到的龙胆苦苷的HPLC谱图；
图4为本发明实施例1中得到的獐牙菜苦苷的HPLC谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法，包括以下步骤：
S1)将原料用醇提取，得到提取液；所述原料为獐牙菜属植物或药材；
S2)将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，洗脱，得到洗脱液；
S3)将所述洗脱液经硅胶柱层析色谱纯化后，得到纯化洗脱液；
S4)将所述纯化洗脱液通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。
按照本发明，所述原料为獐牙菜属植物或药材，优选为獐牙菜或藏茵陈药材，更优选藏茵陈；本发明中优选先将原料粉碎，然后再用醇提取，得到提取液；所述粉碎的程度优选为3～10mm段，更优选为3～8mm的段，再优选为5mm的段；所述醇为本领域技术人员熟知的醇即可，并无特殊的限制，本发明中优选为乙醇和/或甲醇，更优选为体积分数为70％～80％的乙醇和/或甲醇；所述原料与醇的质量体积比优选为1g：(3～5)ml；所述提取的温度优选为50℃～60℃；所述提取的时间优选为0.5～2h，更优选为0.5～1.5h，再优选为1h；为提高提取产率，优选提取2～6次，更优选提取3～5次，最优选提取4次，将各次的提取液合并。
在本发明中，优选先将提取液浓缩；所述浓缩的方法为本领域技术人员熟知的方法即可，并无特殊的限制，本发明优选采用减压浓缩；所述浓缩的温度优选为50℃～60℃；所述浓缩优选至无醇溶剂为止。
浓缩后，用反向聚合物色谱填料吸附；所述反向聚合物色谱填料为本领域技术人员熟知的反向聚合物色谱填料即可，并无特殊的限制，本发明中优选为大孔树脂填料或NM系列色谱填料；所述大孔树脂为本领域技术人员熟知的大孔树脂即可，并无特殊的限制，本发明中优选为AB-8大孔树脂或D-101大孔树脂；所述NM系列色谱填料为本领域技术人员熟知的NM系列色谱填料即可，并无特殊的限制，本发明中优选为NM100-反相聚合物色谱填料。
吸附后，优选先用水洗涤，然后用30％～50％的醇溶液洗脱，得到洗脱液；所述醇溶液为本领域技术人员熟知的醇溶液即可，并无特殊的限制，本发明中优选为甲醇溶液和/或乙醇溶液。其中，在本发明中如无特殊说明百分数均为体积百分数，如30％～50％的醇溶液为醇体积分数为30％～50％的醇溶液。得到的洗脱液为獐牙菜苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷等产品段；洗脱的过程中优选通过高效液相色谱进行在线监控，洗脱至无目标产物；洗脱完之后优选用70％～90％的醇溶液洗脱，收集待回收再利用。所述醇溶液为本领域技术人员熟知的醇溶液即可，并无特殊的限制，本发明中优选为甲醇溶液和/或乙醇溶液。
在本发明中，优选进行二次富集，以收集目标产品的高醇溶液；所述二次富集的方法优选为：将用30％～50％的醇溶液洗脱得到的洗脱液减压浓缩，再经反相聚合物色谱填料吸附，洗脱，得到洗脱液；所述减压浓缩的温度优选为50℃～60℃；减压浓缩优选至无醇为止；所述反相聚合物色谱填料同上所述，在此不再赘述；经反相聚合物色谱填料吸附后，优选用80％～90％的醇溶液洗脱，更优选用90％的醇溶液洗脱，得到洗脱液；所述醇溶液为本领域技术人员熟知的醇溶液即可，并无特殊的限制，本发明中优选为甲醇溶液和/或乙醇溶液。
将所述洗脱液用硅胶柱层析色谱纯化，具体优选按照以下步骤进行：将洗脱液减压浓缩后，用硅胶拌样，得到过柱原料；用有机溶剂与醇溶剂对过柱原料进行梯度洗脱，得到纯化洗脱液；所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯；所述醇溶剂为本领域技术人员熟知的醇溶剂即可，并无特殊的限制，本发明中优选为甲醇或乙醇。通过硅胶柱层析色谱纯化，可除去小极性杂质，得到目标成分的半成品段，纯度达到80％左右。
在本发明中，优选将洗脱液减压浓缩至浸膏，然后再用硅胶拌样，得到过柱原料；所述减压浓缩的温度优选为50℃～60℃；所述硅胶的目数优选为60～80目；所述浸膏与硅胶的的质量比优选为1：(2～4)。
用有机溶剂与醇溶剂对过柱原料进行梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序优选具体为：有机溶剂与醇溶剂的体积比为(30～15):1，优选为(25～15)：1，更优选为20:1；待小极性杂质基本除净后，有机溶剂与醇溶剂的体积比为(10～3)：1，优选为(8～3)：1，更优选为5：1；收集有机溶剂与醇溶剂的体积比为(10～3)：1的洗脱液，得到纯化洗脱液。有机溶剂与醇溶剂体积比为20:1时洗脱可除去小极性杂质；在本发明中，得到纯化洗脱液后，即獐牙菜苷系列成品色带洗脱完全后，优选换为有机溶剂与醇溶剂体积为3:1时洗脱，该段含少量产品后段，最后压干硅胶柱试剂，洗脱完成。乙酸乙酯与甲醇体积为3:1时洗脱硅胶柱目的是收集产品后段的残留产品。
将所述纯化洗脱液通过制备型高效液相色谱分离；在本发明中优选先将纯化洗脱液浓缩至浸膏；所述浓缩的方法为本领域技术人员熟知的方法即可，并无特殊的限制，优选为减压浓缩；所述浓缩的温度优选为50℃～60℃。
然后将浸膏用有机溶剂溶解，作为制备型高效液相色谱的原料；所述有机溶剂为本领域技术人员熟知的有机溶剂即可，并无特殊的限制，本发明中优选为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数优选为10％～40％，更优选为20％～30％；所述制备型高效液相色谱的色谱柱优选为C18色谱柱；所述制备型高效液相色谱的流动相优选为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为20％～40％；流动相的流速优选为100～400ml/min，更优选为200～300ml/min，再优选为200ml/min。
通过制备型高效液相色谱，可以将獐牙菜苷及同类物质的几个成分分离开，收集到獐牙菜苷、獐牙菜苦苷与龙胆苦苷三个纯品，产品纯度达到99％。
通过制备型高效液相色谱分离后，优选利用反相聚合物色谱填料富集，具体为：经反相聚合物色谱填料吸附，洗脱后，减压浓缩，干燥，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分；所述反相聚合物色谱填料同上所述，在此不再赘述；所述洗脱优选采用高浓度的醇溶液进行，更优选为80％～95％的醇溶液，再优选为90％～95％的醇溶液，最优选为95％的醇溶液；所述醇溶液为本领域技术人员熟知的醇溶液即可，并无特殊的限制，本发明中优选为甲醇溶液和/或乙醇溶液；所述减压浓缩的温度优选为50℃～60℃；减压浓缩优选至无溶剂；所述干燥优选为真空干燥；所述干燥的温度优选为40℃～60℃，更优选为40℃～50℃，再优选为45℃。
在本发明中，得到的高纯度单体獐牙菜苷系列成分为獐牙菜苷、獐牙菜苦苷与龙胆苦苷三种，纯度均达到99％以上。
按照本发明，优选采用高效液相色谱(HPLC)对得到的高纯度单体獐牙菜苷系列成分进行质量检测；所述高效液相色谱的色谱柱优选为C18色谱柱；所述高效液相色谱的流动相优选为乙腈与磷酸水溶液；所述乙腈与磷酸水溶液的体积比优选为13：87；所述磷酸水溶液中磷酸的质量体积比分数优选为0.2％；所述高效液相色谱的检测波长优选为238nm。
本发明工艺简单，成本低，且可同时得到多种不同的高纯度单体獐牙菜苷系列成分，产品收率与纯度均较高。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法进行详细描述。
以下实施例中所用的试剂均为市售。
实施例1
1.1提取:
藏茵陈药材粉碎成5mm的段，用80％乙醇溶液回流提取，提取温度60℃，提取4次，合并提取液，每次提取1h。
提取液浓缩：把提取液于60℃，减压浓缩，浓缩至无醇，收集浓缩液，备用。
1.2富集：
采用反相聚合填料AB-8大孔树脂。
过程：
处理好的浓缩液，上反相聚合填料进行吸附，吸附完成后，先用水洗，水洗液弃去，然后用30％浓度的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；通过高效液相色谱进行在线监控，洗脱至基本无目标产品后，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液待回收利用；
二次富集：将中浓度醇洗脱得到的洗脱液减压浓缩至无醇，上反相聚合物填料进行吸附，吸附完成后用90％乙醇溶液洗脱，得到洗脱液。
1.3纯化：
纯化方法：硅胶柱层析色谱
纯化原料：洗脱液60℃减压浓缩至浸膏，用硅胶(60～80目)拌样(浸膏与硅胶的质量比为1:2)，成棕色分散的颗粒，作为过柱原料。
过柱体系：乙酸乙酯与甲醇的体积比为20:1，除去原料中小极性杂质，TLC跟踪在线检测，杂质色带洗脱完成后，换为乙酸乙酯与甲醇的体积比为5：1洗脱，收集该色带段洗脱液，得到纯化洗脱液，该段主要为獐牙菜苷系列成分半成品段；产品色带洗脱完全后换乙酸乙酯与甲醇的体积比为3：1洗脱，收集洗脱液，该段含少量产品后段，最后压干硅胶柱试剂，洗脱完成。
收集乙酸乙酯与甲醇的体积比为5：1的洗脱液，得到纯化洗脱液。
1.4分离
将纯化洗脱液50℃减压浓缩至浸膏，然后用20％甲醇水溶液溶解，得到制备原料。
将所述制备原料通过制备型高效液相色谱分离；所述制备型高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱；流动相为甲醇水溶液其中甲醇的浓度为20％；流动相的流速为200ml/min；根据产品的特征性质，收集不同的信号峰的洗脱液，然后进行分析高效液相在线检测，可收集到獐牙菜苷、龙胆苦苷与獐牙菜苦苷的纯品，纯度一次可达到99％。
1.5纯品富集干燥
将得到的獐牙菜苷、龙胆苦苷与獐牙菜苦苷三种单体的产品浓缩液分别上反相聚合物色谱填料AB-8大孔树脂吸附，吸附完成后用高浓度95％乙醇洗脱，得到的洗脱液50℃减压浓缩至干，45℃真空干燥，得到獐牙菜苷、獐牙菜苦苷及龙胆苦苷。
质控检测方法：
HPLC条件：C18柱；流动相条件：乙腈-0.2％磷酸水(13:87)；检测波长：238nm。
图1为原料藏茵陈药材的HPLC色谱图，其结果见表1。图1中8.631min的峰是獐牙菜苦苷，12.390min的峰是龙胆苦苷，13.316min的峰是獐牙菜苷。
图2为实施例1中得到的獐牙菜苷的HPLC色谱图，结果见表2。收率为86％。
图3为实施例1中得到的龙胆苦苷的HPLC色谱图，结果见表3。收率为85％。
图4为实施例1中得到的獐牙菜苦苷的HPLC色谱图，结果见表4。收率为80.5％。
表1獐牙菜苷的HPLC检测结果
表2龙胆苦苷的HPLC检测结果
表3獐牙菜苦苷的HPLC检测结果
实施例2
2.1提取:
藏茵陈药材粉碎成5mm的段，用70％乙醇溶液回流提取，提取温度60℃，提取4次，合并提取液，每次提取1h。
提取液浓缩：把提取液于60℃，减压浓缩，浓缩至无醇，收集浓缩液，备用。
2.2富集：
采用反相聚合填料D-101大孔树脂。
过程：
处理好的浓缩液，上反相聚合填料进行吸附，吸附完成后，先用水洗，水洗液弃去，然后用40％浓度的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；通过高效液相色谱进行在线监控，洗脱至基本无目标产品后，用80％乙醇洗脱，收集洗脱液待回收利用；
二次富集：将中浓度醇洗脱得到的洗脱液减压浓缩至无醇，上反相聚合物填料进行吸附，吸附完成后用90％乙醇溶液洗脱，得到洗脱液。
2.3纯化：
纯化方法：硅胶柱层析色谱
纯化原料：洗脱液60℃减压浓缩至浸膏，用硅胶(60～80目)拌样(浸膏与硅胶的质量比为1:3)，成棕色分散的颗粒，作为过柱原料。
过柱体系：乙酸乙酯与甲醇的体积比为20:1，除去原料中小极性杂质，TLC跟踪在线检测，杂质色带洗脱完成后，换为乙酸乙酯与甲醇的体积比为5：1洗脱，收集该色带段洗脱液，得到纯化洗脱液，该段主要为獐牙菜苷系列成分半成品段；产品色带洗脱完全后换乙酸乙酯与甲醇的体积比为3：1洗脱，收集洗脱液，该段含少量产品后段，最后压干硅胶柱试剂，洗脱完成。
收集乙酸乙酯与甲醇的体积比为5：1的洗脱液，得到纯化洗脱液。
2.4分离
将纯化洗脱液50℃减压浓缩至浸膏，然后用30％甲醇水溶液溶解，得到制备原料。
将所述制备原料通过制备型高效液相色谱分离；所述制备型高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱；流动相为甲醇水溶液其中甲醇的浓度为30％；流动相的流速为200ml/min；根据产品的特征性质，收集不同的信号峰的洗脱液，然后进行分析高效液相在线检测，可收集到獐牙菜苷、龙胆苦苷与獐牙菜苦苷的纯品，纯度一次可达到99％。
2.5纯品富集干燥
将得到的獐牙菜苷、龙胆苦苷与獐牙菜苦苷三种单体的产品浓缩液分别上反相聚合物色谱填料D-101大孔树脂吸附，吸附完成后用高浓度95％乙醇洗脱，得到的洗脱液50℃减压浓缩至干，45℃真空干燥，得到獐牙菜苷、獐牙菜苦苷及龙胆苦苷。
质控检测方法：
HPLC条件：C18柱；流动相条件：乙腈-0.2％磷酸水(13:87)；检测波长：238nm。
獐牙菜苷的纯度为99.56％；收率为81％。
龙胆苦苷的纯度为99.4％；收率为84.5％。
獐牙菜苦苷的纯度为99.8％；收率为80％。
实施例3
3.1提取:
藏茵陈药材粉碎成5mm的段，用80％乙醇溶液回流提取，提取温度60℃，提取4次，合并提取液，每次提取1h。
提取液浓缩：把提取液于60℃，减压浓缩，浓缩至无醇，收集浓缩液，备用。
3.2富集：
采用NM100-反相聚合物色谱填料。
过程：
处理好的浓缩液，上反相聚合填料进行吸附，吸附完成后，先用水洗，水洗液弃去，然后用50％浓度的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；通过高效液相色谱进行在线监控，洗脱至基本无目标产品后，用90％乙醇洗脱，收集洗脱液待回收利用；
二次富集：将中浓度醇洗脱得到的洗脱液减压浓缩至无醇，上反相聚合物填料进行吸附，吸附完成后用90％乙醇溶液洗脱，得到洗脱液。
3.3纯化：
纯化方法：硅胶柱层析色谱
纯化原料：洗脱液60℃减压浓缩至浸膏，用硅胶(60～80目)拌样(浸膏与硅胶的质量比为1:4)，成棕色分散的颗粒，作为过柱原料。
过柱体系：乙酸乙酯与甲醇的体积比为20:1，除去原料中小极性杂质，TLC跟踪在线检测，杂质色带洗脱完成后，换为乙酸乙酯与甲醇的体积比为5：1洗脱，收集该色带段洗脱液，得到纯化洗脱液，该段主要为獐牙菜苷系列成分半成品段；产品色带洗脱完全后换乙酸乙酯与甲醇的体积比为3：1洗脱，收集洗脱液，该段含少量产品后段，最后压干硅胶柱试剂，洗脱完成。
收集乙酸乙酯与甲醇的体积比为5：1的洗脱液，得到纯化洗脱液。
3.4分离
将纯化洗脱液50℃减压浓缩至浸膏，然后用30％甲醇水溶液溶解，得到制备原料。
将所述制备原料通过制备型高效液相色谱分离；所述制备型高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱；流动相为甲醇水溶液其中甲醇的浓度为40％；流动相的流速为200ml/min；根据产品的特征性质，收集不同的信号峰的洗脱液，然后进行分析高效液相在线检测，可收集到獐牙菜苷、龙胆苦苷与獐牙菜苦苷的纯品，纯度一次可达到99％。
3.5纯品富集干燥
将得到的獐牙菜苷、龙胆苦苷与獐牙菜苦苷三种单体的产品浓缩液分别上NM100-反相聚合物色谱填料吸附，吸附完成后用高浓度95％乙醇洗脱，得到的洗脱液50℃减压浓缩至干，45℃真空干燥，得到獐牙菜苷、獐牙菜苦苷及龙胆苦苷。
质控检测方法：
HPLC条件：C18柱；流动相条件：乙腈-0.2％磷酸水(13:87)；检测波长：238nm。
獐牙菜苷的纯度为99.5％；收率为82％。
龙胆苦苷的纯度为99.95％；收率为83％。
獐牙菜苦苷的纯度为99.0％；收率为81％。
Claims (10)
1.一种高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1)将原料用醇提取，得到提取液；所述原料为獐牙菜属植物或药材；
S2)将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，洗脱，得到洗脱液；
S3)将所述洗脱液经硅胶柱层析色谱纯化后，得到纯化洗脱液；
S4)将所述纯化洗脱液通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述提取的温度为50℃～60℃；所述提取的时间为0.5～2h；所述提取的次数为2～6次。
3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述反相聚合物色谱填料为大孔树脂填料或NM系列色谱填料。
4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2)具体为：
将所述提取液经反相聚合物色谱填料吸附后，先用水洗涤，然后用30％～50％的醇溶液洗脱，得到洗脱液。
5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2)还包括：
洗脱后，减压浓缩，再经反相聚合物色谱填料吸附，洗脱，得到洗脱液。
6.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S3)具体为：
将洗脱液减压浓缩后，用硅胶拌样，得到过柱原料；
用有机溶剂与醇溶剂对过柱原料进行梯度洗脱，得到纯化洗脱液；所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯。
7.根据权利要求6所述的分离纯化方法，其特征在于，所述硅胶的目数为60～80目。
8.根据权利要求6所述的分离纯化方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：有机溶剂与醇溶剂的体积比为(30～15):1；待小极性杂质基本除净后，有机溶剂与醇溶剂的体积比为(10～3)：1；收集有机溶剂与醇溶剂的体积比为(10～3)：1的洗脱液，得到纯化洗脱液。
9.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S4)具体为：
将所述纯化洗脱液减压浓缩后，通过制备型高效液相色谱分离，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分；所述制备型高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱；所述制备型高效液相色谱的流动相为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为20％～40％。
10.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S4)中通过制备型高效液相色谱分离后，经反相聚合物色谱填料吸附，洗脱后，减压浓缩，干燥，得到高纯度单体獐牙菜苷系列成分。
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