CN101396429A

CN101396429A - 一种当药提取物及其制备方法和应用

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Publication number: CN101396429A
Application number: CNA200810000042XA
Authority: CN
Inventors: 叶祖光; 黄文哲
Original assignee: BEIJING ZHONGYAN TONGRENTANG MEDICAL DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: BEIJING ZHONGYAN TONGRENTANG MEDICAL DEVELOPMENT Co Ltd
Priority date: 2007-09-27
Filing date: 2008-01-04
Publication date: 2009-04-01

Abstract

本发明涉及一种当药提取物及其制备方法和应用。该方法以当药为原料，经提取后，仅用一步大孔吸附树脂纯化工艺，即得到含裂环环烯醚萜类化合物达到50％以上，含獐牙菜苦苷单一成分达到40％以上、含当药苷和龙胆苦苷共3个成分的总量达到45％以上的当药提取物。该提取物在保护和预防以及治疗肝损伤方面有显著的疗效。该产品方法操作简便、产品得率高、重复性好、可实施性强。

Description

一种当药提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种中药提取物及其制备方法和应用，具体来说是当药提取物、它的制备方法以及该提取物在保护和预防以及治疗肝损伤的药物中的应用。

背景技术

肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，许多因素，如病毒、生物、药物、理化、酒精等，都可以导致肝损伤，肝脏的病变可认为是肝脏收到不同程度吨上的结果。现代医学对肝损伤的研究比较深入，已从多方面探讨了肝损伤的发生机制，并研制开发出了膜保护剂，抗脂质过氧化剂，抗免疫反应剂等保肝药物，但疗效尚难尽人意，且因其毒副作用，限制了临床应用。

中药有效成分的提取、分离是实现中药现代化的重要步骤，如何在尊重中医药传统理论的基础上，完成中药有效部位的提取分离，是困惑广大医药工作者的实际问题。当药为龙胆科獐牙菜属植物瘤毛獐牙菜Swertia pseudochinensis Hara的干燥全草。又名紫花当药，《蒙药正典》记载其名称为查干-铁木尔-地格达，俗称“肝炎草”，是治疗肝炎的传统药物。《内蒙古中草药》始载有本品，《中国药典)》1977年版一部亦收载。当药为河北、内蒙古一带使用的民间草药，主要分布于东北、华北、河南、山东等地。当药味苦，性寒。归肝、胃、大肠经。用于泻火解毒、利湿、健脾。主治湿热黄疸、痢疾、胃炎、消化不良、火眼、牙痛、口疮和疮毒肿痛等症。当药中化学成分较为复杂，主要包括裂环环烯醚萜类(如獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、当药苷等)、三萜类(齐墩果酸、齐墩果烷、熊果酸等)、黄酮类(当药黄素、芒果苷等口山酮类)等。

现代药理实验表明，当药中的獐牙菜苦苷等裂环环烯醚萜类成分是与保肝活性相关的化学成分，但由于裂环环烯醚萜类化合物结构中的官能团专属性不强，提取纯化比较困难，故相关报道文献较少，且至今尚未见对当药中活性成分研究的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是研制一种在治疗肝炎方面有显著疗效的当药提取物及其制备方法，得到裂环环烯醚萜类化合物含量较高的有效部位提取物，进而确保临床疗效稳定。

为解决上述问题，本发明涉及一种当药有效部位及其制备方法，其步骤包括如下技术方案：

A、以当药药材全草为原料，用水或\和有机溶剂提取，

B、将A中得到的当药提取物用大孔吸附树脂柱层析法进一步纯化，用水或\和有机溶剂洗脱，

C、收集B所得的洗脱液，浓缩，干燥，得到当药提取物。

上述制备方法A中的提取是在室温或加热状态下用浸泡，渗漉，超声、循环超声或者回流方法提取，提取次数是一次或多次。

上述制备方法B中所述的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂，可选用型号为HPD100、HPD300、HPD700、D101、AB-8或者HDD910型，所用的大孔吸附树脂(干品)与当药药材的重量比为1～5∶1，大孔吸附树脂柱的直径与树脂高度比为1∶0.5～15，洗脱溶剂选择以水或\和乙醇或\和丙酮组成的溶剂，洗脱为等浓度洗脱或梯度洗脱。

具体讲，将所得的提取液，浓缩，取离心后的上清液或者过滤后的滤液上大孔吸附树脂柱，先用水或1～30％的乙醇或\和丙酮或\和丙醇组成的溶液洗脱除去杂质，用量为2～8倍柱体积，再用5～70％的乙醇或\和丙酮或\和丙醇的水溶液洗脱，用量为2～8倍柱体积。

上述制备方法C中所述干燥方法为本领域中已知的干燥方法，例如：减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥或微波干燥。

按照上述技术方案所得到的提取物中，獐牙菜苦苷单一成分含量达到40％以上，獐牙菜苦苷、当药苷和龙胆苦苷共3个成分的总量达到45％以上，裂环环烯醚萜类化合物含量达到50％以上。用所得的提取物进行有关肝损伤的保护作用的药效试验，结果表明当药提取物对肝损伤有显著的保护作用。

本发明提供了当药有效部位的提取、分离纯化的有效方法。此方法仅通过一步大孔吸附树脂的纯化工艺即得到高纯度，质量稳定、可控的当药提取物，制备过程中可以只用水和乙醇作为溶剂，减少污染，所用的大孔吸附树脂再生后可重复利用数次，成本低。此方法操作简便、产品得率高、重复性好、可实施性强。根据本发明制得的当药提取物在保护和预防以及治疗肝损伤有显著的效果。在临床用药上，可达到减少用药剂量、减少毒副作用、提高药物疗效的目的。本发明所得的提取物可以制成口服制剂或其他剂型，也可代替当药入药；为实现中药现代化跨近了有利的一步。

附图说明

图1是当药提取物的制备工艺流程图

图2是当药提取物HPLC图谱

图3是当药提取物UV扫描图谱

具体实施方式

实施例1

取当药药材10Kg，剪碎2～5厘米，加水120L，浸泡1小时，回流提取1小时，过滤；药渣再加水100L，回流提取1小时，过滤，药渣再用同样方法提取1次，合并滤液，浓缩至药液体积与药材质量比为2:1，4000rpm离心10min。取上清液，加到已处理好的HPD300(沧州宝恩化工有限公司)型大孔吸附树脂柱(树脂床体积约33L，相当于干树脂与药材的重量比为0.75:1，径高比为1:7)上，先用3倍于树脂床体积(3BV)的水洗脱至几乎无色，弃去洗脱液，再用25％的乙醇水溶液洗脱，每7500ml收集1份，收集16份(相当于约4BV)，检测，根据检测结果决定合并第4～14份洗脱液，60℃减压回收乙醇至相对密度为1.15(热侧)，喷雾干燥(进风口温度140～150℃，出风口温度80～86℃)，即得当药提取物588g，产品得率为药材的5.88％(w/w)。

HPLC检测提取物中獐牙菜苦苷含量为46.2％(w/w)，UV检测提取物中裂环环烯醚萜含量为78.2％(w/w)，獐牙菜苦苷、当药苷和龙胆苦苷共3个成分的含量为52.6％(w/w)。

实施例2

取当药药材6Kg，适当粉碎，加水72L，浸泡1小时，回流提取1小时，过滤；药渣再加水60L，回流提取1小时，过滤，药渣再用同样方法提取1次，合并滤液，浓缩至药液体积与药材质量比为2∶1，过滤，取滤液，加到已处理好的HPD100(沧州宝恩化工有限公司)型大孔吸附树脂柱(树脂床体积24L，相当于干树脂与药材的重量比为0.9:1，径高比为1:5)上，先用2倍于树脂床体积(2BV)的水洗讹脱，弃去洗脱液，再用40％乙醇水溶液洗脱，每6000ml收集1份，收集至16份(相当于约4BV)，检测，根据检测结果决定合并第2～13份洗脱液，60℃减压回收乙醇至相对密度为1.15(热侧)，50℃减压干燥16h，粉碎，得当药提取物368g，产品得率为药材的6.13％(w/w)。

HPLC检测提取物中獐牙菜苦苷含量为42.8％(w/w)，UV检测提取物中裂环环烯醚萜含量为80.9％(w/w)，獐牙菜苦苷、当药苷和龙胆苦苷共3个成分的含量为51.5％(w/w)。

实施例3

取当药药材2Kg，剪碎2～5厘米，加水24L，浸泡1小时，回流提取1小时，过滤；药渣再加水20L，回流提取1小时，过滤，药渣再用同样方法提取1次，合并滤液，浓缩至药液体积与药材质量比为2∶1(v/w)，过滤，取滤液，加到已处理好的D101(天津市海光化工有限公司)型大孔吸附树脂柱(树脂床体积6L，相当于干树脂与药材的重量比为0.6∶1，径高比为1∶6)上，先用4倍于树脂床体积(4BV)的水洗脱，弃去洗脱液，再用60％乙醇水溶液洗脱，每1500ml收集1份，收集至16份(相当于约4BV)，检测，根据检测结果决定合并第2～12份洗脱液，60℃减压回收乙醇至相对密度为1.22(热侧)，70℃以下微波干燥，粉碎，得当药提取物128g，产品得率为药材的6.40％(w/w)。

用HPLC法检测提取物中獐牙菜苦苷含量为47.1％(w/w)，UV检测提取物中裂环环烯醚萜含量为81.8％(w/w)，獐牙菜苦苷、当药苷和龙胆苦苷共3个成分的含量为52.1％(w/w)。

实施例4

小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、模型组、联苯双酯组、当药提取物大剂量组、当药提取物小剂量组，每组10只。各组灌胃给药，每日1次，给药体积0.2ml/10g，对照组和模型组给与等体积蒸馏水，连续10天。分别于第7天上午和第9天下午，除正常对照组之外，其余各组用0.1％四氯化碳油溶液10ml/kg腹腔注射一次。末次给药1小时后(注射16h后)各组小鼠禁食16小时，摘眼球取血，分离血清，测定ALT和AST活性。

结果显示：当药提取物能够明显降低四氯化碳导致的小鼠肝损伤模型的ALT和AST升高，对急性肝损伤具有一定的保护作用。实验结果见表1。

表1 当药提取物对四氯化碳造成小鼠急性肝损伤的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01

实施例5

Wistar大鼠60只，雌雄各半，体重(180～200)g，随机分为6组，分别为空白对照组，模型对照组，阳性对照组，当药提取物大剂量组、当药提取物中剂量组，当药提取物小剂量组，每组10只，适应性喂养5天后，除空白对照组外其余各组以40％CCl₄花生油溶液腹部皮下注射，首次5ml/kg，以后3ml/kg，每周2次，连续注射8周，造模前两天开始灌胃给药预防，直到实验结束，每日给药1次。8周末各组大鼠于末次灌胃1h后大鼠眼眶取血，以3000r/min离心取血清，用半自动生化仪测定血清ALT和AST活性。取肝右中央叶约0.5cm³迅速投入10％福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，制备病理切片，HE染色，光学显微镜观察肝组织病理变化。

结果显示：当药提取物能够降低四氯化碳导致慢性肝损伤模型大鼠ALT和AST的升高。能够明显抑制四氯化碳导致慢性肝损伤的肝脏的病理改变。结果见表2、表3。

表2 当药提取物对CCl₄造成小鼠急性肝损伤的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01

表3 当药提取物对CCl₄所致大鼠慢性肝损伤肝纤维化病理分级的影响

注：卡方检验与模型组比较：*P<0.05

肝组织病理学改变分级：

-：正常肝组织；肝小叶结构完整，无明显病理改变，

+：肝细胞点状坏死，炎细胞浸润，散在的肝细胞脂肪变性，

++：纤维组织增生向肝组织小叶内延伸，

+++：肝细胞结构紊乱，纤维组织增生，桥接坏死，早期肝坏死。

Claims

1、一种当药提取物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

A、以当药药材全草为原料，当药为龙胆科獐牙菜属植物瘤毛獐牙菜Swertiapseudochinensis Hara的干燥全草，用水或\和有机溶剂提取，

C、收集B所得的洗脱液，浓缩，干燥，得到当药提取物，该提取物獐牙菜苦苷单一成分含量达到40％以上，獐牙菜苦苷、当药苷和龙胆苦苷共3个成分的总量达到45％以上，环烯醚萜类化合物含量达到50％以上。

2、根据权利要求1所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：A中所述的提取是在室温或加热状态下用浸泡、渗漉、超声、循环超声或者回流方法提取，提取次数是一次或多次。

3、根据权利要求2所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：B中所述的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂。

4、根据权利要求3所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂与当药药材的重量比为1～5:1。

5、根据权利要求4所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：B中所述的大孔吸附树脂柱的直径与树脂高度比为1:0.5～15。

6、根据权利要求5所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：所得的提取液，浓缩，取离心后的上清液或者过滤后的滤液上大孔吸附树脂柱，用水或\和乙醇或\和丙酮洗脱，洗脱为等浓度洗脱或梯度洗脱。

7、根据权利要求6所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：先用水或1～30％的乙醇或\和丙酮或\和丙醇溶液洗脱除去杂质，用量为2～8倍柱体积，再用5～70％的乙醇或\和丙酮或丙醇溶液洗脱，用量为2～8倍柱体积。

8、根据权利要求7所述的当药提取物的制备方法，其特征在于：C中所述干燥方法为减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥或微波干燥。

9、权利要求1～8中任何一项所述的当药提取物制备方法所制备的提取物。

10、权利要求9所述的当药提取物在用于保护和预防以及治疗肝损伤的药物中的应用。