CN105362362A - 一种萹蓄乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)、选取干燥的萹蓄茎叶磨成粉末；(2)、将粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；(3)、将提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得萹蓄石油醚提取物；(4)、将水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得为萹蓄乙酸乙酯提取物；(5)、将下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即萹蓄正丁醇提取物。萹蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。

Description

一种萹蓄乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明提供了一种萹蓄乙酸乙酯提取物，该提取物用于制备预防或治疗支气管哮喘的药物，属于中医药技术领域。

背景技术

支气管哮喘(以下简称“哮喘”)是一种常见的多发性慢性呼吸道疾病，其发病机制目前尚不完全清楚。目前全球至少有3亿以上，我国有近3000万哮喘患者，哮喘已成为仅次于癌症的世界第二大致死和致残疾病。在我国，哮喘疾病发病也呈逐年上升的趋势。2010年北京、重庆、广州三个城市的同期调查资料显示：儿童哮喘的患病率分别为3.15％、7.45％、2.09％，与10年前的2.69％、4.63％、1.33％相比，均明显上升。目前哮喘疾病的有效控制率低下，总体状况不容乐观，其主要原因是随着社会经济的发展生活水平的提高，环境变化加快，汽车尾气、工业废气、家庭装修、食品添加剂、家养宠物等过敏原越来越多，这都必然导致哮喘的发病率越来越高。因此亟待寻找能更安全有效的治疗哮喘的药物。

气道阻塞是哮喘的重要病理特征，而气道平滑肌的异常收缩是导致这一症状的主要原因。目前支气管扩张剂如β2-受体激动剂被广泛应用于临床，但治疗效果有限，30-45％哮喘病人的肺功能无法得到改善，即使症状有所缓解，停止治疗后病情亦容易反复发作，严重者更需要住院治疗。这给患者本人和家庭造成了极大的痛苦，同时也加重了社会经济的负担和损失。

萹蓄又称畜辩、粉节草、扁竹蓼等，属于蓼科植物，拉丁文名PolygonumAviculareL.，其地上干燥部分入药，是常用中药。全国大部分地区均产该种药草，其中以河南、四川、浙江、山东、吉林、河北等地产量较大，我国湖北武陵山区也有一定产量。萹蓄苦，微寒，具有利尿通淋，杀虫，止痒等药理功能，常用于膀胱热淋,小便短赤,淋沥涩痛，皮肤湿疹，阴痒带下等疾病治疗。该药中主要有黄酮、糖酯、木脂素、甾体以及其它类型的化合物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：目前，哮喘的发病率越来越高，而现有药物疗效有限。

为了解决上述技术问题，本发明利用萹蓄及其提取物舒张气道平滑肌治疗哮喘，此方面的研究，尚未见国内外有相关报道。即，本发明提供了一种萹蓄乙酸乙酯提取物，该提取物经过试验发现能够舒张气道平滑肌，能够用于缓解哮喘患者气道阻塞，因此上述萹蓄乙酸乙酯提取物能够应用于在制备治疗支气管哮喘药物中。

本发明提供的一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)、选取干燥的萹蓄茎叶作为原料，磨成粉末；

(2)、将步骤(1)所得粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；

(3)、将步骤(2)所得提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得浸膏，即萹蓄石油醚提取物；

(4)、将步骤(3)所得的水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得浸膏，即为萹蓄乙酸乙酯提取物；

(5)、将步骤(4)中的下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即萹蓄正丁醇提取物。

优选地，步骤(2)中粉末以体积浓度为70％的乙醇加热回流提取2～4次，每次提取乙醇的添加量为萹蓄粉末体积的8～12倍。每次提取时间为2～3小时。

优选地，步骤(2)中，提取液还经离心或抽滤处理，去除固体杂质后，收集上层液，然后将上层液蒸干，得到提取物。

优选地，步骤(3)中用石油醚萃取2～5次。

优选地，步骤(4)中用乙酸乙酯萃取2～5次。

优选地，步骤(5)中用正丁醇萃取2～5次。

本发明通过上述的制备方法制备得到了萹蓄乙酸乙酯提取物、萹蓄石油醚提取物和萹蓄正丁醇提取物。

本发明提供上述的制备方法制备得到的萹蓄乙酸乙酯提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的应用，蓄乙酸乙酯提取物作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成抗免疫性炎症的药物或药物组合物。

本发明针对以上提取物进行了生物活性试验，具体研究结论如下：

萹蓄乙酸乙酯提取物抑制高钾引起气道平滑肌收缩。

萹蓄乙酸乙酯提取物抑制乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩。

本发明的有益效果：通过对实验小鼠离体气管环张力的检测发现，萹蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。

附图说明

图1为本发明萹蓄各提取部提取物的制备方法示意图。

图2a为本实施例中萹蓄的水部提取物对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图。

图2b为本实施例中萹蓄的石油醚提取物对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图。

图2c为本实施例中萹蓄的乙酸乙酯提取物对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图。

图2d为本实施例中萹蓄的正丁醇提取物对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图。

图3a为本实施例中乙酸乙酯提取物对高钾的剂量效应图。

图3b～3c为本实施例中乙酸乙酯提取物对高钾诱导的外钙的内流有部分抑制作用的图。

图4a～4b为本实施例中萹蓄乙酸乙酯部提取物对乙酰胆碱诱导的内钙的释放有部分抑制作用的图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

下面结合实施例对本发明做详细具体的说明，但是本发明的保护范围并不局限于以下实施例。

1、如图1所示，萹蓄乙酸乙酯及其它各部提取物的制备：

萹蓄购自北京同仁堂(武汉)。经过干燥，打成粉，用70％的乙醇(体积为萹蓄粉末体积的10倍)加热回流提取三次，抽虑，收集过滤液，用旋转蒸发器蒸干，获得提取物(乙醇浸膏)。提取物溶溶于水中。石油醚萃取3次，获取石油醚部及水部。水部用乙酸乙酯萃取3次，获得乙酸乙酯部和水相。水相继续用正丁醇萃取三次，获得正丁醇部。以上各部用旋转蒸发器蒸干分别获得石油醚部、乙酸乙酯部、正丁醇部，获得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物，共约为原料药干重的2％左右。各部提取物溶解于3％DMSO中调pH至7.4用于生物活性实验检测。

2、小鼠气管的体外分离：

雄性成年的BALB/c小鼠颈椎脱臼法处死，将口腔和四肢钉在解剖板上，喷洒75％的酒精后剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于PSS溶液(NaCl135mM,KCl5mM,MgCl₂1mM,CaCl₂2mM,HEPES10mM,glucose10mM,pH7.4)中，然后在转移至胶板上进行进一步修剪。在SZM体视显微镜下用维纳斯剪小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液。

3、小鼠气道平滑肌的张力检测方法：

将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mLPSS并持续通氧的37℃的恒温水浴槽中.前负荷调至500mg，开始平衡，平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液或100μM乙酰胆碱(ACh)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线，30min后即可开始试验。

实验结果：

(1)萹蓄水、石油醚、乙酸乙酯及正丁醇部提取物抑制高钾引起气道平滑肌收缩

如图2a～2d，离体小鼠气管环在80mM高钾溶液中发生稳定持续的预收缩，当分别加入萹蓄各部提取物后，随着加入提取物浓度增加，收缩的气管环张力在石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物添加液中均有下降，在乙酸乙酯提取物(图2c)中下降尤为明显，而水部提取物(由水部干燥获得)中随着萹蓄提取物浓度的增加气管环张力有增加趋势。表明萹蓄乙酸乙酯提取物可有效舒张高钾引起气道平滑肌收缩，且作用呈现剂量依赖性。

(2)萹蓄乙酸乙酯部提取物抑制高钾引起气道平滑肌收缩有效浓度及途径

结合如图3a～3c，离体小鼠气管环在高钾溶液中溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入萹蓄提取物后，随提取物浓度逐渐增加，收缩的气管环张力先升高后下降，该药物作用表现出较好剂量依赖性，当剂量达到0.1mg/mL以上时，气管便显出舒张作用，当乙酸乙酯部提取物浓度添加到0.32mg/ml时，对预收缩的平滑肌的舒张有明显效果，并随浓度增加，对气管环的舒张作用增强，当达到10mg/mL时可使气管完全舒张，并且这种舒张作用可能是通过抑制外钙内流引起。

图3a中纵坐标是气管环舒张的百分比，横坐标是添加药物浓度，从该剂量图能看出，对于乙酸乙酯部，当加入药之后曲线会下降，在1mg/ml时就达到最大舒张，当加入3mg/ml时，气管不再舒张，所以将1mg/ml作为有效浓度。

图3b/3c中，在0钙的条件下，先加有效浓度1mg/ml的药物，再加入80mM/L高钾，最后换成2mM/L的钙的条件下，离体小鼠气管环有部分收缩；而在0钙的条件下，先加入80m/L高钾，再换成2mM/L的钙的条件下，离体小鼠气管环有显著的收缩，随后再加入有效浓度1mg/ml的药物时，离体小鼠气管环能得到很大的舒张。由此可以说明，萹蓄乙酸乙酯提取物能部分抑制外钙的内流。

(3)萹蓄乙酸乙酯部提取物抑制乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩

如图4a～4b，离体小鼠气管环在100μMACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入萹蓄乙酸乙酯提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，随着萹蓄乙酸乙酯提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明萹蓄乙酸乙酯部提取物可完全舒张ACh引起气道平滑肌收缩，且作用呈现一定剂量依赖性。

从上述数据可看出，萹蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (9)

1.一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、选取干燥的萹蓄茎叶作为原料，磨成粉末；

(2)、将步骤(1)所得粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；

(3)、将步骤(2)所得提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得浸膏，即萹蓄石油醚提取物；

(4)、将步骤(3)所得的水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得浸膏，即为萹蓄乙酸乙酯提取物；

(5)、将步骤(4)中的下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即萹蓄正丁醇提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中粉末以体积浓度为70％的乙醇加热回流提取2～4次，每次提取乙醇的添加量为萹蓄粉末体积的8～12倍。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，每次提取时间为2～3小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，提取液还经离心或抽滤处理，去除固体杂质后，收集上层液，然后将上层液蒸干，得到提取物。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中用石油醚萃取2～5次。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中用乙酸乙酯萃取2～5次。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中用正丁醇萃取2～5次。

8.权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到的萹蓄乙酸乙酯提取物、萹蓄石油醚提取物和萹蓄正丁醇提取物。

9.权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到的萹蓄乙酸乙酯提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的应用。